生物制片顯微繪圖染色體和核型分析技術(shù)

1、生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)2010級(jí)碩士研究生第一章 生物制片技術(shù)石蠟制片法一、石蠟制片法o 石蠟制片法是生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。要完整的觀察植（動(dòng)）物的內(nèi)部構(gòu)造，必須先將實(shí)驗(yàn)樣品制成顯微標(biāo)本片，許多植物藥材用徒手切片或滑動(dòng)切片法往往不易得到較薄且均勻的切片，因此，常采用石蠟切片法。o 原理：將液體石蠟滲透到樣品材料內(nèi)部，待石蠟?zāi)坛晒腆w，再進(jìn)行切片，所得切片薄而均勻，約厚45m。有利于切片的長(zhǎng)期保存和常規(guī)檢查。實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑實(shí)驗(yàn)儀器：石蠟切片機(jī)、切片刀、小木塊（2.521.5cm）、解剖針、刀片、毛筆、酒精燈、培養(yǎng)箱、顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)材料：徐長(zhǎng)卿根等實(shí)驗(yàn)試劑：F.A.A.固定液、酒精、二甲苯、石蠟、

2、甘油蛋白、番紅染色劑、固綠（亮綠）染色劑等實(shí)驗(yàn)步驟o 取材FAA固定 沖洗 脫水 透明 浸蠟 包埋 切片 黏片 脫蠟 染色 透明 封藏水梯度乙醇二甲苯二甲苯+石蠟蛋白膠梯度乙醇純蠟梯度乙醇二甲苯樹(shù)脂實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵1、取材：取材要有代表性，注意取材的時(shí)間、部位和方向。2、固定：F.A.A.固定液（F=福爾馬林：40%甲醛5ml；A=乙醇50%或70%90ml；A=冰醋酸5ml），固定時(shí)間：1024h以上。3、脫水（上行）：將材料用梯度乙醇（30%、40%、50%（可過(guò)夜）、60%、70%（可過(guò)夜）、80%、90%、100%）脫水至100%乙醇的過(guò)程。4、透明：二甲苯（50%etoh+50%px、70%

3、、100%、100%）透明至完全透明。5、浸蠟：將液體石蠟（熔點(diǎn)：5255）逐級(jí)浸入細(xì)胞中。6、包埋：使處理后的材料包埋于石蠟中，待冷卻后便于固定于切片機(jī)上，進(jìn)行切片。7、切片：修整切片，固定蠟塊于切片機(jī)上，進(jìn)行切片。8、粘片：用蛋白黏合劑將蠟片粘在載玻片上。9、脫蠟：用二甲苯將蠟片中的蠟溶解脫去。10、染色（下行） ：用梯度乙醇將溶液逐步過(guò)度到染色劑的濃度。 （ 100% 95% 染亮綠試劑 80% 、70%、 60% 、 50%（可過(guò)夜）、 40%、 30% 染番紅色 ）11、脫水透明（上行）：用梯度乙醇將溶液逐步過(guò)度到無(wú)水狀態(tài)。 （30%、40%、50%（可過(guò)夜）、60%、70%（可過(guò)夜

4、）、80%、90%、100%、50%ETOH+50%PX、100%PX）12、封片：樹(shù)脂封片二、冰凍制片法o 冰凍切片冰凍切片o 是借助低溫冷凍將活體組織或新鮮組織快速是借助低溫冷凍將活體組織或新鮮組織快速凍結(jié)達(dá)到一定的硬度進(jìn)行制片的一種方法。凍結(jié)達(dá)到一定的硬度進(jìn)行制片的一種方法?？墒∪グ襁^(guò)程中的一切繁雜手續(xù)和時(shí)間能可省去包埋過(guò)程中的一切繁雜手續(xù)和時(shí)間能夠得到迅速的切片和顯微鑒定結(jié)果。如手術(shù)夠得到迅速的切片和顯微鑒定結(jié)果。如手術(shù)中等待冰凍快速病理報(bào)告，以病變性質(zhì)而決中等待冰凍快速病理報(bào)告，以病變性質(zhì)而決定手術(shù)方式和范圍。定手術(shù)方式和范圍。 儀器：冰凍切片機(jī)、切片刀、二氧化碳、低溫儀器：冰凍切

5、片機(jī)、切片刀、二氧化碳、低溫冰箱等冰箱等試劑：甲醛、二氧化碳、蘇木精染色液等試劑：甲醛、二氧化碳、蘇木精染色液等o 操作步驟：樣品冰凍二氧化碳切片染色封片冰凍切片機(jī)蘇木精染色脫水、透明冰凍切片的優(yōu)缺點(diǎn)：（一）優(yōu)點(diǎn)：（一）優(yōu)點(diǎn)：1簡(jiǎn)便，可以不需要對(duì)組織固定、脫水、透明、包埋等簡(jiǎn)便，可以不需要對(duì)組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進(jìn)行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。手續(xù)即可進(jìn)行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。2快速，用時(shí)短?？焖伲脮r(shí)短。3組織變化不大。組織變化不大。4能很好保存脂肪，類脂等成分。能很好保存脂肪，類脂等成分。5能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對(duì)能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，

6、特別是對(duì)于那些對(duì)有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜于那些對(duì)有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。表面抗原和水解酶保存較好。 （二）缺點(diǎn)：（二）缺點(diǎn)： 1不容易做連續(xù)切片。2切取的組織不能過(guò)大，組織過(guò)大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。3不容易制作較薄的切片。4組織塊在凍結(jié)過(guò)程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。冰凍切片機(jī)的使用及注意事項(xiàng)冰凍切片機(jī)的使用及注意事項(xiàng) （1）新鮮的組織制備）新鮮的組織制備 組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有： CO2氣（78） 丙酮干冰冷卻的輕石油

7、醚、乙烷和庚烷（80） 液氮（190） 液氮冷卻的丙烷（19）。液氮適用于組織化學(xué)，較安全。缺點(diǎn)：組織塊易發(fā)生龜裂。（2）固定組織的制備）固定組織的制備 為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4、24小時(shí)的甲醛固定能很好地保存酶類。但對(duì)許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲醛短時(shí)間固定（10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。 （3）恒冷箱溫度）恒冷箱溫度 一般在冷凍后一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時(shí)再切，一分鐘，到接近冷室溫度時(shí)再切，一般組織在般組織在1520切片最易成功。每種組織切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度。應(yīng)有其合適的切片溫度、刀的溫度和

8、冷室溫度。應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)。（4）抗卷板）抗卷板 抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過(guò)。抗卷板略高于刀面的最高點(diǎn)?？蓱{經(jīng)驗(yàn)調(diào)整過(guò)?？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c(diǎn)?？蓱{經(jīng)驗(yàn)調(diào)整刀對(duì)組織的角度，一般新刀為刀對(duì)組織的角度，一般新刀為20。（5）切片機(jī)）切片機(jī)操作程序：先接通電源，調(diào)定恒冷箱溫度，調(diào)整切片操作程序：先接通電源，調(diào)定恒冷箱溫度，調(diào)整切片刀的角度，調(diào)定切片厚度，標(biāo)本置載臺(tái)致冷達(dá)所刀的角度，調(diào)定切片厚度，標(biāo)本置載臺(tái)致冷達(dá)所需溫度后，將其安放在切片機(jī)推進(jìn)器上。即可切需溫度后，將其安放在切片機(jī)推進(jìn)器上。即可切片。片。 恒冷箱視使用情

9、況每周或每月清潔一次冰霜。恒冷箱視使用情況每周或每月清潔一次冰霜。（6）切片刀）切片刀 新刀切片滿意，舊刀用自動(dòng)磨刀機(jī)磨刀較好。如果切片刀與抗卷板的位置，角度合乎要求，又有一把銳利的刀，就能獲得理想的切片。 三、滑動(dòng)切片法滑走切片法滑走切片法（永久制片） （1）水浸軟化材料（如為鮮材料或固定材料）水浸軟化材料（如為鮮材料或固定材料不用軟化）不用軟化） （2）分割材料成適當(dāng)大小。）分割材料成適當(dāng)大小。 （3）如為木質(zhì)材料用甘油再軟化）如為木質(zhì)材料用甘油再軟化 （4）把材料夾入滑走切片機(jī)的夾物部（如材）把材料夾入滑走切片機(jī)的夾物部（如材料小而不能夾入，可加輔助物，如石蠟泡料小而不能夾入，可加輔助物

10、，如石蠟泡沫塑料等）沫塑料等） （5）切片：調(diào)整）切片：調(diào)整1025u厚度，推動(dòng)刀片，厚度，推動(dòng)刀片，切下材料，用濕毛筆取下片子放表面皿水切下材料，用濕毛筆取下片子放表面皿水中。中。（6）經(jīng)下列各級(jí)乙醇脫水）經(jīng)下列各級(jí)乙醇脫水番紅染色番紅染色1-3分鐘（分鐘（50%乙醇配制）乙醇配制） 50%乙醇（乙醇（1-2次）次） 60%乙醇乙醇70%乙醇乙醇 80%乙醇乙醇固綠染色固綠染色2-5秒秒 （90%醇配制）醇配制） 90%乙醇（洗乙醇（洗1-2次）次）95%乙醇乙醇純酒純酒 精精 注：以上操作于表面皿中進(jìn)行，并用吸管及吸注：以上操作于表面皿中進(jìn)行，并用吸管及吸水草紙吸凈乙水草紙吸凈乙 醇液；每

11、一級(jí)脫水時(shí)間醇液；每一級(jí)脫水時(shí)間3-5分鐘；并保證脫水足夠。分鐘；并保證脫水足夠。（7）經(jīng)下列各級(jí)二甲苯透明）經(jīng)下列各級(jí)二甲苯透明25%50%75%純二甲苯純二甲苯。 注意注意：透明的每一級(jí)透明的每一級(jí)3-5分鐘，用吸唧或吸水分鐘，用吸唧或吸水草紙吸凈試劑（注意勿吸去材料），再放入草紙吸凈試劑（注意勿吸去材料），再放入下一級(jí)。到純二甲苯如有混濁，須退回下一級(jí)。到純二甲苯如有混濁，須退回95%酒精再脫水并重新按透明步驟進(jìn)行。酒精再脫水并重新按透明步驟進(jìn)行。（）封（）封 片：片：1、在玻片上滴一滴樹(shù)脂，將片子平放在樹(shù)膠、在玻片上滴一滴樹(shù)脂，將片子平放在樹(shù)膠 上，用鑷子取蓋玻片，使其一邊接觸樹(shù)膠上，

12、用鑷子取蓋玻片，使其一邊接觸樹(shù)膠 緩慢蓋下。緩慢蓋下。 2、貼標(biāo)簽、寫(xiě)編號(hào)、名稱（橫切或縱切）、貼標(biāo)簽、寫(xiě)編號(hào)、名稱（橫切或縱切） 厚度、日期。厚度、日期。第二章 生物繪圖與攝影技術(shù)o 第一節(jié) 顯微繪圖顯微繪圖顯微繪圖1顯微描繪器的使用顯微描繪器的使用顯微描繪器是用于描繪在顯微鏡下擴(kuò)大的物象時(shí)所用的一種儀器。顯顯微描繪器是用于描繪在顯微鏡下擴(kuò)大的物象時(shí)所用的一種儀器。顯微描繪器利用兩組光學(xué)系統(tǒng)將顯微鏡中的物象和圖畫(huà)的鉛筆象相微描繪器利用兩組光學(xué)系統(tǒng)將顯微鏡中的物象和圖畫(huà)的鉛筆象相迭合，同時(shí)送到觀察者的眼中，以利準(zhǔn)確地依影描繪。迭合，同時(shí)送到觀察者的眼中，以利準(zhǔn)確地依影描繪。顯微描繪器種類很多，

13、下面介紹無(wú)柄描繪器：顯微描繪器種類很多，下面介紹無(wú)柄描繪器：（1）構(gòu)造和原理）構(gòu)造和原理描繪器是由兩個(gè)三棱鏡描繪器是由兩個(gè)三棱鏡A、B粘合在一起，粘合在一起，A棱鏡地粘合面棱鏡地粘合面PP上，除上，除中央部位的小圓孔中央部位的小圓孔M外，均涂以水銀；旁側(cè)有一反射棱鏡外，均涂以水銀；旁側(cè)有一反射棱鏡C，與，與垂直方向成垂直方向成75角，其底面角，其底面FF上亦涂以水銀。上亦涂以水銀。D為接目鏡，為接目鏡，E為接物鏡。觀察時(shí)，載玻片上物體的物象經(jīng)接物鏡為接物鏡。觀察時(shí)，載玻片上物體的物象經(jīng)接物鏡E，接目鏡，接目鏡D，并通過(guò)兩個(gè)三棱鏡粘合面并通過(guò)兩個(gè)三棱鏡粘合面PP的中央小孔的中央小孔M而達(dá)于眼，同

14、時(shí)繪圖而達(dá)于眼，同時(shí)繪圖板板G上的鉛筆上的鉛筆H，也經(jīng)，也經(jīng)C棱鏡底面棱鏡底面FF反射至反射至PP平面而達(dá)于眼。平面而達(dá)于眼。這樣，眼睛能同時(shí)看到顯微鏡下的物體和繪圖板上的鉛筆，進(jìn)行這樣，眼睛能同時(shí)看到顯微鏡下的物體和繪圖板上的鉛筆，進(jìn)行描繪。描繪。（2）使用方法：將顯微鏡正放于繪圖板的左方，按常規(guī)放置標(biāo)本片，調(diào)節(jié)，使物象清晰。取下接目鏡，在鏡筒上端裝上描繪器的附著器，放回接目鏡，再套上描繪器。將繪圖紙固定在繪圖板上，調(diào)節(jié)繪圖板的傾斜度，使與描繪器的角度相一致，再調(diào)節(jié)光線，使視野中的物象與鉛筆象均清晰，就可進(jìn)行描繪。（3）描繪方法）描繪方法先描出目的物的圖像輪廓，再描繪明顯的特征，如較先描出目

15、的物的圖像輪廓，再描繪明顯的特征，如較大的紋孔、較粗的層紋等。當(dāng)描繪一個(gè)視野容納不大的紋孔、較粗的層紋等。當(dāng)描繪一個(gè)視野容納不下的大形或長(zhǎng)形物象時(shí)，可以先描繪一個(gè)視野，然下的大形或長(zhǎng)形物象時(shí)，可以先描繪一個(gè)視野，然后微微移動(dòng)標(biāo)本片，再描繪連續(xù)的部分，須注意，后微微移動(dòng)標(biāo)本片，再描繪連續(xù)的部分，須注意，移動(dòng)前，要確定移動(dòng)前，要確定23個(gè)明顯的標(biāo)志，以免移動(dòng)后個(gè)明顯的標(biāo)志，以免移動(dòng)后物象與圖像銜接不上。移動(dòng)標(biāo)本片和圖紙要平行進(jìn)物象與圖像銜接不上。移動(dòng)標(biāo)本片和圖紙要平行進(jìn)行，每次移動(dòng)距離不應(yīng)超過(guò)行，每次移動(dòng)距離不應(yīng)超過(guò)2/3個(gè)視野。描出草圖個(gè)視野。描出草圖后，卸除描繪器，再仔細(xì)觀察目的物，并與圖像核

16、后，卸除描繪器，再仔細(xì)觀察目的物，并與圖像核對(duì)，作進(jìn)一步的加工修整和補(bǔ)充必要的細(xì)節(jié)，成為對(duì)，作進(jìn)一步的加工修整和補(bǔ)充必要的細(xì)節(jié)，成為鉛筆圖。然后可根據(jù)需要再用硫酸紙依樣描繪成墨鉛筆圖。然后可根據(jù)需要再用硫酸紙依樣描繪成墨線圖。線圖。（4）描圖像的放大倍數(shù)計(jì)算和調(diào)整常見(jiàn)的兩種方法）描圖像的放大倍數(shù)計(jì)算和調(diào)整常見(jiàn)的兩種方法把鏡臺(tái)量尺的刻度線通過(guò)描繪器描繪在圖紙上（一般畫(huà)大把鏡臺(tái)量尺的刻度線通過(guò)描繪器描繪在圖紙上（一般畫(huà)大格線，放大倍數(shù)很高時(shí)用小格線），用量尺測(cè)量繪出的兩格線，放大倍數(shù)很高時(shí)用小格線），用量尺測(cè)量繪出的兩刻度線之間的長(zhǎng)度，除以鏡臺(tái)量尺兩刻度線之間的實(shí)際長(zhǎng)刻度線之間的長(zhǎng)度，除以鏡臺(tái)量尺

17、兩刻度線之間的實(shí)際長(zhǎng)度，即得圖像的放大倍數(shù)。度，即得圖像的放大倍數(shù)。如：圖紙上兩刻度線之間的長(zhǎng)度為如：圖紙上兩刻度線之間的長(zhǎng)度為10mm，而鏡臺(tái)量尺該刻，而鏡臺(tái)量尺該刻度線間的實(shí)際長(zhǎng)度為度線間的實(shí)際長(zhǎng)度為0.1mm，放大倍數(shù)，放大倍數(shù)100.1100（倍）（倍）也可直接用繪出得標(biāo)尺表示放大倍數(shù)。也可直接用繪出得標(biāo)尺表示放大倍數(shù)。用目鏡量尺測(cè)得物體的長(zhǎng)度或大小，除繪圖紙上物象在同用目鏡量尺測(cè)得物體的長(zhǎng)度或大小，除繪圖紙上物象在同一方向測(cè)得得長(zhǎng)度、大小，即得圖像放大倍數(shù)。一方向測(cè)得得長(zhǎng)度、大小，即得圖像放大倍數(shù)。如：大黃簇晶在圖紙上繪得直徑為如：大黃簇晶在圖紙上繪得直徑為24mm，而在顯微鏡下得，

18、而在顯微鏡下得實(shí)際長(zhǎng)度為實(shí)際長(zhǎng)度為120m（0.12mm），放大倍數(shù)），放大倍數(shù)240.12200（倍）（倍）放大倍數(shù)的調(diào)整，一般可利用伸縮顯微鏡鏡筒或調(diào)整繪圖紙放大倍數(shù)的調(diào)整，一般可利用伸縮顯微鏡鏡筒或調(diào)整繪圖紙的高低，使放大倍數(shù)成為整齊數(shù)字，調(diào)整合適，保持顯微的高低，使放大倍數(shù)成為整齊數(shù)字，調(diào)整合適，保持顯微鏡、描繪器、繪圖紙的位置不變，即可描繪。鏡、描繪器、繪圖紙的位置不變，即可描繪。注意：描繪圖像的放大倍數(shù)是借助顯微量尺和直尺計(jì)算而得，注意：描繪圖像的放大倍數(shù)是借助顯微量尺和直尺計(jì)算而得，切不可將顯微鏡本身的放大倍數(shù)誤認(rèn)為是物象的放大倍數(shù)。切不可將顯微鏡本身的放大倍數(shù)誤認(rèn)為是物象的放大

19、倍數(shù)。自動(dòng)顯微成像系統(tǒng)投影式描繪器（5）新型顯微描繪器介紹繪圖技巧簡(jiǎn)介繪圖技巧簡(jiǎn)介觀察仔細(xì)是前提，觀察仔細(xì)是前提，先繪草圖和比例，先繪草圖和比例，正確使用好紙筆，正確使用好紙筆，保持規(guī)范和清晰，保持規(guī)范和清晰，真實(shí)準(zhǔn)確是第一。真實(shí)準(zhǔn)確是第一。2藥材組織簡(jiǎn)圖繪制法藥材組織簡(jiǎn)圖繪制法采用一定的圖案符號(hào)（圖采用一定的圖案符號(hào)（圖12），來(lái)表示藥材切面中各種組織即某），來(lái)表示藥材切面中各種組織即某些特殊構(gòu)造的層次和分布范圍，這種組織圖，稱之組織簡(jiǎn)圖。些特殊構(gòu)造的層次和分布范圍，這種組織圖，稱之組織簡(jiǎn)圖。繪制方法如下：繪制方法如下：（1）制作標(biāo)本片）制作標(biāo)本片 制作反差較大的標(biāo)本片，如各種二重、三重染色

20、制作反差較大的標(biāo)本片，如各種二重、三重染色的石蠟切片，經(jīng)間苯三酚的石蠟切片，經(jīng)間苯三酚-濃鹽酸、氯化鋅碘液或其他試劑染色濃鹽酸、氯化鋅碘液或其他試劑染色后的手切片，要求組織結(jié)構(gòu)清晰，界限分明。后的手切片，要求組織結(jié)構(gòu)清晰，界限分明。（2）觀察）觀察 描繪前，需要仔細(xì)觀察標(biāo)本片，熟悉切片中各種組織的描繪前，需要仔細(xì)觀察標(biāo)本片，熟悉切片中各種組織的構(gòu)造層次，重要鑒別特征的位置、各種組織所占的比例等。構(gòu)造層次，重要鑒別特征的位置、各種組織所占的比例等。（3）勾畫(huà)輪廓圖）勾畫(huà)輪廓圖 用幻燈機(jī)或投影儀，將標(biāo)本片投像于繪圖紙上，用幻燈機(jī)或投影儀，將標(biāo)本片投像于繪圖紙上，調(diào)整合適的放大倍數(shù)，用調(diào)整合適的放大

21、倍數(shù)，用3H（2H）鉛筆輕輕勾畫(huà)出各個(gè)部位）鉛筆輕輕勾畫(huà)出各個(gè)部位的輪廓，不清晰的部位在顯微鏡下，用顯微測(cè)量加以校正。的輪廓，不清晰的部位在顯微鏡下，用顯微測(cè)量加以校正。小型材料，可以直接用描繪器進(jìn)行勾畫(huà)。小型材料，可以直接用描繪器進(jìn)行勾畫(huà)。徒手勾畫(huà)法。徒手勾畫(huà)法。（4）修正鉛筆圖 用HB型鉛筆修正上述輪廓圖，將各部位即重要特征，分別用規(guī)定的簡(jiǎn)圖符號(hào)細(xì)心地描繪成鉛筆圖。（5）圖注及圖名 簡(jiǎn)圖繪完后，用整齊的引線將各部位依次向右方或上、下方（葉類中藥）引出，寫(xiě)上圖注，圖下方寫(xiě)上圖的名稱并注明放大倍數(shù)。（6）注意事項(xiàng) 繪簡(jiǎn)圖符號(hào)時(shí)，應(yīng)注意線條的平直和圓順，點(diǎn)應(yīng)均勻圓正，色調(diào)一致。簡(jiǎn)圖是平面圖，不應(yīng)

22、繪出立體感，所有部位均用符號(hào)表示，不應(yīng)把某個(gè)部位繪成詳圖。簡(jiǎn)圖一般要求整體性和全面性，但有的藥材也可只繪局部或主要部位。3藥材組織詳圖繪制法組織詳圖是把組織中各種細(xì)胞，由外向內(nèi)一次繪出的組織圖。繪制方法如下：（1）、（2）項(xiàng)同組織簡(jiǎn)圖繪制法。（3）勾畫(huà)輪廓圖利用描繪器觀察繪圖，或顯微照相后依次放大的照片繪圖。先用3H鉛筆繪出草圖。直徑較小的組織可全部繪出，直徑大的組織可由外向內(nèi)分成數(shù)段，選取最有鑒別意義的組織特征描繪。描繪時(shí)，各段及各部位細(xì)胞的放大倍數(shù)應(yīng)一致，各種細(xì)胞及內(nèi)含物等應(yīng)依次準(zhǔn)確繪出，切忌隨意填充。（4）詳圖中各類細(xì)胞的表示法及各種類型鉛筆的使用：）詳圖中各類細(xì)胞的表示法及各種類型鉛筆

23、的使用：各類細(xì)胞的表示法一般有三種：各類細(xì)胞的表示法一般有三種：a.單線條法：適用于薄壁細(xì)胞。單線條法：適用于薄壁細(xì)胞。b.雙線條法：適用于略增厚壁的細(xì)胞。雙線條法：適用于略增厚壁的細(xì)胞。c.三線條法：適用于成群的厚壁細(xì)胞及導(dǎo)管；如單個(gè)散在時(shí)，采三線條法：適用于成群的厚壁細(xì)胞及導(dǎo)管；如單個(gè)散在時(shí)，采用雙線條法。用雙線條法。B、HB鉛筆：適于繪粗線條。如繪厚壁細(xì)胞、導(dǎo)管的外緣線。鉛筆：適于繪粗線條。如繪厚壁細(xì)胞、導(dǎo)管的外緣線。H、2H鉛筆：適于繪中線條。如繪薄壁細(xì)胞，各種結(jié)晶體、淀粉粒等。鉛筆：適于繪中線條。如繪薄壁細(xì)胞，各種結(jié)晶體、淀粉粒等。3H鉛筆：適于繪細(xì)線條。如繪厚壁細(xì)胞、導(dǎo)管的內(nèi)緣線、

24、層紋、紋鉛筆：適于繪細(xì)線條。如繪厚壁細(xì)胞、導(dǎo)管的內(nèi)緣線、層紋、紋孔等。孔等。（5）修正鉛筆圖）修正鉛筆圖 將勾畫(huà)的輪廓圖用不同型號(hào)（硬度）的鉛筆和（將勾畫(huà)的輪廓圖用不同型號(hào)（硬度）的鉛筆和（4）項(xiàng)中規(guī)定的畫(huà)法）項(xiàng)中規(guī)定的畫(huà)法修整成鉛筆圖。修整成鉛筆圖。（6）圖注和圖名）圖注和圖名按簡(jiǎn)圖法寫(xiě)上圖注、圖名和放大倍數(shù)。按簡(jiǎn)圖法寫(xiě)上圖注、圖名和放大倍數(shù)。（7）注意事項(xiàng)）注意事項(xiàng)組織詳圖是細(xì)胞的平面圖，但細(xì)胞內(nèi)含物以及厚壁細(xì)胞應(yīng)注意繪出立組織詳圖是細(xì)胞的平面圖，但細(xì)胞內(nèi)含物以及厚壁細(xì)胞應(yīng)注意繪出立體感。體感。4藥材粉末圖繪制法粉末圖是描繪粉末藥材中具有鑒別意義的組織碎片、細(xì)胞或細(xì)胞內(nèi)含物形態(tài)的特征圖。繪

25、制方法如下：（1）制作合適的粉末標(biāo)本片，仔細(xì)觀察。（2）用描繪器作圖或鏡檢時(shí)直接作圖。（3）選擇有鑒別意義的特征，如實(shí)描繪。常見(jiàn)的粉末特征：導(dǎo)管、各種厚壁細(xì)胞、內(nèi)含物、分泌組織、毛茸等。注意觀察和描繪不同的角度和斷面：如表面觀、斷面觀、極面觀、赤道面觀等。注意繪出立體感：如各種厚壁細(xì)胞、內(nèi)含物、毛茸、導(dǎo)管等。（4）圖版的排列、大小和放大倍數(shù)：圖版排列的原則：各類特征相對(duì)集中，又要與其他特征適當(dāng)交叉、美觀、充實(shí)、大方。圖版大小：一般按各出版社要求的大小或其倍數(shù)計(jì)算。放大倍數(shù)：同一張粉末圖中，要求使用同一個(gè)放大倍數(shù)。（5）修正鉛筆圖按詳圖繪制法中4、5項(xiàng)進(jìn)行。（6）圖注和圖名：鉛筆圖繪完后，將各類

26、粉末特征標(biāo)上數(shù)碼，在圖下寫(xiě)明，圖的名稱、放大倍數(shù)，其下面注明特征數(shù)碼的圖注。（7）注意事項(xiàng)圖版排列時(shí)，應(yīng)注意突出重點(diǎn)特征，使占主要版面，次要特征占次要版面或填補(bǔ)空隙，既不能過(guò)于密集繁雜，又不能過(guò)于稀疏松散，切忌不可縱、橫排隊(duì)式。圖片的大小要適中，根據(jù)圖紙的大小和圖的多少確定。5藥材解離組織圖的繪制法（1）根據(jù)材料的性質(zhì)，選擇合適的解離方法、制片，用描繪器進(jìn)行描繪。（2）解離組織是觀察研究藥材某一組織中有鑒別意義的單個(gè)完整的細(xì)胞形態(tài)，故描繪時(shí)，單個(gè)細(xì)胞應(yīng)繪全形圖，過(guò)長(zhǎng)的細(xì)胞，如纖維、管胞、篩胞等，可分上下兩段描繪。描繪時(shí)，應(yīng)體現(xiàn)立體感，各種細(xì)胞的鑒別點(diǎn)要繪出來(lái)，如細(xì)胞的紋孔、導(dǎo)管穿孔板、纖維末端

27、的分枝等。（3）圖版排列，一般各類細(xì)胞在圖中分類集中縱向排列。同一圖版中，可以使用不同的放大倍數(shù)，在圖注中，分別注明放大倍數(shù)。其他與粉末圖相同。顯微攝影顯微攝影 顯微攝影技術(shù)(microscopic photography)也稱顯微照像術(shù)，是利用攝影技術(shù)和顯微鏡把顯微鏡中觀察到的組織、細(xì)胞圖像記錄下來(lái)，并以照片或幻燈片的形式供保存、觀察、測(cè)量和分析鑒定。 顯微攝影儀顯微攝影儀 1顯微攝影裝置顯微攝影裝置最基本的結(jié)構(gòu)就是：各類顯微鏡和各類照相機(jī)。傳統(tǒng)的顯微攝影一般使用傳統(tǒng)的相機(jī)，將鏡頭去除，裝在顯微鏡上，拍攝顯微鏡下看到的切片；或者使用專門的照相顯微鏡，有自己的專用片盒，可以拍35mm膠片，也可

28、拍一次成像和45頁(yè)片，對(duì)焦、光圈、曝光全在顯微鏡上操作完成，除了連續(xù)照明外，甚至裝有閃光燈和色溫表，自動(dòng)曝光系統(tǒng)既可點(diǎn)測(cè)光也可中心重點(diǎn)測(cè)光，曝光補(bǔ)償、倒記數(shù)顯示等等，一應(yīng)俱全。傳統(tǒng)的顯微攝影有著和傳統(tǒng)相機(jī)一樣的缺點(diǎn)：拍攝的照片，不能立拍即現(xiàn)，照片必須要經(jīng)過(guò)沖洗，在數(shù)字化成電子文擋的時(shí)候，細(xì)節(jié)有損失等等。o 數(shù)碼顯微攝影在裝置上，一般使用數(shù)碼相機(jī)通過(guò)各種接口和顯微鏡的組合，然后數(shù)碼相機(jī)和計(jì)算機(jī)相連；數(shù)碼顯微攝影的優(yōu)點(diǎn)在于，可即時(shí)瀏覽拍攝，拍攝后的照片即時(shí)觀看，減少?gòu)U片率；另外拍攝后的照片即時(shí)傳入到計(jì)算機(jī)的分析軟件，即刻得出分析接結(jié)果，大大縮減了因沖洗照片而耽誤大量時(shí)間，從而解決了實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性的問(wèn)

29、題；再者，數(shù)碼顯微攝影拍攝的圖片為數(shù)字化的文檔，可即刻用于power point教學(xué)或日后的編輯出版工作。第三章第三章 染色體和核型分析技術(shù)染色體和核型分析技術(shù) 復(fù)習(xí)1： 細(xì)胞的分裂基本概念基本概念 1無(wú)絲分裂（amitosis）：細(xì)胞核拉長(zhǎng)呈啞鈴狀分裂，中部縊縮形成2個(gè)相似的子細(xì)胞。分裂中無(wú)染色體和紡錘體形成。如：纖毛蟲(chóng)、原生生物、特化的動(dòng)物組織。 2有絲分裂(mitosis)：即體細(xì)胞分裂，通過(guò)分裂產(chǎn)生同樣染色體數(shù)目的子細(xì)胞。在分裂中出現(xiàn)紡錘體。 3無(wú)性生殖(asexual reproduction)：通過(guò)有絲分裂，從個(gè)細(xì)胞或生物繁殖得到基因型完全相同的細(xì)胞或生物。也即克?。╟lone）。

30、 4有性生殖(sexual reproduction)：減數(shù)分裂減數(shù)分裂和受精有規(guī)則地交替進(jìn)行，產(chǎn)生子代的生殖方式。復(fù)習(xí)復(fù)習(xí)2：有絲分裂：有絲分裂 1間期(interphase)：為兩次分裂的中間時(shí)期。通常講的細(xì)胞核的形態(tài)和結(jié)構(gòu)就是指的間期核，染色體沒(méi)有可見(jiàn)的結(jié)構(gòu)。 間期又可分為合成前期（G1）、合成期（S）及合成后期（G2）。在S期，DNA進(jìn)行了復(fù)制。因此有絲分裂中的染色體是已復(fù)制了的兩條染色單體。前期（prophase）： a. 染色體由細(xì)線狀逐漸縮短變粗，由2條染色單體纏繞在一起。 b. 前期末核仁崩潰消失（某些低等生物核仁仍保留，分成2份到子細(xì)胞中）。 c. 前期末時(shí)核膜破裂成碎片，使

31、染色體最大限度地分散于細(xì)胞中。有絲分裂過(guò)程有絲分裂過(guò)程o 中期(Metaphase):主要完成紡錘體的結(jié)構(gòu)及染色體在赤道面上的排列，核膜剛一消失，紡錘體即出現(xiàn)紡錘體即出現(xiàn)，進(jìn)入中期。o 后期（Anaphase）：姐妹染色單體分開(kāi)成獨(dú)立的染色體。并由紡錘體連接著向兩極移動(dòng)，細(xì)胞伸長(zhǎng)，連續(xù)紡錘體拉長(zhǎng)。o 末期（Telophase）：染色體到達(dá)兩極時(shí)，末期開(kāi)始。 a. 核膜形成，核仁消失。 b. 染色體松散成染色質(zhì)團(tuán)。 c. 植物細(xì)胞中，在赤道板位置出現(xiàn)細(xì)胞板，即細(xì)胞壁；動(dòng)物細(xì)胞中在赤道板位置胞質(zhì)縊縮，形成兩個(gè)子細(xì)胞。細(xì)胞板及縊縮環(huán)的位置是由紡錘體微管決定的。 復(fù)習(xí)復(fù)習(xí)3、染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)、染色質(zhì)的

32、基本結(jié)構(gòu)o 染色質(zhì)是細(xì)胞核內(nèi)能被堿性染料染色的物質(zhì)。根據(jù)染色反應(yīng)的不同，可分為常染色質(zhì)和異染色質(zhì)。常染色質(zhì)在間期呈高度分散狀態(tài)（正在進(jìn)行復(fù)制轉(zhuǎn)錄等），染色較淺，光鏡下難以分辨。中期時(shí)發(fā)生螺旋化收縮變短。是產(chǎn)生Mendel比率和各類遺傳現(xiàn)象的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。異染色質(zhì)在間期呈螺旋狀態(tài)，染色較深。其基因活性受到影響。o 染色體是DNA和蛋白質(zhì)組成的復(fù)合物。其中DNA占27，組蛋白質(zhì)占66，RNA占6。一、染色體的結(jié)構(gòu)二、染色體的結(jié)構(gòu)模型二、染色體的結(jié)構(gòu)模型1、核小體-一級(jí)結(jié)構(gòu) 染色質(zhì)是一種纖維狀結(jié)構(gòu)，它是由最基本的單位核小體(nucleosome)成串排列而成的，使得DNA、蛋白質(zhì)、RNA組成為一種致

33、密的結(jié)構(gòu)形式。核小體單位包括：166對(duì)bpDNA，一個(gè)組蛋白八聚體，一分子的組蛋白質(zhì)H1。 這種由核小體串聯(lián)的11nm的染色質(zhì)纖維稱為核絲，染色質(zhì)的初級(jí)結(jié)構(gòu)。2、螺線管(Solenoid)-二級(jí)結(jié)構(gòu)由核小體的長(zhǎng)鏈進(jìn)一步螺旋纏繞形成直徑約30nm左右的染色質(zhì)纖維，即螺線管-染色質(zhì)的。3、超螺線管-三級(jí)結(jié)構(gòu)30nm的染色線（螺線管）進(jìn)一步壓縮形成300nm染色線，稱為超螺線管。4、染色體超螺線管再次折迭和纏繞形成染色體。由DNA到核小體30nm染色質(zhì)是按螺旋方式縮集的，染色體的最高層次結(jié)構(gòu)是由300nm左右的染色線以螺旋方式縮集的，這四個(gè)等級(jí)的演變都是通過(guò)螺旋化實(shí)現(xiàn)的，稱之為多級(jí)螺旋模型（mult

34、iplecoilingmodel）。 染色體（Chromosome）是遺傳物質(zhì)或基因載體的總稱，包括原核生物及細(xì)胞器的遺傳物質(zhì)在內(nèi)。但一般是指真核生物體細(xì)胞分裂中期具有一定形態(tài)的染色質(zhì)。因這一時(shí)期染色體收縮到最短，形態(tài)上較為典型。 三、染色體形態(tài)及其分析（一）染色體的形態(tài)特征 1、大小 不同物種染色體大小差異較大。一般染色體數(shù)目少的則體積較大。一般情況下，植物大于動(dòng)物，單子葉植物大于雙子葉植物。如魚(yú)類染色體數(shù)量多而體積小，小麥染色體大于水稻染色體。同一物種不同組織的細(xì)胞染色體可能有很大的差異。 不同處理方式影響染色體的大小。染色體只有通過(guò)制片，借助顯微鏡才能觀察到，故制備方法影響很大。如秋水仙

35、素縮短染色體，高溫下染色體縮短。 2、染色體形態(tài)結(jié)構(gòu) 典型的染色體通常由長(zhǎng)臂和短臂、著絲點(diǎn)和著絲粒、次縊痕和隨體、端粒等幾部分組成。 （1）著絲點(diǎn)（centromere）和著絲粒(kinetochore) 著絲點(diǎn)即初級(jí)縊痕或主縊痕。中期時(shí)，著絲點(diǎn)不發(fā)生收縮，呈現(xiàn)出透明的縊縮狀結(jié)構(gòu)，是紡錘絲（Spindle）附著的部位。著絲點(diǎn)是染色體不可缺少的重要結(jié)構(gòu)。一個(gè)染色體可以丟失一個(gè)臂或兩個(gè)臂的大部分也能復(fù)制，但若無(wú)著絲點(diǎn)，便無(wú)法復(fù)制而自然丟失。 以前，人們常常將著絲點(diǎn)和著絲粒作為同義詞，指主縊痕，中文譯作“著絲點(diǎn)”。隨著電鏡的應(yīng)用，在著絲點(diǎn)區(qū)發(fā)現(xiàn)一個(gè)在光鏡下不能分辨而在電鏡下則清晰可見(jiàn)的紡錘體附著的特

36、殊結(jié)構(gòu)。因此，國(guó)外學(xué)者指出： 著絲點(diǎn)：指兩個(gè)染色單體保持連接在一起的初縊痕區(qū)。 著絲粒：只限于染色體上紡錘體微管附著的精細(xì)結(jié)構(gòu)。 所以，著絲點(diǎn)泛指初縊痕區(qū)，不含明顯的超微結(jié)構(gòu)，光鏡下可見(jiàn)，適于光鏡下描述染色體使用。 著絲粒僅指紡錘體微管附著于染色體的特殊結(jié)構(gòu)，僅在電鏡下適于描述染色體的超微結(jié)構(gòu)時(shí)使用。由于我們平時(shí)所講的遺傳學(xué)上染色體多是在光鏡下的結(jié)構(gòu)，所以常用著絲點(diǎn)一詞。 通常著絲點(diǎn)在每條染色體上只有一個(gè)，且位置恒定，常用作描述染色體的一個(gè)標(biāo)記。根據(jù)著絲點(diǎn)的位置，可以將染色體劃分為不同的類型。 o 以廣泛應(yīng)用的Levan的四點(diǎn)四區(qū)系統(tǒng)為例： 簡(jiǎn)稱著絲點(diǎn)的位置臂比值染色體與MT連結(jié)臂比值1984

37、年修改M正中部著絲點(diǎn)1.01.0m中部著絲點(diǎn)區(qū)1.01.71.011.70sm亞中部著絲點(diǎn)區(qū)1.73.01.713.0st亞端部著絲點(diǎn)區(qū)3.07.03.017.0t端部著絲點(diǎn)區(qū)7.07.01T端部著絲點(diǎn) （2）次縊痕（Secondary Constriction）、核仁組織區(qū)（Nucleolar organizing region ，NOR）和隨體（Satellite） 在一些植物中（尤其是大染色體的植物），在一個(gè)細(xì)胞的染色體中，至少有一對(duì)染色體除有著絲點(diǎn)外還有一個(gè)不發(fā)生卷曲的、染色很淡的區(qū)域，這個(gè)區(qū)域稱做次縊痕。主要位于染色體短臂上。 核仁組織區(qū)顧名思義負(fù)責(zé)組織核仁的區(qū)域，含有rDNA基因，

38、能合成RNA。次縊痕與核仁組織區(qū)幾乎可作同義詞，只是在使用上有差別。通常在對(duì)染色體一般形態(tài)描述時(shí)用次縊痕（指有這樣一種結(jié)構(gòu)），而在討論其功能時(shí)常用核仁組織區(qū)，表示次縊痕具有組成核仁的特殊功能。 隨體是指次縊痕區(qū)至染色體末端的部分，有如染色體的小衛(wèi)星。隨體主要由異染色質(zhì)組成，是高度重復(fù)的DNA序列。對(duì)這三個(gè)概念的區(qū)分應(yīng)與功能聯(lián)系起來(lái)。3、端粒(Telomere) 端粒指染色體的自然末端。不一定有明確的形態(tài)特征，只是對(duì)染色體起封口作用，使DNA序列終止。 端粒是染色體不可缺少的組成部分。保持了染色體的遺傳上的獨(dú)立性，無(wú)端粒的染色體就與其它無(wú)端粒染色體連接起來(lái)，造成后期染色體的缺失或重復(fù)。 核型分析

39、 根據(jù)染色體的形態(tài)特征?？梢詫?duì)物種進(jìn)行核型分析。 所謂核型是指一個(gè)個(gè)體或物種的染色體的構(gòu)成，包括染色體的大小、形態(tài)、數(shù)目。即指體細(xì)胞染色體在光學(xué)顯微鏡下所有可測(cè)定的表型特征的總稱。 對(duì)一組染色體的形態(tài)特點(diǎn)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)研究（進(jìn)行定性和定量的描述）稱為核型分析。大多以有絲分裂中期染色體為標(biāo)準(zhǔn)，也有采用粗線期染色體。核型分析對(duì)于研究種內(nèi)或種間的核型變化，染色體的數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變異，生物的起源和進(jìn)化，以及鑒定染色體疾病等具有重要的作用。 （二）染色體的數(shù)目 1、染色體的數(shù)目特征 恒定性。同一種生物染色體數(shù)目是恒定的。 染色體在體細(xì)胞中是成對(duì)的，在性細(xì)胞中總是成單的。通常用2n和n表示，如水稻2n=24，n

40、=12；普通小麥2n=42，n=21。 不同物種染色體數(shù)目差異很大。 動(dòng)物中最少的只有1對(duì)染色體（n=1）（即線蟲(chóng)類的一種馬蛔蟲(chóng)變種；而另有一種蝴蝶（Lysandra）可達(dá)191對(duì)染色體（n=191） 植 物 中 ， 菊 科 植 物 H a p l o p a p p u s graxillis只有2對(duì)，隱花植物中瓶爾小草屬（Ophioglossum）的一些物種含有400-600對(duì)以上的染色體。 但染色體數(shù)目多少與物種的進(jìn)化無(wú)關(guān)。 2、A染色體和B染色體 有些生物的細(xì)胞中除具有正常恒定數(shù)目的染色體以外，還常出現(xiàn)額外的染色體。通常把正常的染色體稱為A染色體；把這種額外染色體 統(tǒng) 稱 為 B 染

41、色 體 ， 也 稱 為 超 數(shù) 染 色 體（supernumerary chromosome）或副染色體（accessory chromosome）。 在640多種植物和170多種動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)B染色體，最常見(jiàn)的有玉米、黑麥、山羊草等。 B染色體較A小，多由異染色質(zhì)組成，不載有基因，但自我復(fù)制并傳給后代。 B染色體一般對(duì)細(xì)胞和個(gè)代生存沒(méi)有影響，但當(dāng)數(shù)量增加一定數(shù)量時(shí)就有一定的影響。玉米超過(guò)5個(gè)即不利于生存。 3、細(xì)菌染色體（原核生物） 原核生物同樣具有染色體，但是裸露的DNA分子（細(xì)菌等）或RNA分子（病毒等）。DNA呈線狀，或環(huán)狀。細(xì)菌只有一個(gè)染色體。 如大腸桿菌的染色體呈環(huán)狀，核苷酸對(duì)為310

42、6，長(zhǎng)度為1 .1mm。（三）植物染色體制片實(shí)驗(yàn) （一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬?shí)驗(yàn)?zāi)康?1掌握染色體制片方法，并自選材料進(jìn)行染色體制片。掌握染色體制片方法，并自選材料進(jìn)行染色體制片。 2學(xué)會(huì)染色體核型分析。學(xué)會(huì)染色體核型分析。 （二）實(shí)驗(yàn)器具及試劑（二）實(shí)驗(yàn)器具及試劑 1器具器具 顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、吸水紙、紗布?jí)K、解剖針、剪刀、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、吸水紙、紗布?jí)K、解剖針、剪刀、解剖刀、玻璃棒、鉛筆、恒溫水浴鍋、溫度計(jì)、冰箱、恒溫干燥解剖刀、玻璃棒、鉛筆、恒溫水浴鍋、溫度計(jì)、冰箱、恒溫干燥箱、顯微攝影系統(tǒng)、照片打印紙箱、顯微攝影系統(tǒng)、照片打印紙 2試劑試劑 酒精、冰醋酸、甲醇、鹽酸

43、、鐵礬、蘇木精（或洋紅、石炭酸品紅）、酒精、冰醋酸、甲醇、鹽酸、鐵礬、蘇木精（或洋紅、石炭酸品紅）、秋水仙堿（或?qū)Χ缺斤柡退芤骸⑶锼蓧A（或?qū)Χ缺斤柡退芤骸?-羥基奎啉、富民隆乳劑）、羥基奎啉、富民隆乳劑）、二甲苯、中性樹(shù)膠、石碳酸、甲醛、山梨醇等。二甲苯、中性樹(shù)膠、石碳酸、甲醛、山梨醇等。 （三）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、壓片法 在生物技術(shù)上，除用切片法觀察細(xì)胞外，還可用壓片法，尤其是觀察細(xì)胞中的染色體數(shù)目，用壓片法最為合適，不僅省事，結(jié)果也比切片法好。 壓片法是將材料置載玻片上，用解剖刀或解剖針撥開(kāi)，加染液一滴，蓋以蓋玻片，施以壓力，使材料破碎，細(xì)胞分散，然后進(jìn)行觀察。壓片法種類很多，下面介紹

44、兩種： （1 1）醋酸）醋酸洋紅法洋紅法 此法多用于制備幼小花藥，觀察花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂的壓片。而對(duì)根此法多用于制備幼小花藥，觀察花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂的壓片。而對(duì)根尖壓片有時(shí)染色不好尖壓片有時(shí)染色不好( (但對(duì)洋蔥根尖染色較好但對(duì)洋蔥根尖染色較好) )。其步驟如下：。其步驟如下： 將花藥或根尖將花藥或根尖( (先切成先切成0.5cm0.5cm長(zhǎng)長(zhǎng)) )，投入卡諾氏固定液中固定，投入卡諾氏固定液中固定1 1刻鐘刻鐘至至l l小時(shí)。小時(shí)。 然后移至然后移至7070酒精中保存。酒精中保存。 取固定保存的材料放入鹽酸酒精解離液取固定保存的材料放入鹽酸酒精解離液(95(95酒精一份，濃鹽酸一份，酒精一份，

45、濃鹽酸一份，將二者混合即成將二者混合即成) )中中5 58 8分鐘?；蛑梅昼??；蛑?N1N鹽酸鹽酸( (取比重取比重1.191.19的鹽酸的鹽酸82.582.5毫升，加水至毫升，加水至10001000毫升即成毫升即成) )中于中于6060的水浴溫度下，處理的水浴溫度下，處理6 68 8分鐘，至透明為止。分鐘，至透明為止。 用清水沖洗干凈解離液。用清水沖洗干凈解離液。 取洗凈的材料，放在載玻片上，用醋酸洋紅染液取洗凈的材料，放在載玻片上，用醋酸洋紅染液( (或醋酸蘇木精染或醋酸蘇木精染液液) )染色染色5 51010分鐘。分鐘。 然后將材料移至另一清潔的載玻片上。重新用染液裝片，覆以然后將材料移

46、至另一清潔的載玻片上。重新用染液裝片，覆以蓋玻片，以鉛筆的橡皮頭端輕輕壓蓋玻片，使材料呈現(xiàn)分散的薄蓋玻片，以鉛筆的橡皮頭端輕輕壓蓋玻片，使材料呈現(xiàn)分散的薄層，置鏡下觀察。層，置鏡下觀察。 （2 2）鐵礬）鐵礬蘇木精法蘇木精法 此法一般用于細(xì)胞有絲分裂中的染色體計(jì)數(shù)，由于染色體被染成此法一般用于細(xì)胞有絲分裂中的染色體計(jì)數(shù)，由于染色體被染成紫蘭黑色，用于顯微照相，效果較好。（由于各種植物有自己的特紫蘭黑色，用于顯微照相，效果較好。（由于各種植物有自己的特殊性，因此，取材的時(shí)間、取材的部位、預(yù)處理的時(shí)間、固定的時(shí)殊性，因此，取材的時(shí)間、取材的部位、預(yù)處理的時(shí)間、固定的時(shí)問(wèn)、水解的時(shí)間、染色的時(shí)間等，

47、都有可能不同。在此只作了大致問(wèn)、水解的時(shí)間、染色的時(shí)間等，都有可能不同。在此只作了大致的介紹，具體材料還需作預(yù)備實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索。另外還要注意，各次的介紹，具體材料還需作預(yù)備實(shí)驗(yàn)進(jìn)行摸索。另外還要注意，各次水洗一定要洗干凈沾在材料上的藥液，以免影響下一個(gè)步驟的結(jié)水洗一定要洗干凈沾在材料上的藥液，以免影響下一個(gè)步驟的結(jié)果。）果。） 染色步驟如下染色步驟如下( (以蠶豆根尖作材料為例以蠶豆根尖作材料為例) )： 取材：將蠶豆種子萌發(fā)。待種子根長(zhǎng)至取材：將蠶豆種子萌發(fā)。待種子根長(zhǎng)至1cm1cm左右，在上午左右，在上午8 8時(shí)時(shí)1111時(shí)之間，切下長(zhǎng)約時(shí)之間，切下長(zhǎng)約0.5cm0.5cm的根尖，進(jìn)行預(yù)處理

48、。的根尖，進(jìn)行預(yù)處理。 預(yù)處理：目的使分裂細(xì)胞的染色體縮短和比較分散，便于壓片觀預(yù)處理：目的使分裂細(xì)胞的染色體縮短和比較分散，便于壓片觀察。預(yù)處理是在固定以前進(jìn)行，方法是將材料切下放入以下溶液：察。預(yù)處理是在固定以前進(jìn)行，方法是將材料切下放入以下溶液： 0.050.050.20.2秋水仙堿水溶液中處理秋水仙堿水溶液中處理2 25 5小時(shí)；或：對(duì)二氯苯飽和小時(shí)；或：對(duì)二氯苯飽和水溶液中處理水溶液中處理3-53-5小時(shí)；或：小時(shí)；或：8-8-羥基奎啉羥基奎啉(0.004(0.0040.0050.005) )，處理，處理2 21212小時(shí)；或：富民隆乳劑小時(shí)；或：富民隆乳劑(0.01(0.01) )

49、，處理，處理24244848小時(shí)；或：在小時(shí)；或：在0 033下冷凍處理下冷凍處理2424小時(shí)。小時(shí)。 固定：通常用固定：通常用9595酒精酒精冰醋酸冰醋酸(3(3：1)1)固定液固定固定液固定1 12424小時(shí)。固小時(shí)。固定后換入定后換入7070酒精中保存。一般可保存酒精中保存。一般可保存1 12 2星期，如放入冰箱中星期，如放入冰箱中(3(38)8)則可保存數(shù)月。則可保存數(shù)月。 離析：將保存在離析：將保存在7070酒精中的根尖，用刀縱切成兩半，換入蒸餾酒精中的根尖，用刀縱切成兩半，換入蒸餾水，然后移入水，然后移入1N1N鹽酸中，在鹽酸中，在6060的水浴中離析的水浴中離析10101515分

50、鐘。分鐘。 水洗：離析后必須用水洗凈殘留鹽酸，否則會(huì)影響染色。水洗：離析后必須用水洗凈殘留鹽酸，否則會(huì)影響染色。 媒染：將根尖移入媒染：將根尖移入4 4鐵礬水溶液中，媒染鐵礬水溶液中，媒染20203030分鐘，然后用水分鐘，然后用水洗凈。洗凈。 染色：放入染色：放入0.50.5蘇木精水溶液染色蘇木精水溶液染色3 35 5小時(shí)，如果需要染色較久小時(shí)，如果需要染色較久( (例如過(guò)夜例如過(guò)夜) )則可將蘇木精溶液濃度稀釋。則可將蘇木精溶液濃度稀釋。 壓片：用鑷子夾取根尖一段，放在載玻片上，滴上一小滴醋酸，壓片：用鑷子夾取根尖一段，放在載玻片上，滴上一小滴醋酸，迅速搗碎根尖，蓋上蓋玻片，用鉛筆的橡皮頭

51、輕壓，使材料分散迅速搗碎根尖，蓋上蓋玻片，用鉛筆的橡皮頭輕壓，使材料分散成一薄層。成一薄層。 鏡檢：將材料壓好后，放置顯微鏡下觀察。鏡檢：將材料壓好后，放置顯微鏡下觀察。 2 2、永久制片法：也可按以下步驟制成永久制片：、永久制片法：也可按以下步驟制成永久制片： 若要作永久保存，可將玻片放在電冰箱中冷凍，結(jié)了冰霜后便可若要作永久保存，可將玻片放在電冰箱中冷凍，結(jié)了冰霜后便可揭下蓋玻片，然后將沾有材料的玻片分別與另外干凈的蓋玻片和載揭下蓋玻片，然后將沾有材料的玻片分別與另外干凈的蓋玻片和載玻片進(jìn)行封片處理，制作永久玻片。玻片進(jìn)行封片處理，制作永久玻片。(1)(1) 將壓片直接倒放在盛有將壓片直接