丙烯酰胺測(cè)定方法

1、水質(zhì)丙烯酰胺的測(cè)定固相萃取-高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法編制說(shuō)明（送審稿）水質(zhì)丙烯酰胺的測(cè)定高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法標(biāo)準(zhǔn)編制組2012年10月1項(xiàng)目背景11.1任務(wù)來(lái)源11.2工作過(guò)程12標(biāo)準(zhǔn)制訂的必要性分析12.1丙烯酰胺的環(huán)境危害12.2相關(guān)環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)和環(huán)保工作的需要22.3新建標(biāo)準(zhǔn)方法的優(yōu)勢(shì)23國(guó)內(nèi)外相關(guān)分析方法實(shí)施情況與存在問(wèn)題24標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原則和技術(shù)路線34.1標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原則34.2標(biāo)準(zhǔn)的適應(yīng)范圍和主要技術(shù)內(nèi)容34.3標(biāo)準(zhǔn)制訂的技術(shù)路線35方法研究扌報(bào)告55.1方法研究的目的55.2方法原理55.3試劑和材料55.4儀器和設(shè)備65.5樣品65.6分析步驟75.7結(jié)果計(jì)算與表述9

2、5.8檢出限、精密度和準(zhǔn)確度105.9質(zhì)量保證和質(zhì)量控制126方法驗(yàn)證126.1方法驗(yàn)證方案136.2 方法驗(yàn)證過(guò)程137標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容的解釋138對(duì)實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)的建議149質(zhì)量保證和質(zhì)量控制149.2空白149.2加標(biāo)149.3平行樣149.4校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)1410參考文獻(xiàn)14水質(zhì)丙烯酰胺的測(cè)定高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法編制說(shuō)明1. 項(xiàng)目背景1.1 任務(wù)來(lái)源水質(zhì)丙烯酰胺的測(cè)定高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法標(biāo)準(zhǔn)的制定工作，是按照陜西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局陜質(zhì)監(jiān)標(biāo)【2011】第6號(hào)文關(guān)于下達(dá)2011年第一批地方標(biāo)準(zhǔn)修制訂計(jì)劃的通知規(guī)定起草的，由陜西省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站負(fù)責(zé)制定，項(xiàng)目計(jì)劃編號(hào)為25號(hào)。1.2 工作過(guò)

3、程標(biāo)準(zhǔn)制定任務(wù)下達(dá)后，陜西省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站立即成立了標(biāo)準(zhǔn)編制組。編制組在查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)、標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，制定實(shí)施方案，進(jìn)行開(kāi)題論證。按照方案，進(jìn)行了方法的條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定方法藍(lán)本，然后在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間進(jìn)行方法的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，最后，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果，完成標(biāo)準(zhǔn)（征求意見(jiàn)稿）的編制。2. 標(biāo)準(zhǔn)制訂的必要性分析2.1 丙烯酰胺的環(huán)境危害丙烯酰胺，分子式：CHNO，分子量為71.08，為白色結(jié)晶固體，無(wú)氣味，35熔點(diǎn)：84.5°C，飽和蒸汽壓：0.21Kpa（84.5°C）。溶于水、乙醇、乙醚、丙酮等,但不溶于苯。丙烯酰胺是聚丙烯酰胺的單體，聚丙烯酰胺是一種水溶性高分子聚合物，主要應(yīng)

4、用于水的凈化處理方面。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在發(fā)達(dá)國(guó)家水處理應(yīng)用方面，美國(guó)占聚丙烯酰胺總用量的36%、西歐占35%、日本占49%；近年來(lái)，聚丙烯酰胺在我國(guó)水處理方面應(yīng)用也越來(lái)越廣泛，雖然聚丙烯酰胺被認(rèn)為是無(wú)毒的，但其單體的毒性卻是被肯定的；丙烯酰胺已被國(guó)家癌癥中心（IARC）列為W類(lèi)致癌物，急性毒性實(shí)驗(yàn)證明丙烯酰胺有神經(jīng)毒性、生殖、發(fā)育毒性，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明丙烯酰胺可導(dǎo)致遺傳物質(zhì)的改變和癌癥的發(fā)生。在飲用水和地表水中，丙烯酰胺主要來(lái)源于使用有丙烯酰胺單體殘留的聚丙烯酰胺絮凝劑。所以水中丙烯酰胺的分析是環(huán)境分析中的一項(xiàng)重要內(nèi)容。2.2相關(guān)環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)和環(huán)保工作的需要由于丙烯酰胺對(duì)環(huán)境的危害較大，它已被我國(guó)列入水中優(yōu)先

5、控制的污染物。我國(guó)的地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB3838-2002）規(guī)定丙烯酰胺的標(biāo)準(zhǔn)限值為0.0005mg/L。在環(huán)境分析中還沒(méi)有建立相關(guān)的國(guó)家及地方標(biāo)準(zhǔn)分析方法。因此，建立快速、靈敏的水中丙烯酰胺的監(jiān)測(cè)分析方法，對(duì)了解水環(huán)境的質(zhì)量，保護(hù)水質(zhì)環(huán)境安全，保障公眾飲水安全，對(duì)人群健康的影響具有重要的意義。2.3新建標(biāo)準(zhǔn)方法的優(yōu)勢(shì)HPLC-MS/MS分析水樣中的丙烯酰胺，其優(yōu)勢(shì)是：（1）提高了分析效率。由于取樣量少，大大縮短了分析時(shí)間。（2）定性準(zhǔn)確，在不能完全將干擾物質(zhì)分離的情況下仍可以準(zhǔn)確定性定量，掃描方式可以選擇多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；抗干擾能力非常強(qiáng)。（3）檢出限更低，三重四級(jí)桿質(zhì)譜具有非常高的

6、靈敏度，因此，檢出限可達(dá)0.008口g/L,而GC方法檢出限為0.15口g/L（取樣量100ml水）,HPLC方法檢出限為0.1口g/L（取樣量300mL）。3. 國(guó)內(nèi)外相關(guān)分析方法實(shí)施情況與存在問(wèn)題關(guān)于水中丙烯酰胺的測(cè)定，國(guó)外多采用氣相色譜法、高效液相色譜法等方法進(jìn)行測(cè)定；如美國(guó)EPA8032A用氣相色譜法，前處理采用溴化衍生-液液萃取。EPA8316采用高效液相色譜法，但其主要檢測(cè)對(duì)象為除水外的其它基質(zhì)，而且方法檢出限高達(dá)10口g/L。國(guó)內(nèi)關(guān)于水中丙烯酰胺的測(cè)定主要是氣相色譜法，氣相色譜-質(zhì)譜法。生活飲用水衛(wèi)生規(guī)范（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部2001）中，采用溴化衍生液液萃取-氣相色譜法測(cè)定飲用

7、水中的丙烯酰胺；中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)食品中丙烯酰胺的測(cè)定方法同位素內(nèi)標(biāo)法（SN/T2096-2008）中使用氣相色譜儀-質(zhì)譜法。前處理采用石墨化碳黑層析柱凈化，凈化液中的丙烯酰胺經(jīng)溴水衍生化后，用同位素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)法，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)。以上GC和GC-MS測(cè)定丙烯酰胺，一般都需要經(jīng)過(guò)繁瑣的溴化衍生-液液萃取過(guò)程，測(cè)定周期長(zhǎng)，復(fù)雜的前處理過(guò)程也造成方法精密度、準(zhǔn)確度等性能不穩(wěn)定；HPLC方法，定性能力差，檢出限高。4. 標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原則和技術(shù)路線4.1 標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原則(1) 方法檢出限和測(cè)定范圍滿(mǎn)足地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(GB3838-2002)等相關(guān)環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)和環(huán)保工作的

8、要求。(2) 方法準(zhǔn)確可靠、滿(mǎn)足各項(xiàng)方法特性指標(biāo)的要求。(3) 方法具有普遍適用性，易于推廣使用。(4)標(biāo)準(zhǔn)的格式按照環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則(HJ/T168-2010)、標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)(GB/T1.1-2009)的要求制定。4.2 標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍和主要技術(shù)內(nèi)容(1) 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定地表水及飲用水中丙烯酰胺的固相萃取-高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法的范圍、方法原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品、分析步驟、結(jié)果計(jì)算、準(zhǔn)確度和精密度、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制。(2) 本標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法，側(cè)重儀器分析條件的建立以及質(zhì)量保證和質(zhì)量控制，同時(shí)兼顧便捷、準(zhǔn)確的

9、可操作性。4.3 標(biāo)準(zhǔn)制訂的技術(shù)路線本標(biāo)準(zhǔn)的制訂是在查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，制定實(shí)驗(yàn)方案，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)、驗(yàn)證試驗(yàn)后，編制標(biāo)準(zhǔn)的草稿，再通過(guò)實(shí)驗(yàn)室間的驗(yàn)證試驗(yàn)，完成標(biāo)準(zhǔn)(征求意見(jiàn)稿)的編制。通過(guò)在全省進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿的意見(jiàn)征求、匯總、修訂，完成標(biāo)準(zhǔn)送審稿的編制。陜西省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局組織專(zhuān)家對(duì)標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行評(píng)審，標(biāo)準(zhǔn)編制組根據(jù)評(píng)審意見(jiàn)，進(jìn)行修改完善，最后形成標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿。技術(shù)路線圖見(jiàn)下圖。標(biāo)準(zhǔn)管理部門(mén)下達(dá)制訂計(jì)劃成立標(biāo)準(zhǔn)編制組標(biāo)準(zhǔn)編制組進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研標(biāo)準(zhǔn)編制組通過(guò)初步實(shí)驗(yàn)完善和確定實(shí)驗(yàn)方案開(kāi)題論證，確定方法驗(yàn)證技術(shù)路線和疑難問(wèn)題解決途徑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證，完善實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)主編單位按要

10、求選擇驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室，開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證工作標(biāo)準(zhǔn)編制組編與標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿及編制說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)編制組對(duì)征求的意見(jiàn)進(jìn)行匯總，形成送審稿及編制說(shuō)明送審稿經(jīng)審查合格后，提交報(bào)批稿及編制說(shuō)明報(bào)批稿經(jīng)審查合格后標(biāo)準(zhǔn)管理部門(mén)進(jìn)行批準(zhǔn)、編號(hào)、發(fā)布5. 方法研究報(bào)告5.1方法研究的目的(1)本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水和飲用水中丙烯酰胺的測(cè)定。(2)通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的制訂，使該監(jiān)測(cè)方法的檢出限、精密度、準(zhǔn)確度等滿(mǎn)足地表水及飲用水等環(huán)境質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)丙烯酰胺的測(cè)定要求。我國(guó)的地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(GB3838-2002)規(guī)定丙烯酰胺的標(biāo)準(zhǔn)限值為0.0005mg/L。制訂后的標(biāo)準(zhǔn)中，按環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則(HJ168-2010)

11、附錄A要求測(cè)定方法檢出限，丙烯酰胺的檢出限為0.008口g/L,以4倍檢出限作為測(cè)定下限，測(cè)定下限為0.032»g/L,測(cè)定下限可滿(mǎn)足環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)丙烯酰胺的監(jiān)測(cè)要求。5.2方法原理本方法采用Sep-PakAC2-Plus固相萃取小柱對(duì)水樣中的痕量丙烯酰胺進(jìn)行富集，使用甲醇洗脫，洗脫液濃縮至剛干為宜，迅速加ImL超純水定容，過(guò)PTFE一次性濾膜后，目標(biāo)物經(jīng)過(guò)HPLC分離進(jìn)入三重四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)器，定性定量分析。5.3試劑和材料5.3.1除非另有說(shuō)明，分析時(shí)均使用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的HPLC-MS專(zhuān)用試劑和高純水。5.3.2 甲醇HPLC級(jí)。5.3.3 甲酸HPLC-MS專(zhuān)用。5.3.4 0.

12、45口m次性PTFE微孔濾膜水系。5.3.5 固相萃取小柱SampliQC18ODS500mg/6mL固相萃取小柱；Oasis©HLB6cc(150mg)固相萃取小柱；Sep-PakAC2-Plus固相萃取小柱。5.3.6丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，P=1000.0mg/L市售有證丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為P=1000.0mg/L,介質(zhì)為甲醇，在4°C冰箱中保存。5.3.7丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，P=1.0mg/L準(zhǔn)確吸取丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（5.3.5）100UL于lOOmL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，在4C冰箱中保存。5.4 儀器和設(shè)備5.4.1 高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀（三重四極

13、桿質(zhì)譜）。5.4.2 色譜柱的選用。選用反相ODS柱即十八烷基硅烷化學(xué)鍵合相色譜柱，規(guī)格150mm（柱長(zhǎng)）X2.1mm（內(nèi)徑），5.0口m（粒徑）。5.5 樣品5.5.1 樣品采集及保存樣品應(yīng)采集在棕色玻璃容器中。采樣前用待測(cè)水樣將樣品瓶清洗23次。采樣后，水樣應(yīng)充滿(mǎn)樣品瓶并加蓋密封，置于4C冰箱內(nèi)避光保存。5.5.2 樣品制備5.5.2.1 關(guān)于取樣量的選擇由于HPLC-MS/MS具有極低的檢出限，因此取用10mL水樣進(jìn)行固相萃取等前處理步驟，即滿(mǎn)足定性定量要求。5.5.2.2 固相萃取條件的優(yōu)化飲用水及地表水中的丙烯酰胺采用直接進(jìn)樣法就能滿(mǎn)足分析需要，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大部分地表水及飲用水對(duì)丙烯

14、酰胺具有基質(zhì)抑制效應(yīng)，加標(biāo)回收率僅能達(dá)到50%左右；而且隨著加標(biāo)濃度增大抑制效應(yīng)越明顯；因此，如果不考慮基質(zhì)抑制作用，就會(huì)大大低估水中丙烯酰胺的濃度，故需要考慮固相萃取法對(duì)樣品進(jìn)行前處理。5.5.2.3 固相萃取小柱及洗脫溶液選擇A.固相萃取小柱的選擇本實(shí)驗(yàn)采用SampliQC18ODS500mg/6mL，Oasis®HLB6cc（150mg），Sep-PakAC2-Plus三種固相萃取小柱（5.3.5），先用10mL甲醇（5.3.2），再用10mL水對(duì)其活化，留5mL水浸泡固相萃取小柱15min后上樣過(guò)柱富集，小柱吹干后，用10mL甲醇（5.3.2）洗脫，洗脫液氮吹至干，加1mL超

15、純水定容，過(guò)0.45口m一次性微孔濾膜（5.3.4）過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定。從萃取效果來(lái)看，用Sep-PakAC2-Plus柱萃取樣品加標(biāo)回收率能達(dá)到70%以上，而其它兩種都低于5%。因此本實(shí)驗(yàn)選擇Sep-PakAC2-Plus萃取小柱，見(jiàn)表1。表1不同萃取小柱對(duì)加標(biāo)水樣的回收率比較小柱規(guī)格C18HLBAC2丙烯酰胺加標(biāo)回收率5%7%10%15%70%95%B.洗脫液用量的選擇分別用2mL、4mL、6mL、8mL、10mL、12mL、15mL的甲醇對(duì)富集的目標(biāo)物進(jìn)行洗脫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著洗脫液用量的增加回收率越高，當(dāng)洗脫液用量大于10mL時(shí)，回收率達(dá)到最高，且相差不大，為了節(jié)約氮吹時(shí)間，提高效率并保證回

16、收率，本實(shí)驗(yàn)洗脫劑用量選擇為10mL。5.6 分析步驟5.6.1 有關(guān)色譜-質(zhì)譜條件5.6.1.1 流動(dòng)相條件選擇分別使用水-甲醇、5mmol/L乙酸銨水溶液-甲醇、5mmol/L乙酸銨-0.1%甲酸水溶液-甲醇、0.1%甲酸水溶液-甲醇等做流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)用0.1%甲酸水溶液-甲醇梯度洗脫，靈敏度高，峰對(duì)稱(chēng)性好，見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)色譜圖1,流動(dòng)相梯度洗脫程序見(jiàn)表1。丙烯酰胺的保留時(shí)間為1.63min。-7-圖1丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖表2流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間(min)流速(uL/min)0.1%甲酸溶液()甲醇()0.004009910.404009912.5040040602.514009915.0040

17、09915.6.1.2質(zhì)譜條件優(yōu)化離子化模式：電噴霧電離正離子模式(ESI+)；質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM),母離子(Parent)(m/z):72.375子離子(Product)(m/z):55.487碰撞能量(CollisionEnergy):11V管狀透鏡電壓(Tubelens):65V鞘氣(Sheathgas):35psi輔助氣(Auxiliarygas):10arb毛細(xì)管溫度(CapiliaryTemperature)：350°C分辨率(FWHM)：0.70。蒸發(fā)器溫度(VaporizerTemperature):450C極性：正噴霧電壓(SprayVoltage)(

18、V):35005.6.1.3進(jìn)樣量選擇由于質(zhì)譜為質(zhì)量型檢測(cè)器，進(jìn)樣量越大，響應(yīng)值越高，因此，加大進(jìn)樣量能最大限度的提高方法檢出限，但進(jìn)樣量過(guò)大會(huì)加大色譜峰的拖尾;分別選擇5»L、10L、25口L、50口L、100uL進(jìn)樣量上機(jī)測(cè)定，實(shí)驗(yàn)證明，50uL進(jìn)樣量響應(yīng)值高，且峰對(duì)稱(chēng)性好，而進(jìn)樣100口L時(shí)，峰拖尾嚴(yán)重。因此，進(jìn)樣量選擇50口L。5.6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立將丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.3.6）用甲醇（5.3.2）逐級(jí)稀釋?zhuān)詈笥眉兯渲茲舛确謩e為0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16、20口g/L的使用液，以峰面積對(duì)濃度作線性回歸分析，回歸方程見(jiàn)表3，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。表

19、3丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定編號(hào)12345678濃度（ug/L）0.20.51.02.04.08.016.020.0峰面積13033356617633314409329755856698311337411499140線性方程Y=73414X-3617線性相關(guān)系數(shù)r=0.99965.6.3 每次分析前用中間濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作常規(guī)校準(zhǔn)試驗(yàn)和空白試驗(yàn)：采用和樣品分析相同的試劑和步驟，制備全程序空白溶液，并做為日常的質(zhì)控手段。5.7 結(jié)果計(jì)算與表述5.7.1 制定的標(biāo)準(zhǔn)中采用以樣品的保留時(shí)間和標(biāo)樣的保留時(shí)間相比及特征離子來(lái)定性。用作定性的保留時(shí)間窗口寬度以當(dāng)天測(cè)定標(biāo)樣的實(shí)際保留時(shí)間變化為基準(zhǔn)。5.7.2制定的

20、標(biāo)準(zhǔn)中采用外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法按式（1）來(lái)定量水中丙烯酰胺的濃度。P=(Y-aV/(KXV)ts(1)式中：P水樣中丙烯酰胺的濃度，口g/L；V 水樣中丙烯酰胺的峰面積；a校準(zhǔn)曲線截距；V 洗脫液濃縮定容后的體積，mL；tV 水樣體積，mL；sK校準(zhǔn)曲線斜率。5.8檢出限、精密度和準(zhǔn)確度5.8.1檢出限按照環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（H168-2010）要求，方法分別測(cè)定空白加標(biāo)濃度為0.02口g/L的水樣8份，剔除離群值后，統(tǒng)計(jì)8份水樣的標(biāo)準(zhǔn)偏差S，此時(shí)檢出限MDL二SX2.998。具體數(shù)據(jù)及結(jié)果見(jiàn)表2。表2檢出限測(cè)試數(shù)據(jù)平行號(hào)試樣0.02ug/L測(cè)定結(jié)果（卩g/L）10.01520.00

21、830.01440.01450.01260.01370.00980.014平均值*（卩g/L）0.012標(biāo)準(zhǔn)偏差S（ug/L）0.003檢出限0.008-9-5.8.2室內(nèi)精密度和準(zhǔn)確度測(cè)定(1) 精密度測(cè)定取某地地表水10mL，各七份，分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按樣品步驟進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，見(jiàn)表3。表3.精密度測(cè)試數(shù)據(jù)平行號(hào)試樣0.040ug/L2.000ug/L測(cè)定結(jié)果(ug/L)10.0361.7620.0351.8430.0321.8140.0311.9150.0321.9060.0341.92平均值X(ug/L)0.0331.86標(biāo)準(zhǔn)偏差S(ug/L)0.0020.064相

22、對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差()6.13.4(2) 準(zhǔn)確度測(cè)定取兩個(gè)不同水樣(飲用水和地表水)，各七份，分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按樣品分析步驟測(cè)定其回收率，分析結(jié)果見(jiàn)表4。表4實(shí)際樣品加標(biāo)測(cè)試數(shù)據(jù)平行號(hào)實(shí)際樣品類(lèi)型飲用水地表水樣品加標(biāo)樣品回收率(%)樣品加標(biāo)樣品回收率(%)測(cè)定結(jié)果(ug/L)10.008ND0.03485.00.008ND1.4773.520.008ND0.03280.00.008ND1.7788.530.008ND0.03280.00.008ND1.5075.040.008ND0.03280.00.008ND1.5376.550.008ND0.03382.50.008ND1.7286.06

23、0.008ND0.03177.50.008ND1.6884.0平均值(ug/L)0.008ND0.03280.80.008ND1.6180.6加標(biāo)量(ug/L)0.0402.000測(cè)定結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD1(%)3.17.9說(shuō)明：才Xi（1）測(cè)定均值X計(jì)算公式為：X二4n_、kQx）2（2）標(biāo)準(zhǔn)偏差S計(jì)算公式為：S=十n1S（3）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD計(jì)算公式：RSDT=100%X（4）加標(biāo)回收率二（加標(biāo)試樣測(cè)定值-試樣測(cè)定值）/加標(biāo)量X100%5.8.3 室間精密度和準(zhǔn)確度測(cè)定（1）精密度測(cè)定在飲用水中分別加入一定量丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液制得水樣1和水樣2，由西省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站、西安市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、渭

24、南市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、寶雞市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、漢中市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、商洛市環(huán)境監(jiān)測(cè)站等6個(gè)實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)其進(jìn)行6次測(cè)定，水樣1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：5.6%-9.1%，實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：6.3%，重復(fù)性限為：0.006口g/L，再現(xiàn)性限為：0.008口g/L；水樣2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：6.7%-11.7%,實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為：2.8%。重復(fù)性限：0.403口g/L,再現(xiàn)性限：0.403口g/L。（2）準(zhǔn)確度測(cè)定在飲用水中分別加入一定量丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)液而制得水樣1和水樣2,由其6個(gè)實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)其進(jìn)行6次加標(biāo)回收率測(cè)定,水樣1加標(biāo)回收率在70.0%-97.5%之間,加標(biāo)回收率最終值為80.8%

25、7;9.3%；水樣2加標(biāo)回收率在73.0%-98.0%之間,加標(biāo)回收率最終值為83.0%±4.6%。（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見(jiàn)各實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證報(bào)告）5.9質(zhì)量保證和質(zhì)量控制（QA/QC）方法根據(jù)HPLC-MS/MS定性、定量分析特點(diǎn)和分析過(guò)程技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn),從空白干擾消除、儀器性能、校準(zhǔn)曲線檢查等幾個(gè)方面制訂了質(zhì)量保證和質(zhì)量控制的建議和要求。本次制定的標(biāo)準(zhǔn)，將QA/QC單獨(dú)列為方法的一個(gè)主要內(nèi)容。6. 方法驗(yàn)證6.1 方法驗(yàn)證方案6.1.1 參與方法驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)室基本情況按照環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（HJ168）和國(guó)家環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作暫行要求（環(huán)科涵200910號(hào)）的要求，組織6

26、家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行驗(yàn)證，陜西省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站、西安市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、寶雞市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、渭南市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、漢中市環(huán)境監(jiān)測(cè)站、商洛市環(huán)境監(jiān)測(cè)站。根據(jù)影響方法精密度和準(zhǔn)確度的主要因素和數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求，編制方法驗(yàn)證報(bào)告，驗(yàn)證數(shù)據(jù)主要包括精密度、準(zhǔn)確度等。6.1.2 方法驗(yàn)證方案方法檢出限：按照環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則（H168-2010）要求，方法分別測(cè)定空白加標(biāo)濃度為0.02口g/L的水樣8份，剔除離群值后將各自的8次測(cè)定結(jié)果計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差S,此時(shí)檢出限MDL=SX2.998。方法的測(cè)定下限：參照HJ168-2010,以4倍方法檢出限確定為本方法目標(biāo)物的測(cè)定下限。方法精密度和準(zhǔn)確度：取某地地表水1

27、0mL，各六份，分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按樣品步驟進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。加標(biāo)回收率：取10mL水樣各6份，加入標(biāo)準(zhǔn)品使其濃度為0.040口g/L、2.000»g/L,進(jìn)行全程序分析，剔除離群值后將測(cè)定結(jié)果分別計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、加標(biāo)回收率等。6.2 方法驗(yàn)證過(guò)程6.2.1 首先，通過(guò)篩選確定方法驗(yàn)證單位。按照方法驗(yàn)證方案準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)用品，與驗(yàn)證單位確定驗(yàn)證時(shí)間。在方法驗(yàn)證前，參加驗(yàn)證的人員應(yīng)熟悉和掌握方法原理、操作步驟及流程。方法驗(yàn)證過(guò)程中所用的試劑和材料、儀器和設(shè)備及分析步驟應(yīng)符合方法相關(guān)要求。6.2.2 具體方法驗(yàn)證報(bào)告見(jiàn)附一。6.3 方法驗(yàn)證結(jié)論本方法確定的4倍檢出限為目標(biāo)物的測(cè)定下限。方法精密度和準(zhǔn)確度統(tǒng)計(jì)結(jié)果能滿(mǎn)足方法性能指標(biāo)要求。7. 標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容的解釋除在第5章和第6