青霉素發(fā)酵技術(shù)1.5搖瓶種制作及培養(yǎng)(六步教學(xué)法).總結(jié)

1、教案首頁授課順序?qū)W時(shí)日期年月日班級(jí)課題1.5搖瓶種制作及培養(yǎng)學(xué)學(xué)生通過查閱整理資料，結(jié)合教師講解，學(xué)生能夠理解實(shí)驗(yàn)室搖瓶培養(yǎng)原理；習(xí)掌握搖瓶培養(yǎng)步驟；熟悉搖瓶種制作和培養(yǎng)工藝中的主要設(shè)備；掌握搖瓶種制作的目標(biāo)主要工藝；熟悉搖瓶種制作中涉及的主要參數(shù)。主（ 1）實(shí)驗(yàn)室搖瓶培養(yǎng)原理要（ 2）搖瓶培養(yǎng)步驟內(nèi)容（ 3）搖瓶種制作主要工藝（ 4）搖瓶種制作設(shè)計(jì)的主要設(shè)備（ 5）搖瓶種制作主要參數(shù)教學(xué)1、資訊 2、計(jì)劃 3、決策 4、實(shí)施 5、檢查 6、評(píng)價(jià)過程教具工作任務(wù)單、多媒體設(shè)備、滅菌鍋、顯微鏡、超凈工作臺(tái)等或工具產(chǎn)黃青霉培養(yǎng)物載體采用工作任務(wù)單上的考核表進(jìn)行評(píng)價(jià)，將評(píng)價(jià)結(jié)果記入期末總成績，并填寫

2、教考師評(píng)語部分。核與評(píng)價(jià)輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院教案NO1課程青霉素發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)201/201 學(xué)年第2 學(xué)期教師授課日期班級(jí)工作過程：青霉素發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)教學(xué)任務(wù)1.3：產(chǎn)黃青霉菌株的平皿培養(yǎng)及菌種檢測(cè)知識(shí)目標(biāo)：（ 1）了解青霉素的分類及分子結(jié)構(gòu)、作用機(jī)理應(yīng)用等。（ 2）掌握青霉菌在固體培養(yǎng)基形態(tài)特征（ 3）熟悉青霉素產(chǎn)生菌生長發(fā)育過程（ 4）熟悉產(chǎn)黃青霉菌的特點(diǎn)（ 5）掌握大米孢子的制備方法。（ 6）掌握青霉菌菌種的保藏（ 7）掌握青霉菌的直接制片觀察法（ 8）熟悉母瓶斜面固體培養(yǎng)基配方（ 9）掌握種子質(zhì)量要求技能目標(biāo)：（ 1）能配制察氏斜面培養(yǎng)基（ 2）會(huì)使用高壓蒸汽滅菌鍋（ 3）學(xué)會(huì)無菌操作（

3、4）會(huì)斜面劃線接種產(chǎn)黃青霉菌株（ 5）學(xué)會(huì)使用恒溫培養(yǎng)箱（ 6）會(huì)制備大米培養(yǎng)基（ 8）會(huì)配制乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液（ 9）會(huì)配制 50%乙醇（ 10）會(huì)青霉菌直接制片（ 11）能正確使用顯微鏡（ 12）會(huì)制備菌懸液（供凍干用）（ 13）學(xué)會(huì)操作小型凍干機(jī)（ 14）會(huì)使用高頻火花真空測(cè)定器測(cè)定凍干菌種真空度重點(diǎn)難點(diǎn)：（ 1） 青霉菌插片制片觀察（ 2）青霉菌形態(tài)的準(zhǔn)確鑒定（ 3）產(chǎn)黃青霉菌株保存教學(xué)方法： “課堂，實(shí)訓(xùn)一體化 ”的現(xiàn)場(chǎng)教學(xué)方法；項(xiàng)目導(dǎo)入教學(xué)法。考核方法： 組內(nèi)自我評(píng)分和組間互評(píng)、實(shí)施過程評(píng)分、實(shí)驗(yàn)結(jié)果評(píng)分。學(xué)時(shí)安排： 設(shè)計(jì)方案 2 學(xué)時(shí)、組織實(shí)施 2 學(xué)時(shí)教學(xué)札記：編寫日期：輕工

4、職業(yè)技術(shù)學(xué)院教案附頁教學(xué)組織一、分組學(xué)生全部進(jìn)入發(fā)酵室后，將其分為7組，各組組長兼任安全員、副組長兼任設(shè)備材料員，達(dá)到學(xué)生的自管自治和相互監(jiān)督，學(xué)生與教師的高度配合。二、工作過程導(dǎo)入（資訊）教師通過 ppt 向?qū)W生展示青霉菌液體搖瓶培養(yǎng)物，提出問題：大家想，由試管到茄子瓶培養(yǎng)物、再到液體搖瓶培養(yǎng)有什么變化？學(xué)生回答 引導(dǎo)學(xué)生：容器大?。烤z形態(tài)？產(chǎn)黃青霉生長數(shù)量？投入生產(chǎn)后生長擴(kuò)增速度及進(jìn)入合成代謝所需時(shí)間？最后得出結(jié)論。在生產(chǎn)車間階段，最終一般都是獲得一定數(shù)量的菌絲體。菌絲體比孢子要有利：1、縮短發(fā)酵時(shí)間（產(chǎn)黃青霉深層發(fā)酵一般僅需 2-7d 就可獲得大量的菌絲體，而固體培養(yǎng)則需 30-60d

5、。）2、有利于獲得好的發(fā)酵結(jié)果霉菌：生長較慢，如青霉菌，一般采用三級(jí)發(fā)酵孢子懸浮液一級(jí)種子罐（ 27?C,40小時(shí)孢子發(fā)芽，產(chǎn)生菌絲， 50-100L ）二級(jí)種子罐（ 27?C,1024小時(shí)，菌體迅速繁殖，粗壯菌絲體， 500-1000L）發(fā)酵罐繼續(xù)引導(dǎo)學(xué)生思考：我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室自己如何能獲得青霉菌液體搖瓶培養(yǎng)物？附 1：搖瓶種制作的原理產(chǎn)黃青霉搖瓶種制作是在發(fā)酵罐中， 采用液體培養(yǎng)基通入無菌空氣并加以攪拌，增加培養(yǎng)基中溶氧含量， 提供產(chǎn)黃青霉菌體呼吸代謝所需要的氧氣， 并控制適宜的外界條件，獲得大量的菌絲體或代謝產(chǎn)物。為何用三角瓶？通氣問題怎么解決？裝液量多少？液體培養(yǎng)基如何制作，接種量多少（還

6、用孢子懸液嗎）？通過孢子計(jì)數(shù)來獲得一粒大米的孢子數(shù)量，然后稱量大米的克數(shù)及相應(yīng)米粒數(shù)量，來推知其整體所含孢子數(shù)，來確定單位體積培養(yǎng)液的接種量(1粒米含 1.4 106個(gè)孢子，接種量為 200億孢子 /噸 ) 。得到的培養(yǎng)物能否檢測(cè)其生長量？（答案是肯定的）一般用菌體濃度來反映培養(yǎng)液里菌絲生長量，通過溶液比濁度或單位體積菌絲體干重的測(cè)定來反映菌體濃度。三、教學(xué)任務(wù)導(dǎo)入（資訊）要求學(xué)生快速瀏覽青霉素發(fā)酵學(xué)習(xí)指導(dǎo)書上的參考資料，并提煉出液體搖瓶種培養(yǎng)制備的關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)， 從而讓學(xué)生建立對(duì)該工作過程的感性認(rèn)識(shí)。接著教師隨機(jī)指定學(xué)生回答問題：液體搖瓶種培養(yǎng)制備在青霉素發(fā)酵生產(chǎn)流程中的作用是什么？從而引出本

7、次課要完成的任務(wù)。附 2：搖瓶種子制備主要操作步驟：稱量煮制分裝滅菌無菌檢驗(yàn)接種振蕩培養(yǎng)管理附3：液體種（三角瓶）制作的主要參數(shù)：1)培養(yǎng)基營養(yǎng)成分含量應(yīng)較斜面豐富，以確保一定的營養(yǎng)菌體生長量；能保持生長過程中 pH 穩(wěn)定。2)培養(yǎng)基裝量適當(dāng)，以保證良好的通氣并與發(fā)酵罐通氣條件相適應(yīng)；參考裝量為 40-50 ml/ 250 ml 瓶，60-80 ml/ 500 ml 瓶，90-110 ml/ 750 ml 瓶，120-150 ml/1000 ml 瓶；如果是厭氧培養(yǎng)，則裝量應(yīng)增加一倍以上；3) 滅菌時(shí)要注意不要讓蒸汽冷凝水打濕或粘污培養(yǎng)基在瓶塞或紗布上4）注意搖床轉(zhuǎn)速，轉(zhuǎn)速越快，偏心距越大，通

8、氣越好。經(jīng)常檢查，皮帶松弛時(shí)要緊一緊。5）注意搖床中心與邊緣、上層與下層的溫差引導(dǎo)學(xué)生分析液體搖瓶種培養(yǎng)制備的詳細(xì)步驟，找出關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)， 導(dǎo)出工作過程：由大米培養(yǎng)基 （三角瓶或茄子瓶） 培養(yǎng)物到液體搖瓶種的菌種擴(kuò)增制備流程。四、任務(wù)實(shí)施1. 初步方案討論（計(jì)劃）以小組為單位，按照發(fā)酵實(shí)訓(xùn)任務(wù)書上的“任務(wù) 1.5、產(chǎn)黃青霉制備及培養(yǎng)”的學(xué)習(xí)目標(biāo)及任務(wù)要求， 查閱學(xué)習(xí)指導(dǎo)書 上的相應(yīng)參考資料， 通過學(xué)習(xí)，各小組分別討論產(chǎn)黃青霉菌株的液體培養(yǎng)基制備、滅菌、接種、振蕩培養(yǎng)及菌體濃度測(cè)定、填寫項(xiàng)目任務(wù)書。2. 最佳方案篩選（決策）教師對(duì)各小組方案進(jìn)行點(diǎn)評(píng)，推薦最佳方案， 進(jìn)行修改完善， 并對(duì)其它小組的方

9、案進(jìn)行指導(dǎo)，找出錯(cuò)誤或不足之處。同時(shí)，學(xué)生填寫項(xiàng)目任務(wù)書。3. 方案具體實(shí)施各小組按照產(chǎn)黃青霉菌株大米孢子制備制備流程的定稿方案， 利用實(shí)驗(yàn)室的器材，具體實(shí)施：稱量煮制分裝滅菌無菌檢驗(yàn)接種振蕩培養(yǎng)管理，最后進(jìn)行菌體濃度測(cè)定，制作自己青霉素發(fā)酵實(shí)訓(xùn)動(dòng)漫演示作業(yè)。仔細(xì)觀察實(shí)訓(xùn)生產(chǎn)的過程， 對(duì)每一步都進(jìn)行記錄， 最后完成小組用書的項(xiàng)目記錄表。注意：親米接種后或親米接入生產(chǎn)米后要經(jīng)過激烈振蕩混勻才可放置恒溫培養(yǎng)；生產(chǎn)米要求每粒米的孢子量達(dá)到300 萬個(gè)以上。親米、生產(chǎn)米孢子保存在5 冰箱內(nèi)。4. 關(guān)鍵能力的重點(diǎn)指導(dǎo)（檢查）教師對(duì)學(xué)生的實(shí)踐練習(xí)進(jìn)行有效監(jiān)控，巡回指導(dǎo)，及時(shí)指出不規(guī)范的操作。并對(duì)其關(guān)鍵能力

10、進(jìn)行重點(diǎn)指導(dǎo)。如培養(yǎng)基制備、滅菌、接種、振蕩培養(yǎng)及菌體濃度測(cè)定等。5. 任務(wù)結(jié)果評(píng)價(jià)完成產(chǎn)黃青霉菌株的大米孢子制備任務(wù)后，各小組分別展示產(chǎn)黃青霉菌株的大米孢子三角瓶培養(yǎng)物。首先，進(jìn)行組內(nèi)自我評(píng)價(jià)和組間互評(píng)，接著，教師對(duì)每組結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，指出存在的問題和改進(jìn)的方法。（附：評(píng)價(jià)項(xiàng)目包括：產(chǎn)黃青霉菌株培養(yǎng)物無雜菌污染、產(chǎn)黃青霉菌株在液體培養(yǎng)的生長指標(biāo)、 鏡下能觀察到典型的產(chǎn)黃青霉菌絲體。實(shí)際生產(chǎn)中每批孢子必需進(jìn)行嚴(yán)格搖瓶試驗(yàn)，測(cè)定效價(jià)及檢查雜菌情況。）6. 任務(wù)小結(jié)各組討論進(jìn)行項(xiàng)目小結(jié)、填寫項(xiàng)目報(bào)告書。教師指出各小組在操作過程中存在的問題和正確的處理方法， 評(píng)價(jià)同學(xué)們?cè)谌蝿?wù)實(shí)施過程中的表現(xiàn)（包括遵守紀(jì)律，認(rèn)真仔細(xì)，團(tuán)結(jié)合作） ，提出表揚(yáng)，指出不足。7 . 完成課后作業(yè)要求學(xué)生完成發(fā)酵實(shí)訓(xùn)任務(wù)書中該環(huán)節(jié)中的相關(guān)作業(yè)題。8. 布置下一任務(wù)發(fā)酵系統(tǒng)學(xué)習(xí)與認(rèn)識(shí)、發(fā)酵罐溫控（水循環(huán)）操作。書是我們時(shí)代的生命 別林斯基書籍是巨大的力量 列寧書是人類進(jìn)步的階梯 高爾基書籍是人類知識(shí)的總統(tǒng) 莎士比亞書籍是人類思想的寶庫 烏申斯基書籍 舉世之寶 梭羅好的書籍是最貴重的珍寶 別林斯基書是唯一不死的東西丘特書籍使人們成為宇宙的主人 巴甫連柯書中