【3年高考2年模擬】2016屆高三生物一輪課件：第31講《傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)與微生物的應(yīng)用》

1、知識(shí)一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)一、果酒和果醋的制作1.制作原理與條件知識(shí)梳理知識(shí)梳理 果酒制作果醋制作菌種 酵母 菌 醋酸 菌原理無(wú)氧呼吸產(chǎn)生 酒精 (1)O2、糖源充足:糖 醋酸 (2)有O2、無(wú)糖:乙醇 乙醛 醋酸溫度酒精發(fā)酵 1825 最適為 3035 空氣前期: 需 氧后期: 不需 氧需充足的氧氣時(shí)間1012 d78 d2.制作流程3.葡萄酒呈現(xiàn)深紅色的原因是 紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液 。4.現(xiàn)在工廠生產(chǎn)果酒,為提高果酒的品質(zhì),更好地抑制其他微生物的生長(zhǎng),采取的措施是直接在果汁中加入 人工培養(yǎng) 的酵母菌。二、腐乳的制作1.菌種:主要是 毛霉 。2.原理(1)蛋白質(zhì)肽、氨基酸;(2)脂肪甘油+脂肪酸

2、3.腐乳的制作流程三、泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測(cè)定1.作用菌類: 假絲酵母和乳酸菌 。2.原料:白菜、洋白菜等。3.原理:假絲酵母和乳酸菌將糖轉(zhuǎn)化成 乳酸 和醇類。4.制作步驟5.亞硝酸鹽含量的測(cè)定(1)亞硝酸鹽的產(chǎn)生:由 假絲酵母 產(chǎn)生。(2)亞硝酸鹽的危害: 可轉(zhuǎn)變成致癌物亞硝胺 。(3)亞硝酸鹽含量測(cè)定:在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與 對(duì)氨基苯磺酸 發(fā)生重氮化反應(yīng)后,與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成 玫瑰紅色 產(chǎn)物,將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液進(jìn)行目測(cè)比較,大致估算出泡菜中亞硝酸鹽的含量。1.生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用十分廣泛,如果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作就是生活中常見(jiàn)的例子

3、。下圖是果酒制果醋的發(fā)酵裝置,分析回答下列問(wèn)題:(1)果酒制作中的原材料通常是葡萄,但對(duì)葡萄不能進(jìn)行反復(fù)沖洗,其原因是 。(2)在圖乙中遺漏了一個(gè)裝置,請(qǐng)以文字加以補(bǔ)充。(3)如果將該裝置改為酒精的發(fā)酵裝置,則溫度應(yīng)該控制在 。此時(shí)裝置需要修改的地方是 。果酒制果醋的反應(yīng)式為: 。(4)在果醋發(fā)酵過(guò)程中,用 檢測(cè)是否有醋酸生成。答案 (1)葡萄上存在酵母菌,反復(fù)沖洗,會(huì)洗去大量的酵母菌,不利于酒精發(fā)酵(2)缺少一個(gè)排氣口,應(yīng)補(bǔ)上一個(gè)排氣口裝置,并連上一根長(zhǎng)而彎曲的管子(3)1825 不需要通入空氣C2H5OH+O2CH3COOH+H2O(4)pH試紙解析 (1)果酒通常是以葡萄為原料,通過(guò)酵母

4、菌發(fā)酵獲得的,而酵母菌主要存在于果實(shí)的表面,所以不能對(duì)葡萄進(jìn)行反復(fù)沖洗。(2)乙裝置沒(méi)有排氣管道,所以應(yīng)添加排氣口,并連上一根長(zhǎng)而彎曲的管子。(3)酵母菌產(chǎn)生酒精需進(jìn)行無(wú)氧呼吸,所以生產(chǎn)酒精不需通入空氣。20 左右最適合酵母菌繁殖,所以酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在1825 。(4)用pH試紙檢測(cè)裝置中培養(yǎng)液的pH,以檢測(cè)是否有醋酸生成。2.臘肉、腌白菜、腐乳等是家庭中常見(jiàn)的一些腌制品,其味道鮮美,便于保存。請(qǐng)聯(lián)系生活實(shí)際,回答下列問(wèn)題:(1)臘肉和腌白菜能保存較長(zhǎng)時(shí)間而不腐敗,原因是 。(2)腐乳制作的原理是 。(3)制作腐乳的鹵湯中通常要加入料酒、黃酒等,含量一般控制在12%左右,其目的是 。

5、(4)腌白菜味道鮮美,但最好是等腌制好后再食用,若過(guò)早食用會(huì)影響人體健康,請(qǐng)分析原因。答案 (1)腌制液鹽濃度過(guò)高,微生物因失水而不能生存(2)毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶將脂肪水解為甘油和脂肪酸(3)抑制微生物的生長(zhǎng),同時(shí)使腐乳具有獨(dú)特的香味(4)未腌制成熟的白菜中,亞硝酸鹽等物質(zhì)的含量過(guò)高,食用后可能會(huì)影響人體健康。解析 (1)由于腌制液鹽濃度過(guò)高,微生物失水死亡,所以臘肉和腌白菜能保存比較長(zhǎng)的時(shí)間。(2)腐乳的制作原理是毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸,脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸。(3)制作腐乳的鹵湯中加入料

6、酒、黃酒的目的是抑制微生物的生長(zhǎng),同時(shí)能使腐乳具有獨(dú)特的香味。(4)白菜腌制的過(guò)程中,由于微生物的作用,會(huì)產(chǎn)生硝酸鹽和亞硝酸鹽等物質(zhì),未腌制成熟的白菜中,亞硝酸鹽等物質(zhì)含量高,食用后可能會(huì)影響人體健康。知識(shí)二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用知識(shí)二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用一、微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1.培養(yǎng)基(1)概念:人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 的不同需求,配制出供其 生長(zhǎng)繁殖 的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成:水、 無(wú)機(jī)鹽 、 碳 源、 氮 源和生長(zhǎng)因子。(3)類型:根據(jù)物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和 液體培養(yǎng)基 ;根據(jù)功能可分為選擇培養(yǎng)基和 鑒別 培養(yǎng)基。(4)制備步驟:計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板。2.無(wú)菌技術(shù)(連線

7、)注意:(1)消毒僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物。(2)滅菌可以殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。二、大腸桿菌的純化培養(yǎng)1.純化大腸桿菌,其關(guān)鍵的步驟是 接種 。2.純化培養(yǎng)原理:在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的 菌落 ,即可獲得較純的菌種。3.純化培養(yǎng)方法:平板劃線法和稀釋涂布平板法。(1)平板劃線法:通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。(2)稀釋涂布平板法:將菌液進(jìn)行一系列的 梯度稀釋 ,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面。三、纖維素分解菌的分離1.纖維素酶(1)組成:纖維素分解菌可產(chǎn)生 纖維素酶

8、,纖維素酶是一種復(fù)合酶,它包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。(2)作用:纖維素 纖維二糖 葡萄糖2.纖維素分解菌的分離(1)方法: 剛果紅染色法 。(2)原理 紅色復(fù)合物 紅色消失、出現(xiàn) 透明圈 。(3)標(biāo)志:使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基,根據(jù) 是否產(chǎn)生透明圈 來(lái)篩選纖維素分解菌。(4)操作流程土壤取樣:富含 纖維素 的環(huán)境選擇培養(yǎng):用 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng),以增加纖維素分解菌的數(shù)量剛果紅纖維素 梯度稀釋 涂布平板:將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落:產(chǎn)生 纖維素酶 的菌落周圍出現(xiàn)透明圈項(xiàng)目詳細(xì)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)原理(1)能合成 脲酶 的細(xì)菌才能分解尿素(2)配制以 尿素 為唯一

9、氮源的培養(yǎng)基,能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌數(shù)量統(tǒng)計(jì)(1) 直接計(jì)數(shù) 法(顯微鏡下用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板)(2)間接計(jì)數(shù)法: 稀釋涂布平板法 實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣配制土壤溶液和制備培養(yǎng)基系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)四、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離1.如圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法,請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題:(1)圖甲是利用 法進(jìn)行微生物接種,圖乙是利用 法進(jìn)行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是 和 ;對(duì)這兩種接種工具進(jìn)行滅菌和消毒的方法依次是 和酒精消毒。(2)接種操作為什么一定要在酒精燈火焰附近進(jìn)行? 。(3)接種后,在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)? 。(4)如圖是采

10、用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解,其接種方法是 (填圖甲或圖乙)。答案 (1)平板劃線稀釋涂布平板接種環(huán)涂布器灼燒滅菌(2)火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域(3)避免培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長(zhǎng)(4)圖乙解析圖甲和圖乙分別表示平板劃線法和稀釋涂布平板法,這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。由于在酒精燈火焰附近存在著無(wú)菌區(qū)域,因此接種常在酒精燈火焰附近進(jìn)行。在微生物培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生水,對(duì)微生物的生長(zhǎng)造成影響,故在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需要倒置培養(yǎng)。2.有些微生物能合成纖維素酶。研究人員用化合物A、硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基,成功地篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物。分析回答下列問(wèn)題

11、。(1)培養(yǎng)基中加入的化合物A是 ,為微生物的生長(zhǎng)提供 ,這種培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。(2)為了篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物,向培養(yǎng)基中加入 。(3)在篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物之前,可用液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),增加微生物的濃度。若要獲得純凈的菌株,常采用平板劃線的方法進(jìn)行接種,此過(guò)程所用的接種工具是 ,操作時(shí)采用 滅菌的方法,還可用 法操作。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)滅菌處理才能倒掉,這樣做的目的是 。答案 (1)纖維素碳源選擇(2)剛果紅(3)接種環(huán)灼燒稀釋涂布平板(4)防止造成環(huán)境污染解析 (1)纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶

12、使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。在這三種酶的協(xié)同作用下,纖維素最終被水解成葡萄糖,為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng),同樣,也可以為人類所利用。要篩選出能產(chǎn)生纖維素酶的微生物,應(yīng)用選擇培養(yǎng)基,在培養(yǎng)基中加入纖維素作為唯一的碳源,能在此培養(yǎng)基中存活的微生物就是能產(chǎn)生纖維素酶的微生物。(2)剛果紅可以和像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物,而不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。纖維素分解菌能產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素,從而使菌落周圍形成透明圈。(3)獲得純凈的菌株的兩種方法為平板劃線法和稀釋涂布平板法。(4)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)滅菌處理才能倒掉,這樣可避免微生物對(duì)環(huán)境造成污

13、染。3.纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)在篩選纖維素分解菌的過(guò)程中,通常用 染色法,這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行篩選。(2)乙同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計(jì)數(shù),與分離醋酸菌相比,進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)除了營(yíng)養(yǎng)不同外,最主要的實(shí)驗(yàn)條件差別是 ,該同學(xué)采用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目 。(3)丙同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過(guò)程中,為了防止外界酸和堿對(duì)酶活性的影響,采取的措施是向提取液和分離液中添加 ;若探究纖維素酶活性的最適溫度,如何設(shè)置對(duì)照? 。答案 (1)剛果紅(2)保證無(wú)氧環(huán)境小(低)(3)緩沖溶液設(shè)置不同的溫度梯度進(jìn)行相互對(duì)照解析 (1

14、)利用剛果紅染色法來(lái)篩選纖維素分解菌,剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)培養(yǎng)基中的纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。(2)牛胃內(nèi)是無(wú)氧環(huán)境,故應(yīng)在無(wú)氧環(huán)境下分離牛胃中的纖維素分解菌。相距很近的細(xì)菌可以形成一個(gè)菌落,故菌落數(shù)比活菌數(shù)少。(3)在提取液和分離液中添加緩沖溶液可保證提取液和分離液的pH不受干擾。探究某種酶活性的最適溫度應(yīng)設(shè)置不同的溫度梯度進(jìn)行相互對(duì)照。突破一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)突破一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)1.果酒和果醋發(fā)酵裝置的設(shè)計(jì)思路(1)因酵母菌的繁殖需要空氣,醋酸菌是好氧菌,所以在果酒制作的前期和果醋制作的整個(gè)過(guò)程中都需

15、氧。因酵母菌產(chǎn)生酒精是在無(wú)氧條件下,應(yīng)控制充入氧的量,故應(yīng)在充氣口設(shè)置開(kāi)關(guān)。(2)由于在發(fā)酵過(guò)程中都產(chǎn)生CO2 ,因此又需設(shè)排氣口;為防止空氣中微生物的污染,排氣口應(yīng)連接一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管。重難突破重難突破(3)因要對(duì)發(fā)酵的情況進(jìn)行及時(shí)監(jiān)測(cè),應(yīng)設(shè)置出料口便于取料。(4)果酒和果醋的發(fā)酵裝置及各個(gè)部件的作用裝置圖結(jié)構(gòu)或操作目的充氣口醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵,輸入無(wú)菌空氣; 制酒時(shí)關(guān)閉充氣口排氣口用來(lái)排出CO2長(zhǎng)而彎曲的膠管防止空氣中微生物的污染出料口便于取料,及時(shí)監(jiān)測(cè)發(fā)酵進(jìn)行的情況2.影響腐乳品質(zhì)的因素(1)鹽a.濃度過(guò)低,不足以抑制微生物生長(zhǎng),豆腐易腐敗變質(zhì)。b.濃度過(guò)高,會(huì)影響腐乳口味。(2)酒

16、的含量:一般控制在12%左右。(3)香辛料:具調(diào)味、殺菌作用。(4)溫度:1518 。3.泡菜制作的注意事項(xiàng)(1)材料的選擇及用量蔬菜應(yīng)新鮮,若放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),蔬菜中的硝酸鹽易被還原成亞硝酸鹽。清水和鹽的質(zhì)量比為4 1,鹽水要煮沸后冷卻待用。鹽水煮沸有兩大作用,一是除去水中的氧氣,二是殺滅鹽水中的其他細(xì)菌。(2)防止雜菌污染:每次取樣用具要洗凈,取樣后要迅速封口。(3)氧氣需求泡菜壇要選擇透氣性差的容器,以創(chuàng)造無(wú)氧環(huán)境,有利于乳酸菌發(fā)酵,防止蔬菜腐爛。壇蓋邊沿的水槽中要注滿水,以保證乳酸菌發(fā)酵所需的無(wú)氧環(huán)境,并注意在發(fā)酵過(guò)程中要經(jīng)常補(bǔ)充壇蓋邊沿水槽中的水。(4)溫度:發(fā)酵過(guò)程控制在室溫即可,最好

17、在2636 。溫度過(guò)高,則易滋生雜菌;溫度過(guò)低,則發(fā)酵時(shí)間延長(zhǎng)。典例1如圖簡(jiǎn)單表示葡萄酒的釀制過(guò)程,請(qǐng)據(jù)圖分析:(1)葡萄酒的釀制原理是:先通氣使酵母菌進(jìn)行 ,以增加酵母菌的數(shù)量,然后使酵母菌 獲得葡萄酒。(2)隨著發(fā)酵過(guò)程的加深,液體密度會(huì)逐漸變低(可用密度計(jì)測(cè)量)。其原因是 。(3)在甲中進(jìn)行攪拌的目的是 ,丙中一段時(shí)間后,揭開(kāi)蓋子是否能夠產(chǎn)生果醋? 。(填“能”或“不能”)(4)蘋(píng)果醋是最受歡迎的飲料之一,其生產(chǎn)過(guò)程中利用了 的發(fā)酵作用。在傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)中,果醋制作往往在果酒制作的基礎(chǔ)上進(jìn)行,其相關(guān)的反應(yīng)式為: 。解析 (1)酵母菌為一種兼性厭氧真菌,在有氧情況下可進(jìn)行有氧呼吸,無(wú)氧時(shí)則進(jìn)

18、行酒精發(fā)酵。(2)由于發(fā)酵時(shí)糖被消耗,產(chǎn)生酒精和CO2,而酒精的密度比糖和水低,這是液體密度降低的原因。(3)攪拌可增加甲內(nèi)溶氧量,酵母菌有氧呼吸需要氧。揭蓋后氧氣充足,丙中酒精可在醋酸菌作用下被氧化生成醋酸。(4)果醋制作過(guò)程中,起作用的微生物主要是醋酸菌。答案 (1)有氧呼吸發(fā)酵(2)由于發(fā)酵時(shí)糖被消耗,產(chǎn)生了酒精和CO2,而酒精密度比糖和水低(3)增加溶氧量能(4)醋酸菌C2H5OH+O2CH3COOH+H2O1-1從古至今,酒就與人類生活息息相關(guān)。請(qǐng)回答與釀酒有關(guān)的問(wèn)題:(1)人類使用釀制葡萄酒的微生物主要是酵母菌,酵母菌酒精發(fā)酵的反應(yīng)式是 ;進(jìn)行酒精發(fā)酵一般將溫度控制在 。(2)葡萄

19、酒呈現(xiàn)深紅色的原因是 。(3)現(xiàn)在工廠化生產(chǎn)果酒,為提高果酒的品質(zhì),更好地抑制其他微生物的生長(zhǎng),采取的措施是 ,并接入合適的菌種。(4)某同學(xué)人工自釀葡萄酒時(shí),在發(fā)酵后期向發(fā)酵液中通入空氣,并將發(fā)酵液置于3035 環(huán)境中,結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中有 出現(xiàn),這類微生物在糖類缺乏時(shí)可以使 轉(zhuǎn)化為 ,后者再轉(zhuǎn)化為 。答案 (1)C6H12O6 2C2H5OH+2CO21825 (2)紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液(3)對(duì)原料和設(shè)備進(jìn)行消毒和滅菌(4)醋酸菌乙醇乙醛醋酸解析 (1)釀制葡萄酒使用的微生物主要是酵母菌,酵母菌酒精發(fā)酵的最適溫度是1825 。(2)紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液,故葡萄酒常呈現(xiàn)深紅色。(3)為

20、提高果酒的品質(zhì),更好地抑制其他微生物的生長(zhǎng),需對(duì)原料和設(shè)備進(jìn)行消毒和滅菌后,再接入合適的菌種。(4)釀制葡萄酒時(shí),若在發(fā)酵后期向發(fā)酵液中通入空氣,并將發(fā)酵液置于3035 環(huán)境中,在糖類缺乏時(shí),醋酸菌可把乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛,再將乙醛轉(zhuǎn)化為醋酸。突破二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的應(yīng)用實(shí)例類型實(shí)例選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽用于分離得到金黃色葡萄球菌以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基用于分離分解尿素的細(xì)菌不添加氮源的培養(yǎng)基用于分離固氮微生物石油是唯一碳源時(shí),可以抑制不能利用石油的微生物的生長(zhǎng),使能夠利用石油的微生物生存,達(dá)到分離能消除石油污染的微生物

21、的目的培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)只能得到耐高溫的微生物鑒別培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌(菌落呈深紫色并帶金屬光澤)2.微生物的純化培養(yǎng)方法 平板劃線法稀釋涂布平板法目的 在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體菌落培養(yǎng) 平板冷凝后倒置培養(yǎng),使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染操作過(guò)程接種環(huán)滅菌取菌液在培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)稀釋菌液取菌液于培養(yǎng)基表面涂布器滅菌均勻涂布菌液培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒第一次劃線前:殺死接種環(huán)上的微生物,避免污染培養(yǎng)物之后每次劃線前:殺死殘留菌種,保證每次劃線菌種來(lái)自上次劃線末端劃線結(jié)束后:殺死殘留菌種,避免污染環(huán)

22、境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后再進(jìn)行操作,以免溫度太高殺死菌種(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力要大小適當(dāng),防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破(1)稀釋操作時(shí):每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌;操作時(shí),試管口和移液管應(yīng)在離火焰12 cm處(2)涂布平板時(shí)涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒,取出時(shí)讓多余酒精在燒杯中滴盡,然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中,以免引燃其中的酒精酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適,移液管管頭不要接觸任何物體3.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理:利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微

23、鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。方法:用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)原理:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。計(jì)算公式:每克樣品中的菌株數(shù)=(CV)M,其中,C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù),V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL),M代表稀釋倍數(shù)。操作:設(shè)置重復(fù)組,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。典例2根據(jù)分離以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn),回答下列問(wèn)題:(1)寫(xiě)出脲酶降解尿素的反應(yīng)式

24、: 。(2)該實(shí)驗(yàn)分離細(xì)菌時(shí)用濃度為10-4和10-5土壤稀釋液接種,更容易形成單菌落的是 。(3)A同學(xué)篩選出的菌落為150個(gè),其他同學(xué)只篩選出50個(gè),并且他在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)并沒(méi)有設(shè)置對(duì)照。你認(rèn)為A同學(xué)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有哪些? 。如何設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)排除可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素: 。(4)涂布平板的所有操作怎樣保證無(wú)菌? 。(5)有脲酶的細(xì)菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用? 。 解析脲即尿素,是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。有一些細(xì)菌含有脲酶可以分解尿素,利用尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。本實(shí)驗(yàn)使用稀釋涂布平板法分離以尿素為氮源的微生物,用濃度為10-4和10-5土壤稀釋液接種,更容易形成單菌落的是10-5土壤稀釋液。A同學(xué)結(jié)

25、果產(chǎn)生的原因可能是土樣不同,也可能是培養(yǎng)基污染或操作失誤,排除方案有二:一是由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如果與A同學(xué)一致,則證明無(wú)誤,如果結(jié)果不同,則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基配制有問(wèn)題;另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng),作為空白對(duì)照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染。答案 (1)CO(NH2)2+H2O 2NH3+CO2(2)10-5土壤稀釋液(3)可能是土樣不同,也可能是培養(yǎng)基污染或操作失誤方案有二:一是由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如果與A同學(xué)一致,則證明無(wú)誤,如果結(jié)果不同,則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基配制有問(wèn)題;另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng),作為空白對(duì)照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染(4)應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”,都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、移液管頭不要接觸任何