專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用知識點填空附答案

1、專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)1 .根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)可將培養(yǎng)基可以分為和02 .培養(yǎng)基一般都含有、四類營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對、以及的要求。3 .獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是。4 .消毒是指5 .日常生活中常用的消毒方法是,止匕外，人們也常使用化學(xué)藥劑進行消毒，如用、等。常用的滅菌方法有、,止匕外，實驗室里還用或進行消毒。6 .制備牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基的方法步驟是,，,，。7 .微生物接種的方法中最常用的是和。是指。稀釋涂布平板法指08.菌種的保藏：(1)臨時保藏：將菌種接種到試管的，在合適的溫度下培養(yǎng)，長成后，放入冰箱中保藏，以后每36個月，轉(zhuǎn)移一次新的培養(yǎng)基。

2、缺點是：保存時間，菌種容易被或產(chǎn)生變異。(2)長期保存方法：法，放在冷凍箱中保存。P15旁欄思考題：無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。P16旁欄思考題：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。(1)培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿(2)玻棒、試管、燒瓶和吸管(3)實驗操作者的雙手(1)、(2)需要滅菌；(3)需要消毒。P17倒平板操作的討論1 .培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50C左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不

3、燙手時，就可以進行倒平板了。2 .為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3 .平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。4 .在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。P18平板劃線操作的討論1 .為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需

4、要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。2 .在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3 .在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能

5、使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。P19涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進行無菌操作？應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。P20六、課題成果評價1 .培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。2 .接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作

6、是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。3 .是否進行了及時細致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。P20練習(xí)1 .提示：可以從微生物生長需要哪些條件的角度來思考。例如，微生物的生長需要水、空氣、適宜的溫度，食品保存可以通過保持干燥、真空的條件，以及冷藏等方法來阻止微生物的生長。2 .提示：可以從這三種培養(yǎng)技術(shù)的原理、操作步驟等方面分別進行總結(jié)歸納。例如，這三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足

7、的營養(yǎng)，但無土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無菌的條件，而其他兩種技術(shù)都要求嚴格的無菌條件。3 .提示：這是一道開放性的問題，答案并不惟一，重點在于鼓勵學(xué)生積極參與，從不同的角度思考問題。例如，正是由于證明了微生物不是自發(fā)產(chǎn)生的，微生物學(xué)才可能發(fā)展成為一門獨立的學(xué)科；巴斯德實驗中用到的加熱滅菌的方法導(dǎo)致了有效的滅菌方法的出現(xiàn)，而這一滅菌原理也適用于食品的保存等。課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)1 .尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。選擇分解尿素細菌的培養(yǎng)基特點：惟一氮源，按物理性質(zhì)歸類為性關(guān)官1口加分。2 一PCR()是一種在體外將。此項技術(shù)的自動化，要求使用耐高溫的DNA聚合酶。3

8、 實驗室中微生物的篩選應(yīng)用的原理是：人為提供有利于生長的條件(包括等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。4 .選擇培養(yǎng)基是指05 .常用來統(tǒng)計樣品中活菌數(shù)目的方法是。即當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在的平板進行計數(shù)，計數(shù)公式是。利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是。另外，也是測定微生物數(shù)量的常用方法。6 .一般來說，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目。這是因為一。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用而不是活菌數(shù)來表示。7 .設(shè)置對照實驗的主要目的是，提高實驗結(jié)果的可信度。對照實

9、驗是。滿足該條件的稱為,未滿足該條件的稱為08 .實驗設(shè)計包括的內(nèi)容有：、和具體的實驗步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。9 .不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)和培養(yǎng)。在實驗過程中，一般每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以。10 .土壤有“”之稱，同其他生物環(huán)境相比，土壤中微生物、。11 .土壤中的微生物約是細菌，細菌適宜在酸堿度接近潮濕土壤中生長。土壤中微生物的數(shù)量不同，分離不同微生物采用的的稀釋度不同。12 .一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。這些特征包括菌落的、和等方面。13 .在進行多組實驗過程中，應(yīng)注意做好標(biāo)記，其目

10、的是。14 .對所需的微生物進行初步篩選，只是分離純化菌種的第一步，要對分離的菌種進行一步的鑒定，還需要借助的方法。15 .在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細菌合成的將尿素分解成了。氨會使培養(yǎng)基的堿性,PH。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基變化來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果PH升高，指示劑將變說明該細菌能夠。P22旁欄思考題1 .想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進行計算。P22兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)，

11、在對應(yīng)稀釋倍數(shù)106的培養(yǎng)集中，得到以下兩種統(tǒng)計結(jié)果：1.第一位同學(xué)在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230;2.第二位同學(xué)在該濃度下涂布了三個平板第一位同學(xué)只涂布了一個平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數(shù)值用來求平均值。P22設(shè)置對照A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同，可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同，二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個原因，可以通過實驗來證明。實驗方案有兩種。一種方案是可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣

12、進行實驗，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有說服力，對照的設(shè)置是必不可少的。P24旁欄思考題為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？這是因為土壤中各類微生物的數(shù)量（單位：株/kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。因此，為獲得不同類型的微

13、生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應(yīng)當(dāng)有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。P25結(jié)果分析與評價2 .培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。3 .樣品的稀釋操作是否成功如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)。4 .重復(fù)組的結(jié)果是否一致如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠，教師需要引導(dǎo)學(xué)生一起分析產(chǎn)生差異的原因。P26練習(xí)2.提示：反芻動物的瘤胃中含有大量的

14、微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設(shè)計。課題3分解纖維素的微生物的分離1 .纖維素是類物質(zhì)，是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，止匕外，木材、作物秸稈等也富含纖維素。2 .纖維素酶是一種酶，一般認為它至少包括三種組分，即、和,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成。正是在這三種酶的協(xié)同作用下，纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長提供營養(yǎng)，同樣，也可以為人類所利用。3 .篩選纖維素分解菌可以用法，這種方法能夠通過直接對微生物進行篩選?？梢?/p>

15、與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成，但并不和水解后的和發(fā)生這種反應(yīng)。纖維素分解菌能產(chǎn)生分解纖維素，從而使菌落周圍形成。4 .分離分解纖維素的微生物的實驗流程圖如下：-梯度稀釋05 .為確定得到的菌是否是纖維素分解菌，還學(xué)講行的實驗。纖維素酶的發(fā)酵方法有發(fā)酵和發(fā)酵。測定方法一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的進行定量測定。P28旁欄思考題1 .本實驗的流程與課題2中的實驗流程有哪些異同？本實驗流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一

16、致。2 .為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。3 .將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應(yīng)該埋進土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。P29旁欄思考題1 .想一想，這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足？你打算選用哪一種方法？（兩種剛果紅染色法的比較）方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；具優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素

17、分解菌的作用。方法二的優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。2 .為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。P29六、課題

18、成果評價1 .培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落：對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。2 .分離的結(jié)果是否一致：由于在土壤中細菌的數(shù)量遠遠高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。P30練習(xí)3 .答：流程圖表示如下。土壤取樣-選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）-梯度稀釋-將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上-挑選單菌落發(fā)酵培養(yǎng)專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)1 .液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基2 .水碳源氮源無機鹽PH特殊營養(yǎng)物質(zhì)氧氣3 .防止外來雜菌的污染4 .使用較為溫和的方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有危害的微生物使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外微生物，包括芽抱和抱子5 .煮沸消毒酒精氯氣灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌紫外線化學(xué)藥物6 .計算稱量融化滅菌倒平板7 .平板劃線法稀釋涂布法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃