實驗7基因組DNA的提取(綜合性設(shè)計實驗)

1、基因組基因組DNA的提取的提取實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?. 學(xué)習(xí)從生物體中分離核酸的原理和方法2. 掌握測定核酸的原理和方法3. 掌握核酸的瓊脂糖凝膠電泳的原理和方法4. 培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新實踐能力和團(tuán)隊合作精神，并強(qiáng)化科研反哺教學(xué)效果。選用材料選用材料1. 植物：自己準(zhǔn)備植物：自己準(zhǔn)備注意：實驗體系要盡量小！注意：實驗體系要盡量?。?. 理論準(zhǔn)備理論準(zhǔn)備 不同生物（植物、動物、微生物）的基因組DNA的提取方法有所不同; 不同種類或同一種類的不同組織因其細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含的成分不同，分離方法也有差異。在提取某種特殊組織的DNA時必須參照文獻(xiàn)和經(jīng)驗建立相應(yīng)的提取方法, 以獲得可用的DNA大分子。尤其是組織中的多糖

2、和酶類物質(zhì)對隨后的酶切、PCR反應(yīng)等有較強(qiáng)的抑制作用，因此用富含這類物質(zhì)的材料提取基因組DNA時, 應(yīng)考慮除去多糖和酚類物質(zhì)。實驗方案實驗方案1. 選擇一種材料，查閱文獻(xiàn)，并設(shè)計好提取基因組選擇一種材料，查閱文獻(xiàn)，并設(shè)計好提取基因組DNA的路的路線，及線，及DNA純度的檢測，含量的檢測。純度的檢測，含量的檢測。2. 請詳細(xì)列出所需試劑的清單，以備訂購請詳細(xì)列出所需試劑的清單，以備訂購以及詳細(xì)的實驗儀器列表，包括玻璃儀器和大型實驗儀器以及詳細(xì)的實驗儀器列表，包括玻璃儀器和大型實驗儀器名稱（包括名稱（包括濃度、體積）濃度、體積）成分成分質(zhì)量或質(zhì)量或體積體積配制方法配制方法備注備注20TAE緩沖液

3、pH8.5( ?mL )Tris堿？g冰醋酸？MLNa2EDTA.2H2O？g名稱名稱規(guī)格規(guī)格數(shù)量數(shù)量備注備注容量瓶10mL2實驗要求和注意事項實驗要求和注意事項 1、四人一組、四人一組 。 2、嚴(yán)格控制實驗時間，在規(guī)定的時間內(nèi)完成實驗的、嚴(yán)格控制實驗時間，在規(guī)定的時間內(nèi)完成實驗的設(shè)計、操作、結(jié)果分析和報告。設(shè)計、操作、結(jié)果分析和報告。 3、嚴(yán)格按照科研論文的格式寫出實驗報告。、嚴(yán)格按照科研論文的格式寫出實驗報告。 4、每個小組在全班同學(xué)前匯報實驗結(jié)果。、每個小組在全班同學(xué)前匯報實驗結(jié)果。 5、注意協(xié)調(diào)安排時間，保證休息。、注意協(xié)調(diào)安排時間，保證休息。 6、注意安全。、注意安全。時間安排時間安

4、排1. 提交初步方案、特別是所需試劑清單提交初步方案、特別是所需試劑清單2. 上午：實驗準(zhǔn)備；下午：實驗上午：實驗準(zhǔn)備；下午：實驗3. 進(jìn)行報告進(jìn)行報告實驗條件實驗條件 離心機(jī)：離心機(jī)： 1.5 ml 冷凍高速離心機(jī)冷凍高速離心機(jī)/高速離心機(jī)高速離心機(jī) 5 ml 冷凍高速離心機(jī)冷凍高速離心機(jī) 50 ml冷凍高速離心機(jī)冷凍高速離心機(jī)/低速離心機(jī)低速離心機(jī) 離心管：注明型號離心管：注明型號 DNA純度的檢測純度的檢測 分光光度計分光光度計260nm、280nm的吸光值，并的吸光值，并計算比值。計算比值。 核酸在核酸在260nm附近有強(qiáng)吸收，而蛋白質(zhì)在附近有強(qiáng)吸收，而蛋白質(zhì)在280nm附近有強(qiáng)吸收附近有強(qiáng)吸收 A260/A280 1.8-2.0之間純度較高之間純度較高 若小于若小于1.8，則有蛋白質(zhì)污染，則有蛋白質(zhì)污染 若大于若大于2.0，則有酚類物質(zhì)污染，則有酚類物質(zhì)污染圖圖1 玉米幼葉基因組DNA瓊脂糖電泳圖（17ul）第一次實驗結(jié)果第二次實驗結(jié)果CxMCBxBAM CxCBx BA實驗結(jié)果實驗結(jié)果第一次電泳第一次電泳A A：酚：酚/ /氯仿法氯仿法 B B：堿裂解法：堿裂解法 Bx Bx：堿裂解法原液稀釋一倍后的稀釋液：堿裂解法原液稀釋一倍后的稀釋液C C：碘化鉀法：碘化鉀法 Cx Cx：碘化鉀法原液稀釋一倍后的