非發(fā)酵菌特征及鑒定思路

1、非非發(fā)發(fā)酵陰性桿菌特征酵陰性桿菌特征及鑒定思路及鑒定思路內(nèi)容內(nèi)容 非發(fā)酵細菌分類 主要非發(fā)酵細菌特征 非發(fā)酵細菌耐藥特征 臨床最常分離非發(fā)酵細菌鑒定非法酵革蘭陰性桿菌感染特點 引起臨床各科室引起臨床各科室 人體各部位感染人體各部位感染 鑒定比腸桿菌科復(fù)雜鑒定比腸桿菌科復(fù)雜 耐藥譜廣耐藥譜廣 臨床治療困難臨床治療困難l不發(fā)酵葡萄糖有氧方式代謝不發(fā)酵葡萄糖有氧方式代謝 u 非發(fā)酵菌的分類和命名非發(fā)酵菌的分類和命名l與腸桿菌科不同，非發(fā)酵菌不能簡單地歸與腸桿菌科不同，非發(fā)酵菌不能簡單地歸于具有明顯特征的某一菌科，且很多非發(fā)酵于具有明顯特征的某一菌科，且很多非發(fā)酵菌的正確分類問題仍未解決菌的正確分類問

2、題仍未解決l 主要的非發(fā)酵菌分為主要的非發(fā)酵菌分為6個科個科 1 分類不明分類不明非發(fā)酵細菌原分類: 假單孢菌科 奈瑟菌科 未分科非發(fā)酵細菌現(xiàn)代分類 假單孢菌科 產(chǎn)堿桿菌科 甲基球菌科 根瘤菌科 黃桿菌科 莫拉菌科 未定臨床常見非發(fā)酵菌的分類臨床常見非發(fā)酵菌的分類與鑒定方法相關(guān)的分組與鑒定方法相關(guān)的分組第一組第一組 有動力有動力,極鞭毛極鞭毛: 假單胞菌科假單胞菌科 rRNA群群IV rRNA-I: 假單孢菌屬 類鼻疽類鼻疽 ; 蔥頭蔥頭; 唐菖蒲唐菖蒲; 皮氏皮氏; 叢毛單胞菌屬叢毛單胞菌屬 食酸菌屬食酸菌屬嗜麥芽寡氧單胞菌嗜麥芽寡氧單胞菌木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種木糖氧化

3、亞種脫硝亞種脫硝亞種糞產(chǎn)堿桿菌糞產(chǎn)堿桿菌皮氏產(chǎn)堿桿菌皮氏產(chǎn)堿桿菌華麗桿菌屬華麗桿菌屬其余基因種未命名其余基因種未命名 氧化酶陰性氧化酶陰性 觸酶反應(yīng)不定觸酶反應(yīng)不定 吲哚吲哚 H2S 甲基紅甲基紅 VP反應(yīng)均陰性反應(yīng)均陰性 不產(chǎn)生賴、鳥氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解不產(chǎn)生賴、鳥氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶酶 有的種能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶有的種能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶 所有種不能還原硝酸鹽所有種不能還原硝酸鹽 大多數(shù)能利用枸櫞酸鹽大多數(shù)能利用枸櫞酸鹽 無動力，硝酸鹽還原陰性無動力，硝酸鹽還原陰性u 非銅綠非銅綠 鮑曼不動鮑曼不動 嗜麥芽嗜麥芽非法酵革蘭陰性桿菌的共同特點 在中國蘭或麥康開選擇培養(yǎng)基上呈不發(fā)酵乳

4、糖的菌落(中國蘭上粉紅色) 氧化酶大多陽性 有鞭毛或無鞭毛 革蘭陰性桿菌或球桿菌 不能發(fā)酵糖 色素鑒定非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的基本步驟 初始菌落識別初始菌落識別: 在中國蘭或麥康開培養(yǎng)基上呈不分解乳糖的菌落在中國蘭或麥康開培養(yǎng)基上呈不分解乳糖的菌落 氧化酶氧化酶 革蘭染色革蘭染色 色素色素 確認(rèn)非發(fā)酵細菌確認(rèn)非發(fā)酵細菌 O/F 鞭毛染色鞭毛染色 選擇鑒定系統(tǒng)選擇鑒定系統(tǒng) API 20NE ATB VIEK2Compact等等臨床常見非發(fā)酵革蘭陰性細菌的耐藥特征 銅綠假單孢菌 不動桿菌 嗜麥芽窄食單孢菌 綠膿桿菌耐藥機制 膜蛋白缺失使通透性下降 高產(chǎn)ampC酶; 產(chǎn)ESBL; 產(chǎn)金屬酶 泵出機制銅綠

5、假單孢菌 銅綠假單胞菌的細胞外膜上沒有大多數(shù)革銅綠假單胞菌的細胞外膜上沒有大多數(shù)革蘭陰性細菌所具有的典型的高滲透性孔蛋蘭陰性細菌所具有的典型的高滲透性孔蛋白，它的孔蛋白通道對小分子物質(zhì)的滲透白，它的孔蛋白通道對小分子物質(zhì)的滲透速度僅為典型孔蛋白通道的速度僅為典型孔蛋白通道的1%。 產(chǎn)KPC酶國內(nèi)： 已在腸桿菌科的多個菌屬中有報道。 肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、沙門菌屬、弗勞地檸檬酸桿菌和銅綠假單胞菌等。銅綠假單胞菌等。 該類酶除陰溝腸桿菌可有染色體介導(dǎo)外，其他各類細菌均可為質(zhì)粒介導(dǎo)，已成為臨床治療難題如何檢測? 產(chǎn)KPC酶的菌株用常規(guī)藥敏試驗不容易檢出。 CLSI關(guān)于碳

6、青霉烯類的判斷標(biāo)準(zhǔn)： 厄他培南2g/ml 亞胺培南、美羅培南4g/ml 因此，MIC2g/ml 或4g/ml的菌株仍可判斷為敏感的 警惕：在常規(guī)藥敏中如遇第三、第四代頭孢菌素以及其他的-內(nèi)酰胺類耐藥的菌株均應(yīng)該進行稀釋法測定碳青霉烯類的對這些菌株的MIC。檢測KPC酶的最佳底物 厄他培南是檢測KPC酶的最佳底物。 建議1：可將該藥列為常規(guī)藥敏試驗的品種 建議2：對所有具有ESBLs/AmpC酶樣表型（即對第三、第四代頭孢菌素耐藥）的腸桿菌科細菌采用紙片法或MIC法（E-試驗）進行厄他培南進行厄他培南（和其他碳青霉烯類）的測定。（和其他碳青霉烯類）的測定。 如如MIC為為2或或4g/ml應(yīng)視作有

7、產(chǎn)應(yīng)視作有產(chǎn)KPC酶和其他碳酶和其他碳青酶霉烯酶的可能。青酶霉烯酶的可能。 這時應(yīng)與臨床醫(yī)師聯(lián)系，并將該菌株送往參考試驗室作進一步的研究。改良的Hodge 試驗 0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝淮竽c埃希菌 ATCC25922涂布MH平板 中間貼亞胺培南（10g）紙片 接種待檢菌的無菌接種環(huán)自 紙片外緣向平板邊緣劃線 35過夜培養(yǎng) 結(jié)果判斷：亞胺培南抑菌圈內(nèi)出現(xiàn) 待檢菌矢狀生長者為產(chǎn)碳青霉烯酶 菌株 PCR 擴增試驗、DNA測序證實為某種KPC酶E coli ATCC25922KPC+？KPC -KPC+？不動桿菌的耐藥機制 對多種窄譜內(nèi)酰胺酶耐藥由于TEM1和CARB型內(nèi)酰胺酶 對新型三代頭孢菌素耐藥是因為

8、產(chǎn)大量染色體頭孢菌素酶和超廣譜的TEM酶 不動桿中最主要的碳青霉烯酶是不動桿中最主要的碳青霉烯酶是D D類酶類酶 OXA-23OXA-23、2424、2525、2626、2727、4040、4949、5151、 5454、5555、5858、6060 該酶能水解亞胺培南、青霉素，但不水解三代該酶能水解亞胺培南、青霉素，但不水解三代頭孢菌素頭孢菌素. .不動桿菌主要耐藥機制不動桿菌主要耐藥機制 不動桿菌中還不動桿菌中還產(chǎn)產(chǎn)IMPIMP或或VIMVIM型金屬酶，型金屬酶，該該酶水解底物范圍廣，包括碳青霉烯類、酶水解底物范圍廣，包括碳青霉烯類、青霉素類和頭孢菌素抗生素，不被克拉青霉素類和頭孢菌素抗生

9、素，不被克拉維酸等酶抑制劑抑制，但能被維酸等酶抑制劑抑制，但能被EDTAEDTA、2-2-巰基丙酸巰基丙酸抑制抑制 嗜麥芽窄食單胞菌 常感染嚴(yán)重衰弱和免疫力低下病人 在醫(yī)院水龍頭、污水排水孔呼吸機濕化器均可分離到 可引起菌血癥、心內(nèi)膜炎、醫(yī)院獲得性肺炎、尿路感染、皮膚、軟組織 靜脈放置插管是引起菌血癥的主要原因，死亡率達4169嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥機制 細胞壁對抗生素的親和力極差 膜蛋白對氨基糖甙滲透力低下 藥泵外排機制 產(chǎn)二種內(nèi)酰胺酶 L1 內(nèi)酰胺酶L2內(nèi)酰胺酶（金屬酶） （頭孢菌素酶） 細菌定植的定義 定植是個”相對”的概念 定植 感染宿主因素宿主因素細菌本身因素細菌本身因素下呼吸道感染中,非發(fā)酵菌是臨床棘手的問題 下呼吸道中,非發(fā)酵菌易定植 內(nèi)源性:細菌抵抗力強- 醫(yī)源性 抗生素選擇壓力 一旦演化為感染,病情重,死亡率高MIC/藥敏結(jié)果與臨床治療有矛盾分離株不一定是感染病原菌預(yù)防比治療更重要 在治療每一患者前用含酒精的洗手