第三章紅細(xì)胞檢驗(yàn)

1、 第一節(jié) 紅細(xì)胞生理第二節(jié) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)第三節(jié) 血紅蛋白測(cè)定第四節(jié) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測(cè)定的臨床意義第五節(jié) 網(wǎng)織紅細(xì)胞概述第三章 紅細(xì)胞檢驗(yàn) 第六節(jié) 紅細(xì)胞比容測(cè)定第七節(jié) 紅細(xì)胞直徑測(cè)定第八節(jié) 計(jì)算紅細(xì)胞平均數(shù)第九節(jié) 紅細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)第十節(jié) 點(diǎn)彩紅細(xì)胞檢驗(yàn)第三章 紅細(xì)胞檢驗(yàn) 學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo) 1. 1.概述紅細(xì)胞的生成、形態(tài)與功能以及血紅概述紅細(xì)胞的生成、形態(tài)與功能以及血紅蛋白的結(jié)構(gòu)和吸收光譜。蛋白的結(jié)構(gòu)和吸收光譜。 2.2.敘述紅細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)原理、試劑、操作敘述紅細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)原理、試劑、操作、計(jì)算、注意事項(xiàng)。、計(jì)算、注意事項(xiàng)。 3.3.比較紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞計(jì)數(shù)的異同。比較紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)

2、胞計(jì)數(shù)的異同。 4.4.概述紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的計(jì)數(shù)誤差及質(zhì)量控制。概述紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的計(jì)數(shù)誤差及質(zhì)量控制。一、紅細(xì)胞的發(fā)育過程二、紅細(xì)胞形態(tài)與功能三、血紅蛋白結(jié)構(gòu)與吸收光譜第一節(jié) 紅細(xì)胞生理 造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞 早幼紅細(xì)胞早幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞EPO紅系祖細(xì)胞紅系祖細(xì)胞原始紅細(xì)胞原始紅細(xì)胞一、紅細(xì)胞的發(fā)育過程成熟紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞120120天天鐵鐵 鐵代謝鐵代謝原卟啉原卟啉 膽色素代謝膽色素代謝珠蛋白珠蛋白 蛋白質(zhì)代謝蛋白質(zhì)代謝衰老紅細(xì)胞衰老紅細(xì)胞形態(tài)：雙凹圓盤狀；形態(tài)：雙凹圓盤狀；直徑：直徑：6 6mm，平均，平均7.27.2；厚度

3、：厚度：邊緣部分約邊緣部分約22，中央約，中央約側(cè)面觀呈啞鈴形。側(cè)面觀呈啞鈴形。二、紅細(xì)胞的形態(tài)與功能紅細(xì)胞皺縮，邊緣呈鋸齒狀；紅細(xì)胞皺縮，邊緣呈鋸齒狀；在高滲溶液中：紅細(xì)胞腫漲紅細(xì)胞腫漲甚至破裂，血紅甚至破裂，血紅蛋白逸出后形成蛋白逸出后形成影細(xì)胞。影細(xì)胞。在低滲溶液中：血涂片經(jīng)瑞特血涂片經(jīng)瑞特染色后，細(xì)胞呈粉染色后，細(xì)胞呈粉紅色，中央著色較紅色，中央著色較淡，有明顯的中央淡，有明顯的中央淡染區(qū)，淡染區(qū)的淡染區(qū)，淡染區(qū)的直徑約占紅細(xì)胞直直徑約占紅細(xì)胞直徑的徑的1/31/32/52/5。血紅蛋白和血紅蛋白和水（水（64647070），其余成分為），其余成分為蛋白質(zhì)、磷脂、蛋白質(zhì)、磷脂、無機(jī)鹽和

4、酶。無機(jī)鹽和酶。 水水血紅蛋白血紅蛋白其余成分其余成分功能：1.1.運(yùn)輸運(yùn)輸O O2 2和和COCO2 22.2.調(diào)節(jié)酸堿平衡調(diào)節(jié)酸堿平衡3.3.免疫粘附免疫粘附 血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)三、血紅蛋白結(jié)構(gòu)與吸收光譜 Hb的結(jié)構(gòu)： HbHb-A-A：2222，占，占95959898。HbHb-A: 22-A: 22，占，占2 23 3。 HbHb-F-F：2222，占，占1 1。珠蛋白珠蛋白4 4個(gè)亞鐵血紅素個(gè)亞鐵血紅素原卟啉原卟啉 鐵鐵HbHb的分子量：的分子量：6445864458。1 1分子分子HbHb：4 4個(gè)亞鐵血紅素，個(gè)亞鐵血紅素，4 4個(gè)個(gè)FeFe， 可結(jié)合可結(jié)合4 4

5、個(gè)個(gè)O O2 2。 1mol1molHbHb：4 4mol mol FeFe，可結(jié)合，可結(jié)合4 4mol Omol O2 2。1 1克克HbHb：含：含3.47mg Fe , 3.47mg Fe , 結(jié)合結(jié)合1.39ml O1.39ml O2 2。在正常情況下，外周血中的血紅蛋白主要有：在正常情況下，外周血中的血紅蛋白主要有：氧合血紅蛋白（氧合血紅蛋白（HbOHbO2 2）還原血紅蛋白（還原血紅蛋白（HbredHbred）碳氧血紅蛋白（碳氧血紅蛋白（HbCOHbCO）高鐵血紅蛋白（高鐵血紅蛋白（HiHi或或MHbMHb）。）。及其衍生物吸收光譜及其衍生物吸收光譜Hb氧合血紅蛋白氧合血紅蛋白(H

6、bO(HbO2 2）：呈鮮紅色，在）：呈鮮紅色，在578nm578nm（黃色（黃色光）和光）和540nm540nm（綠色光）處有兩條吸收光帶。（綠色光）處有兩條吸收光帶。還原血紅蛋白（還原血紅蛋白（HbredHbred）：呈暗紅色，在）：呈暗紅色，在556nm556nm（黃（黃、綠色光之間）處有一條吸收光帶。、綠色光之間）處有一條吸收光帶。碳氧血紅蛋白（碳氧血紅蛋白（HbCOHbCO）：呈櫻紅色，在）：呈櫻紅色，在572nm572nm（黃（黃色光）和色光）和535nm535nm（綠色光）處有兩條吸收光帶。（綠色光）處有兩條吸收光帶。高鐵血紅蛋白（高鐵血紅蛋白（HiHi）：呈紅褐色，在）：呈紅褐

7、色，在634nm634nm、578nm578nm、540nm540nm和和500nm500nm處有條吸收光帶。處有條吸收光帶。吸收光譜特征：第二節(jié) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)原理等滲稀釋液稀釋定量全血充入計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。同同WBCWBC計(jì)數(shù)計(jì)數(shù) 想一想：想一想： WBCWBC計(jì)數(shù)用到了計(jì)數(shù)用到了哪些器材？哪些器材？ 第二節(jié) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)器材稀釋液 甲醛枸櫞酸鹽稀釋液甲醛枸櫞酸鹽稀釋液 HayemHayem稀釋液稀釋液稀釋液 1. 1.甲醛枸櫞酸鹽稀釋液甲醛枸櫞酸鹽稀釋液成分成分 功能功能枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉 抗凝、維持滲透壓抗凝、維持滲透壓36%36%甲醛液甲醛液 防腐并固

8、定紅細(xì)胞防腐并固定紅細(xì)胞氯化鈉氯化鈉 維持滲透壓維持滲透壓蒸餾水蒸餾水稀釋液2.Hayem2.Hayem稀釋液稀釋液成分成分 功能功能氯化鈉氯化鈉 調(diào)節(jié)滲透壓調(diào)節(jié)滲透壓硫酸鈉硫酸鈉 提高相對(duì)密度，防止細(xì)胞粘連提高相對(duì)密度，防止細(xì)胞粘連氯化高汞氯化高汞 防腐劑防腐劑蒸餾水蒸餾水操作加稀釋液：加稀釋液：2.0ml2.0ml 采血：采血：10l10l 混勻混勻 充液充液 靜置：靜置：2 23min3min操作 計(jì)數(shù)：高倍鏡下中央大方格計(jì)數(shù)：高倍鏡下中央大方格 五個(gè)中方格的五個(gè)中方格的RBCRBC 計(jì)算：計(jì)算： RBC/L =RBC/L =五個(gè)中方格的五個(gè)中方格的 RBC RBC 5 51010200

9、20010106 6 報(bào)告：報(bào)告：RBCRBC：. . 10101212/L/L取稀釋液取稀釋液1.99ml,1.99ml,加血加血1010l l，計(jì)數(shù)中央大，計(jì)數(shù)中央大格內(nèi)五個(gè)中方格紅細(xì)胞為格內(nèi)五個(gè)中方格紅細(xì)胞為500500個(gè)，請(qǐng)報(bào)告結(jié)果個(gè)，請(qǐng)報(bào)告結(jié)果? ? 答案答案： RBC=500RBC=5005 5101020020010106 6 =5.00=5.0010101212/L/L請(qǐng)您練習(xí) 取稀釋液取稀釋液2.0ml,2.0ml,加血加血2020l l，計(jì)數(shù)中央，計(jì)數(shù)中央大格內(nèi)大格內(nèi)1010個(gè)中方格紅細(xì)胞為個(gè)中方格紅細(xì)胞為800800個(gè)，請(qǐng)報(bào)告結(jié)個(gè)，請(qǐng)報(bào)告結(jié)果果? ? 答案：答案：RBC=

10、800/10RBC=800/1025251010(2000+20)/20(2000+20)/2010106 6 =2.02 =2.0210101212/L/L壓線紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)方法：1. 1. 血量要準(zhǔn)確。血量要準(zhǔn)確。2. 2. 稀釋液要過濾。稀釋液要過濾。3. 3. 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)要分布均勻。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)要分布均勻。注意事項(xiàng)4. 4. 實(shí)驗(yàn)器材應(yīng)清潔干燥。實(shí)驗(yàn)器材應(yīng)清潔干燥。5. 5. 自身凝集素增高者，宜用不含甲醛的枸櫞酸鹽稀釋自身凝集素增高者，宜用不含甲醛的枸櫞酸鹽稀釋 液。液。6.6.同時(shí)做白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定，同時(shí)做白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定，應(yīng)先取紅細(xì)胞計(jì)

11、數(shù)用血。應(yīng)先取紅細(xì)胞計(jì)數(shù)用血。7. 7. 如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，每次簽發(fā)報(bào)告前應(yīng)仔細(xì)核對(duì)。如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，每次簽發(fā)報(bào)告前應(yīng)仔細(xì)核對(duì)。注意事項(xiàng)計(jì)數(shù)誤差1.1.技術(shù)誤差技術(shù)誤差 同白細(xì)胞計(jì)數(shù)同白細(xì)胞計(jì)數(shù) 白細(xì)胞數(shù)過高時(shí)應(yīng)進(jìn)行校正。白細(xì)胞數(shù)過高時(shí)應(yīng)進(jìn)行校正。2.2.固有誤差固有誤差 嚴(yán)重貧血的標(biāo)本，應(yīng)縮小稀釋倍數(shù)或擴(kuò)大計(jì)數(shù)嚴(yán)重貧血的標(biāo)本，應(yīng)縮小稀釋倍數(shù)或擴(kuò)大計(jì)數(shù) 范圍范圍 。質(zhì)量控制1.1.兩差比值評(píng)價(jià)法兩差比值評(píng)價(jià)法 D DR R= = DR2DR2，合格，合格DR 2DR 2，不合格，不合格X1+X2X1+X2|X1-X2 |X1-X2 | |質(zhì)量控制2.2.變異系數(shù)評(píng)價(jià)法變異系數(shù)評(píng)價(jià)法 |Xm|

12、Xm-X |-X | V = V = 100 100 Xm Xm 質(zhì)量得分質(zhì)量得分=100-=100-（2 2 V V）請(qǐng)您思考請(qǐng)您思考 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法上有哪紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法上有哪些不同？些不同？目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正（1 1）紅細(xì)胞稀釋液是等滲溶液而白細(xì)胞?。┘t細(xì)胞稀釋液是等滲溶液而白細(xì)胞稀釋液是低滲溶液。釋液是低滲溶液。pHpH也不相同。也不相同。（2 2）紅細(xì)胞稀釋液不破壞細(xì)胞。）紅細(xì)胞稀釋液不破壞細(xì)胞。（3 3）稀釋倍數(shù)不同。）稀釋倍數(shù)不同。（4 4）選用計(jì)數(shù)池區(qū)域不同。）選用計(jì)數(shù)池區(qū)域不同。（5 5）計(jì)數(shù)域誤差大小不同。）計(jì)數(shù)域誤差大小不同。答案思考題： 1. 1

13、.試著比較顯微鏡紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞試著比較顯微鏡紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的異同。計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的異同。 2.2.常用紅細(xì)胞稀釋液由哪些成分配成，常用紅細(xì)胞稀釋液由哪些成分配成，各有何作用？為什么有的患者可致渾濁？該各有何作用？為什么有的患者可致渾濁？該怎樣處理？怎樣處理？ 1.1.測(cè)知一測(cè)知一HbHb含鐵量是含鐵量是416mg/L416mg/L，氧結(jié)合，氧結(jié)合量是量是16.68%16.68%，問含血紅蛋白多少？，問含血紅蛋白多少？ 2.2.取紅細(xì)胞稀釋液取紅細(xì)胞稀釋液1.98ml1.98ml，加外周血，加外周血20l20l，混勻后充入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)中央大方，混勻后充入計(jì)數(shù)

14、池，計(jì)數(shù)中央大方格中格中5 5個(gè)中方格，平均每個(gè)中方格的紅細(xì)胞個(gè)中方格，平均每個(gè)中方格的紅細(xì)胞為為8080個(gè)，試報(bào)告該標(biāo)本的個(gè)，試報(bào)告該標(biāo)本的RBCRBC計(jì)數(shù)結(jié)果。計(jì)數(shù)結(jié)果。 作業(yè)胡建新第三節(jié) 血紅蛋白測(cè)定一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定二、其他測(cè)定方法學(xué)習(xí)目標(biāo)敘述血紅蛋白敘述血紅蛋白HiCN法的原理、操作、法的原理、操作、注意事項(xiàng)。注意事項(xiàng)。說出說出HiCN轉(zhuǎn)化液的成分及作用。轉(zhuǎn)化液的成分及作用。概述十二烷基硫酸鈉概述十二烷基硫酸鈉.堿羥高鐵血紅素堿羥高鐵血紅素血紅蛋白測(cè)定方法。血紅蛋白測(cè)定方法。 HiCN的吸收光譜與的吸收光譜與Hi、HbO2、HbCO、Hbred等的吸收光譜有何不同等的吸收光譜有

15、何不同？答案答案：（1 1）顏色不同）顏色不同（2 2）吸收峰波長(zhǎng)不同）吸收峰波長(zhǎng)不同（3 3）穩(wěn)定性不同）穩(wěn)定性不同復(fù)習(xí)舊課第三節(jié) 血紅蛋白測(cè)定【定義【定義】 Hb測(cè)定包括濃度測(cè)定和質(zhì)量測(cè)定。本測(cè)定包括濃度測(cè)定和質(zhì)量測(cè)定。本單元是指測(cè)定血液中各種血紅蛋白的總濃單元是指測(cè)定血液中各種血紅蛋白的總濃度，用表示。度，用表示。 第三節(jié) 血紅蛋白測(cè)定【方法【方法】比密法比密法 氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法比色法比色法 十二烷基硫酸鈉法十二烷基硫酸鈉法 堿羥高鐵血紅素法堿羥高鐵血紅素法 血氧結(jié)合力法血氧結(jié)合力法 全血鐵法全血鐵法 一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法 HiCN法：法：ICSH推薦推

16、薦 WHO確認(rèn)的參考方法確認(rèn)的參考方法 我國(guó)推薦為首選方法我國(guó)推薦為首選方法原 理表面活性劑溶解紅細(xì)胞膜，釋放血紅蛋白。血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白（），在一定的值下，與氰離子（）結(jié)合生成穩(wěn)定棕紅色氰化高鐵血紅蛋白（iC）。 i在540處有一吸收峰，測(cè)定其吸光度，可求得血紅蛋白濃度（ ）。 一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法RBC表面活性劑表面活性劑HbK3Fe(CN)6HiCN-HiCN540nm比色比色吸光度吸光度AHb(g/L)計(jì)算計(jì)算一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法試劑試劑文齊血紅蛋白轉(zhuǎn)化液文齊血紅蛋白轉(zhuǎn)化液 氰化鉀氰化鉀 提供提供CN離子離子高鐵氰化鉀高鐵氰化鉀

17、 氧化劑氧化劑無水磷酸二氫鉀無水磷酸二氫鉀 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHTriton X-100（非離子表面活性劑）加速溶血、防止渾濁（非離子表面活性劑）加速溶血、防止渾濁蒸餾水蒸餾水 配成后用濾紙過濾，置配成后用濾紙過濾，置棕色玻瓶棕色玻瓶中（不能中（不能用塑料瓶?。?，塞緊后保存于冷暗處，用塑料瓶！），塞緊后保存于冷暗處，勿使結(jié)冰勿使結(jié)冰，可保存數(shù)月。可保存數(shù)月。 此液應(yīng)呈透明、淡黃色，在此液應(yīng)呈透明、淡黃色，在.0.4之之間，以蒸餾水作空白，用間，以蒸餾水作空白，用540nm比色，吸光度應(yīng)比色，吸光度應(yīng)0.001。若。若變渾、變綠或發(fā)生混濁變渾、變綠或發(fā)生混濁則應(yīng)廢棄。則應(yīng)廢棄。一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法

18、一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法操作 取指血20l，加入5ml轉(zhuǎn)化液中，充分混勻，靜置5min。 用分光光度計(jì)（帶寬應(yīng)小于8 m）比色。波長(zhǎng)540nm，光徑（比色杯內(nèi)徑）1.000cm，以轉(zhuǎn)化液或蒸餾水為空白，測(cè)定其吸光度“”。 一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法 操 作加轉(zhuǎn)化液: 5ml 采血: 20l 靜置：混勻后放置5min 比色： =540 nm，比色杯1.000cm,轉(zhuǎn)化液 （蒸餾水）為空白，測(cè)A值 一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法計(jì)算：分光光度計(jì)符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)式中： 64458是目前國(guó)際公認(rèn)的血紅蛋白平均分子量。 44000是 1965年國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）公布的血紅蛋白摩爾吸光度。 25

19、1是稀釋倍數(shù)。7 .3672514400064458)/(ALgHb測(cè)定管吸光度在實(shí)際工作中，通常沒有在實(shí)際工作中，通常沒有符合標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)。符合標(biāo)準(zhǔn)的分光光度計(jì)。所得吸光度不是偏高就所得吸光度不是偏高就是偏低，因此不能用分光是偏低，因此不能用分光光度法直接引用消光系數(shù)光度法直接引用消光系數(shù)計(jì)算。計(jì)算。一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法 分光光度計(jì)不符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，結(jié)果不能直接計(jì)算得出，可采用的方法為： 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 K值法一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法 i標(biāo)準(zhǔn)曲線制備用HICN標(biāo)準(zhǔn)液在所用的分光光度計(jì)或光電比色計(jì)上，分別測(cè)定其吸光度（A），以為縱坐標(biāo)，血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液的參考值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或

20、求出K值，以后根據(jù)測(cè)定管吸光度即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出Hb濃度值。 一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法 K值法專用血紅蛋白儀測(cè)定法 依據(jù)氰化高鐵血紅蛋白比色法的專用血紅蛋白儀，采用交流蠕動(dòng)泵自動(dòng)進(jìn)液排液，流動(dòng)比色池微量比色，半導(dǎo)體冷光源及光電轉(zhuǎn)換器件，電子線路采用模擬橋式光電轉(zhuǎn)換。信號(hào)經(jīng)處理放大，送至模/數(shù)轉(zhuǎn)換液晶顯示器，直接顯示出所測(cè)血紅蛋白濃度值（/）。測(cè)試速度快，操作簡(jiǎn)便，更適合于臨床。一、氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法操作按說明調(diào)試好儀器。取全血20u，加入5ml HICN轉(zhuǎn)換液中，混勻，靜置5min，吸入儀器測(cè)定，待顯示屏上的數(shù)字穩(wěn)定不跳動(dòng)時(shí)，此讀數(shù)即為該血樣的值

21、。專用血紅蛋白儀測(cè)定法方法學(xué)評(píng)價(jià)主要優(yōu)點(diǎn)：主要優(yōu)點(diǎn)：1操作簡(jiǎn)便。操作簡(jiǎn)便。2試劑較穩(wěn)定，易保存，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。試劑較穩(wěn)定，易保存，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。3血標(biāo)本中的血紅蛋白（除血標(biāo)本中的血紅蛋白（除SHb外）在轉(zhuǎn)化液外）在轉(zhuǎn)化液的作用下能迅速被轉(zhuǎn)化為的作用下能迅速被轉(zhuǎn)化為HiCN，且，且HiCN穩(wěn)定穩(wěn)定便于測(cè)定。便于測(cè)定。4HiCN參考品可長(zhǎng)期保存，便于質(zhì)控。參考品可長(zhǎng)期保存，便于質(zhì)控。方法學(xué)評(píng)價(jià)缺點(diǎn)與不足：缺點(diǎn)與不足：1試劑含劇毒品氰化鉀，使用、處理不當(dāng)可能試劑含劇毒品氰化鉀，使用、處理不當(dāng)可能污染環(huán)境，引起公害。污染環(huán)境，引起公害。2對(duì)碳氧血紅蛋白（對(duì)碳氧血紅蛋白（HbCO）轉(zhuǎn)化太慢。）轉(zhuǎn)化太慢。

22、3不能轉(zhuǎn)化硫化血紅蛋白（不能轉(zhuǎn)化硫化血紅蛋白（SHb）。）。4遇高白細(xì)胞和高球蛋白血癥的血標(biāo)本會(huì)出現(xiàn)遇高白細(xì)胞和高球蛋白血癥的血標(biāo)本會(huì)出現(xiàn)渾濁，標(biāo)本或試劑應(yīng)經(jīng)處理后才能比色。渾濁，標(biāo)本或試劑應(yīng)經(jīng)處理后才能比色。 1可由指血直接測(cè)定，耳血結(jié)果偏高?？捎芍秆苯訙y(cè)定，耳血結(jié)果偏高。靜脈血可按每毫升血靜脈血可按每毫升血 1.5mgEDTA二鈉的比二鈉的比例抗凝，不可用肝素抗凝（可致混濁）。例抗凝，不可用肝素抗凝（可致混濁）。注意事項(xiàng) 有條件的單位應(yīng)校正分光光度計(jì)的有條件的單位應(yīng)校正分光光度計(jì)的波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、波長(zhǎng)重復(fù)性、譜帶半寬度波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、波長(zhǎng)重復(fù)性、譜帶半寬度（狹縫）。雜散光、光度線性和比色杯光（狹

23、縫）。雜散光、光度線性和比色杯光徑。徑。注意事項(xiàng) 專用血紅蛋白儀、標(biāo)準(zhǔn)曲線或值專用血紅蛋白儀、標(biāo)準(zhǔn)曲線或值應(yīng)定期檢查、校正。專用血紅蛋白儀零點(diǎn)應(yīng)定期檢查、校正。專用血紅蛋白儀零點(diǎn)漂移絕對(duì)值超過漂移絕對(duì)值超過 2/，需重新調(diào)零。分，需重新調(diào)零。分光光度計(jì)必須有良好的線性才可用光光度計(jì)必須有良好的線性才可用 值法。值法。注意事項(xiàng) 轉(zhuǎn)化液（文齊氏液）轉(zhuǎn)化液（文齊氏液）p應(yīng)穩(wěn)定應(yīng)穩(wěn)定7.20.2，放置在，放置在棕色硼硅有塞玻璃瓶中，棕色硼硅有塞玻璃瓶中，20室溫保存，冰箱保存穩(wěn)定時(shí)間更長(zhǎng)，室溫保存，冰箱保存穩(wěn)定時(shí)間更長(zhǎng)，但勿使結(jié)冰，不然會(huì)使但勿使結(jié)冰，不然會(huì)使Fe（CN）6失效。失效。放白色瓶、塑料瓶

24、和強(qiáng)光照射會(huì)使放白色瓶、塑料瓶和強(qiáng)光照射會(huì)使CN-下下降，結(jié)果偏低。降，結(jié)果偏低。注意事項(xiàng) 轉(zhuǎn)化液中轉(zhuǎn)化液中KCN是劇毒藥品，極不安是劇毒藥品，極不安全，也污染環(huán)境。這是全，也污染環(huán)境。這是iC法的缺點(diǎn)。法的缺點(diǎn)。KCN必須按劇毒藥品管理規(guī)定保存，在配必須按劇毒藥品管理規(guī)定保存，在配制和保存過程中應(yīng)提高警惕，防止污染。制和保存過程中應(yīng)提高警惕，防止污染。用后廢液應(yīng)分散稀釋處理，或按每升加次用后廢液應(yīng)分散稀釋處理，或按每升加次氯酸鈉液氯酸鈉液35混勻后敞開過夜，使混勻后敞開過夜，使CN一一氧化成氧化成CO2和和2。揮發(fā)后，再排入下水道。揮發(fā)后，再排入下水道。 注意事項(xiàng) 高丙種球蛋白血癥、變性血紅

25、蛋白血高丙種球蛋白血癥、變性血紅蛋白血癥和白細(xì)胞特高的病例都可出現(xiàn)混濁，可于癥和白細(xì)胞特高的病例都可出現(xiàn)混濁，可于每升試劑中加氯化鈉每升試劑中加氯化鈉15g甚至甚至50g防止混濁。防止混濁。 但高濃度有核紅細(xì)胞所致混濁尚不能防止。但高濃度有核紅細(xì)胞所致混濁尚不能防止。 注意事項(xiàng)質(zhì)量控制1.氰化高鐵血紅蛋白參考液的純度檢查：氰化高鐵血紅蛋白參考液的純度檢查： 1）波峰）波峰540 nm, 波谷波谷504nm； 2) A540/A504：1.591.63； 3）A710800 Fe+ E.HbO2 可轉(zhuǎn)化為HiCN目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 13.對(duì)于HiCN的描述,有錯(cuò)的是: A.為Hb衍生物 B.呈

26、棕紅色 C.吸收峰在540nm D.穩(wěn)定性較差 E.只有一較寬的吸收光帶 目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 14.下列哪種試劑可用于紅細(xì)胞稀釋液: A.碳酸銨 B.碳酸氫鈉 C.氯化汞 D.鐵氰化鉀 E.以上都不行目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 15.采用HiCN參考標(biāo)準(zhǔn)液是因?yàn)? A.儀器的差異 B.技術(shù)誤差 C.操作方便 D.快速 E.以上均不對(duì) 目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 16.對(duì)Hb的描述,除哪一條件,均正確: A.由4條多肽鏈組成 B.為結(jié)合蛋白質(zhì) C.含有4個(gè)Fe+原子 D.每克含鐵3.47mg E.每克結(jié)合氧1.39ml 目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 17.對(duì)于轉(zhuǎn)化液的要求,有錯(cuò)的是: A.淡黃透明 B.貯存于棕色

27、瓶 C.不能偏堿 D.不宜用塑料瓶裝 E.變深后不宜再用目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 18.下述哪種試劑不能用于HiCN轉(zhuǎn)化液: A.亞鐵氰化鉀 B.氰化鉀 C.磷酸二氫鉀 D.Triton X-100 E.O-P乳化劑目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 19.關(guān)于RBC正確的是: A.只需將血液稀釋 B.通常稀釋20倍 C.在鏡下計(jì)數(shù)四角大格 D.報(bào)告: .1012/L E.計(jì)數(shù)域誤差較WBC大目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 20.血細(xì)胞計(jì)數(shù)池充液后,數(shù)RBC用的中方格體積是: A. 0.4l B. 0.1l C. 0.04l D. 0.01l E. 0.004l目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 21.RBC液(顯微鏡計(jì)數(shù)法)中最主要

28、成分: A.氯化鈉 B.硫酸鈉 C.氯化汞 D.氯化低汞 E.碳酸鈉目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 22.除哪一條件,均可使RBC的結(jié)果偏高: A.混入酵母菌 B.白細(xì)胞過高 C.管尖外血液未擦凈 D.稀釋液蒸發(fā) E.血液凝固目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 23.HiCN正確的是: A. 高濃度有核紅細(xì)胞混濁可加NaCl防止 B. OP乳化劑可代替TritonX-100 C. 轉(zhuǎn)化液不能偏鹼 D. 轉(zhuǎn)化液用棕色瓶保存胡建新第五節(jié) 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 一、網(wǎng)織紅細(xì)胞概述 二、網(wǎng)織紅細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)1.描述網(wǎng)織紅細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)描述網(wǎng)織紅細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)2.敘述網(wǎng)織紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)方法和注意事敘述網(wǎng)織紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)方法和注意事項(xiàng)項(xiàng)3

29、.闡述網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義闡述網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義學(xué)習(xí)目標(biāo) 一、網(wǎng)織紅細(xì)胞概述 （一）概念 網(wǎng)織紅細(xì)胞：是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間尚未完全成熟的紅細(xì)胞，因其胞質(zhì)中殘存的核糖核酸經(jīng)堿性染料活體染色后呈現(xiàn)藍(lán)色點(diǎn)狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 活體染色：是指細(xì)胞未經(jīng)固定，在保持細(xì)胞生物活性的情況下加染料進(jìn)行染色的方法。（二）分型及形態(tài)特征 型：絲球型，無核紅細(xì)胞中央的嗜堿性物質(zhì)交織成密集的絲團(tuán)狀。（二）分型及形態(tài)特征 型：網(wǎng)型，無核紅細(xì)胞中央的絲團(tuán)狀結(jié)構(gòu)開始松散，呈疏松網(wǎng)眼狀結(jié)構(gòu)排列。（二）分型及形態(tài)特征 型：破網(wǎng)型，網(wǎng)織狀結(jié)構(gòu)開始減少，形成殘破不全的網(wǎng)狀。（二）分型及形態(tài)特征 型：點(diǎn)粒型，只有少數(shù)藍(lán)

30、色點(diǎn)狀顆粒（兩個(gè)以上），或極小的網(wǎng)狀殘余，散布于胞質(zhì)一側(cè)。網(wǎng)織紅細(xì)胞 I型型 絲球型絲球型型型 網(wǎng)型網(wǎng)型 型型 破網(wǎng)型破網(wǎng)型IV型型 顆粒型顆粒型經(jīng)瑞特染色復(fù)染的經(jīng)瑞特染色復(fù)染的網(wǎng)織紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞形態(tài)形態(tài)二、網(wǎng)織紅細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)原理煌焦油藍(lán)、新亞甲藍(lán)和天青等染料都是雜蒽的衍生物，雖然取代基不同，但都含有氨基，在水溶液中呈弱堿性，帶陽電荷，可與酸性基團(tuán)發(fā)生電偶合，特別是與核酸分子中的磷酸基結(jié)合，使膠體的電位發(fā)生變化，分子間排斥力下降，膠體分散力降 低而凝集成藍(lán)色顆粒。二、網(wǎng)織紅細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)試劑1.10g/L新亞甲藍(lán)（或煌焦油藍(lán)）生理鹽水溶液2.10g/L新亞甲藍(lán)ACD溶液3.新亞甲藍(lán)染液 試

31、劑試劑 新亞甲藍(lán)溶液 新亞甲藍(lán) 1 枸椽酸鹽生理鹽水（30g/枸椽酸鈉溶液份，9/ 氯化鈉溶液份，混合而成） 100 待染料溶解后過濾備用。試劑 .天青溶液 將新亞甲藍(lán)1改為天青 1， 其余與新亞甲藍(lán)溶液配制相同。二、網(wǎng)織紅細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù) 操作 加試劑：2滴 外周血：2滴 染色：混勻，371520min 制薄血片：取1滴制片，干燥后鏡檢操作 .試管法 （）于小試管中加煌焦油藍(lán)溶液2滴3滴，加外周血2滴3滴，混勻，塞緊管口，室溫置15min。 （）取上述混勻的細(xì)胞懸液1滴，推制薄血片。操作 （）低倍鏡選擇細(xì)胞分布均勻、著色清晰的部位，于目鏡內(nèi)加一圓形硬紙，中央開一約方孔，油鏡計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞

32、（包括網(wǎng)織紅細(xì)胞）中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，除以1000，即得網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)（103）。二、網(wǎng)織紅細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)%10010001000胞個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞1.直接計(jì)數(shù)法油鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)算:2.米勒窺盤法窺盤為一直徑19mm，厚1mm的圓形玻片，玻片上用微細(xì)刻線劃出大小兩個(gè)正方形格子，圖中大方格B的面積是小方格A的9倍。 將iller窺盤置于目鏡內(nèi)，油鏡計(jì)數(shù)大方格內(nèi)的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，同時(shí)計(jì)數(shù)小方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。然后移動(dòng)視野進(jìn)行同樣的觀察計(jì)數(shù)。 對(duì)壓線的紅細(xì)胞采取統(tǒng)一的計(jì)數(shù)原則：凡壓小方格下線、右線及右下角的一律不計(jì)數(shù)；凡壓上線、左線及左上角的一律計(jì)數(shù)。凡壓大方格

33、下線、右線及右下角的網(wǎng)織紅細(xì)胞一律不計(jì)數(shù)；凡壓上線、左線及左上角的一律計(jì)數(shù)。5個(gè)大方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)均值5個(gè)小方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)均值9注意 由于本法是用1/9面積推斷整個(gè)大方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，所以細(xì)胞分布必須很均勻，否則會(huì)得出錯(cuò)誤的結(jié)果。判斷方法及標(biāo)準(zhǔn)如下：2.米勒窺盤法%1009小方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)大方格內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)當(dāng)小方格內(nèi)計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞達(dá)到111時(shí)，即相當(dāng)于至少觀察了1000個(gè)紅細(xì)胞，計(jì)錄在此過程中計(jì)數(shù)到的所有網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。計(jì)數(shù)10個(gè)視野小方格中紅細(xì)胞數(shù)是120個(gè)，同時(shí)計(jì)數(shù)大方格中網(wǎng)織紅細(xì)胞總數(shù)為16個(gè)，如何報(bào)告結(jié)果？解： 網(wǎng)織紅細(xì)胞%16/（1209）100 1.5%請(qǐng)您練習(xí)請(qǐng)您練習(xí)

34、計(jì)數(shù)10個(gè)視野小方格中紅細(xì)胞數(shù)是102個(gè)，同時(shí)計(jì)數(shù)大方格中網(wǎng)織紅細(xì)胞總數(shù)為15個(gè)，請(qǐng)報(bào)告網(wǎng)紅結(jié)果？答案： 網(wǎng)織紅細(xì)胞%15/（1029）100 1.63% 1.網(wǎng)織紅細(xì)胞相對(duì)值：百分率或分?jǐn)?shù)數(shù)。網(wǎng)織紅細(xì)胞相對(duì)值：百分率或分?jǐn)?shù)數(shù)。 2.網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值: 紅細(xì)胞濃度數(shù)紅細(xì)胞濃度數(shù)(1012/L)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù) 3.網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)（網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)（RPI）: 45. 02患者紅細(xì)胞比容網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)RPI _紅細(xì)胞比容（紅細(xì)胞比容（L/L） 網(wǎng)紅成熟時(shí)間（天）網(wǎng)紅成熟時(shí)間（天） - 0.45 1 0.35 1.5 0.25 2 0.15 2.5 -網(wǎng)織紅

35、細(xì)胞成熟時(shí)間與紅細(xì)胞比積的關(guān)系 己知一患者網(wǎng)紅分?jǐn)?shù)數(shù)為己知一患者網(wǎng)紅分?jǐn)?shù)數(shù)為0.045，紅細(xì)胞比積，紅細(xì)胞比積為為0.35，求網(wǎng)紅生成指數(shù)是多少？，求網(wǎng)紅生成指數(shù)是多少？ 解：查表得紅細(xì)胞比積為解：查表得紅細(xì)胞比積為0.35時(shí)，網(wǎng)紅成熟時(shí)時(shí)，網(wǎng)紅成熟時(shí)間為間為1.5天，代入公式天，代入公式 答案答案： RPI=0.045/1.50.35/0.45 =0.023請(qǐng)您練習(xí)注意事項(xiàng) 1.靜脈血標(biāo)本在4小時(shí)內(nèi)完成計(jì)數(shù)。 2.需活體染色。 3.血液與染液的比1：1。注意事項(xiàng) 4.染色時(shí)間要充足，溫度應(yīng)控制在37。 5.涂片應(yīng)薄而均勻。 6.網(wǎng)織紅細(xì)胞偏低時(shí)可增加計(jì)數(shù)至20003000個(gè)。 7.瑞特染液復(fù)

36、染或二甲苯擦血膜可使結(jié)果偏低。臨床意義 .正常參考值正常參考值 網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)： 成成 人：人：0.0050.015 新生兒：新生兒：0.030.06 兒兒 童：童：0.0050.015 網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值：網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值： 成人：（成人：（2484）109/L臨床意義 2. 臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 （1）判斷骨髓紅細(xì)胞系增生情況）判斷骨髓紅細(xì)胞系增生情況 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)增加：增生性貧血。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)增加：增生性貧血。 網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：網(wǎng)織紅細(xì)胞減少： 再障、白血病等。再障、白血病等。 （2）觀察貧血療效的指標(biāo)）觀察貧血療效的指標(biāo) （3）監(jiān)測(cè)骨髓移植術(shù)后造血功能）監(jiān)測(cè)骨髓移植術(shù)

37、后造血功能 （4）監(jiān)測(cè)腫瘤放、化療后骨髓抑制及其恢復(fù)）監(jiān)測(cè)腫瘤放、化療后骨髓抑制及其恢復(fù)情況情況 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)增加 表示骨髓紅細(xì)胞系統(tǒng)增生旺盛，多見于各種增生性貧血。急性溶血性貧血時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞顯著升高，其數(shù)值可達(dá)20或更高。急性失血性貧血也較明顯增高，缺鐵性貧血和巨幼細(xì)胞性貧血常僅輕度增高。骨髓受白血病、癌腫等浸潤(rùn)時(shí)也呈不規(guī)則輕度增加，此系病理刺激所致，并不反映骨髓造血機(jī)能。網(wǎng)織紅細(xì)胞減少表示骨髓造血機(jī)能減退，常見于再生障礙性貧血，某些溶血性貧血發(fā)生再生障礙危象時(shí)可一過性明顯減少。觀察貧血療效缺鐵性貧血和巨幼細(xì)胞性貧血用鐵劑及維生素12、葉酸治療后，網(wǎng)紅迅速增加，周左右達(dá)到高峰。由于網(wǎng)紅增

38、加先于紅細(xì)胞和血紅蛋白增加，可用于療效評(píng)價(jià)。作為骨髓造血功能恢復(fù)的敏感指標(biāo) 骨髓移植和造血系統(tǒng)惡性腫瘤化療后，血小板、中性粒細(xì)胞、白細(xì)胞和網(wǎng)紅計(jì)數(shù)項(xiàng)指標(biāo)在移植后恢復(fù)的天數(shù)以網(wǎng)紅計(jì)數(shù)出現(xiàn)的最早（13.7天），可作為造血功能恢復(fù)的早期指標(biāo)。 紅細(xì)胞中殘存的紅細(xì)胞中殘存的嗜堿性物質(zhì)，在瑞特嗜堿性物質(zhì)，在瑞特染色血片中，呈均勻分染色血片中，呈均勻分布，染灰藍(lán)、紅藍(lán)等，布，染灰藍(lán)、紅藍(lán)等，稱為嗜多色性紅細(xì)胞稱為嗜多色性紅細(xì)胞。 如因職業(yè)中毒如因職業(yè)中毒NANA變性，呈散在的顆粒，變性，呈散在的顆粒，染淡藍(lán)色染淡藍(lán)色, , 稱為點(diǎn)彩紅稱為點(diǎn)彩紅細(xì)胞。細(xì)胞。嗜多色性紅細(xì)胞 二、儀器計(jì)數(shù)法 .流式細(xì)胞儀（FC

39、M）進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)FCM是高檔次的血細(xì)胞分析儀，是一種快速的單細(xì)胞定量分析儀器，F(xiàn)CM同CT一樣，被認(rèn)為是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中重要的診斷和科研工具。它可以測(cè)量細(xì)胞的生化成分，如DNA、RNA、蛋白質(zhì)、各種股成分及各種酶活性等。FCM測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞基本原理 某些染料（如Y啶橙）與網(wǎng)織紅細(xì)胞中的RNA結(jié)合，在FCM測(cè)定時(shí)發(fā)出特定顏色的熒光，進(jìn)行單參數(shù)定量。 不同階段的網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA的含量不同，通過FCM可以精確的測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率。自動(dòng)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀 測(cè)定原理 血液標(biāo)本計(jì)數(shù)前不經(jīng)固定和染色，標(biāo)本直接吸入儀器內(nèi)計(jì)數(shù)，以氫激光束為光源，堿性槐黃為染料與網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)的RNA結(jié)合，應(yīng)用鞘流原理使網(wǎng)織紅細(xì)

40、胞呈單行排列通過波長(zhǎng)488nm的激光束，測(cè)量散射光強(qiáng)度判斷細(xì)胞體積的大小，測(cè)量熒光強(qiáng)度顯示細(xì)胞內(nèi)RNA多少。 將儀器轉(zhuǎn)換到網(wǎng)紅計(jì)數(shù)將儀器轉(zhuǎn)換到網(wǎng)紅計(jì)數(shù)的操作程序，即可得到網(wǎng)紅的操作程序，即可得到網(wǎng)紅絕對(duì)值、百分比、平均體積、絕對(duì)值、百分比、平均體積、體積分布寬度、血紅蛋白濃體積分布寬度、血紅蛋白濃度、平均血紅蛋白濃度、血度、平均血紅蛋白濃度、血紅蛋白分布寬度及網(wǎng)紅分類紅蛋白分布寬度及網(wǎng)紅分類等多項(xiàng)參數(shù)。等多項(xiàng)參數(shù)。.血細(xì)胞分析儀檢測(cè)網(wǎng)織紅細(xì)胞 總結(jié) 網(wǎng)織紅細(xì)胞是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，分為四型。正常人外周血中大多是型（點(diǎn)粒型）。 傳統(tǒng)的網(wǎng)紅檢查方法是根據(jù)其胞質(zhì)內(nèi)殘存核糖體、核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，

41、經(jīng)新亞甲藍(lán)、煌焦油藍(lán)活體染色后而顯示出來。總結(jié) 檢查網(wǎng)紅的目的是了解骨髓紅細(xì)胞系統(tǒng)的增生情況。以判斷貪血類型，觀察貧血療效。因其數(shù)量變化十分敏感，可作為骨髓造血功能恢復(fù)的敏感指標(biāo)。 正常成人參考值為0.0050.015想一想 說出HiCN法測(cè)定Hb的優(yōu)點(diǎn)和不足。 說出紅細(xì)胞及血紅蛋白病理性減少的原因。 什么是網(wǎng)織紅細(xì)胞？可分為幾型？ 有何臨床應(yīng)用？第六節(jié) 血細(xì)胞比容測(cè)定 一、溫氏管法 二、毛細(xì)管法 三、臨床意義說出紅細(xì)胞比容的測(cè)定原理、方法和臨床意義。概括紅細(xì)胞直徑測(cè)定方法和直徑曲線變化的臨床意義。能夠計(jì)算紅細(xì)胞平均值并分析臨床意義。學(xué)習(xí)目標(biāo)定義與方法紅細(xì)胞比容紅細(xì)胞比容(Hct(Hct、PC

42、V) PCV) ：紅細(xì)胞在血液中所占：紅細(xì)胞在血液中所占容積的比值。容積的比值。 手工離心法：毛細(xì)管法、溫氏法手工離心法：毛細(xì)管法、溫氏法測(cè)定方法測(cè)定方法 血細(xì)胞分析儀法血細(xì)胞分析儀法一、溫氏管法 原理原理 定量抗凝血定量抗凝血溫氏管溫氏管離心離心觀察壓觀察壓實(shí)紅細(xì)胞實(shí)紅細(xì)胞高度高度求得求得紅細(xì)胞的容積紅細(xì)胞的容積/ /血液容積：血液容積：即為即為HctHct。1. 1. 溫氏紅細(xì)胞比容管溫氏紅細(xì)胞比容管2. 2. 長(zhǎng)毛細(xì)滴管長(zhǎng)毛細(xì)滴管 3. 3. 水平式離心機(jī)水平式離心機(jī) 4. 4. 干燥抗凝管干燥抗凝管 器材和試劑操 作 采血：靜脈血采血：靜脈血2ml2ml，EDTA-KEDTA-K2 2

43、或肝素鈉抗凝或肝素鈉抗凝 加樣：加樣：用細(xì)長(zhǎng)毛細(xì)滴管將抗凝血加至比容用細(xì)長(zhǎng)毛細(xì)滴管將抗凝血加至比容管刻度管刻度“10”10”處處 操 作 離心：離心：RCFRCF為為2264g2264g，時(shí)間為，時(shí)間為30 min30 min。 讀數(shù)：紅細(xì)胞層高度讀數(shù)：紅細(xì)胞層高度 操 作 再離心：同樣RCF，10min 讀數(shù)：紅細(xì)胞層柱高度 計(jì)算：Hct值離心后的血液分五層 血漿層血漿層 血小板層血小板層 有核細(xì)胞層有核細(xì)胞層 還原紅細(xì)胞層還原紅細(xì)胞層 帶氧紅細(xì)胞層帶氧紅細(xì)胞層注意事項(xiàng)1.器材清潔干燥。2.抗凝劑應(yīng)對(duì)紅細(xì)胞體積無影響且溶解迅速。 3.血漿若有黃疸、溶血現(xiàn)象應(yīng)注明。4.離心條件必須恒定。本試驗(yàn)

44、要求的相對(duì)離心力是2264g，離心時(shí)間為30分鐘。注意事項(xiàng) 相對(duì)離心力（RCF）g 1.11810-5有效離心半徑（cm） 每分鐘轉(zhuǎn)速的平方（n2）有效離心半徑是指由離心機(jī)軸心至水平位置時(shí)管底的距離（）。例：有效離心半徑為22.5cm，要求RCF為2264g時(shí)，每分鐘離心速度是：練習(xí) 亦可由相對(duì)亦可由相對(duì)離心力計(jì)算圖查出離心力計(jì)算圖查出所需離心速度。所需離心速度。 在左側(cè)找出離心在左側(cè)找出離心半徑，右側(cè)找出每半徑，右側(cè)找出每分鐘轉(zhuǎn)速，將兩點(diǎn)分鐘轉(zhuǎn)速，將兩點(diǎn)連成一條直線，與連成一條直線，與中間相交的一點(diǎn)為中間相交的一點(diǎn)為相對(duì)離心力。相對(duì)離心力。 二、毛細(xì)管法 原理 定量的抗凝血特制的毛細(xì)管高速離

45、心機(jī)離心沉淀觀察壓實(shí)的紅細(xì)胞層的高度求得每升血液中紅細(xì)胞與全血的容積比：即為Hct。二、毛細(xì)管法 器材和試劑 1.專用高速離心機(jī) 2.一次性使用的專用毛細(xì)管 3.毛細(xì)管密封膠 4.刻度讀數(shù)器 5.抗凝劑：肝素或EDTA-K2二、毛細(xì)管法 準(zhǔn)備：抗凝劑處理毛細(xì)管準(zhǔn)備：抗凝劑處理毛細(xì)管 吸血：血液吸入毛細(xì)管內(nèi)吸血：血液吸入毛細(xì)管內(nèi) 606065mm 65mm 處處 混勻混勻 封口封口二、毛細(xì)管法 操作 編號(hào) 離心：12000r/min，5 min。 讀數(shù)：用刻度讀數(shù)器測(cè)量紅細(xì)胞比容的讀數(shù) 計(jì)算刻度讀數(shù)器測(cè)量紅細(xì)胞比容刻度讀數(shù)器測(cè)量紅細(xì)胞比容 注意事項(xiàng) 1.末梢血采血應(yīng)防止混入組織液。 2.靜脈血標(biāo)

46、本收集后擱置時(shí)間不可超過6小時(shí)。 3.同一標(biāo)本的兩次測(cè)量結(jié)果之差不可大于0.015。 4.毛細(xì)管不能用燒熔的方法密封。 5.嚴(yán)格控制離心條件。 6.讀數(shù)應(yīng)盡量避免視差，不能將白細(xì)胞和血小板層的高度算入 正常參考值 成年男性0.3800.508L/L 成年女性0.3350.450L/L 兒童0.350.49L/L 新生兒0.490.54L/L 微量法較溫氏法平均低12三、臨床意義臨床意義1.紅細(xì)胞比容增高 生理性增高：見于紅細(xì)胞生理性增多的情況。 病理性增高：見于真性紅細(xì)胞增多癥、血液濃縮。臨床意義2.紅細(xì)胞比容減低 見于各種貧血時(shí)。3.紅細(xì)胞比容可作為計(jì)算靜脈補(bǔ)液量的指標(biāo)。4.紅細(xì)胞比容可用于

47、紅細(xì)胞平均值中的計(jì)算。5. 紅細(xì)胞比容可作為判斷全血粘度的指標(biāo)。臨床意義通過比容測(cè)定可決定是否需要靜脈輸液及輸液量。例：一男性腹瀉病人測(cè)得HCT為0.62L/L（62%），問每升血容量應(yīng)補(bǔ)液多少升？解：由0.620.49（1X）得 補(bǔ)液量0.620.491 0.26（升）總 結(jié) 1.紅細(xì)胞比容測(cè)定，是將定量的抗凝血置于比積管中，用一定速度（相對(duì)離心力2246g）和時(shí)間（30min）離心沉淀，由此獲得壓實(shí)紅細(xì)胞和上層血漿體積的比值的測(cè)定方法。 2.所用抗凝劑不能影響和改變紅細(xì)胞體積?？?結(jié) 3.離心條件要恒定。離心半徑不同的離心機(jī)轉(zhuǎn)速應(yīng)測(cè)算確定。 4.讀取紅細(xì)胞層的柱高以還原紅細(xì)胞層表面為準(zhǔn)，其

48、毫米數(shù)乘以0.01，即為每升血液中紅細(xì)胞體積的升數(shù)，以L/L為單位報(bào)告結(jié)果。總 結(jié) 5.HCT參考值隨性別和年齡有一定變化幅度。 6.HCT主要用于診斷貧血和判斷貧血類型，了解血液粘度，輸液時(shí)確定劑量等。第七節(jié) 紅細(xì)胞直徑測(cè)量 一、測(cè)微計(jì)的校正 二、紅細(xì)胞直徑的測(cè)量方法 三、臨床意義 （一）測(cè)微計(jì)的組成一、測(cè)微計(jì)的校正1.目鏡測(cè)微計(jì) 為一個(gè)直徑1820mm，圓形玻璃片，中央刻有精確等距離的平行線刻度，一般有50或100等分格。2.鏡臺(tái)測(cè)微計(jì)是一種特制的載玻片，正中有一圓形蓋片封有標(biāo)準(zhǔn)尺，總長(zhǎng)為1mm，被劃分為100等分，每一小格長(zhǎng)為10m。（二）目鏡測(cè)微計(jì)的校正1. 將目鏡測(cè)微計(jì)有刻度一面向下

49、裝入目鏡筒。2. 將鏡臺(tái)測(cè)微計(jì)有刻度一面朝上放在載物臺(tái)上夾好，使標(biāo)準(zhǔn)尺位于視野中央。（二）目鏡測(cè)微計(jì)的校正3.換用測(cè)量被測(cè)物所用的物鏡頭。4. 使兩種測(cè)微計(jì)的刻度平行，先使左邊的“0”刻度重合，然后由左向右找出尋找另一次重合的刻度。5.記錄兩刻度的讀數(shù)，并根據(jù)比值計(jì)算出在此條件下目鏡測(cè)微計(jì)每小格所相當(dāng)?shù)拈L(zhǎng)度（）。 目鏡測(cè)微計(jì)的校正目鏡測(cè)微計(jì)的校正（二）目鏡測(cè)微計(jì)的校正二、紅細(xì)胞直徑測(cè)量方法 紅細(xì)胞直徑測(cè)量：即在顯微鏡下用專用的測(cè)微計(jì)測(cè)量一定數(shù)量的紅細(xì)胞直徑。根據(jù)測(cè)得直徑數(shù)據(jù)，可計(jì)算出紅細(xì)胞平均直徑，繪制紅細(xì)胞直徑分布曲線（Price-Jones曲線），從而了解紅細(xì)胞大小的變化，可判斷紅細(xì)胞形態(tài)

50、有無改變，從而對(duì)貧血類型的鑒別有一定的意義。原理 用已經(jīng)校正目鏡測(cè)微計(jì)，在顯微鏡下測(cè)量一定數(shù)量紅細(xì)胞的直徑。求出紅細(xì)胞的平均直徑（MCD），并繪制紅細(xì)胞直徑曲線。【操作】制備薄血片制備薄血片選擇合適區(qū)域選擇合適區(qū)域測(cè)量紅細(xì)胞直徑：測(cè)量紅細(xì)胞直徑：200200500500個(gè)個(gè) 計(jì)算平均直徑計(jì)算平均直徑繪制繪制P-JP-J曲線曲線P-J曲線注意事項(xiàng) 1.血片要求厚薄均勻，較白細(xì)胞分類血片略薄，紅細(xì)胞無重疊和皺縮變形。 2. 應(yīng)依次測(cè)量紅細(xì)胞直徑，不可任意取舍，對(duì)異形紅細(xì)胞，應(yīng)測(cè)量其長(zhǎng).短徑，取其平均值。 3.目鏡測(cè)微計(jì)一經(jīng)校正，就不得更換物鏡。 4. 鏡臺(tái)測(cè)微計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)尺因油鏡放大而成粗線，目鏡測(cè)微

51、計(jì)放大倍數(shù)較小而呈細(xì)線，細(xì)線重合在粗線上的位置應(yīng)前后一致。三、臨床意義 1.正常人及正常細(xì)胞性貧血紅細(xì)胞直徑曲線特征 紅細(xì)胞直徑范圍在6.09.0之間，平均直徑7.2左右；曲線頂峰在78之間，基底部窄，呈尖峰狀。三、臨床意義 2.大細(xì)胞性貧血紅細(xì)胞直徑曲線特征 紅細(xì)胞直徑增大，MCD 7.49.6，曲線頂峰右移，基底部明顯增寬，多見于巨幼細(xì)胞性貧血等。三、臨床意義 3.小細(xì)胞素性貧血紅細(xì)胞直徑曲線特征 紅細(xì)胞直徑減少，MCD 6.26.7，曲線頂峰左移，基底部增寬。見于缺鐵性貧血和單純小細(xì)胞性貧血等。第八節(jié) 計(jì)算紅細(xì)胞平均值 一、平均紅細(xì)胞體積 二、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量 三、平均紅細(xì)胞血紅蛋

52、白濃度 四、臨床意義 flflMCV個(gè)每升血液紅細(xì)胞數(shù)每升血液中紅細(xì)胞比容1510一、平均紅細(xì)胞體積平均紅細(xì)胞體積（MCV）：是指每個(gè)紅細(xì)胞的平均體積。以飛升（fl）為單位，1L=1015 fl。 pgpggMCH個(gè)每升血液紅細(xì)胞數(shù)濃度每升血液中的血紅蛋白1210二、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）：是指每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)所含血紅蛋白的平均量。以皮克（pg）為單位，1g1012 pg三、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）：是指平均每升紅細(xì)胞中所含血紅蛋白濃度（g/L）。LgLgMCHC/每升血液紅細(xì)胞比容克數(shù)每升血液中的血紅蛋白四、臨床意義 貧血類型 MC

53、V (fl) MCH (pg) MCHC(g/L) 正常細(xì)胞性貧血 正常 正常 正常 大細(xì)胞性貧血 正常 正常 正常 單純小細(xì)胞性 貧血 正常 正常 正常 小細(xì)胞低色素 性貧血 正常 正常 正常例題紅細(xì)胞3.61012，紅細(xì)胞比積0.393/L，求MCV并判斷是否正常。解： MCV0.39210153.61012 109（fL）答：由于結(jié)果92fL，不正常。 例題 紅細(xì)胞 3.61012。血紅蛋白136g。求MCH并判斷結(jié)果正常與否？ 解： 13610123.61012 38pg 答：計(jì)算結(jié)果31pg，不在正常范圍內(nèi)例題血紅蛋白136g/L，紅細(xì)胞比積0.392L/L，求MCHC并判斷結(jié)果是否

54、正常？解： MCHC1360.392 347g/L答：計(jì)算結(jié)果在正常范圍內(nèi)。綜合練習(xí)己知一患者的紅細(xì)胞為4.11012/L；血紅蛋白為128g/L；紅細(xì)胞比積為0.39L/L，求紅細(xì)胞的三個(gè)平均值是多少？答案：MCV0.3910154.11012 95fLMCH12810124.11012 31.22pgMCHC1280.39 328g/L注意在正常細(xì)胞性貧血時(shí)，其紅細(xì)胞平均直徑及其曲線圖形與正常相同。想一想比較紅細(xì)胞比容測(cè)定的兩種方法？如何校正目鏡測(cè)微計(jì)？如何根據(jù)紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白量和紅細(xì)胞比容計(jì)算紅細(xì)胞平均值？如何根據(jù)紅細(xì)胞平均值判斷貧血的類型？大細(xì)胞性、正常細(xì)胞性、單純大細(xì)胞性、正常細(xì)胞

55、性、單純小細(xì)胞性和小細(xì)胞低色素性小細(xì)胞性和小細(xì)胞低色素性目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 1.紅細(xì)胞的三個(gè)平均值（MCV、MCH、MCHC）是依據(jù)RBC、Hb、HCT數(shù)據(jù)按一定方式計(jì)算出來的。根據(jù)三個(gè)平均值可將貧血按形態(tài)學(xué)改變分成（ ）四種類型。目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 2.MCV2.MCV通過（通過（ ）計(jì)算）計(jì)算單位是（單位是（ ）參考值是（）參考值是（ ），增大示紅細(xì)胞（），增大示紅細(xì)胞（ ）。）。HCT和和RBC飛升飛升82-92 fL體積變大體積變大目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正 3.MCH通過（ ）計(jì)算，單位是（ ），參考值是（ ），增加示紅細(xì)胞中（ ），常與平均值中的（ ）變化相同。Hb和和RBC皮克皮克

56、2731Pg血紅蛋白增多血紅蛋白增多MCV目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正4.MCHC通過（ ）計(jì)算，單位是（ ），參考值為（ ）。減小示紅細(xì)胞呈（ ）。Hb和和HCT克克/升升320360g/l低色素性變化低色素性變化潑潑-瓊氏曲線瓊氏曲線直徑微米數(shù)直徑微米數(shù)7um-8um右移右移變寬變寬目標(biāo)形成性檢測(cè)與校正5.由紅細(xì)胞直徑測(cè)定數(shù)據(jù)繪制的曲線叫（ ）。橫軸是紅細(xì)胞的（ ），縱軸是紅細(xì)胞的百分率。正常人曲線頂峰在（ ）之間。巨幼紅細(xì)胞性貧血時(shí)，曲線頂峰將（ ），基底部明顯（ ）。第九節(jié) 紅細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)一、紅細(xì)胞大小異常二、紅細(xì)胞形態(tài)異常三、紅細(xì)胞染色異常四、紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常學(xué)習(xí)目標(biāo)1.描述異常紅細(xì)胞的形態(tài)特

57、點(diǎn)2.描述點(diǎn)彩紅細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)3.概述異常紅細(xì)胞的主要臨床意義 正常成熟紅細(xì)胞正常成熟紅細(xì)胞為兩面微凹的圓盤形，為兩面微凹的圓盤形，平均直徑平均直徑7.27.2，厚約，厚約2 2m m，無核，經(jīng)瑞特染色，無核，經(jīng)瑞特染色后，紅細(xì)胞呈粉紅色，后，紅細(xì)胞呈粉紅色，邊緣較深，中央著色較邊緣較深，中央著色較淡。淡。 各種貧血患者，紅細(xì)胞形態(tài)和著色有不同程度的改變，觀察成熟紅細(xì)胞形態(tài)，有助于貧血的診斷和鑒別診斷。 成熟紅細(xì)胞的形態(tài)改變，常見以下幾種類型。 1.1.小紅細(xì)胞小紅細(xì)胞 直徑小于直徑小于66稱小稱小紅細(xì)胞，正常人偶見。出紅細(xì)胞，正常人偶見。出現(xiàn)較多中央淡染區(qū)擴(kuò)大的現(xiàn)較多中央淡染區(qū)擴(kuò)大的小紅細(xì)胞

58、，提示血紅蛋白小紅細(xì)胞，提示血紅蛋白合成減少，多見于缺鐵性合成減少，多見于缺鐵性貧血。貧血。 一、大小異常一、大小異常大紅細(xì)胞大紅細(xì)胞直徑大于直徑大于1010稱為大稱為大紅細(xì)胞，有時(shí)中央淡染紅細(xì)胞，有時(shí)中央淡染區(qū)不明顯，見于巨幼細(xì)區(qū)不明顯，見于巨幼細(xì)胞性貧血。胞性貧血。.巨紅細(xì)胞直徑大于15者稱巨紅細(xì)胞，常見于巨幼細(xì)胞性貧血。肝臟疾病等。一、大小異常一、大小異常 紅細(xì)胞大小不均紅細(xì)胞大小不均 紅細(xì)胞之間直徑相差紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以上者稱為紅細(xì)胞一倍以上者稱為紅細(xì)胞大小不均，常見于增生大小不均，常見于增生性貧血及巨幼細(xì)胞性貧性貧血及巨幼細(xì)胞性貧血血。 二、形態(tài)異常2.橢圓形紅細(xì)胞呈長(zhǎng)橢圓形，甚至呈長(zhǎng)柱形，長(zhǎng)度大于寬度的3倍4倍。正常人偶見，但最多不超過。常見于遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥，可達(dá)2575，巨幼細(xì)胞貧血和惡性貧血時(shí)也常見。 二、形態(tài)異常二、形態(tài)異常二、形態(tài)異常紅細(xì)胞中央淡染區(qū)呈裂口狀狹孔。正常人紅細(xì)胞中央淡染區(qū)呈裂口狀狹孔。正常人，增高見于遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥，急性乙醇中，增高見于遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥，急性乙醇中毒和毒和DICDIC時(shí)也可見少量口形紅細(xì)胞。時(shí)也可見少量口形紅細(xì)胞。.鐮刀形紅細(xì)胞紅細(xì)胞狹長(zhǎng)似鐮刀，也有呈麥粒狀或冬青葉狀。主要見于Hb病。二、形態(tài)異常6.棘形紅細(xì)胞紅細(xì)胞表面帶有長(zhǎng)短不一的針刺狀或尖刺狀突起，其間距不規(guī)則，突起的