F-7000熒光分光光度計操作規(guī)程

1、日本日立F-7000熒光分光光度計基本操作規(guī)程1、開機順序(1)開啟計算機。(按圖中圓圈按鈕)(2)開啟儀器主機電源。按下儀器主機左側面板下方的黑色按鈕(POWER)。(按下圖中圓圈按鈕)(3)觀察主機正面面板右側的Xe LAMP和RUN指示燈依次亮起來,都顯示黃綠色。Xe LAMP燈先亮，RUN燈后亮2、打開運行軟件。0D(1)雙擊桌面圖標fl solution 2.i for ftmo. ink (FL Solution 2.1 forF-7000)。主機自行初始化，掃描界面自動進入。(2)初始化結束后，須預熱15-20分鐘(若要進行定量分析，須預熱30分鐘以上，按界面提示選擇操作方式3.

2、點擊右上角Method,進行方法設置。若要預掃描，可選擇3-D scan （如下圖）.設置好方法后（見下圖）再點擊右上角Pre Scan （如上圖），Vavflengtk 工燈皿¥ 電"11glXCtllTim4 上4artI在 Instrument Monitor 菜單（見下圖）的 Data mode中選擇 Fluorescence,在EX Start WL中輸入激發(fā)波長200, EX End WL中輸入激發(fā)波長500,在EM Start WL中輸入發(fā)射波長210（有利于保護檢測器），在EM EndWL中輸入700（nm）,為節(jié)約掃描時間，掃描速度 Scan speed可

3、設置為30000。點擊update可知掃描需要多少時間。EX slit和EM slit般選擇5.0 （若熒光強度太弱，可提高該數(shù)值，若強度太高，可降低 該數(shù)值），PMT Voltage （電壓）中可選擇700 （若熒光強度太弱，可提高該數(shù)值，若強度太高，可降低該數(shù)值），PMT Voltage 0-1000v前 面的方框打勾后，可在上面的 PMT Voltage中隨意填寫電壓值。在 Response 中選擇 Auto。Analy%ig JVIethodM力me"Gul. onft hmod。Rctp口口£白Fr-edi cti on fli«ua-EH*nt iff

4、t 電 Mi (I Bn inan“一 J|5 &三而h o-itfciay!VaJ t %£UpWdt© >在Processing菜單中（見下圖）的Y Axis中的Max中填5000或10000,Min 中填 0。Contour 中填寫 10, 在 open data processing window afterdata acquisitior 前打勾。再點擊右上角Pre Scan （如下圖），進行預掃描然后選擇圖譜中顏色最濃、最深、縱坐標最高的漩渦中心點，點擊這 個中心點，即可出現(xiàn)最佳激發(fā)波長、最佳發(fā)射波長及強度。若中心點太密，看不出（如上圖），可點擊右

5、鍵，選才Sc scale,將contour由10.00改為100。再點擊確定即可出現(xiàn)下圖情況:點擊縱坐標最高的漩渦中心，如上圖和下圖，在左上角即可出現(xiàn)最佳激發(fā)波長（EX）、最佳發(fā)射波長（EM）及強度。待預掃描結束后，可再次點擊 Method,進行重新設置，在General菜單的 Measurement中選擇 Wavelength scan （如下圖）；在 Instrument Monitor 菜單（見下圖）的 scan mod即選擇 Emission, Data 中選擇Fluorescence,在EX WL中輸入預掃描中得到的最佳激發(fā)波長，在EM Start WL中輸入比最佳激發(fā)波長大10nm

6、的數(shù)據(jù)（有利于保護檢測器），在EM End WL中輸入700（nm）, Scan speed中選擇240或1200, EX slit和EM slit 一般選擇5.0 （若熒光強度太弱，可提高該數(shù)值，若強度太高，可降低該數(shù)值），PMT Voltage （電壓）中可選擇700 （若熒光強度太弱，可提高該數(shù)值，若強度太高，可降低該 數(shù)值），PMT Voltage 0-1000v前面的方框打勾后，可在上面的 PMTVoltage中隨意填寫電壓值。在 Response中選擇Auto,在Replicates中選擇1,在Cycle time中填0在Processing菜單中（見下圖）的Y Axis中的Max

7、中填1000或2000或10000（可根據(jù)預掃描結果的熒光強度值填寫Y軸熒光強度的最大值），Min 中填 0。Contour 中填寫 10,在 open data processing windowafter data acquisitior 前打勾。4點擊右上角Sample ABC進行數(shù)據(jù)存儲模式及途徑設置（見下圖）phuHei： DpenLjitcs ONS«Fe 丁R»pfcM fi .0jAijcm«nce |<l DIBEXI 湖口 mEM1|50OG rtfnEX 5k ISO-EM Sk 廂-55 .點擊上圖右上角Measure即可對樣品進行測

8、試，測試完后在圖譜右 上角點擊report,再點擊文件菜單“另存為”，可將圖譜數(shù)據(jù)另存為 excel格式。6 . 96微孔板的操作，先安裝相關裝置，安裝后（見下圖）圖中畫圓 圈的支架突出部分要壓住它邊上按鈕。開機后在空白圖譜上面可見 MPR菜單（見下圖），點擊該按鈕。出現(xiàn)下圖情景i u rlKlI IIrtfinPiktn |A1|M<rvM點擊Data save可設置數(shù)據(jù)格式及存儲路線（如下圖）點擊上圖中的Exchange position,放微孔板的支架會跳出來，然后可放入裝有樣品的微孔板，左下角為 A1位置（見下圖）。選擇圖中有樣品的比色皿，如下圖，點擊Sample set可出現(xiàn)黃

9、色背景, 若點擊Reset可取消設置，黃色背景消失。可選擇某一個樣品進行預 掃描（設置方法同上面敘述過的方法一樣），根據(jù)預掃描結果，再對方法進行設置（設置方法同上面敘述過的方法一樣），對批量樣品進行測試。7、關機順序(逆開機順序?qū)嵤┎僮?：(1)關閉運行軟件 FL Solution 2.1 for F-7000(2)關閉儀器主機電源。(3)關閉計算機。注意事項(1)注意開機順序。步驟1- (2)若是未先開主機，則程序會抓取不到主機訊號。(2)注意關機順序。(3)為延長儀器使用壽命，掃描速度、負高壓、狹縫的設置一般不 宜選在高檔。(4)關機后必須半小時(等氤燈溫度降下)方可重新開機。F-7000

10、熒光分光光度計使用操作步驟1、開機：(1)開啟計算機。(2)開啟儀器主機電源。按下儀器主機左側面板下方的黑色按鈕(POWER)。同時，觀察主機正面面板右側的 Xe LAMP和RUN指 示燈依次亮起來，都顯示綠色。2、計算機進入 Windows XP視窗后，打開運行軟件(如圖1)。0H(1 )雙擊桌面圖標FL Solutions 2.1 for FTMU. Ink ( FL Solution 2.1 forF-7000)。主機自行初始化，掃描界面自動進入。(2)初始化結束后，須預熱15-20分鐘，按界面提示選擇操作方式圖1 FL Solution 2.1掃描界面3、測試模式的選擇：波長掃描（wa

11、velength scan(1)點擊掃描界面右側“ Method”(2)在 “General 選項中的 “ Measurement"選擇 a wavelengthscan”測量模式，如圖2。圖2 Method- "General”選項的界面(3)在“Instrument”選項中設置儀器參數(shù)和掃描參數(shù)，如圖3Analysis lethodX圖 3 Method- "Instrument” 選項設置界面主要參數(shù)選項包括：選擇掃描模式 " Scan Mode”: Emission/Excitation/Synchronous(發(fā)射光譜、激發(fā)光譜和同步熒光)。選

12、擇數(shù)據(jù)模式 “ Data Mode ”：磷光測Fluorescence/Phosphprescence/LuminescenCe()t 測量、量、化學發(fā)光)。設定波長掃描范圍A、 掃描熒光激發(fā)光譜(Excitation):需設定激發(fā)光的起始/終止波長(EX Start/End WL)和熒光發(fā)射波長(EM WL );B、 掃描熒光發(fā)射光譜(Emission)：需設定發(fā)射光的起始/終止波 長（EM Start/End WL）和熒光激發(fā)波長（EX WL ）;C、 掃描同步熒光（Synchronous ：需設定激發(fā)光的起始/終止波 長（EX Start/End WL）和熒光發(fā)射波長（EM WL ）。!

13、 Attention :激發(fā)光終止與起始波長差不小于 10nm。選擇掃描速度" Scan Speed （通常選240nm/min）。選擇?發(fā)/發(fā)射狹縫（EX/EM Slit ）。選擇光電倍增管負高壓“ PMT Voltage”（一般選700V）。選擇儀器響應時間“ Response （一般選Auto）。選擇光閘才5制“口 Shutter Control”打，以使儀器在光譜掃描 時自動開啟，而其他時間關閉。選擇“ Report”設定輸出數(shù)據(jù)信息、儀器采集數(shù)據(jù)的步長（通 常選0.2nm）及輸出數(shù)據(jù)的起始和終止波長（Data Start/End）。! Attention : Data St

14、art/End需與 “Instrument” 選項中設置一致，否則所得到的數(shù)據(jù)點會逐漸減少，而無法作圖。（4）參數(shù)設置好后，點擊“確定”。4、設置文件存儲路徑（1）點擊掃描界面右側“ Sample如圖4。圖4 Sample選項的界面(2)樣品命名 " Sample name o(3)選中“UAuto File"，打可以自動保存原始文件和TXT格 式文本文檔數(shù)據(jù)。(4)參數(shù)設置好后，點擊“ OK5、掃描測試(1)打開蓋子，放入待測樣品后，蓋上蓋子。(請勿用力)(2)點擊掃描界面右側“ Measure(或快捷鍵F4),窗口在線出現(xiàn)掃描譜圖6、數(shù)據(jù)處理(1)選中自動彈出的數(shù)據(jù)窗口

15、，如圖 5(2)選擇“Trace” 回，進行讀數(shù)并尋峰等操作。戰(zhàn) Lili Liii Ii.n !. .wli IlfAj* 工Up業(yè)gp闿|圜出IxMBIRt Htl?,. ?ln 開攤 fF t A " r9r-Tmffit.黃土盍0汁5i r-iim M自 i皿國It 陽年” | 3 rm-i.-*«*W - BE i- W < f-. - :lT 1T 3圖5掃描譜圖窗口(3)上傳數(shù)據(jù)。3、關機順序(逆開機順序?qū)嵤┎僮?：(1)關閉運行軟件FL Solution 2.1 for F-7000,彈出窗口，如圖6(2) 選中 “O Close the lamp, the