課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數

1、CO(NHCO(NH2 2) )2 2 + H + H2 2O COO CO2 2 + 2NH + 2NH3 3脲酶脲酶 允許允許特定種類特定種類的微生物生長，同時的微生物生長，同時抑制或阻止其他抑制或阻止其他種類種類微生物生長的培養(yǎng)基，叫做微生物生長的培養(yǎng)基，叫做選擇培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基。尿素尿素尿素尿素1、利用尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基分離出的微生物只是一種細菌嗎？思考：思考： 不是，有多種。 不一定。因為有些微生物可以利用其他微生物的代謝產物進行生長繁殖。 因此，還需借助生物化學方法對分離的細菌作進一步的鑒定。都是能分解尿素的微生物嗎？2、請你提供一種方法，判斷分解尿素的細菌確實能將尿素分解

2、成氨。 在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚酞指示劑,接種培養(yǎng)該細菌，若指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。. .統(tǒng)計菌落數目：統(tǒng)計菌落數目：1.1.顯微鏡直接計數法：顯微鏡直接計數法：這種方法是利用特定這種方法是利用特定細菌細菌計數板或血細胞計數板計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數量。積里樣品中微生物的數量。此法的缺點是不能區(qū)此法的缺點是不能區(qū)分死菌和活菌。分死菌和活菌。2.2.間接計數法（間接計數法（活菌計數法）活菌計數法）每克樣品中的菌落數每克樣品中的菌落數(C(CV)V)M M 其中，其中，C C代表代表某一稀釋度下平板上生長的某一稀釋度

3、下平板上生長的平均平均菌落數菌落數，V V代表代表涂布平板時所用的涂布平板時所用的稀釋液的體積稀釋液的體積(ml)(ml)，M M代表稀釋倍數代表稀釋倍數。在設計實驗時，一定在設計實驗時，一定要涂布要涂布至少至少3 3個平板個平板，作為重復組，才能增強實驗的說服力，作為重復組，才能增強實驗的說服力與準確性與準確性。在分析實驗結果時，在分析實驗結果時，一定要考慮所設置的重復一定要考慮所設置的重復組的組的結果是否一致，如不一致，意味著操作有誤，結果是否一致，如不一致，意味著操作有誤，需要重需要重新實驗新實驗。計算公式：計算公式：每克樣品中的菌株數每克樣品中的菌株數 =（CV）MB例：某同學在稀釋倍

4、數為106 的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數的平均數為234，那么每克樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml） A. 2.34108B. 2.34109C. 234D. 23.4 （三）設置對照（三）設置對照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：將未接種的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)。將未接種的培養(yǎng)基同時進行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：完全培養(yǎng)基（營養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)完全培養(yǎng)基（營養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)觀察菌落數目。觀察菌落數目。主要目的是主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響結果的影響，提

5、高實驗結果的可信度。，提高實驗結果的可信度。 從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土先鏟去表層土3cm3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。準備好的信封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。 由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數為稀釋倍數為103107。 準備準備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和和選擇培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基。每個

6、稀釋每個稀釋度下需要度下需要3個選擇培養(yǎng)基，個選擇培養(yǎng)基，1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。還個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。還需要需要8個滅菌試管和個滅菌試管和1個滅菌移液管個滅菌移液管 。 思考：思考：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數量，選用的稀釋范圍相同嗎？解尿素的細菌的數量，選用的稀釋范圍相同嗎？實驗時要對培實驗時要對培養(yǎng)皿養(yǎng)皿作好標記作好標記。注明培養(yǎng)基類型、注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。度、培養(yǎng)物等。1 1、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封

7、在使用前都需要滅菌。、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。2 2、應在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐、應在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。形瓶中，塞好棉塞。3 3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。的稀釋度等。 三三. .操作提示操作提示1.1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.A.培養(yǎng)細菌培養(yǎng)細菌 B.B.培養(yǎng)真菌培養(yǎng)真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微

8、生物大量繁殖 D.D.表現某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別表現某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別2.2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( )( ) A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素C CD D3.3.下列說法不正確的是（下列說法不正確的是（ ）A.A.科學家從科學家從70708080度熱泉中分離到耐高溫的度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNATaqDNA聚聚 合酶。合酶。B.B.統(tǒng)計某一稀釋度的統(tǒng)計某一稀釋度的5 5個平板的菌落數依次為個平板的菌落數依次為M1M1、M2M2、 M3 M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作為該樣品菌落數的估計值。作為該樣品菌落數的估計值。C.C.設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因設置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因 素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度D.D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數量最大，同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數量最大， 種類最多