毛細(xì)管電泳的使用

1、高效毛細(xì)管電泳儀的使用與維護(hù)基本原理 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳(CE)又稱(chēng)高效毛細(xì)管電泳高效毛細(xì)管電泳(HPCE),是指離子或帶電粒子以毛細(xì)管為分離室,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的液相分離分析技術(shù)。 高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬(wàn)塊/米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬(wàn)。特特 點(diǎn)點(diǎn) 1.儀器簡(jiǎn)單、易自動(dòng)化儀器簡(jiǎn)單、易自動(dòng)化 電源、毛細(xì)管、檢測(cè)器、檢測(cè)池 2.分析速度快、分離效率高分析速度快、分離效率高 在3.1min內(nèi)分離36種無(wú)機(jī)及有機(jī)陰離子，4.1min內(nèi)分離了24種陽(yáng)離子；分離柱效：105107萬(wàn)/m理論塔板數(shù)； 3.操作

2、方便、消耗少操作方便、消耗少 進(jìn)樣量極少，水介質(zhì)中進(jìn)行； 4.應(yīng)用范圍極廣應(yīng)用范圍極廣 有機(jī)物、無(wú)機(jī)物、生物、中性分子；生物大分子等； 分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)、環(huán)境保護(hù)、材料等；分離原理分離原理電泳儀電泳儀進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)CL1020 高效毛細(xì)管電泳儀北京華陽(yáng)利民儀器有限公司北京華陽(yáng)利民儀器有限公司www.huayanglimin .com儀器組成 CL101A 高壓電源 CL1020 紫外檢測(cè)器 CT 數(shù)據(jù)采集及處理工作站 毛細(xì)管電泳檢測(cè)池1. 電泳箱開(kāi)關(guān) 5.毛細(xì)管 9 .液晶顯示屏 13. 檢測(cè)池 17.清洗器2. 電泳分離支

3、架 6. 進(jìn)樣支架 10. 數(shù)字按鍵 14.高壓電源負(fù)極3. 緩沖溶液瓶 7.檢測(cè)器開(kāi)關(guān) 11. 氘燈 15.高壓負(fù)極插座4. 高壓電源正極 8.面板輕觸鍵盤(pán) 12.前置放大器盒 16.高壓連鎖門(mén)控開(kāi)關(guān) 主要技術(shù)參數(shù) 1. 進(jìn)樣進(jìn)樣 液體壓力差進(jìn)樣 50-100mm 2. 沖洗方式?jīng)_洗方式 彈簧助推正壓沖洗 3. 毛細(xì)管毛細(xì)管 石英毛細(xì)管，長(zhǎng)度50-100cm，內(nèi)徑為25-75um 4. 檢測(cè)器波長(zhǎng)范圍檢測(cè)器波長(zhǎng)范圍 190-700nm 5.輸出電壓輸出電壓 0-30kv，連續(xù)可調(diào)儀器運(yùn)行環(huán)境要求儀器運(yùn)行環(huán)境要求 1. 工作環(huán)境干燥，溫度變化小，30，8 小時(shí)內(nèi)溫差波動(dòng)不超過(guò)3（推薦在裝有空調(diào)

4、的環(huán)境中）。 2. 環(huán)境濕度不大于80% 3. 測(cè)量過(guò)程中儀器不要搖動(dòng) 4. 接通電源，儀器預(yù)熱30分鐘 5. 工作電流不要長(zhǎng)時(shí)間超過(guò)150 微安，因?yàn)檫^(guò)高的電流會(huì)是毛細(xì)管內(nèi)的徑向溫度梯度增加，使樣品分離度降低。毛細(xì)管的清洗與維護(hù)毛細(xì)管的清洗與維護(hù) 新毛細(xì)管使用：新毛細(xì)管使用：使用前分別用1mol/L、1mol/LNaOH、水、及緩沖液沖洗毛細(xì)管30分鐘。 如果儀器長(zhǎng)時(shí)間不用（多于一個(gè)星期），清洗后用空氣吹毛細(xì)管20 分鐘，并放于干燥環(huán)境下保存。方法如下：清洗試劑吸入5ml 注射器中，將注射器插入清洗器的固定孔中，用針頭將毛細(xì)管引過(guò)清洗器接口的橡皮墊，連接于注射器出口上，移動(dòng)清洗器手柄使清洗器

5、頂塊壓在注射器推桿上即可進(jìn)行毛細(xì)管沖洗。若是毛細(xì)管直接通過(guò)清洗器接口的橡皮墊必須將毛細(xì)管口截去1mm，以避免發(fā)生堵塞現(xiàn)象。 檢測(cè)窗口：檢測(cè)窗口：選擇毛細(xì)管電泳流通池，使用開(kāi)窗器夾在距離毛細(xì)管出口910 cm 處，用打火機(jī)將此處毛細(xì)管表面的聚酰亞胺燒去，并用擦鏡紙沾丙酮除去余炭，同時(shí)將毛細(xì)管外部灰塵擦凈，自下而上穿入毛細(xì)管流通池，將毛細(xì)管窗口部位固定在流通池窗口，注意應(yīng)將流通池上部螺釘擰緊至毛細(xì)管不能上下移動(dòng)，而下部螺釘不能擰緊！將檢測(cè)流通池裝在檢測(cè)器上，用專(zhuān)用螺釘固定。 檢測(cè)池放入主機(jī)箱正面檢測(cè)池座中，在緩沖溶液瓶中加入新配制好的緩沖溶 液,將電極和毛細(xì)管的兩端浸在緩沖溶液中,保持毛細(xì)管兩端出

6、口在同一水平面 上，且毛細(xì)管內(nèi)必須充滿(mǎn)緩沖溶液,關(guān)好儀器正門(mén),確認(rèn)儀器各部分連接正確后,按 動(dòng)高壓?jiǎn)?dòng)按鈕,如果發(fā)生異常應(yīng)立即按動(dòng)高壓關(guān)斷鈕,檢查并排除故障后,再重 新加壓。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要設(shè)定儀器工作參數(shù)，見(jiàn)下述高壓電源及各檢測(cè)器操作說(shuō)明。 流體壓差進(jìn)樣：將樣品瓶放在高度進(jìn)樣架上，根據(jù)需要調(diào)整進(jìn)樣高度 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后關(guān)閉電源，用蒸餾水沖洗毛細(xì)管30 分鐘，或?qū)⒕彌_溶液保持在毛 細(xì)管中即將毛細(xì)管至于壓力清洗裝置中。儀器各組件操作說(shuō)明儀器各組件操作說(shuō)明 高壓電源 CL 101A 高壓電源是為高效毛細(xì)管電泳儀提供高壓直流電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)力的直流電源設(shè)備。電壓輸出連續(xù)可調(diào)組次窗：組次窗：兩位數(shù)碼管，用于顯示當(dāng)前操

7、作的組次值，共支持100 級(jí)操作（0-99）節(jié)次窗：節(jié)次窗：一位數(shù)碼管，用于顯示當(dāng)前操作的節(jié)次值，共支持10 節(jié)（0-9）電壓窗：電壓窗：設(shè)置狀態(tài)顯示設(shè)定的電壓值，運(yùn)行狀態(tài)顯示電壓輸出值。電流窗：電流窗：設(shè)置時(shí)顯示輸出電流報(bào)警值，運(yùn)行時(shí)顯示監(jiān)測(cè)電流值。時(shí)間窗：時(shí)間窗：用于顯示當(dāng)前操作組次、節(jié)次的時(shí)間設(shè)置值，正常工作時(shí)可倒計(jì)時(shí)。 紫外檢測(cè)器RESET：系統(tǒng)復(fù)位鍵，即使系統(tǒng)回到初始默認(rèn)狀態(tài)；A/Z：調(diào)零鍵，基線(xiàn)回零點(diǎn)；WL：波長(zhǎng)調(diào)節(jié)鍵，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至分析所需值（系統(tǒng)默認(rèn)為254nm）；TC：時(shí)間常數(shù)調(diào)節(jié)鍵，調(diào)節(jié)時(shí)間常數(shù)至分析所需值（系統(tǒng)默認(rèn)為0.5s）；RNG：量程調(diào)節(jié)鍵（共分為0.002、0.005

8、、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2AU/MV10 檔），調(diào)節(jié)信號(hào)輸出量程（僅在使用記錄儀時(shí)有效），若信號(hào)線(xiàn)所接的是數(shù)據(jù)處理輸出端子，此量程調(diào)節(jié)鍵不起作用；1、29、：數(shù)字及小數(shù)點(diǎn)鍵，用于輸入所需數(shù)值；ENTER：確認(rèn)鍵，在輸入波長(zhǎng)等后須按該鍵后系統(tǒng)方可確認(rèn)當(dāng)前的輸入操作。常見(jiàn)故障及說(shuō)明常見(jiàn)故障及說(shuō)明半胱氨酸半胱氨酸高效毛細(xì)管電泳實(shí)驗(yàn) 樣樣 品：品： 半胱氨酸 緩沖溶液緩沖溶液(buffer)： 10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4 1:1緩沖溶液(NaH2PO4和Na2HPO4各5mMol/L)，pH10.6. 0.1mol/L NaOH溶液，二次去離

9、子水。 步步 驟驟 儀器的預(yù)熱和毛細(xì)管的沖洗：打開(kāi)儀器和配套的工作站。工作溫度設(shè)置為30，不加電壓，沖洗新毛細(xì)管，順序依次是：1 mol/L HCl溶液30 min二次水5 min ，1 mol/L NaOH溶液30 min，二次水5 min，10 mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4 1:1緩沖溶液5 min，兩次運(yùn)行之間依次用0.1 mol/L NaOH 2min, 二次水2 min, 緩沖液5min。 樣品測(cè)定樣品測(cè)定 液體壓力差進(jìn)樣，進(jìn)樣壓力50 mbar，進(jìn)樣時(shí)間20s。然后開(kāi)始分析，電壓30 kV。 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1. 沖洗毛細(xì)管時(shí)禁止在毛細(xì)管上加電壓；不允許更改講義上給定的工作電壓，也不建議改變進(jìn)樣時(shí)間。 2. NaOH、HCl、二次水、樣品和緩沖溶液等之