優(yōu)化HPLC及使用注意事項(xiàng)

1、1HPLC維護(hù)維護(hù)21.1.在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)2. 2. 四元二元四元二元/ /單元泵單元泵3. 3. 自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器4. 4. 二極管陣列檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器5. 5. 可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器器3在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)-在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)4工作原理工作原理在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)5何時(shí)需要使用在線脫氣機(jī)何時(shí)需要使用在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)6在線脫氣機(jī)在線脫氣機(jī)脫氣機(jī)的操作脫氣機(jī)的操作：操作泵之前，用至少兩個(gè)體積（標(biāo)準(zhǔn)脫操作泵之前，用至少兩個(gè)體積（標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)氣機(jī)30ml，對(duì)微脫氣機(jī)對(duì)微脫氣機(jī)10ml）沖沖洗洗 真空脫氣機(jī)，特別是真空脫氣機(jī)，特別是當(dāng)當(dāng) 泵關(guān)閉了一段時(shí)間后

2、（例如，過(guò)夜），以及在通道中泵關(guān)閉了一段時(shí)間后（例如，過(guò)夜），以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑使用揮發(fā)性混合溶劑 時(shí)時(shí)。 標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)（標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)（G1322A). 標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)每個(gè)通道體積為12ml 建議排液操作：5ml/min 排液6min以上。 微脫氣機(jī)（微脫氣機(jī)（G1379A). 微脫每個(gè)通道體積為1ml 建議排液操作：2ml/min 排液5min。 切勿用5ml/min 流速去排液。7溶劑溶劑 用棕色玻璃瓶裝水溶液，可以避免藻類(lèi)的生長(zhǎng)。用棕色玻璃瓶裝水溶液，可以避免藻類(lèi)的生長(zhǎng)。 過(guò)濾溶劑以免其中微粒永久性阻塞毛細(xì)管。過(guò)濾溶劑以免其中微粒永久性阻塞毛細(xì)管。避免使用下述可腐蝕鋼鐵的避免使用下述

3、可腐蝕鋼鐵的 溶劑：溶劑： 堿金屬鹵化物及其酸溶液(如：碘化鋰、氯化鉀等)。 高濃度無(wú)機(jī)酸，如硝酸、硫酸. 可能含有過(guò)氧化物的色譜純醚(如THF、二氧六環(huán)、二丙基乙醚)。這些在 使用前必須用干燥氧化鋁過(guò)濾除去過(guò)氧化物。 含強(qiáng)絡(luò)合劑的溶液(如EDTA，乙二胺四乙酸)。 四氯化碳與2-異丙醇或四氫呋喃的混合液。8防止堵塞溶劑過(guò)濾器及真空腔防止堵塞溶劑過(guò)濾器及真空腔 污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類(lèi)生長(zhǎng)將會(huì)縮短溶劑過(guò)濾器的使用壽命，并且影響泵的運(yùn)行。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液 (pH4 至 7) 中尤其如此。下 列建議將會(huì)延長(zhǎng)溶劑過(guò)濾器的使用壽命并維持泵的運(yùn)行。 使用滅過(guò)菌的溶劑瓶來(lái)減緩藻類(lèi)生長(zhǎng)。使用新鮮配

4、制的流動(dòng)相，特別是水溶劑或鹽緩沖液（建議不超過(guò)兩天）。如果應(yīng)用許可，在溶劑中加人0.00010.001M的疊氮化鈉。避免溶劑瓶暴露在直射陽(yáng)光下。用氬氣置換流動(dòng)相上層的空氣。長(zhǎng)期不用時(shí)用水清洗水溶液通道并置換為甲醇日常維護(hù)日常維護(hù),故障診斷故障診斷9日常維護(hù)日常維護(hù),故障診斷故障診斷檢查溶劑過(guò)濾器檢查溶劑過(guò)濾器擰開(kāi)脫氣機(jī)出口或比例閥入口管線，并使液面高于出口擰開(kāi)脫氣機(jī)出口或比例閥入口管線，并使液面高于出口30cm；此時(shí)溶劑會(huì)因；此時(shí)溶劑會(huì)因?yàn)橹亓α鞒觯摎鈾C(jī)或溶劑過(guò)濾頭堵塞時(shí)，溶劑會(huì)流出不暢或不流出為重力流出，脫氣機(jī)或溶劑過(guò)濾頭堵塞時(shí)，溶劑會(huì)流出不暢或不流出。查看過(guò)濾器是否變色查看過(guò)濾器是否變色

5、臨時(shí)取下過(guò)濾器，檢查柱前壓力是否正常臨時(shí)取下過(guò)濾器，檢查柱前壓力是否正常清潔溶劑過(guò)濾器清潔溶劑過(guò)濾器將堵塞的溶劑過(guò)濾器從瓶頭組件中拿下。先用水沖洗殘留之溶劑，然后將過(guò)濾器放在裝有濃硝酸 （35）的燒杯里浸一小時(shí)。用二次蒸餾水徹底沖洗過(guò)濾器。建議不使用超聲波清洗機(jī)清洗。將過(guò)濾器重新裝好。建議定期清洗溶劑過(guò)濾器及溶劑瓶，每三個(gè)月至少清洗一次。注意：不要使用沒(méi)有安裝溶劑過(guò)濾器的系統(tǒng)可能會(huì)嚴(yán)重堵塞系統(tǒng)注意：不要使用沒(méi)有安裝溶劑過(guò)濾器的系統(tǒng)可能會(huì)嚴(yán)重堵塞系統(tǒng)10日常維護(hù)日常維護(hù)Question?1.如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)脫氣是否正常？如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)脫氣是否正常？ 打開(kāi)打開(kāi)Purge閥，設(shè)定泵的流速閥，設(shè)

6、定泵的流速2ml/min，提起當(dāng)提起當(dāng)前所使用溶劑瓶?jī)?nèi)的溶劑過(guò)濾頭，使之脫離液面前所使用溶劑瓶?jī)?nèi)的溶劑過(guò)濾頭，使之脫離液面一小段時(shí)間，此時(shí)溶劑傳送管內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一小段氣一小段時(shí)間，此時(shí)溶劑傳送管內(nèi)會(huì)產(chǎn)生一小段氣泡，放下過(guò)濾頭，讓此段氣泡通過(guò)脫氣機(jī)，如果泡，放下過(guò)濾頭，讓此段氣泡通過(guò)脫氣機(jī)，如果脫氣機(jī)正常，氣泡應(yīng)消失或縮小。脫氣機(jī)正常，氣泡應(yīng)消失或縮小。2.如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)腔體或溶劑過(guò)濾頭是否堵如何簡(jiǎn)單判斷脫氣機(jī)腔體或溶劑過(guò)濾頭是否堵塞？塞？ 關(guān)閉泵，擰開(kāi)脫氣機(jī)出口或比例閥入口管線關(guān)閉泵，擰開(kāi)脫氣機(jī)出口或比例閥入口管線,此此時(shí)溶劑會(huì)因?yàn)橹亓α鞒?，脫氣機(jī)或溶劑過(guò)濾頭堵時(shí)溶劑會(huì)因?yàn)橹亓α鞒觯摎鈾C(jī)或溶

7、劑過(guò)濾頭堵塞時(shí)，溶劑會(huì)流出不暢或不流出。塞時(shí)，溶劑會(huì)流出不暢或不流出。11Agilent 1100 四元泵四元泵 (G1311A)12Agilent 1100 四元泵工作原理四元泵工作原理13Agilent 1100 泵頭泵頭(Pump Head)結(jié)構(gòu)圖結(jié)構(gòu)圖Agilent 1100 泵泵 14嚴(yán)重污染的溶劑出口過(guò)濾芯嚴(yán)重污染的溶劑出口過(guò)濾芯Agilent Agilent 四元二元四元二元/ /單元泵日常維護(hù)單元泵日常維護(hù)15多通道梯度閥（多通道梯度閥（MCGV）操作要點(diǎn)操作要點(diǎn) 當(dāng)鹽溶液和有機(jī)溶劑混合時(shí)，鹽溶液可能與有機(jī)溶劑完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn) 沉淀。但是在梯度閥的混合點(diǎn)，重力作用有可能使鹽

8、顆粒 沉淀下來(lái)。通常，閥的A通道用于水相/鹽溶液，而泵的B通道用于有機(jī)溶 劑。如果使用的是這樣的配置，鹽將落回到鹽溶液中，并被溶解。當(dāng)泵使用 的不同配置（例如，D-鹽溶液，A-有機(jī)溶劑）時(shí)，鹽可能會(huì)落到有機(jī)溶劑 中，從而出現(xiàn)問(wèn)題。 Agilent 1100四元泵中使用鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，建議將鹽溶液接到下面的 口上，有機(jī)溶劑接到上面的梯度閥口上。有機(jī)溶劑通道最好直接在鹽溶液通 道的上面。建議定期用水沖洗所有MCGV通道，以去除在閥口上可能出現(xiàn)的鹽 沉淀。Agilent Agilent 四元二元四元二元/ /單元泵日常維護(hù)單元泵日常維護(hù) 16更好地使用四元泵更好地使用四元泵將裝有溶劑瓶的溶劑箱放

9、在泵上面(或較高處)。當(dāng)在四元泵上使用鹽溶液或有機(jī)溶劑時(shí)，建議將鹽溶液接 在底部的梯度閥口上，將有機(jī)溶劑接在上面的梯度閥口上。有機(jī)通道最好 在鹽溶液通道的上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在 閥口析出得鹽結(jié)晶。操作泵之前，用至少兩個(gè)體積（標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)30ml，對(duì)微脫氣機(jī)10ml）沖洗 真空脫氣機(jī)，特別是當(dāng) 泵關(guān)閉了一段時(shí)間后（例如，過(guò)夜），以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑 時(shí)。防止溶劑過(guò)濾器堵塞及長(zhǎng)菌。當(dāng)濾器表面有黑色或黃色污染層說(shuō)明濾器發(fā)生了堵塞，請(qǐng)立即清洗或更換之。定期檢查排液閥的濾芯。檢查方法：擰開(kāi)排液閥，以水作流動(dòng)相，流速5ml/min，若壓力大于10bar,則須立即更換。Ag

10、ilent Agilent 四元二元四元二元/ /單元泵日常維護(hù)單元泵日常維護(hù) 17Agilent 1100 系列泵的使用須知系列泵的使用須知 更好地使用泵更好地使用泵 當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件時(shí)，由于該附件中也有密封墊，這樣就會(huì)增加活塞桿運(yùn)動(dòng)時(shí)的阻力。所以開(kāi)泵前一定要用10異丙醇，并將其流速調(diào)至約20滴/分鐘使這溶液流過(guò)沖洗裝置。 10異丙醇有助于降低水的表面張力，并有抑菌作用。最好不要用其它溶劑代替。 當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件而不開(kāi)啟當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件而不開(kāi)啟10異丙醇，會(huì)使密封墊及活異丙醇，會(huì)使密封墊及活塞桿的壽命減短。塞桿的壽命減短。18Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知自動(dòng)進(jìn)樣器

11、使用須知19Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知使用自動(dòng)洗針功能使用自動(dòng)洗針功能自動(dòng)洗針功能可以把程序設(shè)置為“帶有洗針的進(jìn)樣”,或?qū)⒆詣?dòng)洗針功能包 含在進(jìn)樣器程序中。當(dāng)使用自動(dòng)洗針功能時(shí)，進(jìn)樣針在取樣后會(huì)轉(zhuǎn)移到洗針 步驟。造成攜留效應(yīng)的主要原因是殘留在進(jìn)樣針外的少量樣品。通過(guò)進(jìn)樣后 的洗針功能可以立即洗去針外表面上殘留的樣品。當(dāng)進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)回到主流路 時(shí)，定量管和針內(nèi)所有的樣品都被沖洗到色譜柱中。這種結(jié)合洗針和沖洗管 路的設(shè)計(jì)可以把攜留效應(yīng)減低到最小的程度。去掉洗滌瓶蓋去掉洗滌瓶蓋為了獲得最佳的分析結(jié)果，裝有溶劑的洗滌瓶是不加蓋的，而且洗滌瓶中的 溶劑對(duì)樣品組分有較好的溶

12、解作用。如果洗滌瓶有蓋將會(huì)有少量樣品留在密 封墊上，這樣會(huì)把殘留的樣品帶到下一個(gè)樣品中。帶有洗針的進(jìn)樣程序帶有洗針的進(jìn)樣程序進(jìn)樣程序中包括了NEEDLE WASH（洗針）命令，當(dāng)這一命令設(shè)置在進(jìn)樣程序 中時(shí)，則在進(jìn)樣前會(huì)進(jìn)入指定的洗滌瓶中洗針。例 1 DRAW 5L（抽取5L樣品） 2 NEEDLE WASH vial 7（洗針到7號(hào)瓶） 3 INJECT（進(jìn)樣）20Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知21Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知提高進(jìn)樣量的精度提高進(jìn)樣量的精度進(jìn)樣體積小于進(jìn)樣體積小于2L當(dāng)進(jìn)樣閥切換到BYPASS（旁路）位置時(shí)，

13、在定量管內(nèi)的流動(dòng)相壓力降低。當(dāng) 進(jìn)樣針抽取樣品時(shí)，流動(dòng)相進(jìn)一步降低壓力。如果流動(dòng)相沒(méi)有充分脫氣，在 進(jìn)樣時(shí)定量管內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生小氣泡。在進(jìn)樣體積小于2L時(shí)這些小氣泡就會(huì) 影響到進(jìn)樣體積的精密度。為了使進(jìn)樣體積小于2L時(shí)有最佳的進(jìn)樣精密 度，建議使用Agilent1100系列真空脫氣機(jī)，確保流動(dòng)相充分脫氣。也可以 在進(jìn)樣間隙自動(dòng)洗針，從而進(jìn)一步提高進(jìn)樣體 積的精密度。22Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知自動(dòng)進(jìn)樣器使用須知提高進(jìn)樣量精度提高進(jìn)樣量精度抽樣速度抽樣速度對(duì)粘稠的樣品，計(jì)量部件從樣品瓶抽取樣品的速度會(huì)影響取樣體積的精密 度。如取樣速度太快，在樣品塞中會(huì)帶有氣泡，從而影響進(jìn)樣體積。

14、抽樣速 度的默認(rèn)值是200L/min (范圍：10-1000L/min)，這一速度適合于大 多數(shù)樣品的取樣要求。但是對(duì)于粘稠的樣品要得到最佳的結(jié)果，設(shè)定的抽樣 速度要低于200L/min。進(jìn)樣器程序中的“DRAW”命令行也用于抽樣速度 的設(shè)定，這是為自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置的。推樣速度推樣速度默認(rèn)的推樣速度為200L/min (范圍：10-1000L/min)，當(dāng)進(jìn)行大體積 進(jìn)樣時(shí)，就要設(shè)定為較大的推樣速度，加快進(jìn)樣周期。這就是縮短計(jì)量器具 從進(jìn)樣周期開(kāi)始（當(dāng)注射器活塞回到起始位置時(shí)）到推出溶劑所需的時(shí)間。進(jìn)樣器程序中的“EJECT”命令行也用于推樣速度的設(shè)定，這是為自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置的。較快的推樣速度可以

15、加快進(jìn)樣器程序所需的時(shí)間。對(duì)于粘稠的樣 品要避免使用過(guò)快的推樣速度。當(dāng)使用多次抽樣功能時(shí)，推樣速度控制著樣品進(jìn)入針座毛細(xì)管擴(kuò)大體積部分 的速度，對(duì)粘稠的樣品要避免使用過(guò)快的推樣速度。23Question?1.樣品量太少（某些離心處理的樣品），無(wú)法過(guò)濾，為樣品量太少（某些離心處理的樣品），無(wú)法過(guò)濾，為了盡量避免堵塞，可以采取什么措施？了盡量避免堵塞，可以采取什么措施？ 在自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置中，適當(dāng)抬高進(jìn)樣針抽樣時(shí)的位在自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置中，適當(dāng)抬高進(jìn)樣針抽樣時(shí)的位置。置。Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)自動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)24Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)自動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)Que

16、stion?2.怎樣判斷自動(dòng)進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子墊圈磨損？怎樣判斷自動(dòng)進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子墊圈磨損？ 將第四號(hào)管（排液的細(xì)塑料管）提起，正常情況下應(yīng)將第四號(hào)管（排液的細(xì)塑料管）提起，正常情況下應(yīng)沒(méi)有液體滴出，如有則轉(zhuǎn)子墊圈已磨損。沒(méi)有液體滴出，如有則轉(zhuǎn)子墊圈已磨損。 色譜現(xiàn)象：壓力不穩(wěn)，保留時(shí)間、峰面積重復(fù)性差，色譜現(xiàn)象：壓力不穩(wěn)，保留時(shí)間、峰面積重復(fù)性差，殘留嚴(yán)重。殘留嚴(yán)重。25Agilent 1100 手動(dòng)進(jìn)樣器（手動(dòng)進(jìn)樣器（G1328A,G1328B)26Agilent 1100 手動(dòng)進(jìn)樣器操作原理手動(dòng)進(jìn)樣器操作原理27Agilent 1100 手動(dòng)進(jìn)樣器操作原理手動(dòng)進(jìn)樣器操作原理28Agilent 1

17、100 手動(dòng)進(jìn)樣器使用須知手動(dòng)進(jìn)樣器使用須知 為了防止虹吸應(yīng)注意使第五第六號(hào)放空管的出口與進(jìn)樣口保持在同一平面29Agilent 1100 手動(dòng)進(jìn)樣器使用須知手動(dòng)進(jìn)樣器使用須知1為了更好的重現(xiàn)性，應(yīng)進(jìn)行滿閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積最好是樣品環(huán)的56倍。2一定要使用合規(guī)格的進(jìn)樣器，規(guī)格為外徑0.028英寸，長(zhǎng)2英寸的平頭針。一定不能使用尖針！它會(huì)嚴(yán)重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈。一定不能使用尖針！它會(huì)嚴(yán)重刮壞轉(zhuǎn)子墊圈。30Agilent 1100 手動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)手動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)1進(jìn)完樣后一定要及時(shí)沖洗進(jìn)樣器，特別是用鹽或緩沖液作流動(dòng)相。由于這些溶液會(huì)形成結(jié)晶從而磨損墊圈。2沖洗方法： A. 將進(jìn)樣器轉(zhuǎn)至Inject

18、位置，利用液相泵輸送高純水沖洗(這時(shí)是沖洗樣品環(huán)及溝槽）. B.用閥清洗接頭和注射器沖洗。31Agilent 1100 手動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)手動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)3經(jīng)常用濕潤(rùn)的軟布清潔進(jìn)樣器，特別是進(jìn)樣口周?chē)?請(qǐng)仔細(xì)閱讀進(jìn)樣器說(shuō)明書(shū)，上面有詳細(xì)使用及其它信息。32Agilent 1100 手動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)手動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù)Question.如何判斷手動(dòng)進(jìn)樣器的密封圈漏？通常結(jié)合兩方面：1從進(jìn)樣器觀察，進(jìn)樣后將針拔出，若從進(jìn)樣口或排空管有液體冒出，顯示密封圈磨損。2從結(jié)果看：通常有壓力不穩(wěn)定，峰面積或保留時(shí)間不穩(wěn)定和殘留嚴(yán)重。33Agilent 1100 柱溫箱器使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù)柱溫箱器使用

19、注意事項(xiàng)及日常維護(hù)34Agilent 1100 柱溫箱器使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù)柱溫箱器使用注意事項(xiàng)及日常維護(hù)1連接的管路盡量短，防止熱擴(kuò)散及峰增寬。2如果使用小體積分析柱以及流速小于0.2ml/min時(shí)建議使用左邊的柱溫箱(左邊體積較少, 3ul).3除非特殊應(yīng)用，建議將兩邊溫度設(shè)置一樣。并確保關(guān)好前蓋。35Agilent 1100 二極管陣列檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器(G1315B)36Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器工作原檢測(cè)器工作原理理37Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器工作原檢測(cè)器工作原理理可變的光進(jìn)口狹縫系統(tǒng)可變的光進(jìn)口狹縫系統(tǒng)這一微型狹縫系統(tǒng)是利用硅

20、的機(jī)械性能和總體布局微型加工技術(shù)以及精確的 制作功能加工而成，它把所需的光學(xué)性能狹縫和光柵集中組合到一起， 成為一個(gè)簡(jiǎn)單、緊湊的元件。狹縫寬度直接由儀器上的微處理器來(lái)控制，并 可用為設(shè)定分析方法的一個(gè)實(shí)驗(yàn)參數(shù)。光柵光柵用一個(gè)凹面全息光柵來(lái)實(shí)現(xiàn)分光和光譜成像， 光柵把入射光束全部分散成組 成它的波長(zhǎng)，然后把它反射到二極管陣列上。 二極管陣列二極管陣列二極管陣列由1024個(gè)光電二極管和一個(gè)位于陶瓷基座上的電路組成，在 190 - 950nm范圍內(nèi)取樣間隔1nm。38Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)檢測(cè)器性能優(yōu)化化39Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)檢

21、測(cè)器性能優(yōu)化化40Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)化檢測(cè)器性能優(yōu)化41Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)化檢測(cè)器性能優(yōu)化流通池光路長(zhǎng)度對(duì)信號(hào)值的影響流通池光路長(zhǎng)度對(duì)信號(hào)值的影響 流通池加長(zhǎng)得到的信號(hào)值就高，盡管在流通池加長(zhǎng)時(shí)噪音略有增加，而 信噪比有較大的增加。例如，見(jiàn)圖8，把流通池長(zhǎng)度由6mm 增加到10mm， 噪音增加10%，而信號(hào)增加70%。 流通池加長(zhǎng)會(huì)使池體積也有所增加在我們的例子中為5L 13L， 這時(shí) 峰寬也會(huì)增加， 如圖8所示，在此例的梯度洗脫中對(duì)分離度沒(méi)有影響。 經(jīng)驗(yàn)表明，池體積應(yīng)為半峰高處峰體積的1/3。 要測(cè)定峰體積，把積分后

22、的 峰寬乘以流速再除以3。圖圖842Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)檢測(cè)器性能優(yōu)化化使用較寬的帶寬有降低噪聲的優(yōu)點(diǎn)，能在整個(gè)波長(zhǎng)范圍內(nèi)降低噪聲和使用 4nm帶寬相比采用30nm帶寬，基線噪聲降低約2.5倍。 而信號(hào)值是4-nm 帶寬的75 %，在此例中信噪比增大2倍。 43Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)檢測(cè)器性能優(yōu)化化44Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)檢測(cè)器性能優(yōu)化化45Agilent 1100二極管陣列二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)檢測(cè)器性能優(yōu)化化46Agilent 1100二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)化二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)化峰

23、寬（響應(yīng)時(shí)間）峰寬（響應(yīng)時(shí)間）響應(yīng)時(shí)間是說(shuō)明在流通池中光吸收產(chǎn)生突變后出現(xiàn)檢測(cè)器信號(hào)的快慢， 檢測(cè)器采用數(shù)值濾波器使響應(yīng)時(shí)間與色譜圖中峰寬相適應(yīng)， 這一濾波器不影響峰 面積和峰的對(duì)稱性， 正確設(shè)定此濾波器會(huì)大大減小基線噪聲（見(jiàn)圖9），但 會(huì)使峰高略有下降。 另外這一濾波器能降低數(shù)據(jù)的速度，優(yōu)化色譜的積分和 顯示，能最大限度地減少存儲(chǔ)色譜和光譜的磁盤(pán)空間。47Agilent 1100二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)化二極管陣列檢測(cè)器性能優(yōu)化表表6 列出檢測(cè)器對(duì)濾波器的選擇。列出檢測(cè)器對(duì)濾波器的選擇。 為獲得最佳效果，把峰寬設(shè)定為接為獲得最佳效果，把峰寬設(shè)定為接近于色近于色 譜圖中窄峰的寬度，譜圖中窄峰的寬

24、度， 此時(shí)響應(yīng)時(shí)間約為峰寬的此時(shí)響應(yīng)時(shí)間約為峰寬的1/3，這樣會(huì)使，這樣會(huì)使峰高降低峰高降低 5%，峰的加寬不到，峰的加寬不到5%。 在檢測(cè)器中峰寬設(shè)定減小會(huì)引起在檢測(cè)器中峰寬設(shè)定減小會(huì)引起峰高增加峰高增加9.5的流動(dòng)相，以的流動(dòng)相，以防腐蝕流通池石英窗，避免使用可能析晶的流動(dòng)相，防止流通池堵塞防腐蝕流通池石英窗，避免使用可能析晶的流動(dòng)相，防止流通池堵塞VWD 40bar；DAD 120bar ； MWD 120bar； FLD 20bar ；RID 5barRID、FLD永遠(yuǎn)是最后一個(gè)檢測(cè)器永遠(yuǎn)是最后一個(gè)檢測(cè)器10.10. 注意不同廠家接頭問(wèn)題，防止?jié)B漏或毀壞色譜柱和接頭注意不同廠家接頭問(wèn)題

25、，防止?jié)B漏或毀壞色譜柱和接頭 Agilent 1100 HPLC日常維護(hù)日常維護(hù)54HPLC常用的色譜柱接頭常用的色譜柱接頭0.090 in.0.130 in.0.090 in.0.170 in.SwagelokWatersParkerRheodyneValcoUptight0.090 in.0.080 in.Troubleshooting LC Fittings, Part II.J. W. Dolan and P. Upchurch.LC/GC Magazine 6:788 (1988)Agilent 1100 HPLC日常維護(hù)日常維護(hù)總結(jié)總結(jié)55Agilent 1100 HPLC日常維護(hù)

26、日常維護(hù)總總結(jié)結(jié)毛細(xì)管的區(qū)分 Blue 0.25 mmColor i.d.Red 0.12 mmGreen 0.17 mm56Agilent 1100 HPLC日常維護(hù)日常維護(hù)總結(jié)總結(jié)57Agilent 1100 HPLC故障診斷故障診斷保留時(shí)間不穩(wěn)定。保留時(shí)間不穩(wěn)定。 首先觀察保留時(shí)間是否有規(guī)律的變化，并同時(shí)觀察壓力是否穩(wěn)定首先觀察保留時(shí)間是否有規(guī)律的變化，并同時(shí)觀察壓力是否穩(wěn)定 若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間呈有規(guī)律變化，若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間呈有規(guī)律變化，多數(shù)是色譜柱未平衡好，多數(shù)是色譜柱未平衡好，特別是含有鹽的流動(dòng)相，需較長(zhǎng)的時(shí)間去平衡。特別是含有鹽的流動(dòng)相，需較長(zhǎng)的時(shí)間去平衡。 若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間無(wú)規(guī)律變化，若壓力穩(wěn)定而保留時(shí)間無(wú)規(guī)律變化