氣相色譜在蔬菜農(nóng)應(yīng)用

1、氣相色譜在蔬菜農(nóng)藥殘留上的應(yīng)用鶴壁市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測檢驗(yàn)中心張艷麗一、農(nóng)藥殘留基本知識(shí)一、農(nóng)藥殘留基本知識(shí)1、農(nóng)藥殘留（、農(nóng)藥殘留（pesticide residue） 農(nóng)藥使用后殘存在生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中的微量農(nóng)藥母體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。以mg/kg, ug/kg, ng/kg表示。2、農(nóng)藥殘留分析 對待測樣品中微量農(nóng)藥殘留進(jìn)行定性、定量分析。 目的: 為新農(nóng)藥提供其在農(nóng)作物上的殘留動(dòng)態(tài)和最終殘留量。 制定農(nóng)藥最大殘留限量和合理使用準(zhǔn)則。 評價(jià)農(nóng)藥殘留對農(nóng)畜產(chǎn)品和環(huán)境的危險(xiǎn)性。 為制定防治農(nóng)藥污染措施提供依據(jù)二、氣相色譜基礎(chǔ)理論二、氣相色譜基礎(chǔ)理論v氣相色譜的由來1 、由

2、來由來 1903年俄國生物化學(xué)家茨維特（年俄國生物化學(xué)家茨維特（Tswett）把植物葉）把植物葉子的石油醚萃取液從一根裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃子的石油醚萃取液從一根裝有碳酸鈣吸附劑的玻璃管上端注入，并進(jìn)一步用石油醚液洗脫，分辨了植管上端注入，并進(jìn)一步用石油醚液洗脫，分辨了植物中的各種色素。物中的各種色素?！吧V色譜”一詞由此而來。一詞由此而來。二、氣相色譜基礎(chǔ)理論二、氣相色譜基礎(chǔ)理論載氣進(jìn)樣色譜柱檢測溫控一、氣相色譜儀流程一、氣相色譜儀流程氣路控制系統(tǒng)記錄儀檢測器色譜柱氣化器六通閥氣體樣品載氣液體樣品輔助氣體電橋或放大器放空二、氣相色譜基礎(chǔ)理論二、氣相色譜基礎(chǔ)理論二、氣相色譜基礎(chǔ)理論二、氣相色譜

3、基礎(chǔ)理論v氣相色譜是色譜中的一種，是用氣體做為流氣相色譜是色譜中的一種，是用氣體做為流動(dòng)相的色譜法，在分離分析方面，具有如下動(dòng)相的色譜法，在分離分析方面，具有如下一些特點(diǎn)：一些特點(diǎn)：、高靈敏度：可檢出、高靈敏度：可檢出- 克的物質(zhì)，克的物質(zhì)，可作超純氣體、高分子單體的痕跡量雜質(zhì)分可作超純氣體、高分子單體的痕跡量雜質(zhì)分析和空氣中微量毒物的分析。析和空氣中微量毒物的分析。、高選擇性：可有效地分離性質(zhì)極為相近、高選擇性：可有效地分離性質(zhì)極為相近的各種同分異構(gòu)體和各種同位素。的各種同分異構(gòu)體和各種同位素。、高效能：可把組分復(fù)雜的樣品分離成單、高效能：可把組分復(fù)雜的樣品分離成單組分。組分。二、氣相色譜基

4、礎(chǔ)理論二、氣相色譜基礎(chǔ)理論v、速度快：一般分析、只需幾分鐘即可完、速度快：一般分析、只需幾分鐘即可完成，有利于指導(dǎo)和控制生產(chǎn)。成，有利于指導(dǎo)和控制生產(chǎn)。、應(yīng)用范圍廣：即可分析低含量的氣、液、應(yīng)用范圍廣：即可分析低含量的氣、液體，亦可分析高含量的氣、液體，可不受組體，亦可分析高含量的氣、液體，可不受組分含量的限制。分含量的限制。、所需試樣量少：一般氣體樣用幾毫升，、所需試樣量少：一般氣體樣用幾毫升，液體樣用幾微升或幾十微升。液體樣用幾微升或幾十微升。三、農(nóng)藥殘留常用的色譜柱與檢測器三、農(nóng)藥殘留常用的色譜柱與檢測器v常用色譜柱：v1、非極性柱DB-1或弱極性柱DB-5用于有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的分析。規(guī)格

5、為：30m0.32mm0.25umv2、中等極性DB-1701或OV1701用于有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的分析。規(guī)格為：30m0.25mm0.25um三、農(nóng)藥殘留常用的色譜柱與檢測器三、農(nóng)藥殘留常用的色譜柱與檢測器ECD、FPD、NPD是最常用的農(nóng)藥殘留物分析檢測器。1、ECD對鹵代農(nóng)藥的檢測靈敏度高，常用于檢測有機(jī)氯農(nóng)藥。2、FPD多用于含硫、磷有機(jī)農(nóng)藥的檢測，用于檢測有機(jī)磷農(nóng)藥。3、NPD適合于含氮與含磷的農(nóng)藥。三、農(nóng)藥殘留常用的色譜柱與檢測器三、農(nóng)藥殘留常用的色譜柱與檢測器v色譜柱與檢測器四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程v常用的檢測方法vNY/T761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除

6、蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定。vGB/T5009.146-2008植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測定。vGB/T5009.145-2003植物性食品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y/T761-2008方法方法v1、樣品制備方法v按GB/T8855抽取蔬菜、水果樣品，取可食部分，經(jīng)縮分后，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，制成待測樣，放入分裝容器中，于-20-16 條件下保存，備用。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法v試樣制備四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法

7、v在天平上準(zhǔn)確稱取25.0g試樣。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法v用量筒或瓶口分液器v量取50.0mL乙腈，v加入稱好的樣品中。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法v用勻漿機(jī)高速勻漿v2min。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法在室溫下靜置30min，使乙腈相與水相分層。濾液收集到裝有5g-7g氯化鈉的100mL具塞量筒中，收集濾液40mL50mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法va.準(zhǔn)確吸取10mL乙腈相溶液(上層)分別放入100ml燒杯中

8、。vb. 將燒杯放在水浴鍋（80）上用蒸汽加熱，杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)饣蚩諝饬鞔祫?dòng)，蒸發(fā)近干。分別加入2ml丙酮或正已烷。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法v凈化用于有機(jī)磷檢測va將燒杯中用2mL丙酮溶解的樣品溶液，完全轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，再用v約3.0mL丙酮分三次洗燒杯，并轉(zhuǎn)移v至離心試管，最后準(zhǔn)確定容至5.0mL。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法b在旋渦混合器上混勻試管中的溶液。c混勻后，過0.2m濾膜，移入2mL樣品瓶中用GC分析。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法v樣品凈化 用于有機(jī)氯、擬除蟲菊

9、v酯類檢測vaFlorisil固相萃取柱（1g），v用5mL丙酮+正已烷（10+90）,v條件化，再加5mL正已烷淋洗。vb當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面v時(shí)，立即將燒杯中用2mL正已烷v溶解的樣品溶液加到已條件化的vFlorisil柱上，并用15mL離心管v接受洗脫液?？恐亓^柱，逐滴v流下。四、樣品前處理過程四、樣品前處理過程N(yùn)Y761-2008方法方法v將離心管中收集的淋洗液放在水浴溫度為50的氮吹儀上，用氮?dú)饩徛祾咧列∮?mL，并定容到5mL。v移入2mL樣品瓶中上氣相色譜檢測。五、有機(jī)磷的分析條件與圖譜五、有機(jī)磷的分析條件與圖譜v有機(jī)磷農(nóng)藥檢測氣相色譜操作條件：v色譜柱：VF-1701

10、（30m0.25mm0.25um）；v柱溫：80保持1min，以20速度上升到130，再以5/min上升到200，再以15/min上升到250，保持11min。v進(jìn)樣口：250，檢測器300；不分流進(jìn)樣； v氮?dú)饬魉伲?0mL/min；柱流速：2mL/min；空氣流速：17mL/min；氫氣流速14mL/min。v進(jìn)樣量：1uL,v數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):varian 氣相色譜工作站五、有機(jī)磷的分析條件與圖譜五、有機(jī)磷的分析條件與圖譜v19種有機(jī)磷的圖譜五、有機(jī)磷的分析條件與圖譜五、有機(jī)磷的分析條件與圖譜v19種有機(jī)磷v的名稱、含量、v出峰時(shí)間v峰面積等。六、有機(jī)氯的分析條件與圖譜六、有機(jī)氯的分析條件與

11、圖譜v有機(jī)氯及菊酯類農(nóng)藥檢測氣相色譜操作條件：v色譜柱：VF-1ms（30m0.32mm0.25um）；v柱溫：80保持1min，以15/min速度上升到280,保持10.0min。v進(jìn)樣口：250，檢測器300；不分流進(jìn)樣；v氮?dú)饬魉伲?8mL/min；柱流速：2mL/min。 v進(jìn)樣量：1uL,v數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):varian 氣相色譜工作站六、有機(jī)氯的分析條件與圖譜六、有機(jī)氯的分析條件與圖譜v有機(jī)氯及菊酯類的圖譜六、有機(jī)氯的分析條件與圖譜六、有機(jī)氯的分析條件與圖譜v13種有機(jī)氯v的名稱、含量、v出峰時(shí)間v峰面積等。六、有機(jī)氯的分析條件與圖譜六、有機(jī)氯的分析條件與圖譜v當(dāng)兩峰重合時(shí)，如何進(jìn)行分

12、離？v1、改變柱溫與載氣流量。v2、換不同類型的色譜柱或更長的色譜柱。v3、用氣質(zhì)聯(lián)用來定性。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v一 、添加回收率（fortified recovery）v空白樣品中加入一定濃度某一種或幾種農(nóng)藥（C1）后，其樣品中此農(nóng)藥濃度測定值（C2）對加入值的百分率（F）。F=C2/C1*100%v添加回收率旨在衡量測定值與真值之間的誤差，是制定農(nóng)殘分析方法準(zhǔn)確度和可行性的指標(biāo)。v可以單個(gè)農(nóng)藥添加測定單殘留添加回收率，也可多種農(nóng)藥同時(shí)添加，測定多殘留添加回收率。v殘留回收率：70120%。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)

13、果的因素v二 、變異系數(shù)（Coefficient of variation,CV）v衡量回收率偏異程度，判定農(nóng)殘分析方法的精確度（重現(xiàn)性）指標(biāo)。vCV=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均回收率*100%vn 一般15%七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率低于70%的因素v1、勻漿后過濾時(shí)，濾液倒入濾紙時(shí)要低于濾紙邊沿2cm，防止濾液倒得太多，濺在外面，濾液要完全收集完。v2、吸取10.00mL乙腈提取液時(shí)，用10mL大肚吸管，吸液前用該液潤洗3次，使液體充滿吸管內(nèi)壁，吸取時(shí)刻度要準(zhǔn)確。v3、氮吹近干的要求是小燒杯內(nèi)

14、潮潮的一層，如果吹干會(huì)回收率低。v4、凈化時(shí)淋洗弗羅里矽柱時(shí)，液面不要干，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入上述待凈化溶液，如果柱子表面干了再倒入溶液，農(nóng)藥會(huì)吸附在柱子上，回收率降低。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v1、取樣時(shí)取樣量不均勻，取的菜汁多，菜樣少，在稱取樣品時(shí)應(yīng)該把粉碎過的菜樣再次混勻，不能只取固體菜樣或只取液體菜汁。v2、氮吹后加2mL丙酮，一定要加蓋鋁箔，這一步在排風(fēng)櫥中操作，如果不加蓋鋁箔，丙酮散發(fā)得快，很快就消失了，這樣也會(huì)引起回收率高。在樣品多時(shí)，操作速度要快，定容完一個(gè)立即進(jìn)行下一個(gè)，為防止時(shí)間過長，丙酮揮

15、發(fā)。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v氮吹后加2mL丙酮v或正已烷后要及時(shí)v加蓋鋁箔防止揮發(fā)。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v3、定容到5mL時(shí)不準(zhǔn)確，v少于5mL.七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v4、混勻溶液時(shí)不要灑出來v這樣也容易使回收率太高。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v5、標(biāo)液配制有問題，如果標(biāo)液峰面積小，那么在樣品峰面積/標(biāo)液峰面積時(shí)結(jié)果值會(huì)大，回

16、收率會(huì)升高。v6、標(biāo)液配制過程：吸200uL濃度為10ug/mL的標(biāo)液，到10mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，濃度為0.20ug/mL，進(jìn)氣相，測得峰面積。標(biāo)液配制要用校準(zhǔn)過的玻璃刻度移液管。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v移液槍與吸量管的峰面積比較七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v7、樣品基質(zhì)七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v回收率高于120%的因素v7、

17、樣品基質(zhì)問題的解決：va 通過已知分析物濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，同時(shí)盡可能保持樣品中基質(zhì)不變，建立一個(gè)校正曲線。vb 用樣品的基質(zhì)配標(biāo)液，例如找一空白樣品，按方法進(jìn)行前處理，最后定容至5mL，用這5mL配制標(biāo)液，進(jìn)氣相測得峰面積，這樣就大大減少了基質(zhì)效應(yīng)。七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v變異系數(shù)15%的因素v百菌清變異系數(shù)為17%，異菌脲變異系數(shù)為25%七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素七、前處理過程影響數(shù)據(jù)結(jié)果的因素v變異系數(shù)15%的因素v1、稱樣時(shí)樣品沒有混勻。v2、氮吹時(shí)吹干的程度不一樣。v3、加標(biāo)時(shí)加標(biāo)量有差異。v4、吸取10.00mL乙腈液時(shí)不準(zhǔn)確。v5、弗羅

18、里矽柱對樣品的影響。v6、用丙酮清洗小燒杯時(shí)，混勻程度不一。八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響v回收率高于120%的因素v1、色譜柱污染后，標(biāo)液與樣品峰面積有所改變，污染嚴(yán)重時(shí)，有些標(biāo)液不出峰或峰面積較小，而樣品與標(biāo)液的峰面積受影響是不同步的。八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響v回收率高于120%的因素v2、襯管受污染后，樣品峰面積減小的系數(shù)與標(biāo)液峰面積減小系數(shù)不一致。八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響v3、基質(zhì)與襯管的影響八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響v3、基質(zhì)與襯管的影響八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響八、氣相條件對數(shù)據(jù)結(jié)果的影響v3、