實(shí)驗(yàn)《檢測生物組織中的糖類、蛋白質(zhì)、脂肪》職教中心王富生

1、學(xué)而時(shí)習(xí)之，不亦說乎學(xué)而時(shí)習(xí)之，不亦說乎？檢測生物組織中的檢測生物組織中的糖類糖類、脂肪脂肪和和蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理 可溶性還原糖可溶性還原糖 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 脂肪脂肪 斐林試劑斐林試劑雙縮脲試劑雙縮脲試劑磚紅色沉淀磚紅色沉淀蘇丹蘇丹染液染液蘇丹蘇丹染液染液橘黃色橘黃色紅色紅色紫色紫色顏色反應(yīng)顏色反應(yīng) 淀粉淀粉 碘液碘液藍(lán)色藍(lán)色二、幾種重要的試劑二、幾種重要的試劑 斐林斐林試劑試劑甲液（甲液（0.1g/mL0.1g/mL的的NaOHNaOH溶液）溶液）乙液（乙液（0.05g/mL0.05g/mL的的CuSOCuSO4 4溶液）溶液）現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用混合均勻混合均勻 雙縮脲雙縮脲

2、試劑試劑A A液（液（0.1g/mL0.1g/mL的的NaOHNaOH溶液）溶液）B B液（液（0.010.01g/mLg/mL的的CuSOCuSO4 4溶液）溶液）現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用先加先加A A液液再加再加B B液液v蘇丹蘇丹（ ）染液：用來鑒定脂肪的存在）染液：用來鑒定脂肪的存在碘液：碘液：用來鑒定淀粉的存在用來鑒定淀粉的存在三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟v1、可溶性還原糖的鑒定、可溶性還原糖的鑒定(1)(1)制備制備組織樣液組織樣液：蘋果洗凈、去皮、切：蘋果洗凈、去皮、切塊塊取取5g5g加少許石英砂研磨加少許石英砂研磨加加5mL5mL水再水再研磨研磨漏斗墊紗布后過濾，得到樣液漏斗墊

3、紗布后過濾，得到樣液( (2)2)鑒定鑒定樣液：取樣液：取2mL2mL樣液于試管中樣液于試管中注入注入 2mL2mL剛配制的剛配制的斐林試劑斐林試劑，振蕩混合振蕩混合（淡藍(lán)色）（淡藍(lán)色） 水浴加熱水浴加熱2min2min左右，觀察溶液顏色變化左右，觀察溶液顏色變化（先變?yōu)椋ㄏ茸優(yōu)樽厣厣?，再變?yōu)?，再變?yōu)榇u紅色磚紅色）制備生物制備生物組織樣液組織樣液取材、研磨、過濾取材、研磨、過濾取樣取樣取取2ml組織樣液注入試管注入試管中組織樣液注入試管注入試管中注入試劑注入試劑向試管中注入向試管中注入1 ml剛配制的斐林試劑剛配制的斐林試劑加熱和觀察加熱和觀察(甲乙液等量混合均勻后再注入甲乙液等量混合均勻后

4、再注入)還原糖的檢測和觀察：還原糖的檢測和觀察：藍(lán)色藍(lán)色棕色棕色磚紅色磚紅色還原性糖鑒定的簡易實(shí)驗(yàn)： 取一小塊梨，用鑷子夾住，滴加幾滴新配置好的斐林試劑，然后放在酒精燈火焰上方，很快就會(huì)看到有有磚紅色的顏色生成。2.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 取材：花生種子（浸泡取材：花生種子（浸泡h），去皮，將子葉削成薄片），去皮，將子葉削成薄片 制片：制片：選取最薄的薄片移至載玻片中央選取最薄的薄片移至載玻片中央在薄片上滴加在薄片上滴加蘇丹蘇丹(或蘇丹或蘇丹) 染液染液2 3滴，滴，染色染色min滴加體積分?jǐn)?shù)為滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精的酒精溶液溶液12滴，洗滴，洗去浮色去浮色(多余的蘇丹多余的蘇丹 )吸去余液

5、，滴吸去余液，滴1-2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片，制成滴蒸餾水，蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片臨時(shí)裝片顯微觀察：顯微觀察： 先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察現(xiàn)象：現(xiàn)象：有被染成有被染成橘黃色橘黃色(或紅色或紅色)的脂肪微粒的脂肪微粒脂肪微粒脂肪微粒 3、蛋白質(zhì)的鑒定、蛋白質(zhì)的鑒定(1)(1)制備制備組織樣液組織樣液：浸泡黃豆：浸泡黃豆1 12d2d去皮、切去皮、切成薄片，加少許石英砂及成薄片，加少許石英砂及5mL5mL水研磨水研磨漏斗墊漏斗墊紗布后過濾，得到樣液（用蛋清要紗布后過濾，得到樣液（用蛋清要稀釋稀釋1010倍倍以以上，否則實(shí)驗(yàn)后黏住試管壁不

6、易洗凈）上，否則實(shí)驗(yàn)后黏住試管壁不易洗凈）(2)(2)鑒定鑒定樣液：取樣液：取2mL2mL樣液于試管樣液于試管中中加入加入 1mL1mL雙縮脲試劑雙縮脲試劑A A液液搖勻搖勻（造成一個(gè)（造成一個(gè)堿性環(huán)境堿性環(huán)境） 加入加入雙縮脲試劑雙縮脲試劑B B液液4滴滴，搖勻，注意顏色，搖勻，注意顏色變化（溶液變?yōu)樽兓ㄈ芤鹤優(yōu)樽仙仙Ａ砣。?。另?清水清水于試管于試管中中加入加入 搖勻搖勻 顏色變化，作為顏色變化，作為 。2mL2mL（A液、液、B液）液）無無對照對照制備生物制備生物組織樣液組織樣液取材研磨過濾或制備蛋清液取材研磨過濾或制備蛋清液注入組織注入組織樣液樣液取一支試管注入黃豆組織液（或蛋

7、清液）取一支試管注入黃豆組織液（或蛋清液）2ml注入試劑注入試劑A加入加入2ml雙縮脲試劑雙縮脲試劑A加入雙加入雙縮脲試縮脲試劑劑B液液4滴滴觀察顏觀察顏色變化色變化在蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)中，必須先加在蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)中，必須先加A液再液再加加B液的原因是液的原因是: 為什么加入為什么加入4滴滴B液而不能過量？液而不能過量？在堿性溶液中，蛋白質(zhì)容易與在堿性溶液中，蛋白質(zhì)容易與Cu2+ 發(fā)生紫發(fā)生紫色反應(yīng)，否則就容易生成藍(lán)色色反應(yīng)，否則就容易生成藍(lán)色Cu (OH) 2沉沉淀對實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象有遮蔽作用淀對實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象有遮蔽作用加入過量的雙縮尿試劑加入過量的雙縮尿試劑 B液，液，CuSO4在在堿性溶液中生成大量的藍(lán)色

8、堿性溶液中生成大量的藍(lán)色Cu (OH) 2沉淀會(huì)遮蔽所產(chǎn)生的紫色。沉淀會(huì)遮蔽所產(chǎn)生的紫色。蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果4.淀粉的鑒定淀粉的鑒定取材：馬鈴薯勻漿取材：馬鈴薯勻漿檢測：檢測：碘液碘液2滴滴現(xiàn)象：現(xiàn)象： 搖勻后變成藍(lán)色搖勻后變成藍(lán)色四、注意事項(xiàng)四、注意事項(xiàng)1斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑甲液（甲液（0.1g/ml的的NaOH溶液）和乙液（溶液）和乙液（0.05 g/ml 的硫酸銅溶液的硫酸銅溶液 ）分別配制、儲(chǔ)存，使用）分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)再臨時(shí)配制，甲乙液滴等量混合均勻后立即時(shí)再臨時(shí)配制，甲乙液滴等量混合均勻后立即使用。使用。2 雙縮

9、脲試劑的使用，應(yīng)先加雙縮脲試劑的使用，應(yīng)先加A（0.1g/ml的的NaOH溶液）溶液）1ml，造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，再，造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，再加加B液（液（ 0.01g/ml 的硫酸銅溶液的硫酸銅溶液 ）4滴。滴。 5在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生作實(shí)驗(yàn)在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生作實(shí)驗(yàn)材料，必須提前浸泡材料，必須提前浸泡34個(gè)小時(shí)，浸泡時(shí)間短，個(gè)小時(shí)，浸泡時(shí)間短，不易切片，浸泡時(shí)間過長，則組織太軟，切下的不易切片，浸泡時(shí)間過長，則組織太軟，切下的薄片不易成型，染色時(shí)間不易過長。薄片不易成型，染色時(shí)間不易過長。 4在蛋白質(zhì)的鑒定試驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)在蛋白質(zhì)的鑒定試驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)材料，必須

10、稀釋，以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管，不易驗(yàn)材料，必須稀釋，以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管，不易洗刷。洗刷。 3在鑒定可溶性還原糖的實(shí)驗(yàn)中，對試管中在鑒定可溶性還原糖的實(shí)驗(yàn)中，對試管中的溶液進(jìn)行加熱時(shí)，試管底部不要觸及燒杯底部，的溶液進(jìn)行加熱時(shí)，試管底部不要觸及燒杯底部，另外，試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免沸騰的熔液另外，試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免沸騰的熔液沖出試管，造成燙傷。沖出試管，造成燙傷。問題探討問題探討:1、在做還原糖、蛋白質(zhì)鑒定的實(shí)驗(yàn)時(shí)，為什么要留出、在做還原糖、蛋白質(zhì)鑒定的實(shí)驗(yàn)時(shí)，為什么要留出一部分樣液？一部分樣液？作對照作對照2、使用雙縮脲試劑時(shí)為什么、使用雙縮脲試劑時(shí)為什么B液只能加液只能加34滴而不能

11、滴而不能過量？過量？ 過量的雙縮脲試劑過量的雙縮脲試劑B B會(huì)與試劑會(huì)與試劑A A反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，而掩蓋生成的紫色。而掩蓋生成的紫色。3、為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能放置太久？為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能放置太久？ 時(shí)間太長，時(shí)間太長，Cu(OH)Cu(OH)2 2懸濁液就沉淀在試管底部而懸濁液就沉淀在試管底部而無法參與反應(yīng)。無法參與反應(yīng)。l深化深化比較項(xiàng)比較項(xiàng)目目試劑及成試劑及成分分原理原理溶液濃度溶液濃度方法方法加熱加熱與否與否結(jié)結(jié)果果可溶還可溶還原糖的原糖的鑒定鑒定斐林試劑斐林試劑NaOHNaOH和和CuSOCuSO4 4磚磚紅紅色色沉沉淀淀蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的鑒定

12、的鑒定雙縮脲試雙縮脲試劑劑NaOHNaOH和和CuSOCuSO4 4溶溶液液呈呈紫紫色色斐林試劑與雙縮脲試劑兩者有何不同？斐林試劑與雙縮脲試劑兩者有何不同？新配制新配制的的Cu(OH)2溶液溶液在堿性在堿性環(huán)境下環(huán)境下的的Cu2+NaOH濃度為濃度為0.1g/mLCuS04濃度為濃度為0.05g/mLNaOH濃度為濃度為0.1g/mLCuS04濃度為濃度為0.01g/mL先把先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液溶液混合混合，而后而后立即使用立即使用。先先加入加入Na0H1mL，然，然后后再加再加CuS044滴，搖勻。滴，搖勻。(不能過量不能過量)水水浴浴加加熱熱不不需需要要實(shí)驗(yàn)的材料的選擇和

13、處理有什么要求？實(shí)驗(yàn)的材料的選擇和處理有什么要求？材料的選擇材料的選擇材料的處理材料的處理還原性糖的鑒定還原性糖的鑒定脂肪的鑒定脂肪的鑒定含糖高，顏色為含糖高，顏色為白色的植物組織，白色的植物組織，如蘋果和梨如蘋果和梨富含脂肪的種子富含脂肪的種子，如花生，如花生浸泡浸泡34小時(shí)小時(shí)/蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定富含蛋白質(zhì)的富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清黃豆或雞蛋清黃豆需浸泡黃豆需浸泡1-2天，天，雞蛋清要先稀釋雞蛋清要先稀釋淀粉的鑒定淀粉的鑒定馬鈴薯馬鈴薯/ 各種可供實(shí)驗(yàn)的材料各種可供實(shí)驗(yàn)的材料梨梨 黃桃黃桃 胡蘿卜胡蘿卜 黃豆黃豆 花生種子花生種子 小麥種子小麥種子 其中適合于鑒定其中適合于鑒定可溶性

14、還原糖可溶性還原糖的是的是 ，理由是，理由是梨的組織細(xì)胞梨的組織細(xì)胞 ，你打算用什么試劑鑒定你打算用什么試劑鑒定? 。 小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪，這是小麥種子不如花生種子更適合用來鑒定脂肪，這是因?yàn)橐驗(yàn)?，你打，你打算用什么試劑鑒定算用什么試劑鑒定? . 例例 做生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋做生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的實(shí)驗(yàn)材料。請根據(jù)下表所列各種材料回答問題：實(shí)驗(yàn)材料。請根據(jù)下表所列各種材料回答問題：梨梨 顏色為白色，并且糖含量較高顏色為白色，并且糖含量較高 斐林試劑斐林試劑脂肪含量

15、不如花生高，也不容易做切片脂肪含量不如花生高，也不容易做切片 用蘇丹用蘇丹或蘇丹或蘇丹試劑試劑小麥種子中糖類化合物小麥種子中糖類化合物 含量很高，卻不適合用含量很高，卻不適合用來鑒定來鑒定 _，這是因?yàn)?，這是因?yàn)?_。 適合于鑒定蛋白質(zhì)的是適合于鑒定蛋白質(zhì)的是 ，理由是，理由是 ，鑒定所用的試劑是，鑒定所用的試劑是 。 蛋白質(zhì)含量高蛋白質(zhì)含量高 黃豆和花生黃豆和花生 雙縮脲試劑雙縮脲試劑淀粉淀粉 可溶性還原糖可溶性還原糖 淀粉是非還原糖且不溶于水淀粉是非還原糖且不溶于水 1、青蘋果汁遇碘液顯藍(lán)色，熟蘋果汁能與斐林試劑青蘋果汁遇碘液顯藍(lán)色，熟蘋果汁能與斐林試劑作用產(chǎn)生磚紅色沉淀，下列結(jié)論中最合理

16、的是作用產(chǎn)生磚紅色沉淀，下列結(jié)論中最合理的是 ( ) A青蘋果汁中有淀粉，不含還原糖青蘋果汁中有淀粉，不含還原糖 B熟蘋果汁中含還原糖，沒有淀粉熟蘋果汁中含還原糖，沒有淀粉 C蘋果轉(zhuǎn)熟時(shí)，大量淀粉水解成還原糖蘋果轉(zhuǎn)熟時(shí)，大量淀粉水解成還原糖 D蘋果轉(zhuǎn)熟時(shí)單糖聚合成淀粉蘋果轉(zhuǎn)熟時(shí)單糖聚合成淀粉 Cl例題例題、安徽阜陽劣質(zhì)奶粉事件震驚全國，引起、安徽阜陽劣質(zhì)奶粉事件震驚全國，引起世人注目。鑒定脫脂淡奶粉是否為偽劣產(chǎn)品，世人注目。鑒定脫脂淡奶粉是否為偽劣產(chǎn)品，肯定不需要用到的化學(xué)試劑是肯定不需要用到的化學(xué)試劑是( ) A.斐林試劑斐林試劑 B. 紅墨水紅墨水C.雙縮脲試劑雙縮脲試劑 D.蘇丹蘇丹染液染液 Bl例題例題