微生物的實驗室培養(yǎng)

1、整理ppt到目前為止，到目前為止， 幾十項幾十項Nobel生理學和醫(yī)學獎，化學獎生理學和醫(yī)學獎，化學獎 都與微生物學有關都與微生物學有關整理ppt微生物的類群原生生物原核生物真菌病毒如酵母菌單細胞的動植物如草履蟲、單細胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細胞結構真核細胞細菌、藍藻 原核細胞整理ppt課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)1.提供營養(yǎng)和條件2.防止污染整理ppt一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.1.基本成分：基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽碳源、氮源、水、無機鹽碳源碳源無機碳源：無機碳源：有機碳源：有機碳

2、源：COCO2 2、COCO3 32 2- -、HCOHCO3 3- -牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物氮源氮源無機氮源：無機氮源：有機氮源：有機氮源：NHNH4 4、NONO3 3- -（為硝化細菌提供（為硝化細菌提供N N源和能源）源和能源）牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含注：含CHONCHON的的有機物有機物是是異異養(yǎng)型微生物的養(yǎng)型微生物的碳源碳源、氮源氮源、能源能源整理ppt一一. .培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質1.1.基本成分：基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽碳源、氮源、

3、水、無機鹽2.2.特殊營養(yǎng)：特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等（生長因子）維生素、堿基等（生長因子）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH3.pH、氧氣的需求：、氧氣的需求：4.4.種類：種類：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有有無無 凝固劑瓊脂凝固劑瓊脂分離分離 鑒定鑒定工業(yè)工業(yè) 生產生產化學成分：化學成分：物理性質：物理性質：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基整理ppt培養(yǎng)基的種類液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基據物理性質分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基據化學成分分選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基據用途分常用于工業(yè)生產常用于觀察微生物的運動、鑒定菌種用于微生物的分離、計數

4、常用于工業(yè)生產常用于分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物的生長。例如，在培養(yǎng)基中加入青霉素，以抑制細菌、放線菌的生長，從而分離到酵母菌和霉菌。又如，在培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可以抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長。根據微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品配制而成，用以鑒別不同種類的微生物。例如，在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍，可以用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌：如果有大腸桿菌，其代謝產物就與伊紅和美藍結合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。整理ppt牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應用最廣泛和最普

5、通的細菌基礎培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g瓊脂瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構成？分析營養(yǎng)構成？整理ppt5. 5. 配制原則配制原則目的明確：目的明確：營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當適宜的適宜的pHpH值：值：有機碳源有機碳源異養(yǎng)型：異養(yǎng)型：根據微生物的根據微生物的種類、培養(yǎng)目的種類、培養(yǎng)目的選擇原料選擇原料自養(yǎng)型：自養(yǎng)型： 不加碳源不加碳源加入緩沖劑加入緩沖劑細菌偏堿，真菌偏酸細菌偏堿，真菌偏酸（CO

6、CO2 2碳源）碳源）生產生產科研科研整理ppt耐高溫需保持干燥的耐高溫需保持干燥的 物品，物品，160170 12小時小時接種環(huán)、接種針等接種環(huán)、接種針等 金屬用具金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒滅菌滅菌定義定義方法方法較為較為溫和溫和理化方法，理化方法，殺死殺死部分有害菌體部分有害菌體（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）強烈強烈的理化方法，的理化方法，殺死殺死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化學藥劑化學藥劑紫外線紫外線灼燒滅菌灼燒滅菌干熱滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等酒精、氯氣、石炭酸

7、等高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，100KPa、121、1530min二二. .無菌技術：無菌技術：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：整理ppt請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手整理ppt2.2.無菌范圍：無菌范圍：實驗操作空間消毒實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒操作者的手、衣著消毒

8、實驗用具滅菌實驗用具滅菌實驗操作過程實驗操作過程二二. .無菌技術：無菌技術：防止外來雜菌的污染防止外來雜菌的污染1.1.消毒與滅菌：消毒與滅菌：酒精燈旁操作酒精燈旁操作超凈工作臺超凈工作臺整理ppt有些細菌在一定的條件下，細胞里面有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的形成一個橢圓形的休眠體休眠體，叫做芽孢。，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸有的細菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才死小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當

9、環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌菌細菌、原生動物、真菌和植物細菌、原生動物、真菌和植物等產生的一種有繁殖作用的等產生的一種有繁殖作用的生生殖細胞殖細胞。能直接發(fā)育成新個體。能直接發(fā)育成新個體。 單個單個或少數菌體或少數菌體2.2.特征：特征：大小、形狀、光澤度、大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。顏色、透明度等。3.3.功能：功能：1.1.定義：定義：菌落菌落鑒定菌種鑒定菌種的重要依據的重要依據固體固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上大量繁殖大量繁殖子細胞群體子細胞群體整理ppt1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨

10、培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g瓊脂瓊脂20.0g三三. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.1.計算：計算：培養(yǎng)基用量培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量依配方計算各成分的用量2.2.稱量：稱量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解、少量水加熱溶解 取紙取紙蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl瓊脂瓊脂 補水定容補

11、水定容4.4.調調pHpH、分裝、封口：、分裝、封口：5.5.滅菌：滅菌：6.6.倒平板：倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個細胞分散成單個細胞, ,形成單個菌落形成單個菌落整理ppt約約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基整理ppt 1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時，左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基

12、的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。時，就可以進行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。生物污染培養(yǎng)基。整理ppt3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝

13、后，皿蓋上會凝結水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用最好不要用這個平板這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。整理ppt二二. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化

14、大腸桿菌：純化大腸桿菌：平板劃線法：平板劃線法：菌種菌種劃劃3 3個平板個平板1 1個不劃線個不劃線1.1.純化大腸桿菌的方法：純化大腸桿菌的方法：平板劃線法平板劃線法和稀釋涂布平板法和稀釋涂布平板法接種環(huán)接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基防止劃破培養(yǎng)基（重復實驗）（重復實驗）（空白對照）（空白對照）整理ppt 平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數次劃線后培養(yǎng)，可以培養(yǎng)基的表面。在數次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體一個細

15、胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體。整理ppt1 1、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死殺死上次殘留的菌種上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，保證使下一次劃線時，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸線次數的增加，使

16、每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。減少，以便得到菌落。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。環(huán)境和感染操作者。整理ppt 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數目比線答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次

17、從上一次劃線的末端開條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。的菌落。整理ppt6 6支試管，分別加入支試管，分別加入9ml9ml無菌水無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液：梯度稀釋菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器整理ppt浸浸稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液：梯度稀釋菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超過不超過0.1ml

18、0.1ml各梯度分別涂布各梯度分別涂布3個平板個平板1 1個不涂布作空白對照個不涂布作空白對照滴滴灼灼涂涂稀稀釋釋10103 3倍倍稀稀釋釋10104 4倍倍稀稀釋釋10105 5倍倍整理ppt 稀釋涂布法是將菌液進行一系列梯度稀釋，稀釋涂布法是將菌液進行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。整理ppt 涂布平板的所有操作都應在火焰附近涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應如何進

19、行無步應如何進行無菌操作？菌操作？應從操作的各個細節(jié)保證應從操作的各個細節(jié)保證“無菌無菌”。例如：酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、例如：酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、 吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管頭不要接觸任何其他物體、 吸管要在酒精燈火焰周圍等等。吸管要在酒精燈火焰周圍等等。整理ppt3平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較整理ppt平板劃線法：平板劃線法：二二. .大腸桿菌的純化培養(yǎng)：大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：1.1.接種：接種：稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：2.2.培養(yǎng)：培養(yǎng)：將將接種后接

20、種后的培養(yǎng)基和一個的培養(yǎng)基和一個未接種未接種的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基放入放入3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h12h24h24h后，后，觀察并記錄觀察并記錄稀稀釋釋10103 3倍倍稀稀釋釋10104 4倍倍稀稀釋釋10105 5倍倍整理ppt（三）菌種的保藏：（三）菌種的保藏：1.1.臨時保藏：臨時保藏： 試管固體斜面培養(yǎng)基上，試管固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)長成菌落培養(yǎng)長成菌落44冰箱保存冰箱保存2.2.長期保存：長期保存：菌種易被污染、變異菌種易被污染、變異甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油（滅菌）甘油（滅菌）1ml1ml菌液菌液2020擱置斜擱置斜面面整理ppt四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上生長