流式淋巴細(xì)胞亞群檢測技術(shù)原理

1、淋巴細(xì)胞亞群檢測目錄1淋巴細(xì)胞的分類2淋巴細(xì)胞亞群檢測方法3淋巴細(xì)胞亞群檢測原理4淋巴細(xì)胞亞群的免疫功能5淋巴細(xì)胞亞群的臨床意義T淋巴細(xì)胞細(xì)胞免疫B淋巴細(xì)胞體液免疫NK細(xì)胞固有免疫淋巴細(xì)胞的分類淋巴細(xì)胞占外周血白細(xì)胞總數(shù)的淋巴細(xì)胞占外周血白細(xì)胞總數(shù)的20%-40%20%-40%檢測方法采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是以流式細(xì)胞儀為檢測手段的一項(xiàng)能快速、精確的對(duì)單個(gè)細(xì)胞(或生物學(xué)顆粒)的理化特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析和分選的技術(shù)FCM檢測對(duì)象：單細(xì)胞懸液或生物顆粒；檢測參數(shù)：多參數(shù)；檢測特點(diǎn)：單細(xì)胞水平分析；檢測速度：高速，最高達(dá)上萬個(gè)細(xì)胞/秒；檢測結(jié)果：精度高、準(zhǔn)確性好；可對(duì)目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行分選；熒光抗體熒

2、光抗體直接標(biāo)記直接標(biāo)記 第一抗體第一抗體熒光二抗熒光二抗間接標(biāo)記間接標(biāo)記免疫熒光染色主要有兩種方法。間接標(biāo)記的方法難以進(jìn)行多色標(biāo)記，而且操作復(fù)雜，所以一般首選直接熒光染色檢測原理常用熒光素499nm 499nm 藍(lán)色熒光（藍(lán)色熒光（BlueBlue） 500-549nm500-549nm，綠色熒光（，綠色熒光（GreenGreen）550-584nm550-584nm，黃色熒光（，黃色熒光（YellowYellow） 585-615nm585-615nm，橙色熒光（，橙色熒光（OrangeOrange）616-700nm616-700nm，紅色熒光（，紅色熒光（RedRed） 700nm700

3、nm，遠(yuǎn)紅外熒光（，遠(yuǎn)紅外熒光（Far-RedFar-Red）常用熒光素?zé)晒馑胤肿訜晒馑胤肿蛹ぐl(fā)光波長激發(fā)光波長（nmnm）發(fā)射光波長發(fā)射光波長（nmnm）中文名中文名FITCFITC4 4888852525 5異硫氰酸熒光素異硫氰酸熒光素PEPE488488575575藻紅蛋白藻紅蛋白PerCPPerCP490490675675多甲藻葉綠素蛋白多甲藻葉綠素蛋白APCAPC6 63333660660別藻青蛋白別藻青蛋白PE-Cy5PE-Cy5488488670670藻紅蛋白藻紅蛋白- -花青素花青素5 5PE-Cy7PE-Cy74 488887 75555藻紅蛋白藻紅蛋白- -花青素花青素7

4、7免疫熒光染色FCM可檢測下列細(xì)胞成分：表面標(biāo)記物胞漿標(biāo)記物核內(nèi)標(biāo)記物可溶性成分聯(lián)合CD45的四色方案第一種是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色標(biāo)記，主要可以檢測T3細(xì)胞、T4細(xì)胞、T8細(xì)胞這三種不同的亞群CD45-FITCCD4-RD1CD8-ECDCD3-PC5聯(lián)合CD45的四色方案第二種是用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的標(biāo)記，用于檢測T3細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞CD45-FITCCD56-RD1CD19-ECDCD3-PC5檢測目的相互協(xié)作共同參與123功能比例數(shù)量T、B細(xì)胞相互作用主要檢測項(xiàng)目淋巴細(xì)胞總T細(xì)胞T4細(xì)胞T8細(xì)胞NK細(xì)胞B細(xì)胞總T淋巴細(xì)胞

5、CD3+T4細(xì)胞CD3+CD4+CD8-T8細(xì)胞CD3+CD8+CD4-B細(xì)胞CD3-CD19+NK細(xì)胞CD3-CD（16+56）+淋巴細(xì)胞的免疫標(biāo)志總T細(xì)胞增高提示體內(nèi)的T細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)見于臨床某些自身免疫性疾?。ㄈ鏢LE）、重癥肌無力、慢性活動(dòng)性肝炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、器官移植排斥反應(yīng)、T細(xì)胞性白血病等總T細(xì)胞降低提示體內(nèi)的T細(xì)胞免疫功能減弱見于某些白血病、應(yīng)用免疫抑制劑藥、放療過程中、先天性細(xì)胞免疫缺陷、艾滋病、多發(fā)性骨髓瘤、傳染性單核細(xì)胞增多癥，以及過勞等造成機(jī)體免疫功能處于相對(duì)較低的其他一些情況T4細(xì)胞增高提示體內(nèi)存在細(xì)菌等病原微生物感染，主要見于臨床各種細(xì)菌性感

6、染性疾病。器官移植發(fā)生排斥反應(yīng)支氣管哮喘SLE活動(dòng)期某些免疫增強(qiáng)藥物的有效結(jié)果注意:晝夜變化（傍晚的峰值可為上午的兩倍）T4細(xì)胞降低提示體內(nèi)存在病毒等病原微生物，主要見于臨床各種病毒感染性疾病，以HIV感染時(shí)減少最為明顯T4細(xì)胞減少也可見于免疫球蛋白缺乏癥、胸腺發(fā)育不良、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病、嚴(yán)重創(chuàng)傷、大手術(shù)等T8細(xì)胞主要功能：特異性直接殺傷靶細(xì)胞 兩條途徑：一是分泌穿孔素、顆粒酶及淋巴毒素 等直接殺傷靶細(xì)胞 二是通過Fas/FasL途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。殺傷特點(diǎn)：殺傷特點(diǎn)：連續(xù)性殺傷連續(xù)性殺傷特異性殺傷特異性殺傷MHCMHC限制性限制性T8細(xì)胞增高提示體內(nèi)存在病毒或胞內(nèi)寄生菌等病原微生物感染主要見

7、于HIV、HBV、CMV、EB等病毒感染也可見于結(jié)核桿菌感染等T8細(xì)胞降低移植排斥反應(yīng)可見于免疫球蛋白缺乏癥胸腺發(fā)育不良嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病糖尿病等T4/T8細(xì)胞比值增高是T4淋巴細(xì)胞增高或T8淋巴細(xì)胞減少所致見于某些自身免疫性疾病，如SLE、多發(fā)性硬化、器官移植排斥反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血等T4/T8細(xì)胞比值降低是T4細(xì)胞減少或T8細(xì)胞增高所致見于艾滋病、再生障礙性貧血、某些白血病、傳染性單核細(xì)胞增多癥、免疫缺陷綜合征、某些病毒感染、惡性腫瘤、結(jié)核病等一般來說，導(dǎo)致T4/T8比值倒置，以全身性、侵襲和破壞機(jī)體免疫系統(tǒng)的感染引起的倒置變化幅度最大臨床抗感染治療有效時(shí)，可以觀察T4/T8細(xì)胞比值

8、的逐步恢復(fù)T4/T8細(xì)胞比值臨床意義器官移植受者免疫功能監(jiān)測個(gè)體化免疫治療療效判斷受者需要的是一種恰當(dāng)?shù)拿庖咭种?，將免疫功能控制在較低的一個(gè)范圍內(nèi)。需要經(jīng)常性監(jiān)測受者的免疫功能，T4/T8細(xì)胞比值是非常好的一個(gè)監(jiān)測指標(biāo)當(dāng)受者T4/T8細(xì)胞比值出現(xiàn)小于0.2的情況時(shí)，必須立即停用免疫抑制藥，等待免疫功能的適當(dāng)恢復(fù)T4/T8細(xì)胞比值與腫瘤惡性腫瘤患者術(shù)前T4/T8細(xì)胞比值低，手術(shù)后比值恢復(fù)正常當(dāng)發(fā)生癌轉(zhuǎn)移時(shí),T3、T4細(xì)胞數(shù)明顯減少的同時(shí)T8細(xì)胞數(shù)明顯增多T4/T8比值明顯降低,提示惡性腫瘤患者晚期細(xì)胞免疫功能更低,預(yù)后更差B細(xì)胞增高提示機(jī)體體液免疫功能被增強(qiáng)此時(shí)體內(nèi)高親和力抗體的產(chǎn)生也增加見于臨

9、床各種細(xì)菌性感染B細(xì)胞增高也見于B細(xì)胞白血病B細(xì)胞減少見于原發(fā)及繼發(fā)性免疫功能低下，臨床可出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的呼吸道及消化道感染見于嚴(yán)重病毒性感染、使用免疫抑制劑制藥等情況見于原發(fā)性B細(xì)胞缺陷?。ㄈ缧月?lián)無丙種球蛋白血癥）和重癥聯(lián)合免疫缺陷（T細(xì)胞同時(shí)缺如）體液免疫功能不良者則減少在生命垂危時(shí)可呈現(xiàn)極度減少 自然殺傷細(xì)胞表面標(biāo)記 CD3-、CD56+、CD16+表面受體（1）殺傷細(xì)胞活化受體（KAR） 結(jié)合靶細(xì)胞表面糖類配體，促使NK發(fā)揮殺傷作用。（2）殺傷細(xì)胞抑制受體（KIR） 識(shí)別自身細(xì)胞表面MHC-I類分子，產(chǎn)生抑制信號(hào)無須致敏即直接殺傷靶細(xì)胞,抗感染與抗腫瘤,免疫調(diào)節(jié)NK細(xì)胞作用及效應(yīng)機(jī)制 抗

10、體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC） 天然細(xì)胞毒性 NK細(xì)胞介導(dǎo)的凋亡 NK細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子 NK細(xì)胞受體 NK細(xì)胞通過ADCC作用殺傷病毒感染的靶細(xì)胞NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞電鏡圖細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞電鏡圖NK細(xì)胞NK細(xì)胞是機(jī)體抗某些病毒、細(xì)菌、寄生蟲、真菌感染的重要免疫因素，NK細(xì)胞異常在病毒感染時(shí)尤其突出。NK細(xì)胞減少見于薩科奇病毒、腦心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、HSV-型等感染。NK細(xì)胞也參與型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)，IL-2治療后外周血NK細(xì)胞數(shù)量增加。NK細(xì)胞NK細(xì)胞與腫瘤性疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)一般而言，腫瘤患者NK細(xì)胞數(shù)量較正常人減少，且減少的程度與腫瘤病情的嚴(yán)重程度密切