一節(jié)細(xì)胞因子檢測(cè)概述ppt課件

1、 第一節(jié) 細(xì)胞因子檢測(cè)概述一、細(xì)胞因子的類型與作用特點(diǎn)二、細(xì)胞因子檢測(cè)的特點(diǎn)與方法 由非神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生的一大類與免疫應(yīng)對(duì)活動(dòng)親密相關(guān)的低分子蛋白與多肽。細(xì)胞因子細(xì)胞因子的類型與作用特點(diǎn)細(xì)胞因子的類型與作用特點(diǎn)1、細(xì)胞因子的分類2、細(xì)胞因子的作用特點(diǎn)以生物學(xué)作用進(jìn)展劃分的分類以生物學(xué)作用進(jìn)展劃分的分類白細(xì)胞介素Interleukin IL-1、IL-2、 IL-18干擾素Interferon IFN-、IFN-、IFN-腫瘤壞死因子Tumor necrosis factor TNF- 、 TNF- 集落刺激因子Colony-stimulating factor M-CSF、G-CSF轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)

2、因子Transforming growth factor TGF- 趨化因子Chemokine IL-8、GROs、MCP-1生長(zhǎng)因子Growth factor EGF、FGF、IGF、PDGFTNFsILsIFNsTGFsChemokinesCSFs各類細(xì)胞因子間關(guān)系各類細(xì)胞因子間關(guān)系1、旁分泌paracrine、自分泌autocrine性2、多源與同源性3、高效性4、多效性pleiotropy5、豐余性redundancy6、協(xié)同性7、拮抗性8、網(wǎng)絡(luò)性細(xì)胞因子細(xì)胞因子細(xì)胞因子受體細(xì)胞因子受體細(xì)胞因子的自分泌與旁分泌性細(xì)胞因子的自分泌與旁分泌性 I L-2 I FN- TNF-細(xì)胞因子的同源

3、性與多源性細(xì)胞因子的同源性與多源性I FN-T細(xì)胞T細(xì)胞NK細(xì)胞IL-4Th細(xì)胞肥大細(xì)胞Th細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞因子的多效性細(xì)胞因子的多效性Th細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞因子的豐余性細(xì)胞因子的豐余性IL-2IL-4IL-5Th細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞因子的協(xié)同性細(xì)胞因子的協(xié)同性IL-4IL-5Th2細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞因子的拮抗性細(xì)胞因子的拮抗性Th1細(xì)胞IL-4 I FN- 細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)性細(xì)胞因子的網(wǎng)絡(luò)性IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、 GM-CSFTNF TGF IL-1 IFNIL-1 IFNTNFIL-1 TGFIFNIL2 IL-4IFN IL2 IL-4 IL-5 IL-6TNF IFN IL-1 TGF

4、TNF IL-1 IFN IL-5 GM-CSF G-CSF M-GSFTNFTNF IL-1 TGFIL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IL-1 IL-6IL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IFN內(nèi)皮細(xì)胞成纖維細(xì)胞TB細(xì)胞因子檢測(cè)的特點(diǎn)與方法細(xì)胞因子檢測(cè)的特點(diǎn)與方法1、檢測(cè)的特點(diǎn)2、檢測(cè)的方法 細(xì)胞因子檢測(cè)的特點(diǎn)細(xì)胞因子檢測(cè)的特點(diǎn)免疫原性較弱樣品含量低樣品具有時(shí)效性生物效應(yīng)特異性差細(xì)胞因子檢測(cè)的方法細(xì)胞因子檢測(cè)的方法免疫學(xué)檢測(cè)方法抗原性檢測(cè)細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)方法生物活性檢測(cè)分子生物學(xué)檢測(cè)方法基因表達(dá)檢測(cè) 第二節(jié) 細(xì)胞因子檢測(cè)的方法與原理一、細(xì)胞因子的細(xì)

5、胞生物學(xué)檢測(cè)二、細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測(cè)三、細(xì)胞因子的分子生物學(xué)檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)1、檢測(cè)方法與原理2、檢測(cè)中的操作留意要點(diǎn) 檢測(cè)方法與原理檢測(cè)方法與原理細(xì)胞增殖或增殖抑制實(shí)驗(yàn)細(xì)胞病變抑制實(shí)驗(yàn)細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)濾膜：計(jì)數(shù)受趨化細(xì)胞趨化因子細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)原理表示趨化實(shí)驗(yàn)原理表示檢測(cè)中的操作留意要點(diǎn)檢測(cè)中的操作留意要點(diǎn)靶細(xì)胞的選擇與培育檢測(cè)標(biāo)本的制備顯示檢測(cè)結(jié)果靶細(xì)胞的選擇與培育靶細(xì)胞的選擇與培育1、對(duì)所測(cè)的細(xì)胞因子有特異的敏感性2、易培育、保管、生物學(xué)特性穩(wěn)定3、有良好的生長(zhǎng)形狀4、種屬適配各類細(xì)胞因子檢測(cè)的常用靶細(xì)胞各類細(xì)胞因子檢測(cè)的常用靶細(xì)胞細(xì)胞因子 實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)

6、 干擾要素IL-1 D10M增殖法 IL-2、IL-4 EL-4M增殖法 IL-4 A352H增殖抑制法IL-2 CTLLM增殖法 IL-4IL-3 KG-1H增殖法 TF-1H增殖法 GN-CSF、IL-5 IL-6、EPOIL-4 CTLLM增殖法 IL-2IL-5 BCL-1M增殖法 IL-4各類細(xì)胞因子檢測(cè)的常用靶細(xì)胞各類細(xì)胞因子檢測(cè)的常用靶細(xì)胞細(xì)胞因子 實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 干擾要素IL-6 B9M增殖法 IL-4、IL-11 BM60H增殖法 IL-7 Clone-IXN/2bM增殖法 IL-8 中性粒細(xì)胞M、H趨化法GM-CSF TF-1H增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5TNF

7、/ L929 M、H細(xì)胞毒法IFN wishH病變維護(hù)法 IFN- 、 IFN- L929M病變維護(hù)法 IFN- 、 IFN- 檢測(cè)標(biāo)本的預(yù)備檢測(cè)標(biāo)本的預(yù)備1、分別特定的產(chǎn)生細(xì)胞2、對(duì)產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)展誘導(dǎo)、激活3、選擇適當(dāng)?shù)乃鸭瘯r(shí)間顯示檢測(cè)結(jié)果顯示檢測(cè)結(jié)果1、細(xì)胞增殖形狀的顯示： 放射性核素?fù)饺敕ā?胞內(nèi)酶活性顯示法 活細(xì)胞染色法 細(xì)胞熒光測(cè)定法2、細(xì)胞毒或細(xì)胞病變形狀的顯示 活細(xì)胞染色法 胞內(nèi)酶活性顯示法 DNA斷片測(cè)定法細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測(cè)細(xì)胞因子的免疫學(xué)檢測(cè)分泌型細(xì)胞因子的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè)ELISPOT細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)激活膜抗原標(biāo)志細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子標(biāo)志細(xì)胞因

8、子的分子生物學(xué)檢測(cè)細(xì)胞因子的分子生物學(xué)檢測(cè)原位雜交技術(shù)Rt-PCR技術(shù) 第三節(jié) 常用細(xì)胞因子的檢測(cè)方法一、IL-2的檢測(cè)二、IFN-的檢測(cè)三、TNF的檢測(cè)待檢樣品細(xì)胞上清 指示細(xì)胞CTLL-2按不同稀釋度參與37C，16-20小時(shí)參與3HTdR1-5Ci37C，4-6小時(shí)搜集細(xì)胞測(cè)定白細(xì)胞介素白細(xì)胞介素-2-2的測(cè)定表示圖的測(cè)定表示圖待檢樣品細(xì)胞上清 指示細(xì)胞L929按不同稀釋度參與37C，4小時(shí)37C，24-48小時(shí)棄取上清，參與VSV察看細(xì)胞病變鏡檢或比色干擾素的測(cè)定表示圖干擾素的測(cè)定表示圖腫瘤壞死因子的測(cè)定表示圖腫瘤壞死因子的測(cè)定表示圖待檢樣品細(xì)胞上清 指示細(xì)胞L929按不同稀釋度參與37C，24小時(shí)棄取上清，洗滌參與結(jié)晶紫染液，洗滌參與細(xì)胞裂解液，比色 第四節(jié) 細(xì)胞因子受體的檢測(cè)一、細(xì)胞因子受體的類型二、細(xì)胞因子受體的檢測(cè) 細(xì)胞因子受體的類型膜型細(xì)胞因子受體分泌型