檢驗(yàn)師考試免疫

1、第四篇 臨床免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)第1單元 免疫學(xué)概論高頻考點(diǎn)1 免疫概念免疫是機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別“自身”與“非己”、排除抗原性異物、維持自身生理平衡和穩(wěn)定的生物學(xué)應(yīng)答過(guò)程。其生理性應(yīng)答過(guò)程對(duì)機(jī)體有利，其病理性應(yīng)答過(guò)程對(duì)機(jī)體有害。高頻考點(diǎn)2 免疫功能1免疫防御：抵御體外病原或抗原入侵的免疫保護(hù)功能稱為免疫防御 。此功能若過(guò)強(qiáng)可能導(dǎo)致組織損傷和功能異常，發(fā)生超敏反應(yīng)；若過(guò)低或缺如，可發(fā)生免疫缺陷病。2免疫穩(wěn)定：維持自身生理內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定的功能免疫穩(wěn)定 。此功能可清除自身衰老細(xì)胞及殘損組織，將免疫應(yīng)答調(diào)控在適度范圍（免疫調(diào)節(jié)），且對(duì)自身正常組織和細(xì)胞不應(yīng)答（自身耐受）；此功能異?？赡軐?dǎo)致自身免疫病發(fā)生。

2、3免疫監(jiān)視：識(shí)別和清除異常突變細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的功能免疫監(jiān)視 。此功能異?？赡軐?dǎo)致腫瘤發(fā)生或病毒持續(xù)性感染。典型試題1（A1型題）現(xiàn)代免疫的概念是（D）A機(jī)體排斥抗原性微生物的功能 B機(jī)體識(shí)別和清除衰老細(xì)胞的功能C機(jī)體排斥異物侵襲的能力 D機(jī)體識(shí)別和排斥抗原性異物的功能E機(jī)體殺傷和清除異常突變細(xì)胞的能力高頻考點(diǎn)3 免疫應(yīng)答概念免疫應(yīng)答包括固有免疫應(yīng)答 和適應(yīng)性免疫應(yīng)答 。固有免疫應(yīng)答：在正常機(jī)體內(nèi)任何時(shí)段均以抗原非特異性方式識(shí)別和清除各種抗原異物和病原體，也稱為非特異性免疫應(yīng)答。適應(yīng)性免疫應(yīng)答：免疫細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)選擇識(shí)別某種抗原后，自身活化、增殖、分化為免疫效應(yīng)細(xì)胞，產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子，排除該抗

3、原的全過(guò)程，也稱為特異性免疫應(yīng)答。高頻考點(diǎn)4 適應(yīng)性免疫應(yīng)答的基本過(guò)程與類型免疫應(yīng)答發(fā)生在外周免疫器官，適應(yīng)性免疫應(yīng)答基本過(guò)程通常分為以下三個(gè)階段：抗原提呈細(xì)胞（包括巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和活化B細(xì)胞）攝取和加工處理抗原，提呈抗原肽給T細(xì)胞，此過(guò)程稱為抗原識(shí)別階段（感應(yīng)階段）；T細(xì)胞接受抗原提呈細(xì)胞提供的抗原肽信息及協(xié)同刺激信號(hào)后，自身活化、增殖和分化為效應(yīng)T細(xì)胞，并合成分泌細(xì)胞因子；同時(shí)，B細(xì)胞特異性識(shí)別抗原并接受活化T細(xì)胞的協(xié)同刺激信號(hào)后，活化、增殖和分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體，此過(guò)程稱為免疫細(xì)胞增殖分化階段；抗體、Tc、TD或細(xì)胞因子等對(duì)抗原發(fā)揮免疫效應(yīng)，此過(guò)程稱為免疫效應(yīng)階段。適應(yīng)性免疫應(yīng)答根

4、據(jù)淋巴細(xì)胞發(fā)揮的效應(yīng)可分為：B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答即體液免疫應(yīng)答，根據(jù)抗原性質(zhì)不同分為兩類：即對(duì)胸腺依賴性抗原（TD抗原）的B細(xì)胞應(yīng)答（必需有Th細(xì)胞輔助）和對(duì)胸腺非依賴性抗原（TI抗原）的B細(xì)胞應(yīng)答（不需要Th細(xì)胞輔助）。經(jīng)抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞活化、增殖并分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成分泌抗體發(fā)揮免疫效應(yīng)。T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答即細(xì)胞免疫，是由抗原提呈細(xì)胞攝取加工TD抗原，并選擇相應(yīng)抗原肽提呈給T細(xì)胞；T細(xì)胞接受抗原信號(hào)和協(xié)同刺激信號(hào)后，活化、增殖和分化為效應(yīng)T細(xì)胞。其中Th1細(xì)胞合成分泌多種細(xì)胞因子，可引起遲發(fā)型超敏反應(yīng)；Tc細(xì)胞則直接殺傷表達(dá)相應(yīng)抗原的靶細(xì)胞及誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡。細(xì)胞免疫主要發(fā)揮抗

5、細(xì)胞內(nèi)寄生菌感染、抗病毒感染、抗寄生蟲感染與抗腫瘤免疫效應(yīng)。高頻考點(diǎn)5 免疫器官的類型和主要功能免疫系統(tǒng)是由免疫器官（中樞免疫器官和外周免疫器官）、免疫細(xì)胞和免疫分子組成的執(zhí)行免疫功能的體系，也是機(jī)體對(duì)抗原性異物進(jìn)行免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。免疫器官分為中樞免疫器官和外周免疫器官。1中樞免疫器官是免疫細(xì)胞發(fā)生、分化和發(fā)育成熟的場(chǎng)所，人類和哺乳動(dòng)物的中樞免疫器官包括胸腺和骨髓，而鳥類還有法氏囊。骨髓是各種免疫細(xì)胞的發(fā)源地，骨髓多能造血干細(xì)胞增殖、分化為髓樣祖細(xì)胞和淋巴樣祖細(xì)胞。淋巴樣祖細(xì)胞一部分在骨髓內(nèi)繼續(xù)發(fā)育為成熟B淋巴細(xì)胞，一部分則進(jìn)入胸腺發(fā)育為成熟T淋巴細(xì)胞。2外周免疫器官包括淋巴結(jié)、脾和粘膜相關(guān)淋

6、巴組織等，是成熟T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞定居增殖的組織，也是對(duì)抗原性異物進(jìn)行免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。（2）外周免疫器官的主要功能是成熟T、B淋巴細(xì)胞定居、休整、增殖、與其他細(xì)胞相互作用及信號(hào)傳導(dǎo)的場(chǎng)所;是免疫應(yīng)答發(fā)生的場(chǎng)所;具有抗原過(guò)濾作用;外周免疫器官參與淋巴細(xì)胞再循環(huán)與歸巢，所有外周免疫器官均可視為是淋巴細(xì)胞再循環(huán)的起點(diǎn)、中途站與歸巢終點(diǎn)。高頻考點(diǎn)6 T細(xì)胞表面標(biāo)志及功能凡參與免疫應(yīng)答以及與免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞統(tǒng)稱為免疫細(xì)胞，依其參與免疫應(yīng)答類型不同可分為非特異性的固有免疫細(xì)胞和特異性的適應(yīng)性免疫細(xì)胞兩大類，其中適應(yīng)性免疫細(xì)胞主要包括專職抗原提呈細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞。1T細(xì)胞重要的細(xì)

7、胞膜表面標(biāo)志有：（1）T細(xì)胞（抗原）受體（TCR）：T細(xì)胞（抗原）受體是由膜分子TCR和CD3構(gòu)成的復(fù)合體，是T細(xì)胞的獨(dú)特標(biāo)志性膜蛋白分子，表達(dá)于所有成熟T細(xì)胞膜表面，接受并轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞活化的抗原信號(hào)（第一信號(hào)）。（2）CD4和CD8MHC分子受體：T細(xì)胞必須先經(jīng)CD4或CD8分子識(shí)別結(jié)合抗原提呈細(xì)胞膜表面的MHC分子才能接受抗原信息。成熟TCR-T細(xì)胞依據(jù)細(xì)胞膜的CD4/CD8分子分為CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞兩個(gè)亞群。CD4+T細(xì)胞輔助性T細(xì)胞（Th）：Th細(xì)胞膜表達(dá)CD4分子，可特異識(shí)別結(jié)合MHC-類分子提呈的相應(yīng)外源性抗原肽，活化并分化為Th1和Th2細(xì)胞。此外，CD4還是人類免疫缺

8、陷病毒（HIV）的受體。CD8+T細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL或Tc）：Tc細(xì)胞膜表達(dá)CD8分子，可特異識(shí)別結(jié)合MHC-I類分子提呈的相應(yīng)內(nèi)源性抗原肽而被活化。（3）協(xié)同刺激分子及受體接受或提供細(xì)胞活化第二信號(hào)： CD28：與抗原提呈細(xì)胞膜表面配體CD80CD86分子結(jié)合后，接受T細(xì)胞活化的第二信號(hào)。CDl54（CD40L）：與B細(xì)胞膜表面的CD40 結(jié)合后，提供B細(xì)胞活化第二信號(hào)。（4）CD2：CD2是成熟T細(xì)胞膜表面的特有標(biāo)志，主要配體是CD58。CD2還是綿羊紅細(xì)胞受體（E受體），可利用綿羊紅細(xì)胞與T細(xì)胞結(jié)合的E花環(huán)試驗(yàn)，測(cè)定外周血中T細(xì)胞總數(shù)。（5）絲裂原受體：T細(xì)胞膜上特有植物血凝素（

9、PHA）受體和刀豆蛋白A（ConA）受體，此外T細(xì)胞與B細(xì)胞膜上都表達(dá)有美洲商陸（PWM）受體，靜息T細(xì)胞與PHA/ConA/PWM結(jié)合后可活化、增殖和分化。2T細(xì)胞功能（1）Th細(xì)胞：主要功能是免疫調(diào)節(jié)。Th l細(xì)胞：主要通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子參與細(xì)胞免疫；Th2細(xì)胞：主要功能是調(diào)節(jié)體液免疫應(yīng)答，通過(guò)提供B細(xì)胞活化第二信號(hào)（協(xié)同信號(hào)）和細(xì)胞因子，輔助B細(xì)胞活化及轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞合成抗體。（2）Tc細(xì)胞：主要效應(yīng)是直接殺傷帶有相應(yīng)Ag的靶細(xì)胞（如病毒感染細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等）或誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡。典型試題2（A1型題）T細(xì)胞不具備的功能是（E）A抗原識(shí)別 B細(xì)胞毒效應(yīng) C分泌細(xì)胞因子D參與免疫調(diào)節(jié) E合成分

10、泌Ig典型試題3（A型題）細(xì)胞毒性T細(xì)胞不具有下列哪種功能（A）A輔助B細(xì)胞分化成抗體產(chǎn)生細(xì)胞 B抗胞內(nèi)寄生細(xì)菌的感染作用C特異性殺傷病毒感染細(xì)胞 D殺傷腫瘤細(xì)胞等E誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡高頻考點(diǎn)7 B細(xì)胞表面及標(biāo)志功能B細(xì)胞是骨髓依賴性淋巴細(xì)胞，受抗原刺激后可分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。1B細(xì)胞的重要膜表面標(biāo)志（1）B細(xì)胞抗原受體（BCR）：BCR由膜免疫球蛋白（mIg）與CD79聚合構(gòu)成，是B細(xì)胞的獨(dú)特標(biāo)志性膜蛋白分子，表達(dá)于所有成熟B細(xì)胞膜表面，接受并轉(zhuǎn)導(dǎo)B細(xì)胞活化的抗原信號(hào)（第一信號(hào)）。未成熟B細(xì)胞膜一般只表達(dá)mIgM，成熟B細(xì)胞膜可同時(shí)表達(dá)mIgM和mIgD。（2）CD19CD21復(fù)合物B細(xì)胞活化

11、輔助受體。（3）CD32B細(xì)胞抑制性輔助受體。（4）協(xié)同刺激分子及受體接受或提供細(xì)胞活化第二信號(hào)：CD40：表達(dá)于成熟B細(xì)胞膜表面。CD40與活化T細(xì)胞膜上的CDl54（CD40L）結(jié)合后，接受B細(xì)胞活化必需的第二信號(hào)。CD80CD86（也分別命名為B7-1B7-2）：主要表達(dá)于活化B細(xì)胞。CD80CD86與T細(xì)胞膜CD28結(jié)合后，T細(xì)胞獲得活化第二信號(hào)。（5）CD5：根據(jù)細(xì)胞膜有無(wú)CD5表達(dá)，可將B細(xì)胞區(qū)分為B1（CD5+）和B2（CD5-）細(xì)胞兩個(gè)亞群。（6）絲裂原受體：B細(xì)胞膜特有的絲裂原受體是脂多糖（LPS）受體和葡萄球菌A蛋白（SPA）受體，此外與T細(xì)胞一樣也表達(dá)有美洲商陸（PWM）

12、受體。靜息B細(xì)胞與LPS/SPA/PWM結(jié)合后可活化、增殖和分化。2B細(xì)胞功能 分化為漿細(xì)胞合成抗體；攝取、加工與提呈抗原；分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)。典型試題4（A1型題）對(duì)T細(xì)胞和B細(xì)胞均有刺激作用的有絲分裂原是（C）APHA BLPS CPWM DConA ESPA典型試題5（A1型題）B淋巴細(xì)胞膜上的最具特征性的受體是（D）AC3受體 BEB病毒受體 CIgGFc受體D膜免疫球蛋白（mIg） E絲裂原受體高頻考點(diǎn)8 NK細(xì)胞特點(diǎn)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）是一類不表達(dá)特異性抗原受體的大顆粒（嗜天青顆粒）淋巴細(xì)胞，顆粒內(nèi)含穿孔素、細(xì)胞毒素、顆粒酶等溶細(xì)胞及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性物質(zhì)。NK細(xì)胞沒(méi)有獨(dú)

13、特膜標(biāo)志，目前將CD56+、CDl6+、CD94+、TCR?、BCR?、CD3?的淋巴樣細(xì)胞鑒定為NK細(xì)胞。NK細(xì)胞無(wú)需抗原刺激，可分泌穿孔素和細(xì)胞因子直接殺傷微生物感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞（靶細(xì)胞），可通過(guò)“抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）”殺傷靶細(xì)胞，也可誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡，是執(zhí)行免疫監(jiān)視功能的重要細(xì)胞。NK細(xì)胞是固有免疫應(yīng)答細(xì)胞，其主要功能有：抗腫瘤免疫；抗細(xì)胞內(nèi)感染免疫，如抗病毒感染、胞內(nèi)寄生菌感染、真菌感染和寄生蟲感染；分泌IFN-、TNF-等細(xì)胞因子，參與免疫調(diào)節(jié)作用。典型試題6（A1型題）NK細(xì)胞不具備的功能是（E）A抗病毒感染 B抗腫瘤 C免疫調(diào)節(jié)D抗胞內(nèi)寄生菌感染 E合成Ig

14、高頻考點(diǎn)9 單核-巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞包括血液中的單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞、以及組織中的巨噬細(xì)胞。單核-巨噬細(xì)胞有如下重要免疫功能：吞噬作用：?jiǎn)魏?巨噬細(xì)胞能直接吞噬和殺傷病原微生物；攝取、加工和提呈抗原：M是一類專職APC，可利用MHC-分子給CD4+T細(xì)胞提呈外源性抗原肽；調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答：M對(duì)免疫應(yīng)答具有正調(diào)節(jié)或負(fù)調(diào)節(jié)的雙向調(diào)節(jié)作用；抗腫瘤作用：充分活化的M能直接吞噬腫瘤細(xì)胞、或分泌TNF-、NO、及溶酶體酶等殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、或利用ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞、或遞呈腫瘤抗原激活T細(xì)胞協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞。參與局部炎癥反應(yīng)：M合成分泌TNF-、IL-1、IL-6及LTB4等炎性介質(zhì)引起局部炎癥反應(yīng)。高頻

15、考點(diǎn)10 免疫球蛋白基本概念、基本結(jié)構(gòu)、功能區(qū)及其功能1基本概念（1）抗體（Ab） 是B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后、增殖分化為漿細(xì)胞合成并分泌至血液和體液中的、能與該抗原特異性結(jié)合的球蛋白。（2）免疫球蛋白（Ig） 是所有具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。2Ig基本結(jié)構(gòu) 單體Ig分子由兩條相同重鏈（H鏈）借二硫鍵在中部相連，而兩條相同輕鏈（L鏈）又借二硫鍵各與一條重鏈連接，形成一種對(duì)稱性四肽鏈分子。（1）L鏈：按抗原性差異分為和兩型，其中型又分為4個(gè)亞型。同一種Ig分子的2條L鏈都是同型的，即都是型或都是型，不會(huì)是混型的。（2）H鏈：按抗原性差異分為、五類，分別是重鏈為類型的IgG（分為Ig

16、G1、2、3、4亞類）、重鏈為類型的IgA（分為IgA1、2亞類）、重鏈為類型的IgM、重鏈為類型的IgD、重鏈為類型的IgE。每一個(gè)Ig單體分子的2條H鏈也是同類型的，不會(huì)是混型的。3Ig功能區(qū) Ig的L鏈和H鏈大約每110個(gè)氨基酸殘基的區(qū)段內(nèi)有一對(duì)鏈內(nèi)二硫鍵，使這一區(qū)段肽鏈折疊構(gòu)成一個(gè)桶狀結(jié)構(gòu)域。每一結(jié)構(gòu)域都有一定的功能，故稱為Ig功能區(qū)。（1）易變區(qū)（V區(qū)）：L鏈和H鏈N端的第一個(gè)結(jié)構(gòu)域因氨基酸順序多變分別稱為L(zhǎng)鏈易變區(qū)（VL）和H鏈易變區(qū)（VH）。VH和VL經(jīng)折疊形成抗原結(jié)合腔，能與對(duì)應(yīng)抗原決定基在空間構(gòu)像上精確互補(bǔ)而特異結(jié)合。（2）恒定區(qū)（C區(qū)）：除V區(qū)外，Ig靠C端的其余肽段氨基酸

17、順序變化很小，分別稱為L(zhǎng)鏈恒定區(qū)（CL）和H鏈恒定區(qū)（CH）。CL的抗原性是Ig分型或亞型的依據(jù)，而CH的抗原性是Ig分類或亞類的依據(jù)。此外CL和CH還可能分布有個(gè)體遺傳標(biāo)志抗原位點(diǎn)。C1區(qū)由CL與CH1區(qū)構(gòu)成；C2由兩個(gè)CH2構(gòu)成，IgG的C2區(qū)有補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)；C3由兩個(gè)CH3構(gòu)成，IgM的C3區(qū)有補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)；IgM和IgE還有一個(gè)C4區(qū)，由兩個(gè)CH4構(gòu)成。（3）鉸鏈區(qū)：是Ig的CH1和CH2之間的一結(jié)構(gòu)松散可以伸展改變Ig構(gòu)型的肽段。鉸鏈區(qū)內(nèi)有兩個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基，兩條H鏈在此形成二硫鍵相連接。4Ig 的水解片段 IgG的鉸鏈區(qū)二硫鍵兩端有木瓜蛋白酶和胃蛋白酶的水解位點(diǎn)：（1）木瓜蛋白

18、酶水解片段：在IgG鉸鏈區(qū)二硫鍵的靠N端一邊將IgG水解成三個(gè)片段，其中二個(gè)由L鏈和VH-CH1構(gòu)成，保留了易變區(qū)完整的抗原結(jié)合區(qū)，稱為抗原結(jié)合片段（Fab）；另一個(gè)片段由兩條H鏈的CH2和CH3區(qū)構(gòu)成，稱為可結(jié)晶片段（Fc）。Fc段可與細(xì)胞膜表面相應(yīng)Fc受體結(jié)合，介導(dǎo)免疫細(xì)胞發(fā)揮免疫效應(yīng)。（2）胃蛋白酶水解片段：在IgG鉸鏈區(qū)二硫鍵的靠C端一邊將IgG分子水解形成一個(gè)F（ab）2片段，由兩個(gè)Fab借鉸鏈區(qū)二硫鍵連接而成，保持完整IgG與Ag結(jié)合的功能；而剩余的CH2和CH3水解成的許多無(wú)任何生物學(xué)效應(yīng)的小分子多肽。6生物學(xué)活性（1）V區(qū)功能：抗體的抗原結(jié)合腔在空間構(gòu)像上與對(duì)應(yīng)抗原決定基精確互

19、補(bǔ)而結(jié)合，使抗原不能發(fā)揮原有的生物學(xué)效應(yīng)。（2）C區(qū)生物學(xué)效應(yīng)：激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑：IgG和IgM與抗原特異性結(jié)合后，可與補(bǔ)體C1q結(jié)合并激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑；介導(dǎo)免疫細(xì)胞效應(yīng)：主要有：免疫調(diào)理作用、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）、介導(dǎo)型超敏反應(yīng)（IgE，IgG4）；通過(guò)胎盤（IgG）；參與免疫調(diào)節(jié)。典型試題7（A1型題）下面關(guān)于免疫球蛋白功能區(qū)的敘述不正確的是（B）AVH和VL構(gòu)成抗原結(jié)合部位 B只有CL，CH1是遺傳標(biāo)記所在CIgG的CH2有補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn) D鉸鏈區(qū)可以改變Ig構(gòu)型ECH3或CH4能與免疫細(xì)胞膜Fc受體結(jié)合典型試題8（X型題）免疫球蛋白生物學(xué)活性包括（ABD）AV區(qū)特異

20、性結(jié)合相應(yīng)抗原 BIgG-CH2激活補(bǔ)體 CIgM穿過(guò)胎盤DFc結(jié)合NK細(xì)胞介導(dǎo)ADCC效應(yīng) E介導(dǎo)型超敏反應(yīng)高頻考點(diǎn)11 各類免疫球蛋白特征與功能1IgG IgG是血清和組織液中含量最高的抗體（約占血清Ig總量的80），也是半衰期（約1624天）最長(zhǎng)的抗體。其重要作用有：抗微生物感染：IgG是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，大多數(shù)抗菌抗體、細(xì)菌毒素或病毒的中和抗體都是IgG，是體內(nèi)主要的抗感染抗體；激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑：IgGl、IgG3與抗原特異結(jié)合后，可高效激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，導(dǎo)致溶血及溶細(xì)胞效應(yīng)；介導(dǎo)免疫細(xì)胞效應(yīng)：IgGV區(qū)特異性結(jié)合抗原后，其Fc段可與M、NK細(xì)胞表面的Fc受體結(jié)合，發(fā)揮免疫調(diào)理和

21、ADCC作用等；保護(hù)胎兒和新生兒：IgG1、IgG3、IgG4是唯一可穿過(guò)胎盤屏障的抗體，是胎兒和新生兒的被動(dòng)抗感染抗體；參與免疫病理?yè)p傷：IgG1、2、3可參與、型超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病，而IgG4可參與型超敏反應(yīng)。2IgM IgM主要有兩種存在形式：（1）單體IgM：是表達(dá)于B細(xì)胞膜表面mIgM，參與構(gòu)成BCR復(fù)合體，選擇識(shí)別與結(jié)合抗原；（2）血清型IgM：五個(gè)單體IgM籍J鏈連接為五聚體，是分子量最大的抗體（970kD），不能通過(guò)血管壁，主要存在于血清中。其重要免疫功能有：血液抗感染抗體：因含10個(gè)抗原結(jié)合區(qū)，具有很強(qiáng)的抗原結(jié)合能力，是重要的血液抗感染抗體；激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑：IgM的C

22、H3區(qū)共有10個(gè)補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)，是激活補(bǔ)體的能力最強(qiáng)的抗體；宮內(nèi)感染診斷依據(jù)：在胎兒發(fā)育后期（約20周）開始有合成IgM的能力，由于母體IgM不能通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，因此如果臍帶血或新生兒血液中特異性IgM量較高的話，則提示新生兒曾受到宮內(nèi)感染；早期感染診斷依據(jù)：機(jī)體受抗原刺激后最先合成IgM，接著是IgG。當(dāng)IgG大量合成時(shí)，IgM合成量則相應(yīng)減少。因此，檢查血清特異性IgM含量可用作傳染病的早期診斷。3IgA IgA有兩種存在形式（1）血清型IgA：為單體分子，主要存在于血清中；（2）分泌型IgA（SIgA）：為二聚體，由J鏈連接兩個(gè)單體分子和附加一個(gè)分泌片構(gòu)成。SIgA是各種粘膜細(xì)胞外分

23、泌液中的主要抗體，存在于呼吸道、消化道、生殖道粘膜表面；也存在于部分腺體分泌液中，如乳汁（初乳中含量最高的抗體是SIgA）、唾液、淚液。嬰兒可從母乳中獲得SIgA，是一種重要的自然被動(dòng)免疫。SIgA性能穩(wěn)定，局部濃度大，是參與粘膜局部免疫主要抗體。4IgE IgE主要由粘膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌，單體結(jié)構(gòu)，是正常人血清中含量最少的Ig（約0.3gml）。IgE具有很強(qiáng)親細(xì)胞性，其Fc段可與肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞表面的FcR I結(jié)合，介異I型超敏反應(yīng)。此外，IgE還參與機(jī)體抗寄生蟲免疫。5IgD IgD為單體分子，血清IgD的生物學(xué)功能尚不清楚，僅占血清Ig總量的0.2。mIgD參與構(gòu)成BCR，

24、成熟B細(xì)胞同時(shí)表達(dá)mIgM和mIgD。高頻考點(diǎn)12 免疫球蛋白血清型Ig是結(jié)構(gòu)復(fù)雜的大分子蛋白質(zhì)，可作為抗原誘導(dǎo)異體或自體的特異性免疫應(yīng)答。Ig有同種型、同種異型和獨(dú)特型等三類抗原決定基。高頻考點(diǎn)13 補(bǔ)體系統(tǒng)基礎(chǔ)知識(shí)1概念 補(bǔ)體系統(tǒng)是存在于人和脊椎動(dòng)物血清、組織液和細(xì)胞膜表面的一組與免疫有關(guān)并具有酶原活性的糖蛋白，當(dāng)被某種物質(zhì)激活后，表現(xiàn)出多種酶活性和其它生物學(xué)效應(yīng)。血清中90的補(bǔ)體是在肝臟中合成的，肝細(xì)胞和枯否細(xì)胞是主要合成細(xì)胞。2理化性質(zhì)（1）補(bǔ)體的化學(xué)成分：糖蛋白，在電泳時(shí)，大多數(shù)屬于球蛋白，少數(shù)屬（如C1s和D因子）和球蛋白（如C1q）。（2）化學(xué)性質(zhì)：很不穩(wěn)定，不耐熱，5630mi

25、n可滅活；強(qiáng)酸強(qiáng)堿、強(qiáng)烈振蕩、乙醚、酒精、蛋白酶等均可使其滅活，甚至離體存放時(shí)間稍長(zhǎng)，活性也會(huì)逐漸喪失。3補(bǔ)體的途徑 補(bǔ)體激活主要有經(jīng)典途徑、甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑和旁路途徑等三條途徑。（1）經(jīng)典途徑：激活可人為分成識(shí)別階段、活化階段和膜攻擊階段，過(guò)程如下：識(shí)別階段：識(shí)別單位是C1q，C1r，C1s，激活物質(zhì)是Ag-2IgG或Ag-IgM復(fù)合物。從激活C1q開始，由C1q激活C1r，最后形成蛋白酶C1s，其底物是C4和C2?；罨A段：激活單位是C4、C2和C3。C1s順序水解C4和C2，由C4和C2的大水解片段組成C4b2b復(fù)合物，此即C3轉(zhuǎn)化酶；C3轉(zhuǎn)化酶水解C3，大片段C3b與C

26、4b2b組成C4b2b3b，此即C5轉(zhuǎn)化酶。膜攻擊階段：膜攻擊單位 C5、C6、C7、C8和C9。C5轉(zhuǎn)化酶將C5水解成C5a和C5b，C5b結(jié)合于細(xì)胞膜并依次激活C6、7、8、9，形成攻膜復(fù)合體C5b6789n。多個(gè)C9分子聚合形成一管狀結(jié)構(gòu)插入膜內(nèi)，穿透細(xì)胞膜，導(dǎo)致細(xì)胞溶解。經(jīng)典途徑啟動(dòng)依賴于抗原抗體復(fù)合物，因而參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答。（2）替代途徑（又稱旁路途徑）：激活物質(zhì)：主要是微生物細(xì)胞壁糖類物質(zhì)（如脂多糖、酵母多糖、葡聚糖等）、聚合IgA和IgG4等。激活過(guò)程：在生理狀況下，血清中的C3可被某些蛋白酶緩慢水解，因此血清中存在低水平的C3b。當(dāng)有細(xì)菌脂多糖（LPS）等激活物存在時(shí)，體液中

27、的C3b可粘附在細(xì)菌細(xì)胞膜表面并與B因子結(jié)合形成C3bB復(fù)合物。C3bB中的B因子易被D因子水解成Ba和Bb，在細(xì)菌細(xì)胞膜上形成C3bBb。Bb具有絲氨酸酶活性，可將本復(fù)合物中的C3水解成C3a和C3b，此復(fù)合物是替代途徑的C3轉(zhuǎn)化酶。此酶可激活更多的C3，生成更多的C3bBb，這就是“C3b依賴性正反饋環(huán)路”。形成的C3b粘附在C3bBb周圍的細(xì)胞膜上，與C3bBb結(jié)合形成C3bnBb復(fù)合物，此即為C5轉(zhuǎn)化酶。此后的膜攻擊階段與經(jīng)典途徑相同。（3）甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑：由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）與病原體結(jié)合后啟動(dòng)激活。MBL首先與細(xì)菌細(xì)胞壁的甘露糖殘基結(jié)合，然后

28、與絲氨酸蛋白酶結(jié)合，形成MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶（MASP）。MASP可水解C4和C2分子，產(chǎn)生C4b2b共同構(gòu)成與經(jīng)典途徑相同的C3轉(zhuǎn)化酶，其后續(xù)激活階段與經(jīng)典途徑相同。4生物學(xué)功能（1）補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用：能溶解細(xì)菌（但一般不溶解革蘭陽(yáng)性菌）、真菌、包膜病毒、寄生蟲，也可溶解自身組織細(xì)胞。（2）溶解免疫復(fù)合物（IC），防止免疫復(fù)合物在體內(nèi)沉積。（3）介導(dǎo)免疫細(xì)胞效應(yīng)：免疫調(diào)理作用：如巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞等通過(guò)其膜表面的CR1與細(xì)菌細(xì)胞膜表面的C3b結(jié)合，把細(xì)菌固定在吞噬細(xì)胞表面，有利于吞噬。免疫粘附作用：紅細(xì)胞膜上有CR1，當(dāng)C3b與Ag-Ab免疫復(fù)合物（IC）結(jié)合后，紅細(xì)胞通過(guò)CR1將C

29、3b-IC粘附在其膜表面，攜帶至肝臟交給巨噬細(xì)胞吞噬清除。炎癥介質(zhì)效應(yīng)：a過(guò)敏毒素作用：C3a、C4a和C5a可與嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞細(xì)胞膜上的C3aR、C4aR和C5aR結(jié)合，導(dǎo)致肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒，引起過(guò)敏反應(yīng)。因此C3a、C4a和C5a也稱為過(guò)敏毒素；b趨化作用：C3a、C5a和C567具有吸引吞噬細(xì)胞到炎癥部位聚集，發(fā)揮吞噬作用，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)，所以也稱為趨化因子；c激肽樣作用：C2a和C4a可直接引起血管擴(kuò)張和通透性增加，造成炎癥性充血。典型試題9（A1型題）補(bǔ)體不具有下列哪種生物學(xué)活性（E）A溶細(xì)胞作用 B吞噬調(diào)理作用 C免疫黏附作用D過(guò)敏毒素作用 E抗原識(shí)別作用典型試題

30、10（X型題）下列哪種成分不參與補(bǔ)體替代激活途徑（AC）AC2 BC3 CC4 DC5 EC6高頻考點(diǎn)14 細(xì)胞因子概念與共同特性1概念 細(xì)胞因子（cytokine，CK）是由多種細(xì)胞、尤其是免疫細(xì)胞合成分泌的一類具有多種生物活性的小分子蛋白質(zhì)或多肽，是細(xì)胞間的信息傳遞分子。2共同特性產(chǎn)生特點(diǎn)：各種細(xì)胞受抗原等誘導(dǎo)活化后都可產(chǎn)生細(xì)胞因子（多源性），而且一種細(xì)胞可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，不同類的細(xì)胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細(xì)胞因子。細(xì)胞合成的細(xì)胞因子，大多數(shù)以自分泌或旁分泌方式分泌在局部組織發(fā)揮作用，少數(shù)可內(nèi)分泌進(jìn)入血流；化學(xué)性質(zhì)：細(xì)胞因子一般為低分子量的蛋白或糖蛋白；作用方式；大多數(shù)細(xì)胞因子采取瞬時(shí)近

31、距離、抗原非特異性、特異受體限制方式作用于靶細(xì)胞；作用特點(diǎn)：生物效應(yīng)常表現(xiàn)為高效性、多效性、重疊性、雙向性、網(wǎng)絡(luò)性。生物學(xué)作用：刺激造血功能、刺激免疫細(xì)胞活化分化和成熟、參與免疫調(diào)節(jié)和細(xì)胞生理功能調(diào)節(jié)、抗病毒及抗腫瘤、介導(dǎo)炎癥等。高頻考點(diǎn)15 細(xì)胞因子及其受體類型1細(xì)胞因子按其生物學(xué)功能可分為：（1）白細(xì)胞介素（IL） 在多種細(xì)胞間發(fā)揮廣泛作用的細(xì)胞因子。（2）干擾素（IFN） 是細(xì)胞受病毒核酸或某些誘生劑刺激后合成分泌的細(xì)胞因子，人干擾素分為IFN-、IFN-、IFN-三種類型，其中IFN-具有干擾病毒復(fù)制的能力；IFN-具有抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用。（3）腫瘤壞死因子（TNF） 是一種能使腫瘤

32、發(fā)生出血性壞死的細(xì)胞因子。TNF-主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，可參與炎癥、疾病進(jìn)展及惡病質(zhì)形成、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抗腫瘤作用等。TNF-主要由活化的Th1細(xì)胞產(chǎn)生，具有細(xì)胞毒作用，又稱淋巴毒素。（4）集落刺激因子（CSF） 是能夠刺激多能造血干細(xì)胞和前體免疫細(xì)胞進(jìn)行增殖分化的細(xì)胞因子。種類主要有粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）、單核-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）。IL3也是CSF，可刺激所有未成熟的免疫前體細(xì)胞發(fā)育分化成熟，稱為多系集落刺激因子。（5）趨化因子 主要由白細(xì)胞與造血微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞分泌，具有對(duì)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、

33、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的趨化和激活活性。（6）生長(zhǎng)因子（GF） 指具有刺激或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)作用的細(xì)胞因子，如表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（EGF）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-（TGF-）等。2細(xì)胞因子受體是識(shí)別CK并與之特異結(jié)合、將CK信息傳遞至細(xì)胞內(nèi)的跨膜蛋白分子。細(xì)胞因子受體分為免疫球蛋白基因超家族、I型細(xì)胞因子受體家族、型細(xì)胞因子受體、型細(xì)胞因子受體家族、趨化性細(xì)胞因子受體家族五個(gè)家族。 （劉琥琥）第2單元 抗原抗體反應(yīng)高頻考點(diǎn)1 體外抗原抗體反應(yīng)概念體外抗原抗體反應(yīng)是指抗體與相應(yīng)抗原在體外特異性結(jié)合后，可因抗原或抗體的物理性狀不同、以及參與反應(yīng)的物質(zhì)不同而出現(xiàn)各種反應(yīng)現(xiàn)象，如凝集、沉

34、淀、補(bǔ)體結(jié)合及中和反應(yīng)等。由于抗原與抗體結(jié)合具有高度特異性，因此可以利用已知抗體鑒定標(biāo)本中的未知抗原（或反過(guò)來(lái)）。高頻考點(diǎn)2 抗原抗體反應(yīng)原理1抗原抗體結(jié)合力 指抗原依賴抗原決定基（表位）和抗體的抗原結(jié)合部位的空間構(gòu)像精確互補(bǔ)特異結(jié)合，這是一種非共價(jià)鍵的可逆結(jié)合，取決于抗體的親和性和親和力。親和性指抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合部位與對(duì)應(yīng)抗原表位之間的結(jié)合強(qiáng)度，是抗體與抗原間的固有結(jié)合力，抗體的抗原結(jié)合部位與抗原表位空間構(gòu)型互補(bǔ)程度越高親和性越強(qiáng)。親和力指一個(gè)完整抗體分子與整個(gè)抗原分子之間的結(jié)合強(qiáng)度，當(dāng)抗體與大分子抗原結(jié)合時(shí)，親和力取決于抗體的抗原結(jié)合部位（結(jié)合價(jià)）數(shù)目，抗體結(jié)合價(jià)越多，抗體親和力高，

35、與抗原結(jié)合牢固，即所謂多價(jià)優(yōu)勢(shì)。結(jié)合后，在抗原與抗體的對(duì)應(yīng)氨基酸殘基之間還有靜電引力、范德華引力、氫鍵結(jié)合力和疏水作用力等四種分子間引力可促進(jìn)結(jié)合，其中范德華引力作用最小，而疏水作用力作用最大。2親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體 Ig與抗原蛋白帶有電荷和強(qiáng)極性基團(tuán)，與水分子有很強(qiáng)的親和力，可在粒子外周構(gòu)成水化膜成為親水膠體。同種膠體粒子在一定pH的水溶液中帶有相同電荷，互相排斥。因此親水膠體能均勻地分布于溶液中不發(fā)生凝集或沉淀。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合后，分子間的極性基團(tuán)由于化學(xué)特性相吻合而互相吸引，因此不能再與水分子結(jié)合，失去親水性能，成為疏水膠體。此時(shí)如有電解質(zhì)存在（如氯化鈉），可以中和膠體粒子表面所帶電荷

36、，進(jìn)一步使疏水膠體粒子相互靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物，發(fā)生凝集或沉淀。典型試題1（A1型題）下列關(guān)于抗原抗體反應(yīng)原理的敘述錯(cuò)誤的是（A）A抗原抗體是共價(jià)結(jié)合，可形成共價(jià)鍵B抗原抗體特異結(jié)合還需要種分子間引力參與C抗體親和力與抗體結(jié)合價(jià)有關(guān)DK值越大，親和性越高，與抗原結(jié)合越牢固E抗原抗體復(fù)合物由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體時(shí)可發(fā)生凝集或沉淀高頻考點(diǎn)3 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1特異性 抗原與抗體的結(jié)合具有高度特異性，其中抗原的特異性取決于抗原表位的化學(xué)基團(tuán)性質(zhì)、數(shù)目及其立體構(gòu)型，而抗體的特異性則取決于V區(qū)的抗原結(jié)合部位空間構(gòu)像，應(yīng)與相應(yīng)抗原表位精確互補(bǔ)吻合。2比例性 在進(jìn)行體外抗原抗體反應(yīng)時(shí)，只有當(dāng)抗

37、原和抗體分子比例最合適時(shí)，抗原與抗體結(jié)合充分，形成的抗原抗體復(fù)合物大且多，出現(xiàn)明顯可見反應(yīng)。測(cè)定抗原抗體分子比例是否合適，在進(jìn)行沉淀反應(yīng)時(shí)，一般用抗原稀釋法，即抗體恒量而抗原做系列稀釋；在進(jìn)行凝集反應(yīng)時(shí)，一般用抗體稀釋法，即抗原恒量而抗體做系列稀釋；或者用抗原與抗體方陣滴定法3可逆性 抗原與抗體的結(jié)合僅是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合，這種結(jié)合雖具有相對(duì)穩(wěn)定性，但為可逆反應(yīng)，即抗原抗體復(fù)合物可以解離?？乖贵w復(fù)合物解離一是取決于抗體與相應(yīng)抗原的親和力，親和力越高復(fù)合物越不易解離；二是取決于反應(yīng)條件，如降低或升高pH值、或增加溶液離子強(qiáng)度，均可降低或消除抗原與抗體間的靜電引力，促使抗原抗體復(fù)合物解離；而

38、降低溶液離子強(qiáng)度則不能引起抗原抗體復(fù)合物解離。4階段性 抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段：第一階段為特異性結(jié)合階段，反應(yīng)取決于抗原表位與相應(yīng)抗體的抗原結(jié)合部位的空間構(gòu)像互補(bǔ)吻合，與外界因素?zé)o關(guān)。反應(yīng)進(jìn)行較快，大多在幾秒鐘至數(shù)分鐘內(nèi)即完成，但無(wú)肉眼可見反應(yīng)出現(xiàn)；第二階段為可見反應(yīng)階段，在抗原與抗體特異結(jié)合的基礎(chǔ)上，受環(huán)境中電解質(zhì)、溫度、 pH、補(bǔ)體等因素的參與和影響，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合、細(xì)胞溶解等可見反應(yīng)。此階段較長(zhǎng)，歷時(shí)數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)乃至數(shù)天。但若為單價(jià)抗體或半抗原，則仍不出現(xiàn)可見反應(yīng)。兩個(gè)階段并無(wú)嚴(yán)格界限，往往第一階段反應(yīng)還未完全完成，即開始第二階段反應(yīng)。典型試題2（A1型題）根據(jù)抗原抗體

39、反應(yīng)的可逆性特點(diǎn)，以下哪種說(shuō)法是正確的（D）A抗原抗體結(jié)合牢固不易受環(huán)境影響 B解離后抗體不能再與抗原結(jié)合C解離后抗原生物學(xué)活性改變 D解離后抗體的特異性不變E解離后抗體的特異性改變典型試題3（X型題）對(duì)于抗原抗體反應(yīng)階段的正確敘述是（ABCD）A可分為特異性結(jié)合階段和可見反應(yīng)階段 B特異性結(jié)合階段反應(yīng)快C可見反應(yīng)段反應(yīng)慢 D可見反應(yīng)階段受反應(yīng)條件影響E兩階段能嚴(yán)格分開高頻考點(diǎn)4 影響抗原抗體反應(yīng)的因素1反應(yīng)物（1）抗體 抗體類型、特異性、親和力和濃度都影響抗體抗原反應(yīng)，等價(jià)帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成。抗體結(jié)合價(jià)：一個(gè)Ig的抗原結(jié)合部位的數(shù)目即是抗體的結(jié)合價(jià)。IgG為2價(jià)，SIgA為4

40、價(jià)，IgM理論結(jié)合價(jià)是10價(jià)。（2）抗原 抗原的分子量、理化性狀、抗原表位的種類及數(shù)目均可影響反應(yīng)結(jié)果?？扇苄钥乖c相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)沉淀反應(yīng)（半抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象），顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集反應(yīng)?？乖Y(jié)合價(jià)：一個(gè)抗原分子所攜帶的功能性抗原表位的數(shù)目即是該抗原的結(jié)合價(jià)。半抗原（一個(gè)表位）是1價(jià)；天然抗原是多價(jià)。由于天然抗原一般是大分子，由多種、多個(gè)抗原表位組成，是多價(jià)抗原，可以和多個(gè)抗體分子交互結(jié)合形成大分子免疫復(fù)合物。2反應(yīng)環(huán)境因素 電解質(zhì)：電解質(zhì)（如氯化鈉）可以中和膠體粒子表面所帶電荷，進(jìn)一步使疏水膠體粒子相互靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物，發(fā)生凝集或沉淀。酸堿度：蛋白

41、質(zhì)抗原等電點(diǎn)（pI）約為pH45，IgG等電點(diǎn)約pH67。當(dāng)pH達(dá)到或接近抗原的等電點(diǎn)時(shí)，即使無(wú)相應(yīng)抗體存在，也會(huì)發(fā)生非特異性的凝集（自凝）或沉淀。因此抗原抗體反應(yīng)一般在pH69電介質(zhì)溶液中進(jìn)行，在此溶液中抗原帶有相同電荷，互相排斥，不會(huì)發(fā)生自凝。而有補(bǔ)體參與的反應(yīng)最適pH7.27.4，否則會(huì)降低補(bǔ)體活性。溫度：在一定范圍內(nèi)，溫度升高抗原與抗體碰撞機(jī)會(huì)增多，使反應(yīng)加速。常規(guī)反應(yīng)溫度為37。典型試題4（A1型題）下列影響抗原抗體反應(yīng)因素中，不屬于反應(yīng)物自身的因素是（D）A抗原物理性狀 B抗體特異性 C抗體親和力D電解質(zhì) E抗原抗體的分子比例高頻考點(diǎn)5 抗原抗體反應(yīng)的基本類型根據(jù)抗原與抗體特異結(jié)合

42、后產(chǎn)生的現(xiàn)象和結(jié)果不同，抗原抗體反應(yīng)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體參與的反應(yīng)和中和反應(yīng)等四種基本類型。 （劉琥琥）第3單元 免疫原及抗血清制備高頻考點(diǎn)1 抗原的制備1顆粒性抗原 各種細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲等皆為顆粒性抗原。一般情況下細(xì)胞抗原（如綿羊紅細(xì)胞）經(jīng)生理鹽水或其他溶液洗凈，配制一定濃度即可；細(xì)菌細(xì)胞多用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，經(jīng)生理鹽水集菌后處理，如菌體抗原加溫100，22.5h去除鞭毛抗原，而鞭毛抗原需用0.3%0.5%甲醛處理。2可溶性抗原 蛋白質(zhì)如細(xì)菌毒素等皆為良好的可溶性抗原，免疫前常需純化。（1）組織和細(xì)胞粗抗原的制備 一般將人或動(dòng)物的組織和細(xì)胞破碎，再經(jīng)一定的方法純化獲得所需的粗抗原。破碎

43、方法有物理性的機(jī)械破碎法、超聲破碎法和20反復(fù)凍融法等，也有生物化學(xué)類的酶處理法、自溶法和表面活性劑處理法等。（2）Ig片段的制備 Ig的片段（如Fab片段、Fc片段、輕鏈片段等）的制備方法有酶裂解法、氧化還原法、離析Ig亞單位和溴化氰裂解法。（3）可溶性抗原的純化 方法有超速離心分離法，選擇沉淀法，凝膠過(guò)濾法，離子交換層析法，親和層析法等。（4）純化抗原的鑒定 化學(xué)分析法：如可用酚試劑法測(cè)定抗原蛋白質(zhì)含量；物理分析法：如鑒定抗原分子量和純度可用聚丙烯酰胺凝膠電泳法等；免疫學(xué)方法：如可用瓊脂擴(kuò)散法、免疫電泳法等鑒定抗原的免疫學(xué)性質(zhì)、含量等。3半抗原 只具有抗原性而無(wú)免疫原性的物質(zhì)稱為半抗原，一

44、般是分子量小于4000dal的有機(jī)物質(zhì)，如寡肽、寡糖和多糖、類脂質(zhì)、核苷、甾族激素、某些小分子量的藥物等。半抗原與蛋白質(zhì)載體或高分子聚合物等結(jié)合后才有免疫原性。一般認(rèn)為載體應(yīng)連接超過(guò)20個(gè)半抗原分子才能使動(dòng)物有效產(chǎn)生抗體，常用聯(lián)接方法有碳二亞胺法、戊二醛法、氯甲酸異丁酯法等。典型試題1（A1型題）純化抗原不需要鑒定的項(xiàng)目是（E）A免疫學(xué)性質(zhì) B抗原含量 C抗原純度D理化性質(zhì) E抗原分子結(jié)構(gòu)典型試題2（X型題）半抗原的特性是（ACE）A分子量一般不超過(guò)4000道爾頓 B具有免疫原性而無(wú)抗原性C只具有抗原性而無(wú)免疫原性 D既有免疫原性也有抗原性E與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后具有免疫原性高頻考點(diǎn)2 佐劑種類

45、和作用免疫佐劑：與抗原同時(shí)或預(yù)先注射于機(jī)體，起增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的輔助物質(zhì)。1佐劑種類 免疫原性佐劑：本身也具備免疫原性，如卡介苗、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌、脂多糖、細(xì)胞因子等。非免疫原性佐劑：如氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣、石蠟油、羊毛脂、胞壁肽、多聚核苷酸等。應(yīng)用最多的是福氏佐劑與細(xì)胞因子佐劑。福氏佐劑有：完全福氏佐劑由石蠟油、羊毛脂和卡介苗混合而成，不完全福氏佐劑只由石蠟油和羊毛脂混合，不含免疫原性佐劑。福氏完全佐劑可提高佐劑效能，但注射后易產(chǎn)生局部持久性潰瘍和肉芽腫。2佐劑作用 應(yīng)用佐劑的目的主要是為了增強(qiáng)抗原對(duì)機(jī)體的免疫原性，提高體液免疫應(yīng)答（增加抗體的滴度）和細(xì)胞

46、免疫應(yīng)答（引起并增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)）水平。典型試題3（A1型題）免疫佐劑的作用不包括（D）A增強(qiáng)巨噬細(xì)胞提呈抗原的能力 B增強(qiáng)抗原的免疫原性 C增加抗體滴度D增強(qiáng)抗原的抗原性 E引起和增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)高頻考點(diǎn)3 免疫動(dòng)物的選擇免疫動(dòng)物必須適齡、健壯、體重達(dá)標(biāo)、無(wú)病原微生物感染。同時(shí)根據(jù)以下基本原則選擇免疫動(dòng)物的種類：根據(jù)抗原的種屬性選擇：免疫動(dòng)物與所接種抗原種屬差異越遠(yuǎn)越好。根據(jù)抗原的免疫原性選擇：針對(duì)不同性質(zhì)的免疫原，選用相應(yīng)的動(dòng)物。如蛋白質(zhì)抗原大部分動(dòng)物皆適合，甾類激素多用家免，酶類多用豚鼠。根據(jù)抗血清要求：實(shí)驗(yàn)室研究，若抗血清需要量不多，一般選用家兔、豚鼠和雞等小動(dòng)物，R（rabbit

47、）型血清是以家兔為代表的小型動(dòng)物抗血清；若需要制備大量免疫血清，應(yīng)選用馬、綿羊等大動(dòng)物，H（hrose）型血清是以馬為代表的大型動(dòng)物抗血清。高頻考點(diǎn)4 免疫方法與途徑1免疫方案 根據(jù)免疫目的要求、抗原性質(zhì)、佐劑種類來(lái)制定免疫方案?？刹捎萌棵庖叻ā⑽⒘棵庖叻ɑ蚧旌厦庖叻?。2免疫接種途徑 有皮內(nèi)、皮下、靜脈、腹腔、肌肉及足掌等常規(guī)接種途徑。但若抗原量少且寶貴，可采用淋巴結(jié)內(nèi)微量注射法接種；而半抗原宜采用皮內(nèi)多點(diǎn)注射接種；3免疫接種劑量 應(yīng)根據(jù)抗原分子量大小、免疫原性強(qiáng)弱、動(dòng)物個(gè)體狀態(tài)和免疫時(shí)間決定接種劑量。典型試題4（A1型題）某免疫原只有10g，制備抗血清應(yīng)選擇哪種接種方法（D）A皮內(nèi)注射 B

48、皮下注射 C肌內(nèi)注射D淋巴結(jié)內(nèi)微量注射 E靜脈注射高頻考點(diǎn)5 免疫血清的分離、鑒定和保存1血清抗體效價(jià)測(cè)定 家兔可通過(guò)耳緣靜脈采血法、小鼠可通過(guò)剪尾法采取少量血，用凝集試驗(yàn)或沉淀試驗(yàn)測(cè)定抗體效價(jià)；2動(dòng)物采血 有心臟采血法、靜脈多次采血法、頸動(dòng)脈放血法等；3分離血清 采用室溫自然凝固、靜置4冰箱待血清析出后收??；4純化IgG 先用硫酸銨鹽析法粗提丙種球蛋白，再用離子交換層析法、親和層析法、凝膠層析法、酶解法、非特異性抗原吸附法等進(jìn)一步純化；5抗體特異性與效價(jià)鑒定 常采用雙向瓊脂擴(kuò)散法；6抗血清保存 通常用4保存（保存時(shí)間不超過(guò)一年）；也可2040低溫保存（保存時(shí)間約五年），或真空冰凍干燥保存（可

49、保存510年）。典型試題5（X型題）抗血清在保存或應(yīng)用前必須做（ABC）A抗體效價(jià)的鑒定 B抗體特異性鑒定 CIg純化DIg分子量的測(cè)定 EIg類型的鑒定（劉琥琥）第4單元 單克隆抗體高頻考點(diǎn)1 單克隆抗體概念1單克隆抗體（McAb） 是由一個(gè)B細(xì)胞克隆合成的、只能與一種相應(yīng)抗原表位特異結(jié)合的完全均一的Ig。完全均一指Ig的血清型、理化性狀、與抗原結(jié)合的特異性等高度均一。2.多克隆抗體 天然抗原常有多種不同抗原表位，因此可刺激體內(nèi)多個(gè)B細(xì)胞克隆活化并產(chǎn)生針對(duì)多種不同抗原表位的抗體，其混合物即為多克隆抗體，血清及組織液中的抗體就是多克隆抗體。高頻考點(diǎn)2 雜交瘤技術(shù)基本原理由一個(gè)小鼠脾細(xì)胞和一個(gè)小

50、鼠骨髓瘤細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞膜融合而形成的多倍體細(xì)胞系稱為B細(xì)胞雜交瘤（hybridoma） 細(xì)胞。正常脾細(xì)胞特性：具有次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶（HGPRT），用選定抗原免疫后可合成針對(duì)該抗原的Ab，在人工合成培養(yǎng)液中只能傳12代；骨髓瘤細(xì)胞特性：不能合成分泌Ig、缺乏HGPRT，穩(wěn)定易培養(yǎng)，能在人工合成培養(yǎng)液中無(wú)限傳代，易于和脾細(xì)胞融合。B雜交瘤細(xì)胞同時(shí)具有合成分泌特異性抗體以及在體外無(wú)限傳代的能力，而由一株B雜交瘤細(xì)胞合成分泌的均一同源抗體即是單克隆抗體。典型試題1（A1型題）骨髓瘤細(xì)胞不具有的特性是（E）A穩(wěn)定 B自身不分泌Ig和細(xì)胞因子 C易與脾細(xì)胞融合D易培養(yǎng)，可在人工合成培養(yǎng)液中長(zhǎng)期

51、生長(zhǎng)和傳代E具有次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶高頻考點(diǎn)3 B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)1選擇培養(yǎng)基HAT培養(yǎng)液 HAT培養(yǎng)液中含有三種關(guān)鍵的有機(jī)物質(zhì)：次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T）。哺乳類細(xì)胞的DNA從頭合成途徑利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶合成DNA，但可被葉酸拮抗劑氨基喋呤阻斷；補(bǔ)救合成途徑可在HGPRT催化下利用次黃嘌呤和胸腺嘧啶合成DNA。在HAT選擇培養(yǎng)基中，骨髓瘤細(xì)胞因其從頭合成途徑被氨基喋呤阻斷而又缺乏HGPRT，不能利用補(bǔ)救途徑合成 DNA，因而死亡；而脾細(xì)胞雖有HGPRT仍能合成DNA，但因不能在體外傳代培養(yǎng)而死亡；B雜交瘤細(xì)胞可在HAT選擇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)、繁殖和傳代。2細(xì)

52、胞融合 在聚乙二醇（PEG）作用下，脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞可發(fā)生細(xì)胞膜融合形成多倍體細(xì)胞。3雜交瘤細(xì)胞的稀釋與選擇 細(xì)胞兩兩融合是隨機(jī)的，要獲得能合成分泌所需單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，必須在細(xì)胞培養(yǎng)板上將融合細(xì)胞充分稀釋，進(jìn)行克隆化處理，然后取每一雜交瘤細(xì)胞株的培養(yǎng)液與目標(biāo)抗原進(jìn)行體外抗原抗體反應(yīng)，篩選合成特異性抗體的陽(yáng)性細(xì)胞株。典型試題2（X型題）B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)有（ADE）A具有抗體分泌功能 B不具抗體分泌功能 C有免疫調(diào)節(jié)功能D能在HAT選擇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖 E能無(wú)限傳代，具有永生性典型試題3（A1型題）未融合的瘤細(xì)胞不能在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，原因是（B）A具有HGPRT B缺乏HGPR

53、T C缺乏HeLa細(xì)胞株D缺乏Vero細(xì)胞株 E缺乏K562細(xì)胞株高頻考點(diǎn)4 雜交瘤抗體的制備技術(shù)1單克隆抗體的產(chǎn)生 利用DNA補(bǔ)救合成途徑機(jī)制在HAT培養(yǎng)液中選擇出能合成所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，然后利用小鼠體內(nèi)誘生法或體外細(xì)胞培養(yǎng)法大量培養(yǎng)增殖，制備所需的單克隆抗體。2單克隆抗體的純化 常用的單克隆抗體純化方法除鹽析法、凝膠過(guò)濾法外，還有離子交換層析法和辛酸提取法等。3單克隆抗體的性質(zhì)鑒定 單克隆抗體性質(zhì)鑒定一般采用免疫標(biāo)記技術(shù)，最常用的為ELISA方法，一般先作定性試驗(yàn)，如陽(yáng)性結(jié)果則進(jìn)一步作定量檢測(cè)。高頻考點(diǎn)5 基因工程抗體基因工程抗體是用基因工程技術(shù)改造鼠源性單克隆抗體的基因，保留其V區(qū)的

54、抗原結(jié)合部位，盡量減少C區(qū)的鼠源成分，降低其異源性，從而創(chuàng)造出的新型抗體。1人源化抗體 是用基因工程技術(shù)盡量減少鼠源單克隆抗體中非V區(qū)的鼠源成分而創(chuàng)造出的一種新型抗體。如人-鼠嵌合抗體，是通過(guò)基因拼接技術(shù)將人IgG-C區(qū)的DNA片段與鼠IgG-V區(qū)的DNA拼接后，導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)表達(dá)制備而成的抗體。2小分子抗體 是具有抗原結(jié)合功能的Ig分子片段，包括Fab和Fv，單鏈抗體，單區(qū)抗體等。3抗體融合蛋白 將抗體分子片段與其他蛋白融合，如將Fv與某些毒素、酶、細(xì)胞因子拼連，抗體作為定位導(dǎo)向物，可攜帶融合蛋白結(jié)合在靶細(xì)胞特定部位，發(fā)揮融合蛋白的生物學(xué)效應(yīng)，即所謂“生物導(dǎo)彈”。4雙特異性抗體 雙特異性抗體是由

55、識(shí)別不同抗原表位的兩個(gè)小分子抗體連接構(gòu)成，能同時(shí)識(shí)別并結(jié)合兩種抗原。5抗體庫(kù)技術(shù)及應(yīng)用 抗體庫(kù)技術(shù)是指通過(guò)基因克隆技術(shù)將全套抗體重鏈及輕鏈可變區(qū)基因DNA序列克隆出來(lái)，與可表達(dá)質(zhì)粒載體重組，通過(guò)宿主細(xì)菌直接表達(dá)有功能的抗體分子片段，然后篩選出特異目標(biāo)的可變區(qū)基因?，F(xiàn)有組合抗體庫(kù)技術(shù)及菌體抗體庫(kù)技術(shù)。典型試題4（A1型題）人-鼠嵌合體DNA是由何DNA拼接的（E）A人Ig與鼠Ig重組 B人IgV區(qū)與鼠IgC區(qū)拼接C鼠IgV區(qū)與人IgV區(qū)重組 D人IgC區(qū)與鼠IgC區(qū)拼接E人IgC區(qū)與鼠IgV區(qū)拼接（劉琥琥）第5單元 凝集反應(yīng)高頻考點(diǎn)1 凝集反應(yīng)的概念與特點(diǎn)在適當(dāng)電解質(zhì)溶液中，當(dāng)抗原或抗體其中一方是顆粒狀時(shí)，它們特異性結(jié)合后可形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)屬于體外抗原抗體反應(yīng)，其特點(diǎn)參見第二單元。高頻考點(diǎn)2 直接凝集反應(yīng)在適當(dāng)電解質(zhì)溶液中，顆粒性抗原與其相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，抗體可將顆粒性抗原交叉聯(lián)接，形成肉眼可見的凝集塊，稱為直接凝集反應(yīng)。1玻片凝集反應(yīng)及應(yīng)用 一般將已知抗體（診斷血清