細胞信號轉(zhuǎn)到ppt課件

1、ph causes non-autonomous overgrowth in mosaic eyes 主要技術手段：主要技術手段： MARCM技術技術 TUNEL法法MARCM技術技術假設想在嵌合體中敲除基因，假設想在嵌合體中敲除基因，用用FLP/FRT系統(tǒng)系統(tǒng) 假設想在嵌合體中添加基因表達，假設想在嵌合體中添加基因表達，用用UAS/Gal4系統(tǒng)系統(tǒng)UAS/Gal4系統(tǒng)系統(tǒng)GAL4/UASGAL4/UAS系統(tǒng)是一種轉(zhuǎn)基因體系。系統(tǒng)是一種轉(zhuǎn)基因體系。原理：利用特定的啟動子或加強原理：利用特定的啟動子或加強 子，以組織特異性的方式激子，以組織特異性的方式激 活酵母轉(zhuǎn)錄激活子活酵母轉(zhuǎn)錄激活子GAL4

2、GAL4的表的表 達，達，GAL4GAL4又以同樣的方式引又以同樣的方式引 起起GAL4GAL4反映元件反映元件UASUAS- -靶靶 基因的轉(zhuǎn)錄?；虻霓D(zhuǎn)錄。 GAL4UASUAS/Gal4系統(tǒng)系統(tǒng)FLP/FRT 系統(tǒng)系統(tǒng)果蠅含有四對染色體，每對染果蠅含有四對染色體，每對染色體中的一條被稱為同源染色色體中的一條被稱為同源染色體，分別來自于母本和父本。體，分別來自于母本和父本。在正常的細胞分裂中，一對同在正常的細胞分裂中，一對同源染色體總是能忠實地復制，源染色體總是能忠實地復制，然后分配到新分裂的細胞中然后分配到新分裂的細胞中 FLP是一個來自酵母的染色體重組酶是一個來自酵母的染色體重組酶FR

3、T那么是那么是FLP催化的一段催化的一段DNA序列序列同源重組產(chǎn)生會兩個子細胞中，一個含有雙份正常染色體，令一個含有雙份突變?nèi)旧w。假設我們在正常染色體上添加標示GFP，那么，可以在果蠅組織中察看突變細胞的表型變化 假設兩條染色體中的一條是正常的，而另一條基因被突變掉，那么對于絕大部分沒有重組的細胞來說，它們是“雜合體。FLP/FRT 系統(tǒng)系統(tǒng)MARCM 技術技術(mosaic analysis with a repressible cell marker )同源同源染色染色體重體重組組非同非同源染源染色體色體組合組合GAL80UAS/GFP/mutation突變細胞突變細胞TUNEL法法 D

4、NA片段化與檢測片段化與檢測細胞凋亡中染色體細胞凋亡中染色體DNADNA的斷裂是個的斷裂是個漸進的過程，染色體漸進的過程，染色體DNADNA首先在核首先在核酸內(nèi)切酶作用下，隨機切斷；酸內(nèi)切酶作用下，隨機切斷；在核小體單位之間被隨機切斷。構在核小體單位之間被隨機切斷。構成成180-200bp180-200bp核小體式片段；核小體式片段；DNADNA雙鏈斷裂出現(xiàn)缺口即可產(chǎn)生一雙鏈斷裂出現(xiàn)缺口即可產(chǎn)生一系列系列DNADNA的的3 3-OH-OH末端，被染色。末端，被染色。 添加細胞膜通透性添加細胞膜通透性 TdT 酶和熒光素標志酶和熒光素標志 的的dUTP進入細胞進入細胞在在TdT酶的輔助下酶的輔助下dUTP與凋亡細胞中斷裂與凋亡細胞中斷裂DNA的的3-OH末端結合末端結合 HRP標志的抗熒光標志的抗熒光 素抗體特異結合素抗體特異結合HRP底物，底物，H2O2發(fā)生氧化、環(huán)化反發(fā)生氧化、環(huán)化反響，構成棕