微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證方案

1、微生物棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證方案1 主題內(nèi)容本方案規(guī)定了微生物棉簽擦拭取樣驗(yàn)證的目的、原理、標(biāo)準(zhǔn)及內(nèi)容。2 適用范圍本方案適用微生物棉簽擦拭法取樣。3 責(zé)任人質(zhì)量部現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控員：負(fù)責(zé)棉簽擦拭取樣方法驗(yàn)證方案的起草及實(shí)施。質(zhì)量部QC：負(fù)責(zé)按計(jì)劃完成相關(guān)檢驗(yàn)任務(wù)，確保檢驗(yàn)結(jié)論正確可靠。質(zhì)量部QA：負(fù)責(zé)監(jiān)督驗(yàn)證實(shí)施的全過程。驗(yàn)證管理員：協(xié)助驗(yàn)證方案的起草，組織協(xié)調(diào)驗(yàn)證工作，并總結(jié)驗(yàn)證結(jié)果，出具驗(yàn)證報(bào)告。質(zhì)量管理部部長(zhǎng)：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及驗(yàn)證報(bào)告的審核。質(zhì)量授權(quán)人：負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)。組長(zhǎng)：質(zhì)量管理部部長(zhǎng)驗(yàn)證小組成員：QA主管 QC主管 微生物限度檢驗(yàn)員 現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控員4 內(nèi)容4.1 概述制藥企業(yè)生產(chǎn)設(shè)

2、備、生產(chǎn)場(chǎng)所、用具等需要清潔，清潔后殘留物限度經(jīng)檢驗(yàn)應(yīng)符合要求。檢驗(yàn)殘留物限度的方法有兩種：一是最終淋洗水取樣；二是擦拭取樣。擦拭取樣優(yōu)點(diǎn)是能對(duì)最難清潔部位直接取樣，通過考察有代表性的最難清潔部位的殘留物限度評(píng)價(jià)生產(chǎn)設(shè)備的清潔狀況。但取樣方法需驗(yàn)證其可行性。因此需通過取樣方法驗(yàn)證確定清潔方法的有效性。能消除藥品交叉污染及微生物污染。 4.2 驗(yàn)證目的通過對(duì)清洗消毒后微生物取樣方法的回收率實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)取樣方法的有效性、代表性和科學(xué)性，并為證明清潔方法有效性提供基本依據(jù)。 4.3 驗(yàn)證原理通過物理的擦拭對(duì)那些已經(jīng)干燥的殘留物取樣。通過選擇適當(dāng)?shù)牟潦萌軇?、擦拭工具和擦拭方法，可將清洗過程中未溶解的，已

3、“干結(jié)”在設(shè)備表面或溶解度很小的物質(zhì)擦拭下來。檢驗(yàn)結(jié)果能直接反映出個(gè)取樣點(diǎn)的清潔狀況。4.4 清潔方法執(zhí)行XX機(jī)清潔SOP、房間清潔SOP。4.5 驗(yàn)證方法.試驗(yàn)器具包括不銹鋼載片（規(guī)格50mm×50mm）、培養(yǎng)皿90mm、醫(yī)用棉簽，以上器具均需要經(jīng)過121、30分鐘滅菌后使用。.1.金黃色葡萄球菌菌液的制備接種金黃色葡萄球菌CMCC(B)26 003新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，30-35培養(yǎng)18-24小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋制成每0.1ml含菌數(shù)50-100CFU的工作菌液，并采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)。.2.白色念珠菌菌液的制備接種白色念

4、珠菌CMCC(F)98 001新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，23-28培養(yǎng)24-48小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋制成每0.1ml含菌數(shù)50-100CFU的工作菌液，并采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)。.3.染菌不銹鋼載片制備·載片脫脂處理：載片放在含肥皂的水中煮沸30分鐘，以純化水洗凈；用純化水煮沸10分鐘；用純化水漂洗至PH中性晾干備用。·菌液滴染將經(jīng)滅菌的不銹鋼載片平鋪于無菌平皿內(nèi)，滴加金黃色葡萄球菌、白色念珠菌含菌量為50-100CFU的菌液0.1ml，并均勻涂布于整個(gè)載體表面。滴染菌液后，載片置潔凈工作臺(tái)晾干備用。每種菌平行制備

5、2個(gè)染菌不銹鋼載片。.4.擦拭取樣·取無菌醫(yī)用棉簽2支，用0.9%無菌氯化鈉溶液潤(rùn)濕后，在錐形瓶上擠壓除去多余的溶液。將其中1支棉簽頭按在染菌載片上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣表面，擦拭路線按下圖所示，擦拭過程應(yīng)覆蓋整個(gè)表面。另取1支棉簽再次對(duì)該不銹鋼載片表面擦拭，擦拭路線和上次擦拭路線垂直。擦拭完后，用無菌手術(shù)刀把棉簽的頭部（棉花部位）剪斷，投入裝有50ml0.9%無菌氯化鈉溶液的錐形瓶中，密閉。共制備12份檢品。·取適宜稀釋的菌液0.1ml（約50-100CFU）分別注入平皿中，立即傾入冷卻至45左右的培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，測(cè)定所涂布的試驗(yàn)菌數(shù)。

6、.5.檢驗(yàn)將裝有樣品的錐形瓶反復(fù)振搖，使面前上的微生物釋放到溶液中。取樣品溶液50ml薄膜過濾，取出濾膜，菌面朝上，貼于培養(yǎng)基上。金黃色葡萄球菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，白色念珠菌用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。.6培養(yǎng)及計(jì)數(shù)檢驗(yàn)結(jié)束后，將細(xì)菌平皿倒置于30-35培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，霉菌平皿倒置于23-28培養(yǎng)箱培養(yǎng)5天，計(jì)數(shù)。4.5.2可接受標(biāo)準(zhǔn)：陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長(zhǎng)，總回收率不低于70%，RSD20%。 4.6 檢驗(yàn)結(jié)果：見檢驗(yàn)記錄。4.7 驗(yàn)證次數(shù)：進(jìn)行三次驗(yàn)證。5結(jié)論與評(píng)價(jià)驗(yàn)證小組根據(jù)驗(yàn)證情況對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)審，做出驗(yàn)證結(jié)論，由質(zhì)量受權(quán)人作出是否批準(zhǔn)的決定及負(fù)責(zé)發(fā)放驗(yàn)證證書。對(duì)驗(yàn)證結(jié)果評(píng)審應(yīng)包括：驗(yàn)證試驗(yàn)

7、是否有遺漏？ 驗(yàn)證實(shí)施過程中對(duì)驗(yàn)證方案有無修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準(zhǔn)？驗(yàn)證記錄是否完整？驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)？綜合驗(yàn)證的結(jié)果，判定取樣方法的有效性。6再驗(yàn)證：有以下情況需要進(jìn)行再驗(yàn)證。6.1 到了規(guī)定的再驗(yàn)證周期。6.2 若取樣方法有變化應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。6.4 潔凈區(qū)環(huán)境包括溫、濕度有重大變化應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。7附表7.1 表一取樣檢驗(yàn)記錄可接受標(biāo)準(zhǔn)總回收率不低于70%，RSD20%金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)白色念珠菌檢驗(yàn)陽(yáng)性菌陰性菌1號(hào)樣2號(hào)樣3號(hào)樣4號(hào)樣5號(hào)樣RSD/檢驗(yàn)人陽(yáng)性菌陰性菌1號(hào)樣2號(hào)樣3號(hào)樣4號(hào)樣5號(hào)樣RSD/檢驗(yàn)人第一次第二次第三次總回收率結(jié)論 復(fù)核人： 日期： 7.2 表二 驗(yàn)證結(jié)論與評(píng)價(jià)驗(yàn)證結(jié)