糖代謝相關(guān)檢驗教學課件

1、2021/4/26 精品PPT 1糖代謝相關(guān)檢驗糖代謝相關(guān)檢驗2021/4/26 精品PPT 2學習內(nèi)容學習內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 血糖測定血糖測定第二節(jié)第二節(jié) 血清糖基化蛋白測定血清糖基化蛋白測定第三節(jié)第三節(jié) 胰島素釋放及胰島素釋放及C肽釋放試驗肽釋放試驗第四節(jié)第四節(jié) 糖代謝產(chǎn)物測定糖代謝產(chǎn)物測定第五節(jié)第五節(jié) 其他糖測定其他糖測定2021/4/26 精品PPT 3學習目標學習目標掌握血糖及口服糖耐量試驗的概念、實驗原理、操作方掌握血糖及口服糖耐量試驗的概念、實驗原理、操作方法及臨床應(yīng)用；掌握糖化血清蛋白測定的原理、方法學法及臨床應(yīng)用；掌握糖化血清蛋白測定的原理、方法學評價及臨床應(yīng)用評價及臨床應(yīng)用熟

2、悉胰島素及胰島素釋放試驗的臨床應(yīng)用；熟悉熟悉胰島素及胰島素釋放試驗的臨床應(yīng)用；熟悉C-肽及肽及C-肽釋放試驗的臨床應(yīng)用。肽釋放試驗的臨床應(yīng)用。了解血乳酸、丙酮酸、了解血乳酸、丙酮酸、-羥丁酸及其他糖的測定。羥丁酸及其他糖的測定。能規(guī)范、熟練地進行血糖測定、口服糖耐量試驗、糖化能規(guī)范、熟練地進行血糖測定、口服糖耐量試驗、糖化血紅蛋白和糖化血清蛋白的測定，并正確解釋實驗結(jié)果血紅蛋白和糖化血清蛋白的測定，并正確解釋實驗結(jié)果2021/4/26 精品PPT 4糖是一類化學本質(zhì)為多羥醛或多羥酮及其衍生物的有機化糖是一類化學本質(zhì)為多羥醛或多羥酮及其衍生物的有機化合物，糖代謝（合物，糖代謝（carbohydr

3、ate metabolism）指葡萄糖）指葡萄糖(glucose，Glc)、糖原、糖原(glycogen，Gn)等在體內(nèi)的一系列復雜等在體內(nèi)的一系列復雜的化學反應(yīng)。的化學反應(yīng)。在人體內(nèi)糖的主要形式是葡萄糖在人體內(nèi)糖的主要形式是葡萄糖(glucose，Glc)及糖原及糖原(glycogen，Gn)。葡萄糖是糖在血液中的運輸形式，在機體。葡萄糖是糖在血液中的運輸形式，在機體糖代謝中占據(jù)主要地位；糖原是葡萄糖的多聚體糖代謝中占據(jù)主要地位；糖原是葡萄糖的多聚體,包括肝糖包括肝糖原、肌糖原和腎糖原等，是糖在體內(nèi)的儲存形式。葡萄糖原、肌糖原和腎糖原等，是糖在體內(nèi)的儲存形式。葡萄糖與糖原都能在體內(nèi)氧化提供能

4、量。與糖原都能在體內(nèi)氧化提供能量。前言前言2021/4/26 精品PPT 5臨床常用檢測試驗：血糖濃度測定，口服葡萄糖耐量試驗，臨床常用檢測試驗：血糖濃度測定，口服葡萄糖耐量試驗，糖化血紅蛋白測定，糖化血清蛋白測定，胰島素及胰島素釋糖化血紅蛋白測定，糖化血清蛋白測定，胰島素及胰島素釋放試驗，放試驗，C-肽及肽及C-肽釋放試驗，糖代謝產(chǎn)物（血乳酸、丙酮、肽釋放試驗，糖代謝產(chǎn)物（血乳酸、丙酮、-羥丁酸）測定，其他糖（果糖、半乳糖）測定等。羥丁酸）測定，其他糖（果糖、半乳糖）測定等。2021/4/26 精品PPT 6第一節(jié)第一節(jié)血糖測定血糖測定2021/4/26 精品PPT 7血糖一般指血液中的葡萄

5、糖。在激素等因素的調(diào)節(jié)下，血血糖一般指血液中的葡萄糖。在激素等因素的調(diào)節(jié)下，血糖濃度保持相對恒定。糖濃度保持相對恒定。健康人群空腹血糖的參考范圍通常為健康人群空腹血糖的參考范圍通常為3.896.11mmol/L（70110mg/dl），但），但2003年美國糖尿病協(xié)會（年美國糖尿病協(xié)會（ADA）建議）建議下調(diào)參考范圍上限為下調(diào)參考范圍上限為5.6mmol/L（100mg/dl）。）。 血糖血糖2021/4/26 精品PPT 8血糖濃度取決于血糖的來源及去路的動態(tài)平衡。血糖的來血糖濃度取決于血糖的來源及去路的動態(tài)平衡。血糖的來源主要受機體進食的影響，而去路則取決于機體對血糖的源主要受機體進食的影

6、響，而去路則取決于機體對血糖的利用。利用。 一、糖代謝概述一、糖代謝概述2021/4/26 精品PPT 9根據(jù)機體所處的不同狀態(tài)，血糖主要有三個來源：根據(jù)機體所處的不同狀態(tài)，血糖主要有三個來源： 1食物中糖類的消化吸收食物中糖類的消化吸收 2糖原的分解糖原的分解 3非糖物質(zhì)的轉(zhuǎn)化非糖物質(zhì)的轉(zhuǎn)化（一）血糖的來源（一）血糖的來源2021/4/26 精品PPT 10葡萄糖的代謝過程根據(jù)機體的需要而定，主要代謝葡萄糖的代謝過程根據(jù)機體的需要而定，主要代謝去路有：去路有： 1有氧氧化有氧氧化 2合成糖原合成糖原 3轉(zhuǎn)換為非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)換為非糖物質(zhì) 4轉(zhuǎn)換為其他糖類衍生物轉(zhuǎn)換為其他糖類衍生物 5生成尿糖生成尿

7、糖（二）血糖的去路（二）血糖的去路9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-5-22022-5-2Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-5-22022-5-22022-5-25/2/2022 2:45:42 AM11、人總是珍惜為得到。2022-5-22022-5-22022-5-2May-222-May-2212、人亂于心，不寬余請。2022-5-22022-5-22022-5-2Monday, May 02, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-5-22022-5-22022-5-22022-5-25/2/2022

8、14、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月2日星期一2022-5-22022-5-22022-5-215、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月2022-5-22022-5-22022-5-25/2/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-5-22022-5-2May 2, 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2022-5-22022-5-22022-5-22022-5-22021/4/26 精品PPT 12血糖的來源與去路血糖的來源與去路2021/4/26 精品PPT 13血糖如何維持穩(wěn)定？血糖如何維持穩(wěn)定？關(guān)鍵酶調(diào)節(jié)關(guān)鍵酶調(diào)節(jié)關(guān)鍵酶如何調(diào)節(jié)關(guān)鍵

9、酶如何調(diào)節(jié)激素調(diào)節(jié)激素調(diào)節(jié)常見的升高血糖的激素常見的升高血糖的激素胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素常見的降低血糖的激素常見的降低血糖的激素胰島素胰島素二、血糖濃度的調(diào)節(jié)二、血糖濃度的調(diào)節(jié)2021/4/26 精品PPT 14定義：胰島素（定義：胰島素（insulin）是由）是由胰島胰島細胞細胞合成分泌的多肽激合成分泌的多肽激素。它主要作用于素。它主要作用于肝臟、骨骼肌和脂肪組織肝臟、骨骼肌和脂肪組織。功能：一方面促進這些組織細胞攝取葡萄糖，并轉(zhuǎn)換成糖功能：一方面促進這些組織細胞攝取葡萄糖，并轉(zhuǎn)換成糖原或脂肪貯存；另一方面抑制肝臟的糖原分解和糖異生，原或脂肪貯存；另

10、一方面抑制肝臟的糖原分解和糖異生，從而降低血糖。從而降低血糖。（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰島素胰島素定義定義功能功能2021/4/26 精品PPT 15 化學構(gòu)成化學構(gòu)成人胰島素含人胰島素含51個氨基酸殘基，分子量個氨基酸殘基，分子量5808，由，由A、B兩條鏈組兩條鏈組成，含兩個鏈間二硫鍵和一個鏈內(nèi)二硫鍵。人胰島素有別成，含兩個鏈間二硫鍵和一個鏈內(nèi)二硫鍵。人胰島素有別于其他生物的胰島素，但其于其他生物的胰島素，但其B鏈的鏈的C末端（末端（B23B26）具有）具有高度保守性，是胰島素生物學活性的決定性區(qū)域，故不同高度保守性，是胰島素生物學活性的決定性區(qū)域，故不同來源的胰島素在免疫

11、學和生物學活性上有相似性來源的胰島素在免疫學和生物學活性上有相似性（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰島素胰島素2021/4/26 精品PPT 16 合成過程合成過程首先在胰島首先在胰島細胞的核糖體上合成含細胞的核糖體上合成含100個氨基酸殘基的個氨基酸殘基的前胰前胰島素原（島素原（preproinsulin）。）。前胰島素原很快被酶前胰島素原很快被酶切去信號肽切去信號肽，生成，生成86個氨基酸的胰島素個氨基酸的胰島素原（原（proinsulin）。）。最后胰島素原通過蛋白酶作用，切掉最后胰島素原通過蛋白酶作用，切掉4個氨基酸殘基，水解個氨基酸殘基，水解為為51個氨基酸的胰島素和個氨基酸

12、的胰島素和31個氨基酸的個氨基酸的C-肽（肽（C-peptide）。）。 （一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰島素胰島素2021/4/26 精品PPT 17（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰島胰島素素前胰島素原前胰島素原（preproinsulin）胰島素原胰島素原（proinsulin）胰島素胰島素（insulin）C-肽肽（C-peptide）2021/4/26 精品PPT 18 釋放釋放激動劑：葡萄糖、氨基酸、胰腺、胃腸激素等。激動劑：葡萄糖、氨基酸、胰腺、胃腸激素等。阻斷劑：高血糖、生長抑素和阻斷劑：高血糖、生長抑素和-腎上腺素能。腎上腺素能。（一）降低血糖的激素（一）降

13、低血糖的激素胰島素胰島素2021/4/26 精品PPT 19胰島素主要為肝臟攝取并降解，少量由腎小球濾過，并在近胰島素主要為肝臟攝取并降解，少量由腎小球濾過，并在近曲小管重吸收和降解。胰島素在體循環(huán)中的生物半壽期為曲小管重吸收和降解。胰島素在體循環(huán)中的生物半壽期為45min。 主要通過胰島素和胰島素受體的結(jié)合，觸發(fā)細胞內(nèi)特異性的主要通過胰島素和胰島素受體的結(jié)合，觸發(fā)細胞內(nèi)特異性的信號轉(zhuǎn)導，從而產(chǎn)生相應(yīng)的生物學效應(yīng)。信號轉(zhuǎn)導，從而產(chǎn)生相應(yīng)的生物學效應(yīng)。 （一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰島素胰島素 降解降解 作用機制作用機制2021/4/26 精品PPT 20胰島素樣生長因子（胰島素樣生

14、長因子（insulin like growth factors， IGF）是一種是一種多肽，與胰島素的結(jié)構(gòu)相似，具有類似于胰島素的代謝作用多肽，與胰島素的結(jié)構(gòu)相似，具有類似于胰島素的代謝作用和促生長作用，主要有和促生長作用，主要有IGF I和和IGF II。IGF I又稱生長調(diào)節(jié)素又稱生長調(diào)節(jié)素C（somatomedin C），），是細胞生長和分化的主要調(diào)節(jié)因子之是細胞生長和分化的主要調(diào)節(jié)因子之一，而一，而IGF II的生理作用尚不清楚。的生理作用尚不清楚。IGF I主要由肝臟產(chǎn)生，其主要由肝臟產(chǎn)生，其他許多阿組織也可合成他許多阿組織也可合成IGF I，但不入血，僅在局部發(fā)揮作用。但不入血，僅

15、在局部發(fā)揮作用。血液中，血液中，IGF濃度約比胰島素高濃度約比胰島素高1 000倍，但絕大部分與特異倍，但絕大部分與特異性蛋白質(zhì)結(jié)合，僅少量以游離形式存在。而胰島素在血液中性蛋白質(zhì)結(jié)合，僅少量以游離形式存在。而胰島素在血液中全部是游離的，因此相比胰島素，血液中全部是游離的，因此相比胰島素，血液中IGF的活性很低。的活性很低。IGF通過特異性的通過特異性的IGF受體或胰島素受體而發(fā)揮作用。受體或胰島素受體而發(fā)揮作用。（一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰島素樣生長因子胰島素樣生長因子2021/4/26 精品PPT 21IGF I在正常糖代謝中的作用尚不清楚，外源性注入可導致低在正常糖代謝中的

16、作用尚不清楚，外源性注入可導致低血糖，而血糖，而IGF I缺乏可引起生長遲緩。胰腺外腫瘤可致缺乏可引起生長遲緩。胰腺外腫瘤可致IGF的生的生成過量，患者可有饑餓性低血糖。測定成過量，患者可有饑餓性低血糖。測定IGF I濃度可評價生長濃度可評價生長激素的缺乏和過量，監(jiān)測機體的營養(yǎng)狀況。激素的缺乏和過量，監(jiān)測機體的營養(yǎng)狀況。 （一）降低血糖的激素（一）降低血糖的激素胰島素樣生長因子胰島素樣生長因子2021/4/26 精品PPT 22胰高血糖素和腎上腺素胰高血糖素和腎上腺素（二）升高血糖的激素（二）升高血糖的激素 刺激葡萄糖釋放刺激葡萄糖釋放減少葡糖糖利用減少葡糖糖利用生長激素和皮質(zhì)醇生長激素和皮質(zhì)

17、醇2021/4/26 精品PPT 23血糖的激素調(diào)節(jié)血糖的激素調(diào)節(jié)2021/4/26 精品PPT 24如果調(diào)節(jié)失衡，結(jié)果是什么？如果調(diào)節(jié)失衡，結(jié)果是什么？高血糖或者低血糖高血糖或者低血糖低血糖：低于低血糖：低于2.8 mmol/L2.8 mmol/L。高血糖：高于高血糖：高于7.1 mmol/L7.1 mmol/L（高于（高于8.89 mmol/L8.89 mmol/L，出現(xiàn)糖尿）。，出現(xiàn)糖尿）。最常見病理性高血糖：糖尿病。最常見病理性高血糖：糖尿病。2021/4/26 精品PPT 25高血糖癥與糖尿病高血糖癥與糖尿病 高血糖癥（高血糖癥（hyperglycemia）是糖代謝紊亂導致血糖是糖代

18、謝紊亂導致血糖濃度高于參考上限的一種異?，F(xiàn)象，主要表現(xiàn)為空腹血濃度高于參考上限的一種異常現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為空腹血糖損傷、糖耐量減退或糖尿病。其中，空腹血糖損傷和糖損傷、糖耐量減退或糖尿病。其中，空腹血糖損傷和糖耐量減退是正常糖代謝與糖尿病之間的中間狀態(tài)，皆糖耐量減退是正常糖代謝與糖尿病之間的中間狀態(tài)，皆系發(fā)展為糖尿病及心血管病變的危險因子和標志，而糖系發(fā)展為糖尿病及心血管病變的危險因子和標志，而糖尿病是一組嚴重的代謝性疾病。尿病是一組嚴重的代謝性疾病。 2021/4/26 精品PPT 26糖尿病的發(fā)病機制與分型糖尿病的發(fā)病機制與分型 糖尿?。ㄌ悄虿。╠iabetes mellitus, DMdi

19、abetes mellitus, DM）是一組由于是一組由于胰島胰島素分泌不足或素分泌不足或/ /和胰島素作用低下和胰島素作用低下而引起的糖代謝紊而引起的糖代謝紊亂性疾病。亂性疾病。分型：分型：型糖尿病、型糖尿病、型糖尿病型糖尿病臨床癥狀臨床癥狀:“三多一少三多一少”，即多尿、煩渴、多飲和體，即多尿、煩渴、多飲和體重減輕。重減輕。2021/4/26 精品PPT 27型糖尿病型糖尿病又叫青年發(fā)病型糖尿病或胰島素依耐型糖尿病。又叫青年發(fā)病型糖尿病或胰島素依耐型糖尿病。原因：胰腺產(chǎn)生胰島素的細胞已經(jīng)徹底損壞原因：胰腺產(chǎn)生胰島素的細胞已經(jīng)徹底損壞,從而完從而完全全失去了產(chǎn)生胰島素的功能失去了產(chǎn)生胰島素

20、的功能.治療：依賴胰島素治療。治療：依賴胰島素治療。型糖尿病型糖尿病又叫非胰島素依耐型糖尿病。又叫非胰島素依耐型糖尿病。原因：原因：自身能夠產(chǎn)生胰島素，但細胞無法對其作出反自身能夠產(chǎn)生胰島素，但細胞無法對其作出反應(yīng)，使胰島素無法發(fā)揮作用應(yīng)，使胰島素無法發(fā)揮作用。治療：需要胰島素單獨或與口服藥聯(lián)合應(yīng)用的治療治療：需要胰島素單獨或與口服藥聯(lián)合應(yīng)用的治療2021/4/26 精品PPT 282021/4/26 精品PPT 29 測定方法測定方法 無機化學法無機化學法有機化學法有機化學法酶法酶法 參考范圍參考范圍3.9 - 6.1 mmol/L (70 110 mg/dL) 臨床意義臨床意義高血糖癥高血

21、糖癥低血糖癥低血糖癥三、血清（漿）葡萄糖測定與評價三、血清（漿）葡萄糖測定與評價2021/4/26 精品PPT 30原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使 CuCu2+2+還原成還原成CuCu+ + ，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍色的鉬藍。通過比色法，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍色的鉬藍。通過比色法測定藍色化合物，計算出血糖的含量測定藍色化合物，計算出血糖的含量特異性差、易受其他還原性物質(zhì)的干擾，現(xiàn)已淘汰特異性差、易受其他還原性物質(zhì)的干擾，現(xiàn)已淘汰空腹正常血糖參考值空腹正常血糖參考值 4.4 - 6.7mmol/L 4.4 - 6.7mmol/L或或80-

22、120mg/dL80-120mg/dL無機化學法：無機化學法：Folin-WuFolin-Wu法法2021/4/26 精品PPT 31有機化學法：鄰甲苯胺法有機化學法：鄰甲苯胺法 原理：原理： 葡萄糖為一含醛基的已糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成葡萄糖為一含醛基的已糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲羥甲基基-2-呋喃甲醛呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成，后者與鄰甲苯胺縮合成青色的青色的Schiff堿堿。 Schiff堿顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量成正比堿顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量成正比。 評價：操作簡便，特異性高，操作簡便，可直接采用血漿或血清進行評價：操作簡便，特異性高，操作簡便，

23、可直接采用血漿或血清進行測定，但其使用的測定，但其使用的試劑具有腐蝕性和致癌性，現(xiàn)應(yīng)用較少試劑具有腐蝕性和致癌性，現(xiàn)應(yīng)用較少。2021/4/26 精品PPT 32酶法酶法葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(GOD)法法己糖激酶己糖激酶(HK)法法葡萄糖脫氫酶葡萄糖脫氫酶法法國際公認國際公認國家推薦國家推薦2021/4/26 精品PPT 33實驗實驗 9-1葡萄糖氧化酶（葡萄糖氧化酶（ glucose oxidase, GOD）法測定血糖）法測定血糖 原理：原理：葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過氧化氫。過氧化氫在過氧化物酶過氧化物酶 (peroxidase，POD)作用下

24、，分解為水和氧的同時將無色無色的的4-4-氨基安替比林氨基安替比林與酚氧化縮合生成酚氧化縮合生成紅色的紅色的醌類化合物醌類化合物。 紅色的深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比，在510nm波長處測定吸光度，與標準管比較可計算出血糖的濃度。 2021/4/26 精品PPT 34試劑準備試劑準備 磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（0.1 mol/L, pH7.0） 酶試劑酶試劑葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶1200U，過氧化物酶，過氧化物酶1200U，4-氨基安替比林氨基安替比林 10 mg ，溶于上述磷酸鹽緩沖液，溶于上述磷酸鹽緩沖液80 mL中，調(diào)中，調(diào)pH7.0，定容，定容至至100 mL，2-8保存，可

25、保存保存，可保存3個月個月 酚溶液酚溶液重蒸餾酚重蒸餾酚100 mg溶于溶于100 mL蒸餾水中，避光、蒸餾水中，避光、 2-8保存保存，可，可保存保存1個月個月 苯甲酸溶液（苯甲酸溶液（12 mol/L） 葡萄糖標準液（葡萄糖標準液（5.0 mmol/L ）2021/4/26 精品PPT 35實驗操作實驗操作加入物 /mL空白管標準管測定管血清0.02葡萄糖標準液0.02蒸餾水0.02酶酚混合試劑3.03.03.0 混勻，置混勻，置 37 37 水浴保溫水浴保溫 1515分鐘，分鐘，每管加蒸餾水每管加蒸餾水0.5 ml0.5 ml，在，在510nm510nm波長處比色，以空白管調(diào)零，讀取各管

26、吸光度。根據(jù)各管波長處比色，以空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。根據(jù)各管吸光度吸光度計算其血糖濃度計算其血糖濃度。 結(jié)果計算結(jié)果計算取取3 3支試管，按下表操作支試管，按下表操作葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）葡萄糖標準液濃度葡萄糖標準液濃度A A標準管標準管A A測定管測定管=2021/4/26 精品PPT 36自動化分析儀檢測自動化分析儀檢測 試劑試劑主要成分與手動檢測類似，見試劑盒說明書。主要成分與手動檢測類似，見試劑盒說明書。工作液配置：根據(jù)標本量，臨時將酶試劑與緩沖液按工作液配置：根據(jù)標本量，臨時將酶試劑與緩沖液按 照照1:4比例混勻。比例混勻。 操作操作定標、質(zhì)量控制、標本上機定標、

27、質(zhì)量控制、標本上機 結(jié)果計算結(jié)果計算1 mg/dL X 0.0555=0.0555 mmol/L2021/4/26 精品PPT 37葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液的葡萄糖含量，但不葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液的葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。這是因為尿液中的尿酸等能直接測定尿液葡萄糖含量。這是因為尿液中的尿酸等干擾物質(zhì)濃度過高，可干擾過氧化物酶反應(yīng)，造成結(jié)果干擾物質(zhì)濃度過高，可干擾過氧化物酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。假性偏低。對于血液樣品需及時分離紅細胞。因為紅細胞的酵解將對于血液樣品需及時分離紅細胞。因為紅細胞的酵解將會導致測定結(jié)果偏低。建議測定樣品以草酸鉀會導致測定結(jié)果偏低。建議

28、測定樣品以草酸鉀- -氟化鈉氟化鈉為抗凝劑以抑制糖酵解。為抗凝劑以抑制糖酵解。注意事項注意事項2021/4/26 精品PPT 38嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清先制備無蛋白血濾液，嚴重黃疸、溶血及乳糜樣血清先制備無蛋白血濾液，然后在進行測定。然后在進行測定。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。 葡萄糖氧化酶對葡萄糖氧化酶對 - D 葡萄糖高度特異，溶液中的葡葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約萄糖約 36% 為為 型，型， 64% 為為 型。葡萄糖的完全氧型。葡萄糖的完全氧化需要化需要 型到型到 型的變旋反應(yīng)。葡萄糖變旋酶，可加型的變旋反應(yīng)。葡萄糖變旋酶，可加速這一反應(yīng)，延長孵育時間可達到

29、完成自發(fā)變旋過程速這一反應(yīng)，延長孵育時間可達到完成自發(fā)變旋過程。新配制的葡萄糖標準液主要是。新配制的葡萄糖標準液主要是 型，故須放置型，故須放置 2h 以上以上 ( 最好過夜最好過夜 ) ，待變旋平衡后方可應(yīng)用。，待變旋平衡后方可應(yīng)用。 注意事項注意事項2021/4/26 精品PPT 39計算：計算： 葡萄糖標準液：葡萄糖標準液：5 mmol/L5 mmol/L 血清葡萄糖（血清葡萄糖（mmol/Lmmol/L）=A=AT T/A/AS S C CS S參考值：參考值： 3.96.1 mmol/L2021/4/26 精品PPT 40本法測定葡萄糖非常特異，從原理反應(yīng)式中可知第一本法測定葡萄糖非

30、常特異，從原理反應(yīng)式中可知第一步是特異反應(yīng)，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在步是特異反應(yīng)，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應(yīng)的第二步。一些還原性物質(zhì)如尿酸、維生素反應(yīng)的第二步。一些還原性物質(zhì)如尿酸、維生素 C 、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質(zhì)競爭過氧化氫膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質(zhì)競爭過氧化氫，從而消耗反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的過氧化氫，產(chǎn)生競爭，從而消耗反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的過氧化氫，產(chǎn)生競爭性抑制，使測定結(jié)果偏低。但是對測定結(jié)果無顯著影性抑制，使測定結(jié)果偏低。但是對測定結(jié)果無顯著影響。響。實驗誤差分析：實驗誤差分析：2021/4/26 精品PPT 41實驗實驗 9-2己糖激酶（己糖激酶（H

31、K）法測定血糖）法測定血糖n原理：原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加與標本中的葡萄糖濃度成正比。n評價評價：本法特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動化分本法特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動化分析，為葡萄糖測定的參考方法，但是析，為葡萄糖測定的參考方法，但是試劑較貴試劑較貴。2021/4/26 精品PPT 42試劑盒配方試劑盒配方2021/4/26 精品PPT 43實驗操作實驗操作 （2 2）混勻，置）混勻，置 37 37 水浴保溫水浴保溫 1010分鐘，在分鐘，在340nm340nm波長處比色，波長處比色，比色皿光徑比色皿光徑1 cm1 cm、以蒸餾水調(diào)零，讀取

32、各管吸光度。根據(jù)各管吸、以蒸餾水調(diào)零，讀取各管吸光度。根據(jù)各管吸光度光度計算其血糖濃度計算其血糖濃度。 （3 3）結(jié)果計算）結(jié)果計算1 1）終點法）終點法（1 1）按下表操作）按下表操作2021/4/26 精品PPT 44實驗操作實驗操作 2）速率法）速率法 以半自動生化分析儀為例以半自動生化分析儀為例（1）主要參數(shù)如下）主要參數(shù)如下系數(shù)系數(shù)8.2孵育時間孵育時間30s監(jiān)測時間監(jiān)測時間60s波長波長340nm比色皿光徑比色皿光徑1.0cm溫度溫度37吸液量吸液量0.5mL （2）加樣）加樣 （3）結(jié)果計算）結(jié)果計算血清葡萄糖（血清葡萄糖（mmol/L）=(A/T)8.22021/4/26 精品

33、PPT 45注意事項及評價注意事項及評價試劑要求：各工具酶均需高純度產(chǎn)品。試劑要求：各工具酶均需高純度產(chǎn)品。準確度及精密度較高，適用于自動分析儀，但試劑準確度及精密度較高，適用于自動分析儀，但試劑較貴。較貴。己糖激酶法測定血糖不收輕度溶血、脂血、黃疸、己糖激酶法測定血糖不收輕度溶血、脂血、黃疸、尿酸、維生素尿酸、維生素C等干擾，但嚴重溶血的標本會影響測等干擾，但嚴重溶血的標本會影響測定結(jié)果。罕見病癥病例，特別是定結(jié)果。罕見病癥病例，特別是IgM型中，血液葡萄型中，血液葡萄糖測定結(jié)果不可靠。糖測定結(jié)果不可靠。2021/4/26 精品PPT 46不同檢測方法所提供的空腹正常血糖參考值存在不同檢測方

34、法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異。差異。葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法：3.93.96.1mmol/L6.1mmol/LFolin-WuFolin-Wu法：法：4.44.46.7mmol/L6.7mmol/L鄰鄰- -甲苯胺法：甲苯胺法：3.93.96.1mmol/L6.1mmol/L2021/4/26 精品PPT 47葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能反映血中葡萄糖：該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應(yīng)用與臨床。的真實含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應(yīng)用與臨床。 己糖激酶法己糖激酶法：特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于

35、自動化分析特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動化分析，為葡萄糖測定的參考方法，但是試劑較貴。，為葡萄糖測定的參考方法，但是試劑較貴。Folin-WuFolin-Wu法法：該法對葡萄糖：該法對葡萄糖無特異性無特異性，一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的，一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。反應(yīng)。鄰鄰- -甲苯胺法甲苯胺法：該法涉及強酸、加熱等反應(yīng)條件，不便于大規(guī)模檢測：該法涉及強酸、加熱等反應(yīng)條件，不便于大規(guī)模檢測，且鄰甲苯胺須蒸餾后使用，且鄰甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性有毒性，臨床和科研上已很少采用。，臨床和科研上已很少采用。血糖測定方法特點血糖測定方法特點2021/4/26 精品PPT 48 測定方法

36、測定方法 無機化學法無機化學法有機化學法有機化學法酶法酶法 參考范圍參考范圍3.9 - 6.1 mmol/L (70 110 mg/dL) 臨床意義臨床意義高血糖癥高血糖癥低血糖癥低血糖癥四、葡萄糖耐量試驗四、葡萄糖耐量試驗2021/4/26 精品PPT 492021/4/26 精品PPT 502021/4/26 精品PPT 512021/4/26 精品PPT 52第二節(jié)第二節(jié)血清糖基化蛋白質(zhì)測定血清糖基化蛋白質(zhì)測定2021/4/26 精品PPT 53血清糖基化蛋白質(zhì)測定血清糖基化蛋白質(zhì)測定比色法比色法(酶法酶法)測定糖化血紅蛋白測定糖化血紅蛋白果糖胺法測定糖化血清清蛋白果糖胺法測定糖化血清清

37、蛋白2021/4/26 精品PPT 54第三節(jié)第三節(jié)胰島素釋放及胰島素釋放及C肽釋放試驗肽釋放試驗2021/4/26 精品PPT 55胰島素釋放及胰島素釋放及C C肽釋放試驗肽釋放試驗化學發(fā)光免疫分析法化學發(fā)光免疫分析法(CLIA)測定胰島素測定胰島素電化學發(fā)光免疫分析法電化學發(fā)光免疫分析法(ECLIA)測定測定C肽肽2021/4/26 精品PPT 56第四節(jié)第四節(jié)糖代謝產(chǎn)物測定糖代謝產(chǎn)物測定2021/4/26 精品PPT 57糖代謝產(chǎn)物測定糖代謝產(chǎn)物測定血乳酸測定血乳酸測定血測定丙酮血測定丙酮血血-羥丁酸測定羥丁酸測定2021/4/26 精品PPT 58第五節(jié)第五節(jié)其他糖測定其他糖測定2021/4/26 精品PPT 59其他糖測定其他糖測定尿液果糖測定尿液果糖測定血半乳糖測定血半乳糖測定2021/4/26 精品PPT 609、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。May-22May-22Monday, May 02, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2:45:442:45