植物生理實驗報告

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上本科學生綜合性實驗報告    項目組長 高銘遠     學號 成 員 杜廣宇、杜沙沙、段司宇、馮慧彬、宮亞坡專    業(yè) 生物技術   班級   1班   實驗項目名稱 小麥耐鹽生理指標測定 指導教師及職稱 尉連伶   講師 開課學期    2008   至  2009 學年 2 學期上課時間   2009 年    4  

2、0; 月  22    日植物耐鹽性生理指標的測定一、實驗目的及要求通過本實驗的學習，使學生掌握脯氨酸含量、過氧化物酶活性和丙二醛含量測定方法，掌握單因子方差分析，培養(yǎng)學生離心機和分光光度計的使用技能，為今后撰寫畢業(yè)論文打下良好的基礎。二、實驗主要儀器和試劑儀器: 離心機；分光光度計；恒溫水浴鍋試劑：酸性茚三酮溶液；冰醋酸；標準脯氨酸溶液；3磺基水楊酸；過氧化物酶測定反應液；pH6.0磷酸緩沖液10TCA；0.6TBA三、實驗原理植物在鹽脅迫下,植物可通過積累一定量的脯氨酸降低水勢, 維持植物體內(nèi)的水分平衡,保證植物的正常生長。脯氨酸本身是一種

3、水溶性最大的氨基酸，它可以防止原生質(zhì)體的水分散失，在植物細胞生理干旱時，它的增加有助于細胞或組織保持水分。用磺基水楊酸提取植物樣品時，脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加熱處理后，溶液即成紅色，色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長下比色，從標準曲線上查出脯氨酸的含量。植物在鹽脅迫下，活性氧含量會明顯增加，對植物體產(chǎn)生毒害，而過氧化物酶會清除植物體內(nèi)多余的活性氧 。過氧化物酶廣泛存在于植物的各個組織器官中。在有過氧化氫存在的條件下，過氧化物酶可以使愈創(chuàng)木酚氧化，產(chǎn)生茶褐色物質(zhì)，在470nm處有最大吸收峰，可根據(jù)單位時間內(nèi)A470的變化值，計算POD活性大小。植物在鹽

4、脅迫下，往往發(fā)生膜脂過氧化作用，丙二醛是其產(chǎn)物之一，通常將其作為脂質(zhì)過氧化指標，用于表示細胞膜脂過氧化程度和植物對逆境條件反應的強弱。丙二醛（MDA）是常用的膜脂過氧化指標，在酸性和高溫度條件下，可以與硫代巴比妥酸（TBA）反應生成紅棕色的三甲川（3,5,5-三甲基惡唑2,4-二酮），其最大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質(zhì)的干擾，其中最主要的是可溶性糖，糖與TBA顯色反應產(chǎn)物的最大吸收波長在450nm，532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加，因此測定植物組織中MDATBA反應物質(zhì)含量時一定要排除可溶性糖的干擾。四、實驗步驟（一）實驗材料

5、的培養(yǎng)小麥種子吸脹8h后消毒、4下春化30天，采用砂培法種植，至三葉期，作為供試材料。（二）鹽脅迫處理用100 mmol/L NaCl對小麥進行鹽脅迫，以未進行鹽脅迫為對照，以進行鹽脅迫為處理，鹽脅迫3d后分別測定脯氨酸含量、過氧化物酶活性和丙二醛含量，對照和處理分別重復3次。（三）脯氨酸含量測定1.標準曲線的制作用100g/ml脯氨酸配制成2、4、6、8、10g/ml的標準溶液。取標準溶液各2ml,加2ml3% 磺基水楊酸，2ml冰醋酸和4ml2.5% 茚三酮試劑于具塞試管中，置沸水浴中顯色1h，冷卻后與波長520nm測定A值，以A值為縱坐標，脯氨酸濃度（g/ml）為橫坐標繪制標準曲線。2.

6、脯氨酸的提取 稱取小麥葉片0.5g，加3%磺基水楊酸5ml研磨提取，勻漿移至試管中，在沸水浴中提取10min，冷卻后，5000rpm離心20min，上清液即為脯氨酸粗提液。3.反應體系取上清液2ml，并加入1ml冰醋酸，2ml酸性茚三酮，混勻置于沸水浴中顯色0.5h。以2ml磺基水楊酸，1ml冰醋酸，2ml酸性茚三酮為對照。在可見分光光度計下520nm處測得A值。4. 脯氨酸的含量的計算從標準曲線查得脯氨酸濃度，計算出樣品中脯氨酸的含量，以每克材料鮮重含脯氨酸的微克數(shù)表示（g/g）。（四）過氧化物酶活性的測定 1.過氧化物酶的提取稱取小麥葉片0.2g，加5ml pH 6.0的磷酸緩沖液，再加入

7、0.02g PVP-30（除去酚類物質(zhì)的毒害，防止醌類物質(zhì)的干擾）及少量石英砂研磨。4，5000rpm離心15分鐘，上清液為酶粗提取液2.反應體系50l酶粗提取液加入4ml反應液，在可見分光光度計下470nm處測A值，放入后立即記時，每隔1min記一次數(shù)值，連續(xù)記錄三次，取平均值。3.酶活力定義過氧化物酶活性以每克鮮重每分鐘在470nm下A值的變化值，設每變化0.01A為一個酶活力單位。過氧化物酶活性=U/min·g（五）丙二醛含量測定1.丙二醛提取小麥葉片0.5g，加入10三氯乙酸(TCA)5mL(分兩次加)和少量石英砂充分研磨，勻漿液以5000r/min離心20min，上清液即為

8、樣品提取液。2.反應體系取2mL提取液，分別加入2mL 0.6TBA液，混勻，在試管上加蓋塞，置于沸水浴中沸煮15min，迅速冷卻，離心。取上清液測定532nm和450nm下的A值。以2mL水代替提取液調(diào)零。3.MDA含量計算：根據(jù)C6.45×A5320.56×A450，計算出樣品提取液中丙二醛的濃度C，然后再計算出每克樣品中丙二醛的含量(mol/g（FW)。五、實驗結(jié)果標準液濃度（ug/ml）00.40.81.21.62.0A值00.0210.0470.0650.0850.102原始數(shù)據(jù)：對 照處 理A 值含量或活性（FW）A 值含量或活性（FW）脯氨酸含量1. 0.04

9、72. 0.0513. 0.0531.109.67192.119.35283.124.19331. 0.1172. 0.1873. 0.3061.279.08752.448.50303.736.5095POD活性1.A值0.448，0.569，0.684，0.786差值 0.121，0.115，0.1022.A值0.541，0.717，0.875，1.021差值 0.176，0.158，0.1463.A值0.701，0.880，1.046，1.196差值 0.179，0.166，0.1501. 11266.672. 160003. 165001.A值0.877，1.112，1.322，1.51

10、1差值 0.235，0.210，0.1892.A值1.112，1.389，1.622，1.807差值 0.277，0.233，0.1853.A值 1.139，1.434，1.676，1.869差值 0.295，0.242，0.1931. 21133.332. 23166.673. 24333.33丙二醛含量1.A450=0.408A532=0.1962.A450=0.397A532=0.1993.A450=0.443A532=0.2051. 51.7862. 53.06153. 53.70851.A450=0.544A532=0.2022.A450=0.447A532=0.2013.A450=

11、0.504A532=0.1861. 49.9132. 52.30653. 45.873單因子方差分析結(jié)果：對 照處 理脯氨酸含量117.7393±7.a488.0333±231.259bPOD活性14588.89±2887.97a22877.78±1619.443b丙二醛含量52.852±0.a49.36417±3.a六、結(jié)果分析本次實驗所得結(jié)果中，脯氨酸含量和POD活性測得結(jié)果差異顯著，但丙二醛含量所測結(jié)果對照組與鹽處理組差異并不十分明顯，綜合分析有以下原因：由于本次實驗時間較長，前后相差一個月左右，致使三次測定中實驗材料存在差異。

12、麥苗所取部位不同，如葉部和莖部中脯氨酸含量、POD活性和丙二醛含量存在的差異可能影響實驗結(jié)果。試驗中，研磨不充分、石英砂和PVP加入不適量、每次水浴加熱時間控制不精確等，都可能影響分光光度計測得結(jié)果，從而影響實驗結(jié)果。由于測定丙二醛含量是，由多人測量，可能存在的誤差較大，導致丙二醛含量兩組差異不顯著。 實驗中存在一系列的機械誤差，也可能是影響實驗結(jié)果。七、思考題：1.為什么使用砂培法培養(yǎng)實驗材料？沙培介質(zhì)的通氣性較好，可以保證根際有較好的通氣性。沙子的粒徑較小,持水量較多,擴散范圍大,根系能充分吸水吸肥，且根系水平方向伸展。每次都用新鮮營養(yǎng)液，較好的維持養(yǎng)分平衡，減少調(diào)控營養(yǎng)液的麻煩。持水量大

13、，工業(yè)次數(shù)可減少，每天供液12次即可。水和肥料的用量較多，吸收利用率也不高，易于產(chǎn)生鹽類積累。雖不易較精確控制，但仍可以調(diào)節(jié)PH。2.分光光度法要求A值在多大范圍內(nèi)，數(shù)據(jù)才可靠，如何調(diào)整？在實際分析工作中，溶液的吸光度控制在0.20.7時，數(shù)據(jù)較為可靠。調(diào)整方法：節(jié)“0”點。輕輕旋動調(diào)“0”電位器，使讀數(shù)表頭指針恰好位于透光度為“0”處（此時，比色皿暗箱蓋是打開的，光路被切斷，光電管不受光照）節(jié)T=100。將盛蒸餾水（或空白溶液或純?nèi)軇┑谋壬蠓湃氡壬笞苤械牡谝桓駜?nèi)，有色溶液放在其它格內(nèi)，把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上，轉(zhuǎn)動光量調(diào)節(jié)器，使透光度T=100，即表頭指針恰好指在T=100處。他們繼

14、續(xù)往前走。走到了沃野，他們決定停下。被打巴掌的那位差點淹死，幸好被朋友救過來了。被救起后，他拿了一把小劍在石頭上刻了：“今天我的好朋友救了我一命?！币慌院闷娴呐笥褑柕剑骸盀槭裁次掖蛄四阋院竽阋獙懺谏匙由希F(xiàn)在要刻在石頭上呢？”另一個笑笑回答說：“當被一個朋友傷害時，要寫在易忘的地方，風會負責抹去它；相反的如果被幫助，我們要把它刻在心靈的深處，任何風都抹不去的?！迸笥阎g相處，傷害往往是無心的，幫助卻是真心的。在日常生活中，就算最要好的朋友也會有摩擦，也會因為這些摩擦產(chǎn)生誤會，以至于成為陌路。友情的深淺，不僅在于朋友對你的才能欽佩到什么程度，更在于他對你的弱點容忍到什么程度。學會將傷害丟在風里

15、，將感動銘記心底，才可以讓我們的友誼歷久彌新！友誼是我們哀傷時的緩和劑，激情時的舒解劑；是我們壓力時的流瀉口，是我們?yōu)碾y時的庇護所；是我們猶豫時的商議者，是我們腦子的清新劑。但最重要的一點是，我們大家都要牢記的：“切不可苛求朋友給你同樣的回報，寬容一點，對自己也是對朋友?！睈垡蛩固拐f：“世間最美好的東西，莫過于有幾個頭腦和心地都很正直的朋友。”他們繼續(xù)往前走。走到了沃野，他們決定停下。被打巴掌的那位差點淹死，幸好被朋友救過來了。被救起后，他拿了一把小劍在石頭上刻了：“今天我的好朋友救了我一命?！币慌院闷娴呐笥褑柕剑骸盀槭裁次掖蛄四阋院竽阋獙懺谏匙由?，而現(xiàn)在要刻在石頭上呢？”另一個笑笑回答說：“當被一個朋友傷害時，要寫在易忘的地方，風會負責抹去它；相反的如果被幫助，我們要把它刻在心靈的深處，任何風都抹不去的?！迸笥阎g相處，傷害往往是無心的，幫助卻是真心的。在日常生活中，就算最要好的朋友也會有摩擦，也會因為這些摩擦產(chǎn)生誤