醫(yī)院免疫室標(biāo)準(zhǔn)化操作程序免疫室內(nèi)質(zhì)量控制操作指南(ELISA)人民醫(yī)院檢驗科免疫SOP人民醫(yī)院質(zhì)量管理體系課件

1、成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY GL-01版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容 免疫室內(nèi)質(zhì)量控制操作指南（ELISA）生效日期：20120101第 5 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples Hospital 免疫室內(nèi)質(zhì)量控制操作指南（ELISA）1 目的對免疫室內(nèi)部的檢驗程序進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。2 適用范圍臨床免疫實驗室3 職責(zé)檢驗科主任負(fù)責(zé)組織人員制定質(zhì)量控制程序，免疫室組長負(fù)責(zé)組織人員具體實施。4 室內(nèi)質(zhì)量控制管理程序室內(nèi)質(zhì)量控制是由實驗室工作人員采用一系列統(tǒng)計學(xué)的方法，連續(xù)評價本實驗室測定工作

2、的可靠程度，判斷檢驗結(jié)果是否可發(fā)出的整個過程。室內(nèi)質(zhì)量控制是實驗室質(zhì)量控制保證體系中的基本要求之一。4.1 開展室內(nèi)質(zhì)量控制前的準(zhǔn)備工作4.1.1 人員實驗室專業(yè)技術(shù)人員須具有相應(yīng)的專業(yè)學(xué)歷，并取得相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格。資質(zhì)、經(jīng)歷和能力必須能夠滿足相應(yīng)崗位的要求。檢驗人員要加強專業(yè)繼續(xù)教育，適應(yīng)專業(yè)發(fā)展需求。4.1.2 項目及方法的選擇和評價檢驗項目及方法的選擇，應(yīng)能滿足臨床工作需要，須符合在衛(wèi)生行政部門核準(zhǔn)登記的醫(yī)學(xué)檢驗診療科目，并應(yīng)按照衛(wèi)生部規(guī)定的檢驗項目及方法開展工作。目前要求選擇的方法要符合衛(wèi)生部全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）和/或經(jīng)國家批準(zhǔn)注冊的廠家檢驗方法及程序。進(jìn)一步應(yīng)建立

3、檢驗方法的選擇和評審等程序，規(guī)范相關(guān)工作。4.1.3 儀器設(shè)備儀器要按照儀器操作規(guī)程定期檢查并經(jīng)常維護(hù)和保養(yǎng)，使儀器設(shè)備處于最佳狀態(tài)下運轉(zhuǎn)。對測定臨床樣本的各類儀器要按一定的要求進(jìn)行校對，校準(zhǔn)是要選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)品，如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)能溯源到參考方法或參考物質(zhì)。4.1.4 質(zhì)控品的選擇質(zhì)控品是保證質(zhì)控工作的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。根據(jù)物理性狀可有凍干質(zhì)控品，液體質(zhì)控品，混合血清等；根據(jù)有無測定值可分為有定值質(zhì)控品和非定值質(zhì)控品。實驗室可根據(jù)情況選用以上任何一種質(zhì)控品作為室內(nèi)質(zhì)控品。作為較理想的質(zhì)控品至少應(yīng)具備以下一些特征：人血清基質(zhì)，分布均勻；無傳染性；添加劑和調(diào)制物數(shù)量少；瓶間變異??；凍干品其復(fù)溶后穩(wěn)定

4、，28時24小時，-20不少于20天，某些不穩(wěn)定成分在復(fù)溶后前4小時的變異小于2%；到實驗室后應(yīng)有1年以上的原載效期。全血質(zhì)控品28儲存，開瓶后一般可使用510天。在使用過程中要注意供貨商的說明，對質(zhì)控品的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)密觀察，不能使用質(zhì)量發(fā)生重大變化的質(zhì)控品。4.2 室內(nèi)質(zhì)量控制的方法一般來說，免疫室應(yīng)將質(zhì)控品與患者標(biāo)本同時測定，并將質(zhì)控結(jié)果標(biāo)在質(zhì)控圖上，然后觀察質(zhì)控結(jié)果是否超過質(zhì)控限，從而判斷該批病人的檢測結(jié)果是否失控。目前，國內(nèi)最常用的是Levey-Jennings質(zhì)控圖，此圖的優(yōu)點是可以從兩個角度觀察誤差，即觀察批內(nèi)誤差和批間誤差。4.2.1 設(shè)定靶值在開始室內(nèi)質(zhì)量控制時，首先應(yīng)設(shè)定質(zhì)控品

5、的靶值。實驗室應(yīng)對新批號質(zhì)控品的各個測定項目自行確定靶值。靶值必須在實驗室內(nèi)使用自己現(xiàn)行的測定方法進(jìn)行測定。（1） 先連續(xù)測定同一批的質(zhì)控品20天，根據(jù)獲得的20次質(zhì)控測定結(jié)果，計算出平均數(shù)，作為暫定靶值。以此暫定靶值作為下一個月室內(nèi)質(zhì)控圖的靶值進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。1個月結(jié)束后，將該月的在控結(jié)果與前20個質(zhì)控測定結(jié)果匯聚在一起，計算累積平均數(shù)（第一個月），以此累積的平均數(shù)作為下1個月質(zhì)控圖的靶值。重復(fù)上述操作過程，連續(xù)3-5個月。（2） 常用靶值的設(shè)定：以最初20個數(shù)據(jù)和35個月在控數(shù)據(jù)匯集的所有數(shù)據(jù)計算的累積平均數(shù)作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常用靶值，并以此作為以后室內(nèi)質(zhì)控圖的平均數(shù)。4.2.2 設(shè)定控制

6、限 對新批號質(zhì)控品應(yīng)確定控制限，控制限通常以標(biāo)準(zhǔn)差倍數(shù)表示。（1） 暫定標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定 根據(jù)20次質(zhì)控測定結(jié)果，計算出標(biāo)準(zhǔn)差，并作為暫定標(biāo)準(zhǔn)差。以此暫定標(biāo)準(zhǔn)差作為下1個月室內(nèi)質(zhì)控圖的標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。1個月結(jié)束后，將該月的在控結(jié)果與前20個質(zhì)控測定結(jié)果匯集在一起，計算累積標(biāo)準(zhǔn)差（第一個月），以此累積的平均數(shù)作為下1個月質(zhì)控圖的標(biāo)準(zhǔn)差。重復(fù)上述操作過程，連續(xù)35個月。（2） 常用標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定 以最初20次質(zhì)控測定結(jié)果和35個月在控結(jié)果匯集的所有數(shù)據(jù)計算的累積標(biāo)準(zhǔn)差作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常用標(biāo)準(zhǔn)差，并以此作為以后室內(nèi)質(zhì)控圖的標(biāo)準(zhǔn)差。（3） 確定控制限 在求出均值和標(biāo)準(zhǔn)差后，再確定質(zhì)控上限（UCL）及

7、質(zhì)控下限（LCL）。質(zhì)控上限值x+3s; 質(zhì)控下限為x-3s?？刂葡逓樾袆咏缦?，若超出此線，極可能為誤差，應(yīng)采取積極的行動，以求改善。另將x2s定為上下警告線，若超出此線，則極有誤差可能。雖不必采取行動，但需要密切注意今后的趨勢變化。4.2.3 繪制質(zhì)控圖及記錄質(zhì)控結(jié)果 根據(jù)質(zhì)控品的靶值和控制限，繪制Levey-Jennings質(zhì)控圖。以Y軸為質(zhì)控品的測定值，X軸為測定次數(shù)N。在Levey-Jennings質(zhì)控圖上Y軸刻度上一般提供x3s 的濃度范圍。X軸刻度通常表示為時間，常為1個月。各水平線相應(yīng)為均值和質(zhì)控限。圖中其質(zhì)控限為x3s。 質(zhì)控記錄是重要的質(zhì)量文件，也是重要的法律證據(jù)。記錄需完整

8、，應(yīng)包括：檢測項目名稱；檢測方法；儀器名稱、型號；試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品來源及批號；均值、標(biāo)準(zhǔn)值、變異系數(shù)；每天記錄質(zhì)控結(jié)果、質(zhì)控日期，并有質(zhì)控操作人員簽名；如有失控，應(yīng)填寫失控報告，記錄失控數(shù)據(jù)、失控判斷規(guī)則、失控原因、處理措施、處理后的效果；每月應(yīng)有總結(jié)，質(zhì)量負(fù)責(zé)人審核并簽名；同時或另行記錄校準(zhǔn)詳細(xì)情況及儀器相關(guān)情況。4.2.4 失控情況處理及原因分析由免疫室質(zhì)控主管審核質(zhì)控結(jié)果，按統(tǒng)計學(xué)規(guī)律判斷測定結(jié)果是否在控制范圍內(nèi)。失控信號的出現(xiàn)受多種原因的影響，這些因素包括操作上的失誤，試劑，校準(zhǔn)物，質(zhì)控品的失敗，儀器維修不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則，控制限范圍不恰當(dāng)?shù)取ＪЭ匦盘栆坏┏霈F(xiàn)就意味與測定質(zhì)控品

9、相關(guān)的那批病人標(biāo)本報告可能作廢。此時，首先要查導(dǎo)致的原因，然后再隨機挑選出一定比例的（如5%或10%）的患者標(biāo)本進(jìn)行重新測定，最后根據(jù)既定標(biāo)準(zhǔn)判斷先前測定結(jié)果是否可靠，對失控做出恰當(dāng)?shù)呐袛?。常?guī)檢驗工作中，必須堅持室內(nèi)質(zhì)量控制流程。質(zhì)控值在控，患者標(biāo)本可以檢測和報告；質(zhì)控值失控時，須停止患者標(biāo)本的檢測，據(jù)發(fā)檢驗報告，然后分析尋找失控原因，著手解決問題。當(dāng)?shù)玫绞Э匦盘枙r，可以從以下步驟尋找原因:(1) 檢查質(zhì)控品：立即重測同一質(zhì)控品：用以查明的質(zhì)控原因，另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差，則重測的結(jié)果應(yīng)在允許范圍內(nèi)（在控）。如果重測結(jié)果仍不在允許范圍，則新開一瓶質(zhì)控品，重測質(zhì)控項目：如

10、新開的質(zhì)控血清結(jié)果正常，那么原來那瓶質(zhì)控血清可能過期或室溫放置時間過長而變質(zhì)，或者被污染。(2) 檢查試劑：是否更換過試劑，核對試劑瓶、試劑批號、試劑配制，試劑外觀是否正常，如有問題，更換試劑，重測失控項目。(3) 檢查儀器：如果重測結(jié)果仍不在允許范圍，則進(jìn)行儀器維護(hù)，重測質(zhì)控項目：檢查儀器狀態(tài)，查明光源是否需要更換，濾光片是否需要清潔或更換，對儀器進(jìn)行清洗等維護(hù)。(4) 檢查環(huán)境、操作等測定條件是否有變動或異常，排除后重測失控項目。4.2.5 室內(nèi)質(zhì)量控制數(shù)據(jù)的管理月質(zhì)控數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理（1） 當(dāng)月所有項目原始數(shù)據(jù)和原始記錄；（2） 當(dāng)月所有項目的質(zhì)控圖；（3） 所有質(zhì)控的計算數(shù)據(jù)（包括平均數(shù)

11、、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)及累積的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)）；（4） 當(dāng)月的失控報告分析（包括失控規(guī)則判斷，失控原因，采取的糾正措施等）；（5） 當(dāng)月的質(zhì)控工作總結(jié)。5 參考文獻(xiàn) 5.1 醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法5.2 從玉隆，馮仁豐，陳曉東主編.臨床實驗室管理學(xué).中國醫(yī)藥科技出版社.2004,北京成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY GL-02版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容臨床免疫實驗室生物安全守則生效日期：20120101第 8 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples Hospital 臨床免疫實驗室生物安全守則1 目的

12、 為了保護(hù)工作人員自身的安全，防止傳染病感染，每個工作人員必須遵守實驗室安全守則，按章行事。2 總的守則2.1 在有血液和體液的情況下，要防止刺傷、切割傷和擦傷，并保護(hù)已有的傷口、皮膚疾患，結(jié)膜和粘膜的表面。2.2 采取防止人員和衣物污染的簡單保護(hù)措施，并保持良好的基本衛(wèi)生習(xí)慣。2.3 用控制和消毒的辦法處理血液和體液對表面的污染。2.4 安全處理污物和廢物。3 操作具體措施3.1 在操作所有傳染性物質(zhì)或在有可能接觸血液或含有血液的體液的地方，都要求戴手套。3.2 不要用戴手套的手摸暴露的眼睛、鼻子和皮膚。3.3 不要戴著手套離開工作場所或在實驗室周圍走動。3.4 在受到任何污染和結(jié)束工作后，

13、要立即用肥皂和水洗手。3.5 在實驗室內(nèi)要穿工作服，當(dāng)離開實驗室或到其他地方時，要脫下工作服，將其留在實驗室內(nèi)。3.6 在接觸HIV材料的工作正在進(jìn)行的時候，應(yīng)關(guān)閉實驗室的門，門上應(yīng)有“生物危害，請勿進(jìn)入”的的標(biāo)志。3.7 實驗室應(yīng)保持清潔、整齊、不要放無關(guān)的材料和設(shè)備。3.8 當(dāng)一個試驗程序結(jié)束后，要用有效的多用途消毒劑，對工作臺面進(jìn)行消毒， 3.9 盡量避免使用針頭、針管等銳器，使用過的針頭、針管等銳器應(yīng)放在不會被刺穿的容 器內(nèi)，用過的針頭不要重新裝上。3.11 禁止口吸任何材料。3.12 技術(shù)步驟操作時減少產(chǎn)生氣溶膠、液滴、外溢和外濺至最小程度。3.13 實驗室內(nèi)不得飲用水，進(jìn)食和吸煙、

14、使用化妝品及儲存食品和個人用品。4 溢灑和和接觸污染物事故的處理4.1 溢灑物質(zhì)首先蓋上紙巾或其他吸收性材料。在溢灑地區(qū)和周圍傾倒消毒劑，然后傾倒在吸收性材料上，歷時10分鐘。再清洗干凈。全部過程應(yīng)戴手套操作，戴有手套的手應(yīng)避免直接與已經(jīng)消毒的溢灑物質(zhì)接觸。4.2 針頭或其他針刺傷口、切口和皮膚被溢灑、潑出的標(biāo)本物質(zhì)污染后，應(yīng)徹底用肥皂和洗凈。應(yīng)擠壓傷口使出血。4.3 應(yīng)把一切溢灑事故以及有可能接觸到物質(zhì)向?qū)嶒炇翌I(lǐng)導(dǎo)匯報，并做相應(yīng)的事故記錄，并給予合適的醫(yī)學(xué)評價、監(jiān)測、處理。5 污染材料和垃圾的處理5.1 反復(fù)使用的器械，必須放在工作地點防刺穿的金屬或塑料容器內(nèi)，這些器械在清洗和分裝前先消毒劑

15、浸泡1小時以上，然后煮沸法消毒，在消毒和清潔時必須戴手套。 5.2 懷疑污染了工作服或其他保護(hù)服，應(yīng)放在實驗室專一的容器內(nèi)，用高壓蒸汽或其他消毒方法消毒并清洗。5.3 一次性使用的器械，應(yīng)放在工作地點不會被刺穿的容器內(nèi)，所有的污染物質(zhì)最好都能在工作區(qū)內(nèi)消毒，也可將污染物放在容器內(nèi)蓋好，從工作區(qū)運至中心處理地點處理。5.4 對儀器污水的處理：先將污水放在統(tǒng)一容器內(nèi)，加消毒劑，1小時后倒入廢液槽。6 對實驗室工作人員的衛(wèi)生和醫(yī)學(xué)監(jiān)測6.1 在開始從事這項工作前，進(jìn)行臨床檢查是有益的。6.2 如實驗室工作人員同血液或病毒污染材料有非腸道或粘膜接觸，對原材料必須進(jìn)行鑒定，有條件時要作病毒及抗體試驗，如

16、原材料呈HIV抗體或抗原陽性，必須報告，并作出醫(yī)學(xué)評價。工作人員應(yīng)在接觸后6周復(fù)查，并在以后定期復(fù)查（接觸后12周和6個月）。6.3 實驗室HIV試驗結(jié)果應(yīng)保密。7 現(xiàn)用消毒劑7.1 次氯酸鈉（即10家用漂白粉溶劑）或75乙醇。7.2 “慶衛(wèi)”牌消毒劑，其應(yīng)用：消毒對象配比方法有效氯濃度（mg/L）消毒時間（分鐘）使用方法受病毒污染的物品10克水加1000ml120030-60浸泡注射器、玻璃器皿等10克水加1200ml100030工作人員工作服等10克水加5000ml24015浸泡或擦洗衛(wèi)生間、地板10克水加2400ml50030浸泡或擦洗物體表面消毒10克水加4000ml30010浸泡或擦

17、洗8 注意事項8.1外用消毒劑，不可內(nèi)服。8.2本品有腐蝕和有漂白作用，慎用于金屬物和有色織物消毒。8.3配制時應(yīng)戴口罩、手套，避免藥液直接接觸皮膚粘膜，藥液宜即配即用。成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY GL-03版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容免疫室檢驗質(zhì)量管理總則生效日期：20120101第 12 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples Hospital 免疫室檢驗質(zhì)量管理總則1 目的對免疫室內(nèi)部所有的檢驗程序質(zhì)量總體管理，以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。2 適用范圍臨床免疫實驗室3 職責(zé)檢驗科主任負(fù)責(zé)組織人員制定質(zhì)量管

18、理總則，免疫室組長負(fù)責(zé)組織人員具體實施。4 要求 臨床免疫血清學(xué)檢驗專業(yè)人員必須熟悉本專業(yè)質(zhì)控的理論和方法。操作人員須經(jīng)過相關(guān)專業(yè)知識培訓(xùn)，方能進(jìn)入免疫室進(jìn)行操作。免疫室應(yīng)建立健全免疫血清檢驗的科學(xué)管理制度。做到臨床免疫血清檢驗的各項操作規(guī)范化和程序化，嚴(yán)格把好試劑質(zhì)量關(guān)，杜絕使用質(zhì)量差和過期的試劑。有的試劑如HBsAg、HCV、HIV等必須有中國生物制品檢定所的“批批檢”方能使用。5 質(zhì)量控制認(rèn)真做好實驗室常規(guī)檢測的質(zhì)量控制，質(zhì)量控制之目的是要保證每次實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。要做到這一點需要多方面的考慮：5.1樣本收集： 樣品進(jìn)入實驗室之前，應(yīng)注意樣本的采集、保存、處置等環(huán)節(jié)：a）采集時，應(yīng)注意防

19、止溶血，防止污染，加強標(biāo)本收集的驗收工作。b）運輸時，應(yīng)注意將樣品放置于實驗室固定樣品區(qū)。樣品放置，應(yīng)注意避開陽光直接照射，不要在室內(nèi)暴露過久。5.2 標(biāo)本要求5.2.1抽無抗凝血或肝素-鋰抗凝血3-5ml。5.2.2抽血時間無特殊要求。5.2.3 檢測標(biāo)本應(yīng)無嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重脂血。不合格標(biāo)本應(yīng)退回，并做好相應(yīng)記錄。5.2.4當(dāng)天未檢測標(biāo)本應(yīng)放置2-8保存。超過3天未檢測標(biāo)本應(yīng)離心（1500-3000轉(zhuǎn)/分）分離血清，放置-20以下環(huán)境保存，應(yīng)在7天以內(nèi)檢測完畢。5.2.5 檢測完的標(biāo)本放置2-8保存20天，以備復(fù)檢。5.2.6最終標(biāo)本應(yīng)按照傳染物處理方法處理。5.3準(zhǔn)備工作： 包被板使用時，從

20、冰箱中取出應(yīng)在室溫放置20min恒溫之后，再打開密封真空包裝，以防由于微孔板過冷而吸收室內(nèi)水氣，造成包被物“潮解”，而影響檢驗質(zhì)量。尤其是上次未用完的微孔板，更應(yīng)密封包裝好，存入冰箱（4）。取出時，更應(yīng)注意防“潮解”的問題。5.3.1加樣： 加樣本時要注意一個樣本使用一個加樣頭。注意加樣頭的消毒與回收。有條件時應(yīng)使用一次性加樣頭。5.3.2酶標(biāo)抗體： 酶標(biāo)抗體要防止反復(fù)凍融，一次用不完的應(yīng)及時放入4冰箱保存。酶標(biāo)抗體的加樣頭，應(yīng)用新的加樣頭，準(zhǔn)確加樣，防止加樣過程中，加樣頭與已加入病人血清的微孔板壁接觸，造成交叉污染（尤其是在一步法操作中，更應(yīng)注意）。5.3.3洗滌： 洗滌是ELISA操作規(guī)程

21、中重要的環(huán)節(jié)。清洗“干凈”，是保證質(zhì)量的關(guān)鍵。實驗室采用機器洗滌，這是必要的。而儀器設(shè)備的穩(wěn)定性是檢測工作的條件。改進(jìn)實驗室設(shè)備，減輕操作人員工作，防止交叉污染，保證結(jié)果一致性，這是洗板機帶來的一系列好處。但要時常注意洗板機的工作狀態(tài)及堵針情況，及時糾正機器故障，防止假陽性或假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。5.3.4溫育： 溫育中，注意溫箱的溫度是否符合試劑盒的要求。微孔板放入溫箱或水浴箱中，應(yīng)保證微孔板各孔的均一受熱。因此，在水浴箱中溫度在36-38，微孔板不可架在試管架上，微孔板不可疊放于溫箱內(nèi)。5.3.5顯色： ELISA法檢測常用的酶是辣根過氧化物酶（HRP），它的底物是過氧化氫，而供氫體有兩種：鄰

22、苯二胺（OPD）和四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。酶的底物在酶的作用下，將供氫體氧化，供氫體氧化后的產(chǎn)物會顯色。故底物使用中，應(yīng)注意先觀察底物有無顏色，目的就是防止過氧化氫氧化，影響顯色結(jié)果，底物有顏色應(yīng)棄用。5.3.6計算： ELISA法檢測不能用肉眼判定結(jié)果，應(yīng)采用酶標(biāo)儀讀數(shù)，嚴(yán)格按照試劑盒提供的計算公式判定結(jié)果。重視檢驗結(jié)果的計算，是保證數(shù)值正確的前提。不按試劑盒說明書計算檢驗結(jié)果或僅用臨界值血清判斷檢測結(jié)果是錯誤的。6.試劑盒的質(zhì)檢： 采用臨界值血清作試劑盒質(zhì)檢是十分簡便可行的事。如用HBsAg1ng/ml的質(zhì)控血清可以直接顯示試劑盒靈敏度度是否達(dá)到1ng/ml。用HBSAg 2ng/ml的質(zhì)

23、控血清檢測時，其S/CO值應(yīng)大于1.5。表明試劑盒合格。每塊板均放置臨界值血清孔，是對每塊板的質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測的最簡便方式。7 結(jié)果報告： 采用酶標(biāo)儀，科學(xué)地報出結(jié)果，所有的原始記錄應(yīng)保存兩年。8 特殊檢查的質(zhì)量控制（HIV抗體檢測）HIV檢測是一項嚴(yán)肅、認(rèn)真、技術(shù)性極強的工作。加強質(zhì)量控制殊為重要。謹(jǐn)記我們僅是HIV初篩實驗室，責(zé)任僅限于對規(guī)定的受檢對象進(jìn)行初篩。工作遇有陽性結(jié)果，只視為可疑，應(yīng)及時送標(biāo)本（重新采集的受檢可疑陽性對象的血液）至有關(guān)確認(rèn)實驗室加以確認(rèn)。我們無權(quán)向送檢單位宣布陽性結(jié)論，更不能告知受檢者本人其陽性結(jié)果。任何一個環(huán)節(jié)的差錯或技術(shù)誤差造成漏檢或假陽性報告，將會對受檢者及其家

24、屬產(chǎn)生很大的影響，甚至引起整個單位或社區(qū)的混亂。因此在進(jìn)行HIV檢測時，除嚴(yán)格遵循一般ELISA方法質(zhì)量控制操作規(guī)程外，有兩點尤其要注意。首先是操作人員的相對穩(wěn)定。操作人員的熟練程度是檢測工作的關(guān)鍵。所有儀器和試劑均是靠人去操作的，如果對其熟練程度不夠，將直接影響到實驗的精確性。故所有新參加的人員均必須事先經(jīng)過省級以上的培訓(xùn)學(xué)習(xí)方能上崗。其次是診斷試劑的質(zhì)量，試劑的質(zhì)量是檢測工作的保證。初篩檢測試劑必須是HIV-1/2混合型，經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)或注冊的，并在有效期內(nèi)使用。所有HIV檢測試劑，均應(yīng)貼有國家藥品生物制品檢定所的防偽標(biāo)記。遇可疑陽性標(biāo)本需用兩種以上不同試劑進(jìn)行復(fù)核。HIV檢測時應(yīng)隨時觀察試

25、劑質(zhì)量，以便及時反饋。也可用其它同類試劑加以比較。9 室間質(zhì)評 在開展好室內(nèi)質(zhì)控的基礎(chǔ)上，必須參加省臨檢中心或衛(wèi)生部臨檢中心組織的室間質(zhì)評活動，以便更好地了解自己的質(zhì)量管理水平。10 總結(jié) 血清免疫學(xué)檢測的質(zhì)量管理工作要每年進(jìn)行總結(jié)。質(zhì)控工作的水平，要逐級接受監(jiān)督，檢查。對質(zhì)控不合格者，應(yīng)及時查找原因，并報告科主任，吸取經(jīng)驗教訓(xùn)，限期改正提高。成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY GL-04版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容免疫室內(nèi)部質(zhì)量控制手冊生效日期：20120101第 20 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples H

26、ospital 免疫室內(nèi)部質(zhì)量控制手冊（ELISA）1 目的對免疫室內(nèi)部的檢驗程序進(jìn)行質(zhì)量控制，監(jiān)視實驗全過程，排除誤差，防止變化，維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀；保證ELISA檢驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠，充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點。2 適用范圍適用于我室開展的所有常規(guī)免疫檢測項目3 職責(zé)檢驗科主任負(fù)責(zé)組織人員制定質(zhì)量控制程序，免疫室組長負(fù)責(zé)組織人員具體實施。4 該SOP變動程序本標(biāo)準(zhǔn)程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)組長、科主任。5 內(nèi)部質(zhì)量控制的具體實施辦法5.1 分析前質(zhì)控5.1.1 人員培訓(xùn)實驗是人操作的，因此檢驗人員需經(jīng)過培訓(xùn)，熟練掌握本專業(yè)如下幾方面的技術(shù)知識：5.1.

27、1.1 檢驗項目的基本原理（ELISA原理）；5.1.1.2 臨床意義；5.1.1.3 熟悉檢測技巧，了解易出現(xiàn)差錯的環(huán)節(jié)及難點；5.1.1.4 熟悉檢測試劑性能（包括試劑盒組成，包被片段及其組成）；5.1.1.5 熟悉檢測儀器的原理及性能；掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識。5.1.1.6 某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門組織的專業(yè)培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。5.1.2 標(biāo)本的采集和保存5.1.2.1 標(biāo)本采集時應(yīng)盡量避免溶血，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本會增加非特異性顯色造成假陽性。5.1.2.2 長菌的標(biāo)本同

28、樣的道理也易產(chǎn)生假陽性，因菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。5.1.2.3 抗凝不完全的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量不用抗凝血尤其是不使用肝素抗凝劑。5.1.2.4 標(biāo)本在冰箱中保存時間過長易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深，一般血清置4冰箱5天內(nèi)完成測試。如需保存一周以上則要-20冰凍保存，凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，溶解時應(yīng)上下顛倒充分混勻，同時避免氣泡。可上下顛倒混合，不要在混勻器上強烈振蕩。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。5.1.2.5 ELISA的靈敏度1ng/ml水平上，標(biāo)本間的污染要盡量避免，尤其不

29、應(yīng)與生化試驗用同一管標(biāo)本。5.1.3 試劑盒選擇衛(wèi)生部規(guī)定乙肝試劑，丙肝試劑，必須使用經(jīng)衛(wèi)生部生物制品檢定所檢定合格，并貼有防偽標(biāo)簽的產(chǎn)品。5.1.4 儀器質(zhì)控為使儀器保持最佳工作狀態(tài)應(yīng)建立維護(hù)和校正儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），詳細(xì)請參見所要控制的儀器包括移液器（加樣槍），水浴箱（溫箱），洗板機和酶標(biāo)儀。5.1.5 室內(nèi)質(zhì)控血清的選擇：5.1.5.1質(zhì)控品是保證質(zhì)控工作的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。室內(nèi)質(zhì)控品用于臨床實驗室日常工作的室內(nèi)質(zhì)控，其定值應(yīng)可溯源至二級標(biāo)準(zhǔn)品。免疫測定對質(zhì)控品要求的前提是，其基質(zhì)應(yīng)為血清，并且還必須是人血清，以避免動物血清中類似成分干擾。5.1.5.2 室內(nèi)質(zhì)控品要求其所含待物的

30、濃度接近試驗或臨床決定性水平。所謂“試驗的決定性水平”是針對定性測定，特指特定試驗的測定下限，亦即特定試劑的陽性判定值（Cutoff值）。使用測定接近試劑盒Cutoff值的室內(nèi)質(zhì)控品，應(yīng)能靈敏地反映常規(guī)測定中的批間變異。而“臨床決定性水平”則是對定量測定而言，即測定物在此濃度時即具有相應(yīng)臨床采取診療措施的要求或具備決定性的臨床診療價值。因此，以接近這種臨床決定性水平的濃度設(shè)置室內(nèi)質(zhì)控品，就能反映該指標(biāo)的測定有效性。5.1.5.3 保持穩(wěn)定（如為凍干品，則復(fù)溶前和復(fù)溶后都應(yīng)穩(wěn)定）。由于免疫測定的室內(nèi)質(zhì)控是一項連續(xù)性的工作，所以要求室內(nèi)質(zhì)控品必須在一定的時間內(nèi)，在28或冰凍條件下保持穩(wěn)定。目前我室

31、使用的為衛(wèi)生部臨床檢驗中心制備的標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)控血清。已購買的質(zhì)控血清，可以在-20保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4保存5天。不宜反復(fù)凍融或自行分裝。目前開展各項檢驗的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按3-6個月用量準(zhǔn)備5.1.5.4 無已知的傳染危險性，對已知的經(jīng)血液傳播的病原體如HIV、HCV和HBV等必須作滅活處理并且靶值或預(yù)期結(jié)果已確定5.2 分析中質(zhì)控 ELISA實驗的結(jié)果受操作影響大，每一步驟對測定結(jié)果都可能會產(chǎn)生較大的影響，測定的精密度是組成測定各步驟變異和的平方根；改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，亦即最容易出現(xiàn)問題的步驟上，如加樣、

32、溫育時間等，應(yīng)對試劑制備、測定方法和儀器操作均制定標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP），但最重要的是在測定中，所有的實驗技術(shù)人員在進(jìn)行相關(guān)測定時，必須嚴(yán)格按相應(yīng)的SOP進(jìn)行操作，除非經(jīng)實際工作證明正在使用的SOP中有不適當(dāng)之處時，才可對SOP按一定程序進(jìn)行修改。5.2.1 實驗中的室內(nèi)質(zhì)量控制程序 室內(nèi)質(zhì)量控制(IQC)就是由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度旨在監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性。并確定當(dāng)批的測定結(jié)果是否可靠，可否發(fā)出檢驗報告。 免疫室內(nèi)質(zhì)控方法除每板試驗使用試劑盒提供的陰性對照和陽性對照作為內(nèi)質(zhì)控外，目前我們使

33、用臨界值血清法并制作質(zhì)控圖，一般仍沿用生化L-J圖進(jìn)行，利用Westgard規(guī)則判定失控，應(yīng)首先做好OCV和RCVK以確定失控標(biāo)準(zhǔn)。臨界值血清做室內(nèi)質(zhì)控血清用于防止弱陽性標(biāo)本的漏檢。對任何一個試驗都應(yīng)確定一個允許的誤差范圍，前提是滿足臨床要求。如允許誤差定得過小，在臨床上不存在任何意義，但為了符合該規(guī)定卻要花費很大人力、物力和時間。相反，如果將允許誤差定得過大，將使監(jiān)測系統(tǒng)察覺不到臨床上要求檢出的誤差，失去質(zhì)控的意義。5.2.1.1 最佳條件下已知值質(zhì)控血清變異（OCV）的測定在本實驗室最佳條件下（包括操作者、試劑、儀器等）檢測質(zhì)控血清20-30次，測得結(jié)果計算，求出該組數(shù)據(jù)的均值和標(biāo)準(zhǔn)差（S

34、D）表示該實驗室的最佳工作質(zhì)量?，F(xiàn)舉例說明HBsAg ELISA法檢測時OCV的測定。使用的質(zhì)控血清為臨界值血清，HBsAg濃度為5 ng/ml。在該實驗室中選擇素質(zhì)最好、操作最熟練的技術(shù)員進(jìn)行認(rèn)真地專門測定，選用最佳的試劑盒，檢測之前，將恒溫、加樣器等認(rèn)真校正、調(diào)校正、調(diào)試，使用新的加樣吸頭等，即在最佳、最理想的條件下進(jìn)行檢測。除質(zhì)控血清外同時測定陰性對照品和陽性對照品。并作雙份測定，得出2個吸光度（A值），求出X。連續(xù)作20次，求出20個X，即X1X20。從這20個數(shù)據(jù)中，求出OCV的X和SD。5.2.1.2 常規(guī)條件下已知值質(zhì)控血清變異（RCVK）的測定。 做常規(guī)檢驗的技術(shù)人員，在常規(guī)檢

35、驗的條件下，將質(zhì)控血清放在常規(guī)檢測樣本中，進(jìn)行20次檢驗，結(jié)果計算同OCV法。一般認(rèn)為RCV的SD在OCV的SD兩倍范圍內(nèi)可以接受。若太大應(yīng)該查找原因，使其向OCV的SD值接近。在改進(jìn)實驗室條件后（例如校正加樣器，糾正洗板機操作，調(diào)正溫育溫度等），重新進(jìn)行RCVK的測定。如果RCVK的SD值更小，說明OCV不是最佳條件下測定的，應(yīng)重新再測OCV。常規(guī)條件下，RCVK肯定要比OCV大。通過質(zhì)控控制各項條件，使RCVK的數(shù)據(jù)盡可能接近OCV值。RCVK的數(shù)據(jù)反映該實驗室日常工作的質(zhì)量，用于作質(zhì)控圖，對室內(nèi)檢驗的結(jié)果進(jìn)行控制，每日檢驗的結(jié)果，報告能否發(fā)出。5.2.1.3 質(zhì)控圖的制作通過以上步驟，可

36、以開始作室內(nèi)質(zhì)控圖，根據(jù)RCVK的X和SD作質(zhì)控框圖。利用質(zhì)控圖可以對每次檢驗的結(jié)果進(jìn)行檢測，當(dāng)沒有更換另一批號試劑盒和另一批號質(zhì)控血清時，該質(zhì)控圖可以連續(xù)作下去。一般來說，免疫室應(yīng)將質(zhì)控品與患者標(biāo)本同時測定，并將質(zhì)控結(jié)果標(biāo)在時空圖上，然后觀察結(jié)果是否超過質(zhì)控限，從而判斷該批病人的檢測結(jié)果是否失控。5.2.1.3.1 設(shè)定靶值在開始室內(nèi)質(zhì)控圖的制作時，首先應(yīng)設(shè)定質(zhì)控品的靶值。實驗室應(yīng)對新批號質(zhì)控品的各個測定項目自行確定靶值。靶值必須在實驗室內(nèi)使用自己現(xiàn)行的測定方法進(jìn)行確定。5.2.1.3.1.1 先連續(xù)測定同一批的質(zhì)控品20天，根據(jù)獲得的20次質(zhì)控測定結(jié)果，計算出平均數(shù)，作為暫定靶值。以此暫定

37、靶值作為下一個月室內(nèi)質(zhì)控圖的靶值進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。1個月結(jié)束后，將該月的在控結(jié)果與前20個質(zhì)控測定結(jié)果會聚在一起，計算累積平均數(shù)（第一個月），以此累積的平均數(shù)作為下1個月質(zhì)控圖的靶值。重復(fù)上述操作過程，連續(xù)3-5個月。5.2.1.3.1.2 常用靶值的設(shè)定：以最初20個數(shù)據(jù)和35個月在控數(shù)據(jù)會聚的所有數(shù)據(jù)計算的累積平均數(shù)作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常用靶值，并以此作為以后室內(nèi)質(zhì)控圖的平均數(shù)。5.2.1.3.2設(shè)定控制限 對新批號質(zhì)控品應(yīng)確定控制限，控制限通常以標(biāo)準(zhǔn)差倍數(shù)表示。5.2.1.3.2.1暫定標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定 以最初20次質(zhì)控測定結(jié)果，計算出標(biāo)準(zhǔn)差，并作為暫定標(biāo)準(zhǔn)差。以此暫定標(biāo)準(zhǔn)差作為下1個月室內(nèi)質(zhì)控

38、圖的標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。1個月結(jié)束后，將該月的在控結(jié)果與前20個質(zhì)控測定結(jié)果匯集在一起，計算累積標(biāo)準(zhǔn)差（第一個月），以此累積的平均數(shù)作為下1個月質(zhì)控圖的標(biāo)準(zhǔn)差。重復(fù)上述操作過程，連續(xù)35個月。5.2.1.3.2.2常用標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定 以最初20次質(zhì)控測定結(jié)果和35個月在控結(jié)果匯集的所有數(shù)據(jù)計算的累積標(biāo)準(zhǔn)差作為質(zhì)控品有效期內(nèi)的常用標(biāo)準(zhǔn)差，并以此作為以后室內(nèi)質(zhì)控圖的標(biāo)準(zhǔn)差。5.2.1.3.2.3確定控制限 在求出均值和標(biāo)準(zhǔn)差后，再確定質(zhì)控上限（UCL）及質(zhì)控下限（LCL）。質(zhì)控上限值x+3s; 質(zhì)控下限為x-3s?？刂葡逓樾袆咏缦?，若超出此線，極可能為誤差，應(yīng)采取積極的行動，以求改善。另將x2s定為

39、上下警告線，若超出此線，則極有誤差可能。雖不必采取行動，但需要密切注意今后的趨勢變化。5.2.1.3.3繪制質(zhì)控圖 根據(jù)質(zhì)控品的靶值和控制限，繪制Levey-Jennings質(zhì)控圖。以Y軸為質(zhì)控品的測定值，X軸為測定次數(shù)N。在Levey-Jennings質(zhì)控圖上Y軸刻度上一般提供x3s 的濃度范圍。X軸刻度通常表示為時間，常為1個月。各水平線相應(yīng)為均值和質(zhì)控限。圖中其失控定為x3s。目前我室仍依據(jù)Westgard規(guī)則判定失控。5.2.1.4 質(zhì)控結(jié)果的記錄 質(zhì)控記錄是重要的質(zhì)量文件，也是重要的法律證據(jù)。記錄需完整5.2.1.4.1 所有實驗的原始資料均應(yīng)存檔；所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊；原始登

40、記表應(yīng)記錄試劑來源、批號；質(zhì)控血清的來源及測定值并注明是否在控；簽上實驗者姓名及審核者姓名。5.2.1.4.2 如有失控，應(yīng)填寫失控報告、記錄失控數(shù)據(jù)、失控判斷規(guī)則、失控原因、處理措施、處理后的效果；5.2.1.4.3 每月應(yīng)有總結(jié)，質(zhì)量負(fù)責(zé)人審核并簽名5.2.1.4.4 如試驗結(jié)果對臨床診斷有決定意義，其樣本應(yīng)保留，至少與病歷保存期一致5.2.1.4.5 同時或另行記錄校準(zhǔn)詳細(xì)情況及儀器相關(guān)情況。5.2.1.5 失控情況處理及原因分析由免疫室質(zhì)控主管審核質(zhì)控結(jié)果，如陰性對照顯色，陽性對照不顯色立即判定失控，當(dāng)陰性對照，陽性對照在控時，進(jìn)一步分析臨界值血清的質(zhì)控結(jié)果，按照Westgard質(zhì)控規(guī)

41、則判斷測定結(jié)果是否在控制范圍。失控信號的出現(xiàn)受多種原因的影響，這些因素包括操作上的失誤，試劑，校準(zhǔn)物，質(zhì)控品的失敗，儀器維修不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則，控制限范圍不恰當(dāng)?shù)?。失控信號一旦出現(xiàn)就意味與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批病人標(biāo)本報告可能作廢。此時，首先要查導(dǎo)致的原因，然后再隨機挑選出一定比例的（如5%或10%）的患者標(biāo)本進(jìn)行重新測定，最后根據(jù)既定標(biāo)準(zhǔn)判斷先前測定結(jié)果是否可靠，對失控做出恰當(dāng)?shù)呐袛?。常?guī)檢驗工作中，必須堅持室內(nèi)質(zhì)量控制流程。質(zhì)控值在控，患者標(biāo)本可以檢測和報告；質(zhì)控值失控時，須停止患者標(biāo)本的檢測，據(jù)發(fā)檢驗報告，然后分析尋找失控原因，著手解決問題。當(dāng)?shù)玫绞Э匦盘枙r，可以從以下步驟尋找原因:5

42、.2.1.5.1檢查質(zhì)控品：立即重測同一質(zhì)控品：用以查明的質(zhì)控原因，另外，這一步還可以查出偶然誤差，如有偶然誤差，則重測的結(jié)果應(yīng)在允許范圍內(nèi)（在控）。如果重測結(jié)果仍不在允許范圍，則新開一瓶質(zhì)控品，重測質(zhì)控項目：如新開的質(zhì)控血清結(jié)果正常，那么原來那瓶質(zhì)控血清可能過期或室溫放置時間過長而變質(zhì)，或者被污染。5.2.1.5.2檢查試劑：是否更換過試劑，核對試劑瓶、試劑批號、試劑配制，試劑外觀是否正常，如有問題，更換試劑，重測失控項目。5.2.1.5.3檢查儀器：如果重測結(jié)果仍不在允許范圍，則進(jìn)行儀器維護(hù)，重測質(zhì)控項目：檢查儀器狀態(tài)，查明光源是否需要更換，濾光片是否需要清潔或更換，對儀器進(jìn)行清洗等維護(hù)。

43、5.2.1.5.4檢查環(huán)境、操作等測定條件是否有變動或異常，排除后重測失控項目。5.3 分析后質(zhì)控5.3.1 檢驗結(jié)果的質(zhì)量控制 查對檢驗項目是否完全檢測完畢，減少漏查的發(fā)生。同時對檢驗結(jié)果進(jìn)行核查核對，對于十分異常、與臨床診斷不相符合及不能用相關(guān)臨床知識來解釋的結(jié)果進(jìn)行復(fù)查，及時與臨床溝通尋找原因，并記錄下相關(guān)信息進(jìn)行保存。合格的或者確認(rèn)無誤的結(jié)果簽字發(fā)放報告。對于我室的常規(guī)急診項目我們需在兩個小時之內(nèi)完成檢驗并且報告臨床或發(fā)放報告。5.3.2 檢驗后的標(biāo)本保存 我室的檢驗后標(biāo)本一般存放于28冰箱，注明相關(guān)信息如檢測時間、標(biāo)本編號、門診或住院等。標(biāo)本的保存是為了查對病人的標(biāo)本與檢測結(jié)果的聯(lián)系

44、。一般保存7天。6 室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的管理6.1 每月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理每個月的月末，應(yīng)對當(dāng)月的所有質(zhì)控數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總和統(tǒng)計處理，計算的內(nèi)容至少應(yīng)包括：1 當(dāng)月每個測定項目原始質(zhì)控數(shù)據(jù)的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。2 當(dāng)月每個測定項目除外失控數(shù)據(jù)后的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。3 當(dāng)月及以前每個測定項目所有質(zhì)控數(shù)據(jù)的累積平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。6.2 每月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的保存 每個月的月末，應(yīng)將當(dāng)月的所有質(zhì)控數(shù)據(jù)匯總整理后存檔保存，存檔的質(zhì)控數(shù)據(jù)包括：（1）當(dāng)月所有項目原始質(zhì)控數(shù)據(jù)；（2）當(dāng)月所有項目質(zhì)控數(shù)據(jù)的質(zhì)控圖；（3）所有質(zhì)控的計算數(shù)據(jù)（包括平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)及累積的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系

45、數(shù)等）；（4）當(dāng)月的失控報告單（包括失控時間、項目、違背哪一項失控規(guī)則、失控原因、采取的糾正措施、糾正后效果如何、操作人員及質(zhì)控主管簽字）。6.3 每月上報的質(zhì)控數(shù)據(jù)圖表每個月的月末，將當(dāng)月的所有質(zhì)控數(shù)據(jù)匯總整理后，應(yīng)將以下匯總表上報實驗室負(fù)責(zé)人：（1） 當(dāng)月所有測定項目質(zhì)控數(shù)據(jù)匯總表。（2） 所有測定項目該月的失控情況匯總表。6.4 室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的周期性評價 每個月的月末，都要對當(dāng)月室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)及累積平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)之間是否有明顯不同。如果發(fā)現(xiàn)有顯著性的變異，就要對質(zhì)控圖的均值、標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行修改，并要對質(zhì)控方法重新進(jìn)行設(shè)計。成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免

46、疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY GL-05版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容免疫室內(nèi)務(wù)管理生效日期：20120101第 23 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples Hospital 免疫室內(nèi)務(wù)管理1 目的對免疫室內(nèi)務(wù)進(jìn)行實效管理，以保證實驗室整體內(nèi)務(wù)管理和生物安全的要求。 2 適用范圍適用于免疫室3 職責(zé)檢驗科主任負(fù)責(zé)組織人員制定免疫室內(nèi)務(wù)管理程序，免疫室組長負(fù)責(zé)組織人員具體實施。4 該SOP變動程序本標(biāo)準(zhǔn)程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)組長、科主任。 5、免疫組崗位分工與職責(zé)管理規(guī)定5.1概述免疫

47、組人員少，標(biāo)本多，標(biāo)本保存時間較長，出報告時間長，所以要加強責(zé)任心，提高效率，爭取盡快盡早并準(zhǔn)確的發(fā)報告。5.2崗位職責(zé)工作人員需要完成本崗位范圍內(nèi)：日常標(biāo)本的檢測登記、檢測、報告；質(zhì)量控制；試劑管理與請購；儀器日常保養(yǎng)；檢測后標(biāo)本的保存與清理；每班工作結(jié)束后工作場地的整理；負(fù)責(zé)監(jiān)督臨時換崗（換班或頂班）人員工作執(zhí)行情況。5.3崗位分工崗位I：特定蛋白分析，檢測病人血清中ANA、ds-DNA、ENA等自身免疫項目；崗位：酶標(biāo)檢測，檢測病人血清中HbsAg，HbsAb，HbeAg，HbeAb，HbcAb，HbcAb-IgM，前S1 ，HIV抗體，梅毒抗體，HCV等ELISA項目。 崗位III：檢

48、測病人血清中：HAV-IgM，HCV，HDV，HEV-IgM。 崗位：負(fù)責(zé)全科室外檢工作。6 環(huán)境條件室內(nèi)溫度、濕度，每天一次，上午記錄。7 恒溫設(shè)備溫箱、水浴箱、普通冰箱，每天一次，上午記錄。8分析儀器常規(guī)使用與保養(yǎng)當(dāng)日一次，發(fā)現(xiàn)問題隨時詳細(xì)記錄；質(zhì)控按要求測試完畢后，及時手工記錄，并傳入或手工錄入實驗室信息系統(tǒng)。9 標(biāo)本與結(jié)果9.1不合格標(biāo)本記錄、危急值報告記錄、結(jié)果記錄、原始數(shù)據(jù)打印記錄。9.2崗位記錄（附表：免疫組崗位記錄表） 免疫室室內(nèi)環(huán)境條件控制范圍溫度1828，濕度85。 免疫組儀器/項目的定標(biāo)/質(zhì)控計劃儀器/項目定標(biāo)/校準(zhǔn)周期質(zhì)控周期MULTISKAN MK3酶標(biāo)儀PW960洗

49、板機附表：免疫組崗位記錄表免疫組崗位記錄表（表樣）日 期工作人員崗位記錄備注成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY GL-06版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容免疫室內(nèi)質(zhì)控失控處理程序生效日期：20120101第 25 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples Hospital 免疫室內(nèi)質(zhì)控失控處理程序1 目的對免疫室室內(nèi)質(zhì)控失控制定處理程序，以規(guī)范質(zhì)量控制。 2 適用范圍適用于免疫室內(nèi)質(zhì)控失控處理3 職責(zé)檢驗科主任負(fù)責(zé)組織人員制定免疫室內(nèi)質(zhì)控失控處理程序，免疫室組長負(fù)責(zé)組織人員具體實施。4 該SOP變動程序本標(biāo)準(zhǔn)程序的變動，

50、可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)組長、科主任。5失控處理原則 檢測人員發(fā)現(xiàn)質(zhì)控數(shù)據(jù)違背質(zhì)控規(guī)則后，通知組長協(xié)作處理，共同分析失控的真?zhèn)?，并做出是否發(fā)出與質(zhì)控一同檢測的那批標(biāo)本的檢測報告，必要時通知檢驗科主任處理。填寫失控報告。直到質(zhì)控在控后重新檢測。5.1失控原因分析與處理5.1.1 失控的原因分析5.1.1.1自身原因 質(zhì)控批號與質(zhì)控值是否一致；試劑是否混勻；質(zhì)控品是否恢復(fù)室溫 并搖均勻。5.1.1.2試劑是否有效。5.1.1.3質(zhì)控品是否有效。5.1.1.4儀器是否正常運作。5.1.1.5室溫是否符合分析要求。5.1.2失控的處理5.1.2.1操作不規(guī)范時應(yīng)

51、嚴(yán)格按作業(yè)指導(dǎo)書重新檢測一次。仍失控進(jìn)行下一步。5.1.2.2試劑和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)在有效期內(nèi)使用，仍然不在控應(yīng)更換標(biāo)準(zhǔn)品重新定標(biāo)。仍失控進(jìn)行下一步。5.1.2.3更換質(zhì)控品，再做質(zhì)控。仍失控進(jìn)行下一步。5.1.2.4 做可能影響檢測的儀器相應(yīng)部分保養(yǎng)。仍失控進(jìn)行下一步。5.1.2.5請儀器工程師分析。6.支持性文件標(biāo)本采集程序標(biāo)本管理程序室內(nèi)質(zhì)控操作程序不合格標(biāo)本處理程序標(biāo)本驗收與報告審核制度不合格標(biāo)本登記表室內(nèi)質(zhì)控失控記錄表室內(nèi)質(zhì)控總結(jié)表成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY GL-07版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容免疫組溫度與環(huán)境失控處理程序生效日期：20120101

52、第 26 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples Hospital 免疫組溫度與環(huán)境失控處理程序1 目的對免疫室室內(nèi)溫度與環(huán)境失控制定處理程序，以規(guī)范質(zhì)量控制。 2 適用范圍適用于免疫室內(nèi)溫度與環(huán)境失控處理3 職責(zé)檢驗科主任負(fù)責(zé)組織人員制定免疫室內(nèi)溫度與環(huán)境失控處理程序，免疫室組長負(fù)責(zé)組織人員具體實施。4 該SOP變動程序本標(biāo)準(zhǔn)程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)組長、科主任。5 具體程序要求5.1溫度與環(huán)境記錄人員在發(fā)現(xiàn)失控時，通知組長協(xié)助處理。5.2失控冰箱內(nèi)的物品應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移至等同溫度的受控冰箱內(nèi)。5.3

53、室內(nèi)溫濕度不在要求范圍內(nèi)，開空調(diào)或抽濕機進(jìn)行調(diào)整。待恢復(fù)正常后，再開機檢測標(biāo)本。5.4若不能自行解決時，報檢驗科負(fù)責(zé)人，協(xié)調(diào)有關(guān)各方進(jìn)行維修或處理。5.5若對檢測結(jié)果造成影響時，由檢驗科負(fù)責(zé)人作出處理決定。5.6及時填寫失控報告。6. 相關(guān)文件記錄環(huán)境溫度濕度記錄表孵箱、冰箱溫度登記表成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY CZ-08版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容ELISA標(biāo)本處理程序生效日期：20120101第 28 頁 共235 頁Laboratory of Chengdu No.2 Peoples Hospital ELISA標(biāo)本處理程序1 目的 對免疫室室內(nèi)

54、需要進(jìn)行酶聯(lián)免疫實驗 （ELISA）的標(biāo)本制定嚴(yán)格的標(biāo)本處理程序，以保證ELISA實驗的質(zhì)量控制要求。2 適用范圍適用于免疫室內(nèi)進(jìn)行ELISA實驗的所有標(biāo)本。3 職責(zé)檢驗科主任負(fù)責(zé)組織人員制定免疫室ELISA標(biāo)本處理程序，免疫室組長負(fù)責(zé)組織人員具體實施。4 該SOP變動程序本標(biāo)準(zhǔn)程序的變動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)組長、科主任。5 采集與要求5.1靜脈采血方法用真空采血針取肘靜脈血3.0ml放入無抗凝管或肝素鋰抗凝管中，送檢。5.2對不合格標(biāo)本的處理對有嚴(yán)重溶血、脂血、無標(biāo)識等不合格的標(biāo)本，按不合格標(biāo)本處理，并在不合格標(biāo)本登記本做好記錄。 6病人標(biāo)本的檢

55、測6.1標(biāo)本的登記與編號6.1.1按照檢測項目編號，并在病人檢測記錄登記本登記。實習(xí)/進(jìn)修生必須在帶教老師監(jiān)督下操作，不能單獨操作及填發(fā)報告。對需要復(fù)查的標(biāo)本在下一批檢測相同項目時重新編號。6.1.2復(fù)檢日期或其它事項可以在“備注”欄注明。6.2檢測具體操作見相應(yīng)的作業(yè)指導(dǎo)書。 7 結(jié)果編輯和報告簽發(fā) 檢測完畢后，將結(jié)果登記或傳入實驗室信息系統(tǒng)。然后，在該系統(tǒng)編輯、錄入和簽發(fā)報告。具體操作見實驗室信息系統(tǒng)手冊。 8 標(biāo)本保存靜脈血標(biāo)本在檢測完收集，置28冰箱保存2周。HIV檢測標(biāo)本按照其作業(yè)指導(dǎo)書處理。9 標(biāo)本處理保存到期的標(biāo)本，統(tǒng)一送到醫(yī)藥垃圾處理中心統(tǒng)一處理。10 相關(guān)文件記錄標(biāo)本采集程序不合格標(biāo)本處理程序不合格標(biāo)本登記表成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 免疫SOP文件編號：CDEY-LAB-MY CZ-09版本/修訂號：B/0主題內(nèi)容ELISA原理生效日期：20120101第 30 頁 共235 頁Laboratory