蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測(cè)定和沉淀反應(yīng)

1、3操作（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。（2）向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL，加一管，搖勻一管。此時(shí)1、2、3、4 管的pH依次為5.9、5.3、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。最混濁的一管的pH即為酪蛋白的等電點(diǎn)。 二、蛋白質(zhì)的沉淀及變性1目的（1）加深對(duì)蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識(shí)。（2）了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實(shí)用意義。（3）了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。2原理 在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蚴ル姾珊兔撍恋?。 蛋白質(zhì)的沉淀反

2、應(yīng)可分為兩類。 （1）可逆的沉淀反應(yīng) ;（2）不可逆沉淀反應(yīng) ; 蛋白質(zhì)變性后，有時(shí)由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。 3操作 （1）蛋白質(zhì)的鹽析 無(wú)機(jī)鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類濃度時(shí)，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過(guò)程。加5卵清蛋白溶液5 mL于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少

3、量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過(guò)濾，向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止，此時(shí)析出的沉淀為清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。 （2）重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) 重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2 mL，再加3硝酸銀溶液12滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？（3）某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2 mL，再加入1mL 5三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻，傾出上清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。（4）有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入2

4、mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2 mL95乙醇?；靹?，觀察沉淀的生成。 （5）乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號(hào)。依下 表順序加入試劑： 振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻，向各管內(nèi)加水8 mL，然后在第 2、3號(hào)管中各加一滴甲基紅，再分別用0.1molL醋酸溶液及0.05 molL碳酸鈉溶液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。每管再加0.1molL鹽酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。 （5）乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號(hào)。依下 表順序加入試劑： 振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻，向各管內(nèi)加水8 mL，然后在第 2、3號(hào)管中各加一滴甲基紅，再分別用0.1molL醋酸溶液及0.05 molL