《山銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》

1、ICS65.020.20點(diǎn)擊此處添加中國標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)分類號(hào)B 66DB43湖南省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 43/T××××2022山銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程Code of practice for propogation via tissue culture of Lonicerae Flos點(diǎn)擊此處添加與國際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識(shí)（征求意見稿）2022-××-××發(fā)布××××-××-××實(shí)施發(fā)布DB 43/T ×××

2、15;2022目錄前言III山銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程11 范圍12 規(guī)范性引用文件13 術(shù)語和定義13.1 山銀花LoniceraeFlos13.2 壯苗培養(yǎng)14 外植體采集14.1 采集時(shí)間14.2 采集方法15 外植體處理15.1 清洗25.2 滅菌26 培養(yǎng)基制備26.1培養(yǎng)基配方26.2培養(yǎng)基配制、滅菌與保存27組織培養(yǎng)27.1培養(yǎng)條件27.2 初代培養(yǎng)27.3 繼代培養(yǎng)27.4壯苗培養(yǎng)37.5生根培養(yǎng)37.5煉苗38移栽38.1 移栽容器38.2移栽基質(zhì)38.3 移栽時(shí)間38.4 移栽方法385移栽苗管理49容器苗培育49.1 容器49.2基質(zhì)49.2基質(zhì)消毒49.3栽植方法49.

3、4苗木管理410苗木出圃511檔案管理5附錄A(資料性附錄) 山銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基配方6前言本文件按照GB/T 1.1-2020給出的規(guī)則起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由湖南省林業(yè)局提出。本文件由湖南省林業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：湖南省林業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：王湘瑩、王曉明、李永欣、蔡能、曾慧杰、喬中全、陳藝、王昊。6山銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程1 范圍本文件規(guī)定了山銀花組織培養(yǎng)育苗技術(shù)的外植體采集、外植體處理、培養(yǎng)基制備、組織培養(yǎng)、移栽、容器苗培育、苗木管理、苗木出圃、檔案管理等生產(chǎn)技術(shù)要求。本文件適用于湖南省山銀花組

4、織培養(yǎng)育苗。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6001 育苗技術(shù)規(guī)程LY/T 1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程LY/T 1000容器育苗技術(shù)3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1 山銀花Lonicerae Flos為忍冬科忍冬屬植物灰氈毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand. -Mazz.)。3.2 壯苗培養(yǎng) Strong seedling culture將增殖的山銀花叢芽剪成單芽莖段接

5、種到壯苗培養(yǎng)基上，使其生長粗壯。4 外植體采集4.1 采集時(shí)間宜在春季3-4月晴天葉片表面露水干后采集外植體。4.2 采集方法選擇生長健壯、無病蟲害的母樹采集外植體。從當(dāng)年生嫩枝上剪取帶頂芽或腋芽的莖段，留葉柄基部，去掉葉片。將采集的嫩枝低溫保濕帶回實(shí)驗(yàn)室，取嫩枝頂端4 cm-6 cm作為外植體。5 外植體處理5.1 清洗用自來水沖洗外植體3次5次，用軟毛刷蘸中性洗潔精溶液輕輕刷洗，再用流水沖洗外植體至潔凈。5.2 滅菌在超凈臺(tái)上將外植體浸泡在75%酒精10 s，無菌水沖洗2次3次，用添加2滴3滴吐溫-80的0.1%升汞溶液浸沒外植體5 min，無菌水沖洗4次5次，用滅菌濾紙吸干外植體表面水分

6、。6 培養(yǎng)基制備6.1培養(yǎng)基配方初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基與生根培養(yǎng)基的配方見附錄A.6.2培養(yǎng)基配制、滅菌與保存按照LY/T 1882執(zhí)行。7組織培養(yǎng)7.1培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度25 ±2 ，光照時(shí)間h·d-1，光照強(qiáng)度3040 mmol·m-2·s-1。7.2 初代培養(yǎng)將滅菌的外植體切成長1.5 cm2.5 cm的小莖段，接種在初代培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30 d左右。7.3 繼代培養(yǎng)7.3.1初代轉(zhuǎn)接將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)的萌芽切成長2.0 cm2.5 cm的莖段，接種在繼代培養(yǎng)基上。7.3.2繼代轉(zhuǎn)接將繼代培養(yǎng)增殖的叢生芽按2個(gè)3個(gè)芽為一個(gè)單位分開，切去基部褐變

7、的愈傷組織，接種在新的繼代培養(yǎng)基上。7.3.3繼代周期每隔25 d30 d將繼代苗轉(zhuǎn)接到新的繼代培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)控制在16代內(nèi)。7.3.4增殖材料更新增殖材料繼代培養(yǎng)超過16代或出現(xiàn)退化，苗細(xì)弱時(shí)，宜重新采集外植體更新繁殖材料。7.4壯苗培養(yǎng)將繼代苗剪成長2.0 cm2.5 cm莖段，接種在壯苗培養(yǎng)基上。7.5生根培養(yǎng)6.3.5.1生根接種從壯苗培養(yǎng)的組培苗中挑選高2.5 cm4.0 cm的健壯苗，分割成單株后轉(zhuǎn)接在生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。6.3.5.2生根周期生根培養(yǎng)25 d30 d后，待長出完整的根系后煉苗移栽。7.5煉苗當(dāng)組培苗根長度達(dá)到1.0 cm1.5 cm時(shí)進(jìn)行煉苗，將組培瓶苗移

8、到溫室大棚。煉苗溫度控制1530，自然光下閉口煉苗7 d10 d。8移栽8.1 移栽容器選用穴盤或底部有孔的育苗盤。8.2移栽基質(zhì)泥炭土70%，珍珠巖30%。8.3 移栽時(shí)間宜在春季、初夏和初秋時(shí)移栽。8.4 移栽方法從培養(yǎng)瓶中取出煉苗后的生根苗，清水洗凈根部培養(yǎng)基。在58%瑞毒霉錳鋅可濕性粉劑0.1%溶液中浸泡3 min4 min，取出后移栽在盛有基質(zhì)的移栽容器中，用該瑞毒霉錳鋅溶液淋透移栽基質(zhì)。85移栽苗管理將移栽的組培苗置于有自動(dòng)噴霧設(shè)備的塑料大棚中，覆蓋遮光率85%的遮陽網(wǎng)，開啟自動(dòng)噴霧設(shè)備。移栽50 d60 d后將成活的組培苗栽植在育苗容器中，進(jìn)行容器苗培育。9容器苗培育9.1 容器

9、宜選用塑料營養(yǎng)杯，規(guī)格9 cm×9 cm 或10 cm×10 cm。9.2基質(zhì)泥炭土80%，珍珠巖20%。9.3基質(zhì)消毒栽植組培苗前1 d2 d，用70%甲基托布津或75%百菌清或58%甲霜錳鋅1000倍液淋透基質(zhì)。9.4栽植方法在育苗容器中裝填約1/2的基質(zhì)，將組培苗栽植在育苗容器中，加滿基質(zhì)，淋足定根水。9.5苗木管理9.5.1光照控制組培苗栽植在育苗容器后置于遮光率85%的遮陽棚內(nèi)。栽植后1個(gè)月后，選擇陰天，揭去遮陽網(wǎng)。9.5.2水分管理根據(jù)基質(zhì)的干濕情況適時(shí)澆水或噴水，保持基質(zhì)濕潤。9.5.3施肥每隔15 d20 d用氮磷鉀水溶性肥600倍800倍溶液澆苗1次。9.

10、5.4打頂摘心當(dāng)苗木頂梢開始彎曲，及時(shí)在彎曲處打頂摘心。9.5.5病蟲害防治每隔15 d20 d噴施75%百菌清800倍液與25克/升溴氰菊酯乳油2000 倍混合溶液。9.5.6除草按照LY/T 1000執(zhí)行。10苗木出圃10.1 苗木分級(jí)合格容器苗分為級(jí)、級(jí)苗，分級(jí)指標(biāo)見表1。苗齡(月)I級(jí)苗II級(jí)苗綜合控制指標(biāo)苗高(cm)地徑(cm)苗高(cm)地徑(cm)1240.00.5030.00.40根系完整和發(fā)達(dá)，生長健壯，葉色正常10.2 苗木檢驗(yàn)容器苗出圃應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)方法和檢測(cè)規(guī)則按GB6001規(guī)定執(zhí)行。10.3苗木出圃按GB 6001規(guī)定執(zhí)行。11檔案管理檔案管理的內(nèi)容包括：外植體

11、采集與處理情況、組織培養(yǎng)和容器育苗技術(shù)措施、苗木管理、各項(xiàng)作業(yè)的用工量和原材料消耗等。附錄A(資料性附錄) 山銀花組織培養(yǎng)培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基成分類別培養(yǎng)基成分初代培養(yǎng)基 mg/L繼代培養(yǎng)基mg/L壯苗培養(yǎng)基mg/L生根培養(yǎng)基mg/L大量元素NH4N031650825825825KNO3190000950MgS04 7H20370185185185KH2PO4170858585CaCl2 2H20400220220220鐵鹽FeS03 7H2027.827.827.827.8Na2-EDTA37.337.337.337.3微量元素MnS04 4H2022.322.322.322.3ZnS04 7H208.68.68.68.6CuS04 5H200.0250.0250.0250.025Na2 Mo04 2H200.250.250.250.25CoC12 6H200.0250.0250.0250.025KI0.830.830.830.83H3BO36.26.26.26.2有機(jī)營養(yǎng)成分煙酸0.50.50.50.5鹽酸硫胺素0.10.10.10.1鹽酸吡哆醇0.50.50.50.5甘