上海交通大學(xué)微生物課件第2章

1、純培養(yǎng)和顯微技術(shù)純培養(yǎng)和顯微技術(shù)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院微生物的基本特點：??！t 在絕大多數(shù)情況下都是利用微生物的群體來研究其屬性；t 微生物的物種（菌株）一般也是以群體的形式進行繁衍、保存；培養(yǎng)技術(shù)在微生物學(xué)中具有重要意義！在研究中所使用的微生物培養(yǎng)群體：培養(yǎng)物：在一定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物：含有多種微生物的培養(yǎng)物；純培養(yǎng)物： 只有一種微生物的培養(yǎng)物；通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復(fù)的結(jié)果純培養(yǎng)技術(shù)是進行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！ 微生物個體微小的特點也決定了顯微技術(shù)是進行微生物研究的另一項重要技術(shù)，因為絕大多數(shù)微生物的個體形態(tài)及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)只能通過顯微鏡才能進行觀察和研究。微生物

2、的基本特點：小！第一節(jié) 微生物的分離和純培養(yǎng) 從混雜的群體中分離特定的某一種微生物，是研究和利用微生物的第一步。一、無菌技術(shù)t 用于分離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任何微生物；t 在轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)微生物時防止其它微生物的污染；1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌常用的器具：試管、瓶子、培養(yǎng)皿等1887年，R J Petri 發(fā)明 Petri dish高溫干熱滅菌高壓蒸汽滅菌試管、瓶子、培養(yǎng)皿等常用的滅菌方法：第6章第5節(jié)1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌常用的器具：2、接種操作無菌操作：火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進行2、接種操作無菌操作：在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進行二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)培養(yǎng)基：

3、液體培養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基；半固體培養(yǎng)基；瓊脂二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)菌落（colony）： 單個（或聚集在一起的一團）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、 有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞生長群體,圖2-3眾多菌落連成一片菌苔（lawn）圖2-5（ 圖 2-3）同一細菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個菌落的基本方法：稀釋！二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)2、稀釋倒平板法1、涂布平板法操作較麻煩，對好氧菌、熱敏感菌效果不好！使用較多的常規(guī)方法，但有時涂布不均勻！二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)3、平板劃線法二、用固體

4、培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)4、厭氧微生物的分離厭氧罐厭氧手套箱三、用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng) 稀釋法進行液體分離必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，大多數(shù)（一般應(yīng)超過95%）表現(xiàn)為不生長。四、單細胞（孢子）分離t 一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進行；t 操作難度與細胞或個體的大小成反比；五、選擇培養(yǎng)分離t 抑制大多數(shù)其它微生物的生長；t 使待分離的微生物生長更快；微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化：沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中一切生物 生長的要求，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。五、選擇培養(yǎng)分離1. 利用選擇平板進行直接分離待分離的微生物生長，其它微生物的生長被抑制t 高溫下培養(yǎng)

5、：分離嗜熱細菌；t 培養(yǎng)基中不含N：分離固氮菌；t 培養(yǎng)基加抗生素：分離抗性菌；五、選擇培養(yǎng)分離2. 富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)是微生物學(xué)家最強有力的技術(shù)手段之一。營養(yǎng)和生理條件的幾乎無窮盡的組合形式可應(yīng)用于從自然界選擇出特定微生物的需要。七、微生物的保藏技術(shù)1傳代保存2液體冷凍保存3冷凍干燥保存第二節(jié) 顯微鏡和顯微技術(shù)實驗課講解普通光學(xué)顯微鏡，其他顯微鏡的有關(guān)內(nèi)容略第三節(jié) 顯微鏡下的微生物微生物（病毒）古生菌（Archaea）細菌（Bacteria）真菌（酵母、霉菌、蕈菌等）、 單細胞藻類、 原生動物等非細胞型細胞型真核微生物（Eukarya）又稱真細菌（eubacteria），包括普通細菌、放線菌、

6、藍細菌、 枝原體、立克次氏體和衣原體等古生菌在進化譜系上與真細菌及真核生物相互并列，且與后者關(guān)系更近，而其細胞構(gòu)造卻與真細菌較為接近，同屬于原核生物。本教材將古生菌與真細菌合并介紹。一、細菌1、一般個體形態(tài)和排列球狀桿狀螺旋狀基本形態(tài)一般細菌的大小范圍：0.5 1 mm （直徑）0.2 1 mm （直徑） X 1 80 mm（長度）0.3 1 mm （直徑） X 1 50 mm（長度）(長度是菌體兩端點之間的距離，而非實際長度)A、球狀 細胞個體呈球形或橢圓形，不同種的球菌在細胞分裂時會形成不同的空間排列方式，常被作為分類依據(jù)。B、桿狀 細胞呈桿狀或圓柱形，一般其粗細（直徑）比較穩(wěn)定，而長度則常因培養(yǎng)時間、培養(yǎng)條件不同而有較大變化。炭疽病的病原菌 -炭疽桿菌破傷風(fēng)梭菌C、螺旋狀弧菌螺旋菌螺旋體菌弧菌：菌體只有一個彎曲，其程度不足一圈，形似“C”字或逗號，鞭毛偏端生。(寄生性弧菌-蛭弧菌)螺旋菌：菌體回轉(zhuǎn)如螺旋，螺旋數(shù)目和螺距大小因種而異。鞭毛二端生。細胞壁堅韌，菌體較硬。螺旋體菌：菌體柔軟，用于運動的類似鞭毛的軸絲位于細胞外鞘內(nèi)。梅毒密螺旋體圖2-15二、古生菌方形細菌（square-shaped bacteria）星形細菌（star-shape