檢驗儀器分析技術(shù)及應(yīng)用

1、一緒論臨床檢驗技術(shù)技術(shù)分類：臨床化學(xué)檢驗分析技術(shù)（包括自動生化分析、干化學(xué)分析、血氣分析、電解質(zhì)分析、 電泳分析） 臨床免疫學(xué)檢驗分析技術(shù)臨床血液學(xué)檢驗和尿液檢驗分析技術(shù)（血細胞分析、 血液凝固分析、 血液流變分析、 流式細胞分析、 血紅細胞沉降分析和尿液分析）臨床微生物學(xué)檢驗分析技術(shù)臨床分子生物學(xué)檢驗分析技術(shù)二血細胞分析技術(shù)血液由血漿（ 55%）和血細胞（ 45%）組成。（填空題）所謂血細胞計數(shù)主要是指計數(shù)單位容積中紅細胞、白細胞和血小板的個數(shù)。（填空題）白細胞被稱為人體衛(wèi)士，它可以防止外來微生物的侵害及其他感染。血細胞計數(shù)有變阻脈沖法（簡稱變阻法）、光電計數(shù)法和激光計數(shù)法。（大題）變阻法血

2、細胞計數(shù)原理：血細胞是電的不良導(dǎo)體，將血細胞置于電解液中，由于細胞很小，一般不會影響電解液的導(dǎo)通程度。但是如果構(gòu)成電路的某一小段電解液截面很小，其尺度可與細胞直徑相比擬，那么當(dāng)有細胞浮游到此時，將明顯增大整段電解液的等效電阻。如果該電解液外接恒流源(不論負載阻值如何改變，均提供恒定不變的電流 )，則此時電解液中兩極間的電壓是增大的，產(chǎn)生的電壓脈沖信號與血細胞的電阻率成正比。如果控制定量溶有血細胞的電解溶液，使其從小截面通過，也即使血細胞順序通過小截面，則可得到一連串脈沖，對這些脈沖計數(shù)，就可求得血細胞數(shù)量。由于各種血細胞直徑不同，所以其電阻率也不同，所測得的脈沖幅度也不同，根據(jù)這一特點就可以對

3、各種血細胞進行分類計數(shù)。這就是變阻脈沖法原理。（填空題）變阻脈沖法計數(shù)在大多數(shù)細胞計數(shù)器中是利用小孔管換能器裝置實現(xiàn)的。（填空題）脈沖的個數(shù)與通過小孔的細胞個數(shù)相當(dāng)，脈沖的幅度與細胞體積成正比。脈沖信號經(jīng)過下列步驟得出細胞計數(shù)結(jié)果：放大，閾值調(diào)節(jié)，甄別，整形。（填空題） 體積不同的紅細胞、白細胞、 血小板， 其產(chǎn)生的脈沖幅度也不同，排列序列以白細胞最大，紅細胞次之，血小板最小。（簡答）什么叫細胞直方圖：以體積為橫坐標，以細胞的相對數(shù)量為縱坐標。把細胞在一個個很小的體積范圍（小于 2fld ，又稱通道， 頻道）內(nèi)的數(shù)量分布情況表達出來，我們稱之為直方圖。 紅細胞直方圖 （顯示范圍從24 360f

4、l ）血小板直方圖（顯示范圍0 36fl ）白細胞直方圖（顯示范圍是30 450fl ，在直方圖上表現(xiàn)為3 個白細胞亞群， 35 90fl范圍的淋巴細胞群，可以包括淋巴細胞，91 160fl 范圍的單個核細胞群，可以包括單核細胞、幼稚細胞， 161 450fl范圍的粒細胞群，可以包括嗜酸性細胞、嗜堿性細胞、中性粒細胞。）白細胞直方圖除顯示分類外，還顯示4 個報警區(qū)域，如果某個報警區(qū)域里的計數(shù)值異常增多，就在此區(qū)域出現(xiàn)R報警， R1 為直方圖上淋巴峰左側(cè)區(qū)域有異常，可能有血小板凝塊、巨大血小板、有核紅細胞、不溶性紅細胞和冷凝集素等因素的影響， R2為直方圖上淋巴峰和單和峰之間的區(qū)域有異常，可能有

5、異型淋巴細胞、幼稚淋巴細胞、漿細胞、嗜酸性細胞或嗜堿性細胞等因素的影響，R3 為直方圖上核峰和中性粒峰之間的區(qū)域有異常有不成熟粒細胞、嗜酸性粒細胞等因素的影響，R4 為直方圖上中性粒峰右側(cè)區(qū)域有異常，粒細胞數(shù)量過多，Rm 為以上區(qū)域 2個或 2 個以上同時有異常。存在著 2 個以上的細胞同時通過細孔的現(xiàn)象稱為重合現(xiàn)象。為了在物理上最大限度地減少重合現(xiàn)象，開發(fā)出了鞘流法，具體方法為：具體做法是用一毛細管對準小孔管,細胞混懸液從毛細管噴出 ,同時與四周流出的鞘液一起流過敏感區(qū),保證細胞混懸液在中間形成單個排列的細胞液,四周被鞘液圍繞 . 鞘流技術(shù)可應(yīng)用于兩種細胞計數(shù)原理:一為電阻抗原理,鞘流通過小

6、孔的敏感區(qū)進行細胞計數(shù),另一種為激光計數(shù)原理 , 細胞液流室較長 ,與激光垂直相交,激光光束對流經(jīng)的每一個細胞照射后產(chǎn)生光散射,利用此原理進行細胞計數(shù)。（大題）為控制細胞通過小孔時的精密度，除采用鞘流技術(shù)外，各廠家還采用了一系列相關(guān)技術(shù)：脈沖編輯，高精度體積分析，掃流技術(shù)，防反流裝置VonBehrens 感應(yīng)器，延時計數(shù)。定量裝置中的特殊部件主要有負壓泵、壓力調(diào)節(jié)器、廢液瓶等。（大題）白細胞分類技術(shù)：1.容量、電導(dǎo)、光散射法 (VCS )體積（ V ）：測量使用的是電阻抗原理。電導(dǎo)法（C）：根據(jù)細胞壁能產(chǎn)生高頻電流的性能采用高頻電磁探針，測量細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)、 細胞核和細胞漿的比例以及細胞內(nèi)質(zhì)粒的

7、大小和密度。光散射（ S）：是根據(jù)細胞表面光散射的特點提供了注重細胞類型的鑒別方式，來自激光光源的單色光束直接進入計數(shù)池的敏感區(qū)，在1070°時對每一個細胞進行掃描分析，提供了細胞結(jié)構(gòu)，形態(tài)的光散射信息。2.阻抗與射頻聯(lián)合法： 此類儀器白細胞分類通過三個不同檢測系統(tǒng)完成.a 嗜酸性細胞檢測系統(tǒng)b 嗜堿性細胞檢測系統(tǒng)c 淋巴、單核、粒細胞（中性、嗜堿性、嗜酸性）檢測系統(tǒng)3.光散射與細胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合法4.多角度偏振光散射技術(shù)。測量正常標本時，可以從這4 個角度（ 0° <1-3> 、 10° <7-11> 、90°垂直光散射 <

8、70-110>對白細胞進行測量。同一種特定的程序自動存儲和分析數(shù)據(jù)，將白細胞分為嗜酸性粒、中性粒、嗜堿性粒、淋巴和單核五種。（大題）血紅蛋白測量原理：血紅蛋白的單位是g 100m1(新制是 g L) ，臨床檢驗時因難以從血液中將其分離出來而采用相對比色法進行間接測量。用溶血劑將經(jīng)過稀釋的血液中的紅細胞破壞，血紅蛋白便溶解出來，再加入轉(zhuǎn)化試劑進而轉(zhuǎn)化為顏色穩(wěn)定的氰化血紅蛋白。血紅蛋白含量越高，它的顏色就越深， 透光性就越差 (或吸光性越強 )。用光電器件檢測透射光強度，并與已定標的血紅蛋白值相比較，即可得出血紅蛋白含量。常用的光路系統(tǒng)為了防止光散射和外來光干擾，均采用雙波長法測量。在血液樣

9、品中加入氰化鉀，將生成氰化血紅蛋白，這是一種顏色很穩(wěn)定的物質(zhì)。它的光密度曲線在540nm 處有一個吸收峰。（填空）血樣分析一般包括吸樣、稀釋、送樣等過程。三流式細胞分析技術(shù)（簡答題）流式細胞儀（FCM ）：主要功能：可進行細胞多參量分析，包括細胞大小、形狀、蛋白熒光、氧化還原狀態(tài)、膜的結(jié)構(gòu)、流動性、微黏性、膜電位、酶活性、鈣離子含量、 pH 、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、 DNA 合成、堿基比例等；進行細胞表型分析；細胞分選、 DNA 含量分析以及細胞分化周期分析等。FCM 工作原理：將待測細胞染色后制成單細胞懸液。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測

10、樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包圍著樣品高速流動，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列，依次通過監(jiān)測區(qū)域。流式細胞儀通常以激光作為激發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束，垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激光熒光。光散射信號在前向小角度進行檢測， 這種信號基本上反映了細胞體積的大小。 這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度， 經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號。 細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現(xiàn)的。流式細胞儀中所用的濾片有中性濾片、帶通濾片、帶阻濾片、長波通濾片、短波通濾片、長波通雙色性反射片（填空題）影響流式細胞術(shù)分

11、析的因素：細胞的熒光染色、激光光源的穩(wěn)定性、細胞流速的穩(wěn)定性、細胞懸液樣品的影響（細胞黏連，團塊常造成管道阻塞，重疊細胞可造成分析誤差。）流式細胞儀的組成：光學(xué)系統(tǒng)，液流系統(tǒng)，電子系統(tǒng)，計算機系統(tǒng)和數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換處理系統(tǒng)。（大題）流式細胞儀的臨床應(yīng)用：在免疫學(xué)中的應(yīng)用（外周血T 淋巴細胞亞群的測定，T 淋巴細胞亞群用于器官移植后排斥反應(yīng)的監(jiān)測，肺泡灌洗液中T 淋巴細胞亞群的測定，在艾滋病監(jiān)測中的應(yīng)用，細胞內(nèi)染色和細胞因子的測定）；在血液病學(xué)中的應(yīng)用。四血凝分析技術(shù)生物學(xué)方法：凝固法，即將凝血因子激活劑加入到待檢血漿中，使血漿發(fā)生體外凝固，凝血儀連續(xù)記錄血漿凝固過程中的一系列變化，并將這些變化信號轉(zhuǎn)變

12、成數(shù)據(jù)，用計算機收集、處理數(shù)據(jù)后得出檢測結(jié)果。（填空題）可分為三類：電流法、黏度法、光學(xué)法。（判斷題）凝血儀根據(jù)這種由于血液凝固而導(dǎo)致光強度的變化來判斷凝固終點的方法稱之為光學(xué)法。（填空或判斷題） 散射比濁法： 根據(jù)待檢樣品在凝固過程中散射光的變化來確定凝固終點的檢測方法。透射比濁法：根據(jù)待檢樣品在凝固過程中吸光度的變化來確定凝固終點的檢測方法。黏度法：在待檢樣品中加入小鐵珠，利用變化的磁場使小鐵珠產(chǎn)生運動，隨著血漿的凝固，血漿粘稠度增加，小鐵珠的運動強度逐漸減弱，儀器根據(jù)小鐵珠運動強度的變化來確定凝固終點。生物化學(xué)方法是以酶學(xué)方法為基礎(chǔ)的直接定量法，其優(yōu)點是用酶學(xué)方法直接定量；測定結(jié)果準確；

13、重復(fù)性好；便于自動化；標準化；所需樣品量小。五血液流變學(xué)分析技術(shù)影響血液流變特性因素：紅細胞的特性、白細胞的變形性、血小板的聚集性、纖維蛋白原濃度等血液流變特性：紅細胞聚集性，紅細胞變形性，血液黏度（全血黏度 <與流變場中切變率有一定關(guān)系 >、運動黏度、相對黏度、比黏度、還原黏度） 。血液黏度的測量是其中最重要的指標。測量血液黏度的儀器目前普遍應(yīng)用的是毛細管黏度計及回轉(zhuǎn)錐板式黏度計。毛細管法測血黏度的理論依據(jù)是泊肅葉定律。血液黏度的影響因素：血液中細胞因素的影響<紅細胞對血液黏度的影響（紅細胞壓積是主要影響因素），白細胞對血液黏度的影響，血小板對血液黏度的影響>；血漿血

14、清黏度對血液黏度的影響；溫度對血液黏度的影響；酸堿度及滲透壓對血液黏度的影響；血液流速對血液黏度的影響；血管對血液黏度的影響；其他如性別，新生兒，運動，時間，季節(jié)等。六尿液分析技術(shù)尿液分析儀是某些化學(xué)成分含量的專用自動化儀器，可分為濕式和干式化學(xué)系統(tǒng)兩大類。自動尿液分析的原理和方法：（填空或選擇題）按測試項目分類：8 項尿液分析儀包括尿蛋白 （ PRO）、尿糖 (GLU) 、尿 PH（ PH）、尿酮體（KET ）、尿膽紅素 (BIL) 、尿膽原 (URO,UBG) 、尿潛血 (ERY) 、尿亞硝酸鹽 (NTT) 。9 項尿液分析儀包括尿8 項 +尿白細胞（ WBC 或 LUE ）。10 項尿液

15、分析儀包括尿8項 +尿白細胞、尿比重。11 項尿液分析儀包括尿8 項 +尿白細胞、尿比重和顏色或維生素C。12 項尿液分析儀包括尿8項 +尿白細胞、尿比重、尿液顏色和濁度。（大題）尿液干化學(xué)分析儀的測試原理：多聯(lián)試劑帶的多層膜結(jié)構(gòu)： 1 尼龍膜 <保護作用 >2 絨制層 <過碘酸鹽試劑區(qū) >3 吸水層 <使尿均勻快速浸入抑制流到相鄰反應(yīng)區(qū) >4 塑料片 <支持體 >空白塊是為了消除尿液本身的顏色及試劑塊分布的狀態(tài)不均等所產(chǎn)生測試誤差，提高測量準確度而設(shè)置的。原理：當(dāng)把浸了尿液的試劑帶放入分析儀的試劑帶傳送帶槽內(nèi)，傳送系統(tǒng)將試劑帶傳送到檢測器下面進

16、行掃描時，實際帶上已經(jīng)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)的各種試劑塊被光源照射，其反射光被檢測器吸收。試劑帶中各試劑塊與尿液中相應(yīng)成分發(fā)生反應(yīng)，顯示不同顏色，顏色的深度與尿液中某些成分成比例關(guān)系，試劑帶中還有另一個試劑塊稱為顏色補償區(qū)，作為尿液本身顏色，以此對顏色尿液及儀器變化等產(chǎn)生的誤差進行補償。測定每種試劑帶反射光的光量值，將其與空白塊的反射光量值進行比較，通過計算機求出由反射率換算成的濃度值，便可由分析儀打印出半定量的數(shù)值。尿沉渣分析儀原理：應(yīng)用了流式細胞和電阻抗的原理。當(dāng)一個尿液標本被稀釋并經(jīng)染色液染色后，靠液壓作用通過鞘液活動池。當(dāng)反應(yīng)樣品從樣品噴嘴出口進進鞘液活動室時，被一種無粒子顆粒的鞘液包圍，使每個

17、細胞以單個縱列的形式通過活動池的中心（豎直）軸線，在這里每個尿液細胞被氬激光光束照射。每個細胞有不同程度的熒光強度，從染色尿液細胞發(fā)出的熒光，主要反映細胞的定量特性，如細胞膜、核膜、線粒體和核酸）、前向散射光強度和電阻抗的大?。娮杩闺娦盘栔饕c細胞的體積成正比）。儀器正是將這種熒光、散射光等光信號轉(zhuǎn)變成電信號，并對各種信號進行分析，最后得到每個尿液標本產(chǎn)生出的直方圖和散射圖。全自動尿沉渣分析儀主要由光學(xué)檢測系統(tǒng)、液壓系統(tǒng)、電阻抗檢測系統(tǒng)和電路系統(tǒng)組成。七血氣分析技術(shù)血氣分析儀是通過對人體血液及呼出氣的酸堿度（pH ）、二氧化碳分壓（PCO2）、氧分壓（ PO2）進行定量測定，來分析和評價人體

18、血液酸堿平衡（紊亂）狀態(tài)和輸氧狀態(tài)的儀器。利用各種活性膜直接測量溶液中特定離子濃度的電極叫離子選擇電極，簡稱ISE，遵循能斯特方程式。（簡答題）離子選擇性電極的分類：按電極膜材料的不同來劃分，分為固體離子交換膜電極、液體離子交換膜電極（用浸有液體離子交換劑的惰性孔薄膜代替固體膜作為電極膜）、氣敏電極和酶電極等類型。（簡答題）固體離子交換膜電極分類：玻璃電極、壓片膜電極、單晶膜膜電極、非均相膜電極。離子選擇性電極的特點：直接測定、選擇性強、響應(yīng)快，測量迅速、適應(yīng)性強，應(yīng)用廣泛、所需樣品少、總體價格低廉、攜帶方便、易實現(xiàn)儀器微型化。（判斷題）檢測下限又稱檢測限度，它表明離子選擇性電極能夠檢測被測離

19、子的最低濃度。（填空題）參比電極：常用的有兩種，甘汞電極，銀-氯化銀電極。甘汞電極由水銀、甘汞（Hg2CL2 ）和飽和氯化鉀溶液組成。甘汞電極的電位只取決于氯離子的活度。銀 -氯化銀電極的最大特點是在較高溫度時，電極電位仍穩(wěn)定，其最高工作溫度達250° C。血氣分析儀的工作原理：（與電解質(zhì)分析儀相同），pH 系統(tǒng)使用pH 值為 7.383 和 6.840 左右的兩種標準緩沖液進行定標。八電解質(zhì)分析技術(shù)電解質(zhì)是指在溶液中能解離成帶電離子而具有導(dǎo)電性能的一類物質(zhì)。在臨床化學(xué)領(lǐng)域中，其主要指體液中最常測定的 Na+ 、K +、Cl - 和 HCO 3-四種電解質(zhì)，以及Ca2+、 Mg 2+

20、無機P 等電解質(zhì)分析儀的工作原理及基本結(jié)構(gòu)：電解質(zhì)分析儀的工作原理和血氣分析儀相同，采用一個毛細管測試管路，讓待測液體同時和所有的測量電極相接觸。不同的電極和樣品中相應(yīng)的離子起作用而建立起各自相應(yīng)的電位； 電計部分將電極產(chǎn)生的電位放大后顯示或打印出來。鈉電極是一種含鉛硅酸鈉的玻璃電極。鉀電極為采用纈氨霉素與聚氯乙烯的膜電極。氯電極的敏感膜由金屬氯化物材料制成。九生化分析技術(shù)生化分析儀其結(jié)構(gòu)不同主要分為以下三類：連續(xù)流動式生化分析儀<特點流動室主要基于“氣泡隔離連續(xù)分析”原理 >、離心式生化分析儀<特點單色光是按垂直方向通過比色孔進行比色測定>、分離式生化分析儀<特

21、點模仿手工操作，用加樣探針將樣本加入各自比色杯中，試劑探針按一定的時間要求自動定量加入試劑，經(jīng)攪拌器混勻后在一定條件下反應(yīng) >。生化分析即利用光電比色法來分析樣本中的生化指標。（填空題）光具有波動和微粒兩種性質(zhì)，通稱光的波粒二象性。某兩種顏色的光按照一定的比例混合，能夠得到白色光的話，這兩種顏色的光就叫做互補色。朗伯 -比爾定律： A=KCL ， A 吸光度K 吸 <消>光系數(shù) C 溶液濃度L 液層厚度，在入射光一定時，溶液吸光度與溶液濃度及液層厚度成正比。利用光電池或光電管等光電轉(zhuǎn)換元件作檢測器來測量通過有色溶液的透射比或吸光度，從而求出被測物質(zhì)含量的方法叫做光電比色法。光

22、電比色計由光源、濾光片、比色皿、光電檢測器、放大和顯示等六部分組成。（填空題）分光光度計和光電比色計的最主要區(qū)別是用單色（光）器代替了濾光片。分光光度計中常用的色散元件是棱鏡和光柵。（簡答題）后分光技術(shù)的優(yōu)點：不需移動儀器比色系統(tǒng)中的任何部件，可同時選用雙波長或多波長進行測定，這樣可降低比色的噪聲，提高分析的精確度和減少故障率；通過雙波長或多波長可有效的抑制渾濁、溶血、黃疸對實驗測定的影響；雙波長或多波長可有效的補償由于電源變動造成的影響。自動生化分析儀的常用分析方法：一點法（加入試劑后，在測定時間中指定一點，測定出相應(yīng)吸光度值來求得待測物質(zhì)濃度的方法。 ）；二點法；二點速率分析法；速率A 法

23、。（填空題）生化檢測項目在疾病臨床診斷中的應(yīng)用：肝膽疾病、腎臟疾病、糖尿病及其他內(nèi)分泌疾病、骨代謝標志物。十電泳技術(shù)分散介質(zhì)中帶電粒子在電場作用下，向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象稱為電泳。按電泳的原理有三種形式的電泳分離系統(tǒng)：移動界面電泳、區(qū)帶電泳、穩(wěn)態(tài)電泳（或置換電泳）。等電點IEP ：在某一pH 的溶液中，蛋白質(zhì)分子所帶的正電荷數(shù)可恰好等于負電荷數(shù)，所帶凈電荷為零，呈電中性，此時蛋白質(zhì)質(zhì)點在電場中不移動，溶液的pH 稱為該蛋白質(zhì)的等電點（IEP ）。溶液的pH 小于IEP ，則蛋白質(zhì)結(jié)合一部分H+而帶正電荷，在電場中向負極移動，反之亦然。遷移率：粒子移動速度v/ 電場強度E 表示單位電場

24、強度下帶電粒子的運動速度稱為遷移率。影響電泳的因素：電場強度，溶液的pH 值，溶液的離子強度，電滲，溫度，其他如緩沖溶液黏度、緩沖溶液與帶離子相互作用。( 簡答題）溶液離子強度：溶液的離子強度一般在0.02-0.2mol/kg之間時，電泳較合適.離子強度過高，則會降低顆粒的泳動速度 <原因是帶電顆粒能把溶液中與其電荷相反的離子吸引在自己周圍形成一個與運動顆粒符號相反運動方向相反的離子氛 >離子強度過低 , 則緩沖能力差，往往會因溶液 PH 值變化而影響泳動的速率。醋酸纖維薄膜電泳比紙電泳的優(yōu)勢：較之紙電泳有電滲小、分離速度快、分離清晰以及血清用量少、操作簡便等優(yōu)點。毛細管電泳（ C

25、E ）是 20 世紀 80 年代初發(fā)展起來的一類高效快速的分離分析方法。十一 . 散射免疫分析技術(shù)散射免疫分析，是一種微量、快速、自動化檢測體液中特定蛋白質(zhì)成分的免疫化學(xué)分析技術(shù)。該技術(shù)是將免疫測定與散射比濁法的原理相結(jié)合而設(shè)計的一種快速免疫測定方法，主要用于對體液中單個蛋白成分的測定。濁度分析的基本方法分兩大類：透射免疫比濁法、散射免疫比濁法（簡答題）散射免疫比濁法基本原理：激光散射光系水平軸照射，通過溶液時，遇到抗原抗體復(fù)合物粒子，光線鋇離子顆粒折射， 發(fā)生偏轉(zhuǎn)。 偏轉(zhuǎn)角度可以從0 到 90 度，這種偏轉(zhuǎn)的角度可因光線波長和粒子大小不同而有所不同。散射光的強度與抗原抗體復(fù)合物的含量成正比，

26、同時也和散射夾角成正比，和波長成反比。任何發(fā)熒光的物質(zhì)都存在兩個特征光譜，即激發(fā)光譜與熒光光譜。物質(zhì)必須具備三個條件才能發(fā)出熒光：具有特征的吸收結(jié)構(gòu)具有一定的熒光效率適宜的環(huán)境。（填空題）為了避免或減少熒光物質(zhì)的光分解作用，應(yīng)在測定時才打開激發(fā)光閘。（填空題）被測藥物濃度與熒光偏振程度成反比。時間分辨熒光分析法與通常的 FIA 法不同，是用三價稀土離子（ Eu3+ ）代替熒光物質(zhì)、放射性核素或酶作為標記物，標記抗原或抗體，用時間分辨技術(shù)測量熒光強度，根據(jù)熒光強度或相對熒光強度比值，來判斷反應(yīng)體系被分析物的濃度。十三 . 酶免疫分析技術(shù)基本原理：是將酶催化的放大作用與抗原、抗體的免疫反應(yīng)相結(jié)合的

27、一種微量分析技術(shù)。酶標記抗體或抗原后，既不影響抗體或抗原的免疫反應(yīng)特異性，也不改變酶本身的催化活性，即在相應(yīng)的反應(yīng)底物參與下，標記的酶可以使底物基質(zhì)水解而呈色，或使供氫體由無色還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩难趸?，這種有色產(chǎn)物可以通過肉眼、光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡進行觀察，也可以用分光光度計加以測定。酶免疫分析方法中的主要組成部分：固相載體（塑料- 聚苯乙烯或聚氯乙烯制成的微孔反應(yīng)板48 孔 /96 孔）包被蛋白 待測樣品酶標記物各種緩沖液。（簡答題） 酶標儀與普通光電比色計的不同之處在于：1. 盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板 .微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附

28、作用,故用它作為固相載體 . 2.酶標儀的光束是垂直通過待測溶液和微孔板的3. 酶標儀通常不使用A, 而是使用光密度OD 來表示吸光度 .十四 . 發(fā)光免疫分析技術(shù)（簡答題）優(yōu)點：靈敏度高、檢測速度快、操作簡便、所用試劑對人體無危害，成為非放射性免疫分析技術(shù)中最具有發(fā)展前景的方法之一。所用的標記物可分為三類，即發(fā)光反反應(yīng)中所消耗掉的標記物、發(fā)光反應(yīng)中起催化作用的標記物、酶標記物。十五 . 無創(chuàng)性實驗診斷技術(shù)無創(chuàng)性實驗診斷技術(shù)可分為兩大類，第一類以光譜分析及相關(guān)技術(shù)分析各種血液與生化成分，譜學(xué)（ MRS ）。（填空題）血液中的各種無形成分如血紅蛋白、葡萄糖、尿素氮、藥物及血氣分析等，在性吸收光譜

29、，這就是利用NIR 開展無創(chuàng)性檢驗的理論基礎(chǔ)。第二類為核磁共振光NIR 區(qū)均有各自的特異無創(chuàng)血氣分析主要檢測指標分兩個方面。一方面是氧合作用的評估，包括氧飽和度，動脈氧分壓等指標，其測定技術(shù)包括脈氧測定法，通過皮膚測定氧，間接熱量測定法；另一方面是肺的換氣功能評估，包括二氧化碳分壓，二氧化碳含量等指標，其測定技術(shù)包括通過皮膚測定二氧化碳，末端潮汐二氧化碳測定。十六 .臨床微生物學(xué)分析技術(shù)臨床微生物學(xué)檢驗分析主要包括自動微生物培養(yǎng)，微生物鑒定和抗菌藥物敏感試驗等。自動化血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)的基礎(chǔ)是檢測細菌和真菌生長時所釋放的二氧化碳，此作為血液中有無微生物存在的指標。血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)包括一個培養(yǎng)系統(tǒng)和一個檢測系統(tǒng)，其中培養(yǎng)系統(tǒng)由培養(yǎng)瓶和真空采血器等組成，檢測系統(tǒng)則由恒溫孵育系統(tǒng)，檢測系統(tǒng)和計算機及其外圍設(shè)備等組成。血培養(yǎng)檢測系統(tǒng)應(yīng)用的檢測技術(shù)主要有;：放射性14C 標記。二氧化碳感受器和均質(zhì)熒光。微生物鑒定系統(tǒng)采用數(shù)碼分類鑒定法的原理，即計算并比較數(shù)據(jù)庫內(nèi)每個細菌條目對系統(tǒng)中每個生化反應(yīng)出現(xiàn)的頻率總和。目前用于臨床的藥敏分析方法主要分為三類：抗生素紙片擴散系統(tǒng)、瓊脂稀釋試驗系統(tǒng)和微量肉湯稀釋試驗系統(tǒng)，其中，以第三類應(yīng)用最多。實時熒光定量 PCR 技術(shù)，是指在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號實時監(jiān)測整個PCR 進程，最后通過標準曲線，對未知模板進行定量分析