WS、T 59-1996氨基二硝基甲苯的色譜測定方法

?尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的氣相色譜測定方法

WS/T59-1996

1主題內(nèi)容與適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的氣相色譜測定方法。本法最低檢測濃度為4mg/L。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于接觸三硝基甲苯(TNT)的工人尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的測定。

2原理

尿樣加鹽酸加熱水解后，在pH7～8用甲苯萃取尿樣中4-A，進氣相色譜儀測定。采用OV-17柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以保留時間定性，峰面積定量。

3儀器

3.1氣相色譜儀，電子捕獲檢測器。

3.2旋渦混合器。

3.3容量瓶，10mL。

3.4具塞試管，5mL。

3.5微量注射器，5mL。

3.6聚乙烯塑料瓶，50～100mL。

3.7尿比重計。

4試劑

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除另有說明者外，均為分析純級。

4.1實驗用水：為重蒸餾水或具有同等純度的去離子水。

4.2鹽酸，ρ20=1.19g/mL。

4.3碳酸氫鈉。

4.4無水乙醇。

4.5甲苯。

4.62，6-二硝基甲苯，化學(xué)純。內(nèi)標(biāo)物。

4.72，6-二硝基甲苯溶液：稱取50mg2，6-二硝基甲苯溶于甲苯中，并稀釋至100mL，混勻。逐級稀釋成含內(nèi)標(biāo)0.5mg/mL的甲苯溶液。

4.84-氨基-2，6-二硝基甲苯(4-A)標(biāo)準(zhǔn)品。

4.94-氨基-2，6-二硝基甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液：取標(biāo)準(zhǔn)品以無水乙醇為溶劑，配成濃度為1mL相當(dāng)于2mg4-A的貯備液。臨用前，以甲苯或含內(nèi)標(biāo)0.5mg/mL的甲苯溶液(4.7)稀釋成1mL相當(dāng)于20mg4-A的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.10質(zhì)控樣：用加標(biāo)的模擬尿、接觸者混合尿或加標(biāo)的正常人混合尿作質(zhì)控樣。

5采樣、運輸和保存

用聚乙烯塑料瓶收集約100mL接觸TNT工人的班后尿，盡快測量比重，每100mL尿加10mL鹽酸(4.2)。夏季運輸時最好冷藏。分析前放普通冰箱內(nèi)，可保存兩周。

6分析步驟

6.1儀器操作條件

色譜柱：柱長1.6m，內(nèi)徑3.2mm，玻璃柱。

OV-17∶ShimaliteW(AW-DMCS)201D(80～100目)=1.5∶100。

柱溫：220℃。

程序升溫：初溫為200℃，保持0.4min以后以10℃/min的速率升溫至220℃，然后再以5℃/min的速率升至240℃，保持1min，分析結(jié)束。

載氣(氮氣)：50mL/min。

6.2空白試驗

取正常人混合尿按照樣品處理(6.3)的操作同樣處理，與樣品同時進行測定。

6.3樣品處理

取1mL尿樣于5mL具塞試管中，加入0.1mL濃鹽酸，混合均勻(已加鹽酸保存的尿樣取1.1mL)，于100℃水浴中放置1h。冷卻后，用過量固體碳酸氫鈉(4.3)調(diào)至pH7～8，然后用1mL甲苯(4.5)［或含內(nèi)標(biāo)的甲苯溶液(4.7)］萃取，在旋渦混合器上振搖3min，放置分層，上層甲苯溶液供分析用。

6.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取7個容量瓶，按下表配制標(biāo)準(zhǔn)管。

4-A標(biāo)準(zhǔn)管的配制

管號

0

1

2

3

4

5

6

4-A標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.9)，mL

0

0.25

0.50

1.00

2.50

5.00

10.00

甲苯［或含內(nèi)標(biāo)(4.7)］，mL

10.00

9.75

9.50

9.00

7.50

5.00

0.00

4-A濃度，mg/mL

0

0.5

1

2

5

10

20

各取2mL以上標(biāo)準(zhǔn)管中的溶液進氣相色譜儀，按儀器操作條件(6.1)測定，重復(fù)進樣三次。以4-A濃度為橫坐標(biāo)，各濃度峰面積(或與內(nèi)標(biāo)峰面積之比)平均值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6.5樣品測定

取2mL按6.3條處理得到的甲苯萃取液進樣，按儀器操作條件(6.1)測定。用保留時間定性，峰面積(或與內(nèi)標(biāo)峰面積之比)定量。在測定前后以及每測定10個樣品后，測定一次質(zhì)控樣。

7計算

7.1按式(1)計算尿樣換算成標(biāo)準(zhǔn)比重(1.020)下的濃度校正系數(shù)k。

……………(1)

7.2按式(2)計算尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的濃度。

X=c·k

……………(2)

式中：X——尿中4-氨基-2，6-二硝基甲苯的濃度，mg/L；

c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的4-氨基-2，6-二硝基甲苯濃度，mg/mL。

8說明

8.1本法的檢測限為7.2×10－12g。4-A濃度在0～50mg/L范圍內(nèi)進樣2mL，濃度與峰面積(或峰面積之比)呈線性關(guān)系。在應(yīng)用中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限為20mg/L，已能滿足分析要求。當(dāng)尿中4-A濃度為0.90，2.71，5.42mg/L時，批內(nèi)變異系數(shù)分別為2.0%，2.2%和1.3%，批間變異系數(shù)分別為4.1%，3.7%和3.4%(n=6)。尿中4-A濃度為0.94～5.41mg/L時，加標(biāo)回收率為85%～100%。

8.2采集班后尿樣時，工人要脫離生產(chǎn)場所，換下工作服，洗凈手、臂及面部，以防TNT的污染。采樣后應(yīng)盡早加酸在冰箱中保存。

8.31mL尿樣加0.1mL鹽酸在100℃加熱1h時，4-A水解量最大。

乙醚、苯和甲苯對4-A的萃取效果均佳，但乙醚易揮發(fā)，精密度較差，苯的毒性較大，本法采用沸點較高毒性較小的甲苯為4-A的萃取劑，對4-A的一次萃取率為94%～100%。萃取后放置1～2min，甲苯萃取液輕度乳化，取上清液三日內(nèi)分析。

8.4OV-17固定液的分離效果好，峰形好，且不會污染檢測器。同類型國產(chǎn)擔(dān)體亦適用。色譜柱加溫方式確定為等溫和程序升溫兩種，以利應(yīng)用，兩者分離效果均佳，但程序升溫所得的峰形更好。如儀器不穩(wěn)定，應(yīng)采用內(nèi)標(biāo)法定量。

測定空氣中TNT的OV-17+QF-1通用柱亦可使用，但QF-1的最高使用溫度為250℃，柱溫需嚴格控制，謹防污染檢測器。

8.5尿樣加酸在100℃下水解1h后，產(chǎn)生的極性化合物，不干擾測定。

8.6職業(yè)接觸TNT工人班后尿在OV-17色譜柱上分離得TNT、4-A、2-A(2-氨基-4，6-二硝基甲苯)和5個未知物。本方法亦適用于測定職業(yè)接觸TNT工人尿中TNT及其他代謝物2-A。

8.7質(zhì)控樣使用加標(biāo)的模擬尿時可考察準(zhǔn)確度和精密度。使用接觸者尿或加標(biāo)的正常尿時可考察精密度。但人尿不易久存。模擬尿只含人尿的大量成分。

附加說明：

本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由上海醫(yī)科大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所負責(zé)起草。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人潘志擎。

本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動衛(wèi)生與職業(yè)病研究所負責(zé)解釋。

中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn).

WS/T59-199