第29章生殖免疫及其免疫檢測(cè)

1、第一章第一章 血液標(biāo)本采集與處理血液標(biāo)本采集與處理臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)第二十九章第二十九章 生殖免疫及其免疫檢測(cè)生殖免疫及其免疫檢測(cè) 王 芳目 錄第一節(jié) 概述第二節(jié) 常用的生殖相關(guān)免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法和臨床意義人類生殖過程圖示生殖免疫學(xué)是近年來發(fā)展起來的生殖生物學(xué)與免疫生物學(xué)交叉的邊緣學(xué)科，著眼于研究生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域免疫學(xué)問題。主要包括神經(jīng)-生殖內(nèi)分泌-免疫調(diào)節(jié)、母-胎免疫調(diào)節(jié)及生殖免疫調(diào)節(jié)等方面。第一節(jié)第一節(jié) 概述概述重點(diǎn)提示生殖道組織的局部免疫妊娠與免疫自然流產(chǎn)與免疫性激素與免疫一、生殖道組織的局部免疫（一）宮頸與陰道免疫1. 抗原提呈細(xì)胞（1）性質(zhì)：樹突狀巨噬細(xì)胞（2）分布：宮頸和陰道上皮

2、層2. T 細(xì)胞（1）成分：主要為CD8+ T細(xì)胞（2）分布：宮頸天然上皮、轉(zhuǎn)化區(qū)上皮細(xì)胞3. B細(xì)胞（1）分布：陰道、宮頸陰道部、宮頸管組織（2）分泌抗體：分泌型IgA一、生殖道組織的局部免疫（二）子宮局部免疫1. T細(xì)胞 （1）免疫營(yíng)養(yǎng)作用 （2）免疫殺傷作用2. 巨噬細(xì)胞 主要的抗原提呈細(xì)胞3. 大顆粒淋巴細(xì)胞（LGL） 一、生殖道組織的局部免疫（三）卵巢免疫1.免疫細(xì)胞（1）巨噬細(xì)胞（2）淋巴細(xì)胞（3）肥大細(xì)胞（4）多形核細(xì)胞2.細(xì)胞因子（1）胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）（2）轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-）（3）表皮生長(zhǎng)因子（EGF）二、妊娠與免疫（一）配子免疫1. 精子抗原（1）膜抗原（2）

3、結(jié)構(gòu)抗原（3）血型抗原（4）組織相容性抗原（5）精子內(nèi)部各種酶系抗原二、妊娠與免疫2. 卵細(xì)胞-透明帶抗原由顆粒細(xì)胞分泌并包裹于卵細(xì)胞膜表面的一層基質(zhì)，為糖蛋白，在受精過程中起重要作用。透明帶抗原可誘發(fā)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗透明帶抗體，當(dāng)抗體與透明帶結(jié)合可影響卵細(xì)胞的受精及著床。二、妊娠與免疫（二）胚胎免疫 胚胎同種抗原（1）定義：來源于胚胎期和胚胎組織的一類抗原。（2）分類： 胚胎同種抗原； HLA； AFP 二、妊娠與免疫（三）母體-胎兒免疫 胎兒不被母體所排斥的因素：（1）妊娠期母體的免疫防御反應(yīng)受到嚴(yán)重抑制；（2）胎盤的免疫屏障作用將胎兒抗原封閉起來；（3）母體的抗體及其他免疫因子受到胎盤屏障

4、的阻礙。妊娠與免疫（四）胎盤免疫 1.胎盤機(jī)械屏障作用； 2.胎盤限制大分子抗原物質(zhì)進(jìn)入胎兒血液循環(huán)； 3.滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)的HLA-G抗原發(fā)揮免疫抑制作用； 4.胎盤分泌多種具有免疫抑制作用的蛋白質(zhì)及激素。三、自然流產(chǎn)與免疫免疫機(jī)制非免疫相關(guān)免疫相關(guān)40%-50%50%-60%染色體異常生殖道解剖異常內(nèi)分泌異常生殖道感染自身免疫型同種免疫型三、自然流產(chǎn)與免疫1.自身免疫型（1）抗磷脂抗體 定義：是一組自身免疫性抗體，包括狼瘡抗凝因子、 抗心磷脂抗體、抗磷脂酸絲氨酸抗體、抗磷脂酸抗體等。意義：若陽性，則流產(chǎn)的發(fā)生率高達(dá)66%89%。（2） 抗精子抗體 作用：阻礙精子獲能；干擾精子穿過卵子透明帶等

5、。三、自然流產(chǎn)與免疫2.同種免疫型（1）組織相容性抗原系統(tǒng)（HLA）與自然流產(chǎn) HLA-DR,HLA-DQ抗原 滋養(yǎng)層-淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)抗原（TLX）（2）封閉抗體（ blocking antibodies，BA ）與自然流產(chǎn)BA與母胎界面上來自父系的抗原相結(jié)合，阻止母體Th細(xì)胞識(shí)別胎兒抗原后引發(fā)的對(duì)胚胎的攻擊。（3）細(xì)胞免疫與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)Th1/ Th2平衡失調(diào) 四、性激素與免疫泌乳素孕激素雌激素四、性激素與免疫（一）泌乳素性質(zhì)：垂體激素；分布：以胸腺、卵巢、淋巴細(xì)胞為主；作用：促進(jìn)胸腺內(nèi)T細(xì)胞分化成促進(jìn)B細(xì)胞的分化和成熟，也是NK細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)因子。四、性激素與免疫（二）孕激素孕酮通過識(shí)別胎

6、兒來源的抗原，活化/TCR+形成孕酮受體對(duì)妊娠的免疫保護(hù)作用；孕酮通過 PIBF干擾花生四烯酸的代謝和誘導(dǎo)免疫反應(yīng)向TH2偏移，降低NK細(xì)胞活性，有助于妊娠維持。四、性激素與免疫（三）雌激素（三）雌激素1.雌激素對(duì)免疫系統(tǒng)的作用： 調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、增生； 影響細(xì)胞因子的產(chǎn)生； 刺激B細(xì)胞的活化和抗體的產(chǎn)生。2.雌激素受體（estrogen receptor , ER）第二節(jié)第二節(jié) 常用的生殖相關(guān)免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及其常用的生殖相關(guān)免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目及其檢測(cè)方法和臨床意義檢測(cè)方法和臨床意義重點(diǎn)提示不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)生殖系內(nèi)分

7、泌功能的免疫學(xué)檢測(cè)一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)不孕癥：指婚后未避孕，同居2年未曾受孕者?？咕涌贵w，抗透明帶抗體是其中重要的免疫性因素。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（一）抗精子抗體（AsAb）1.抗精子抗體產(chǎn)生機(jī)制： （1）男性抗精子抗體：自身抗體； （2）女性抗精子抗體：同種異體抗體；2.抗精子抗體類型： （1）生殖道分泌物中主要為分泌型IgA，血清中以IgG和IgM為主； （2）臨床上通常檢測(cè)的是血清中的IgG。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)3.抗精子抗體的檢測(cè)方法（1）精子凝集試驗(yàn)原理：精子表面結(jié)合了抗體后可相互凝集；

8、檢測(cè)方法：明膠凝集法、管板凝集法、圓盤凝集法、毛細(xì)管凝集法等；特點(diǎn)：本法特異性差，假陽性發(fā)生率高。精子凝集圖一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（2）補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)及精子制動(dòng)試驗(yàn)原理：在補(bǔ)體作用下，精子與抗體結(jié)合后不能向前移動(dòng)；特點(diǎn)：本法僅能檢測(cè)作用于精子尾干等的精子抗體，特異性強(qiáng)，敏感性差，假陰性發(fā)生率高。（3）免疫珠結(jié)合法原理：用抗人免疫球蛋白抗體包被的聚丙烯酰胺能結(jié)合于結(jié)合了精子抗體的精子表面，在相差顯微鏡可見此種免疫珠隨精子前進(jìn)而移動(dòng)。特點(diǎn)：此法可靠性好但敏感性難以肯定，不能進(jìn)行定量測(cè)定。一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（4）酶聯(lián)免疫吸附法（E

9、LISA）是不孕不育的一項(xiàng)初篩試驗(yàn)；敏感性高，重復(fù)性好。 人抗精子抗體人抗精子抗體ELISA試劑盒試劑盒一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)一、不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)（二）抗透明帶抗體（AzpAb）1. AzpAb產(chǎn)生機(jī)制透明帶具有抗原性，感染或育齡婦女排卵過程中透明帶反復(fù)破裂和吸收，機(jī)體處于抗原刺激的敏感狀態(tài)，產(chǎn)生AzpAb；2. AzpAb對(duì)生殖的影響阻遏精子吸附和穿過透明帶；干擾著床；影響卵細(xì)胞發(fā)育和生長(zhǎng)。不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)不孕癥的生殖免疫學(xué)檢測(cè)3. AzpAb的檢測(cè)方法（1）ELLSA及BA-ELLSA法： （2）透明帶沉淀反應(yīng) （3）放射免疫法（4）間接免疫熒光試驗(yàn) （5）被動(dòng)血凝法（6）

10、精子-透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn) 二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（一）封閉抗體（blocking antibodies）1. 定義：是人類白細(xì)胞抗（HLA）、滋養(yǎng)層及淋巴細(xì)胞交叉反應(yīng)抗原（TLX）等刺激母體免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的一類IgG型抗體。2. 分類：抗HLA-DR抗 體抗TLX抗體； 抗Fc受體抗體； 抗基因抗體； 抗冷B細(xì)胞抗體。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)3.檢測(cè)方法（1）補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)女方血清內(nèi)的封閉抗體與男方外周血淋巴細(xì)胞結(jié)合，在補(bǔ)體作用下致細(xì)胞死亡，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色（使死亡細(xì)胞著色），顯微鏡下評(píng)判結(jié)果。（2）單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)封閉試驗(yàn)絲裂霉素處理男方淋巴細(xì)胞后，分別在含有AB型血清及女

11、方血清的培養(yǎng)條件下與女方淋巴細(xì)胞混合培育，3H-胸腺嘧啶核苷摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖水平，結(jié)果以封閉效率表示。二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（3）流式細(xì)胞術(shù)分析封閉抗體原理:采用競(jìng)爭(zhēng)法原理，以AB型或小牛血清中抗CD3、CD4、CD25的抗體與測(cè)定管中的抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合男方細(xì)胞；測(cè)定抗CD3、CD4、CD25封閉效率大于1%為陽性。流式細(xì)胞儀二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（二）抗磷脂抗體（APLA）1. 定義：是一種廣泛的、異種基因的自身抗體家族，分為狼瘡抗凝物（LAC）和抗心磷脂抗體（ACA）兩大類。2.抗心磷脂抗體（ACLA）的檢測(cè)方法 ELISA法最常用二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（三）夫婦雙方HLA

12、抗原檢測(cè)HLA-I類抗原多用血清學(xué)方法檢測(cè)； HLA-DR抗原檢測(cè)常用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)來鑒定；（四）透明帶抗體及抗精子抗體檢測(cè)見第二十九章第二節(jié)二、反復(fù)自然流產(chǎn)的免疫學(xué)檢測(cè)（五）血型及抗血型抗體測(cè)定1.常見的血型不合引起的同種免疫?。?）ABO血型不合的同種免疫病；（2）Rh血型不合的同種免疫??；2.診斷主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)室特異性抗體檢查三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)（一）支原體檢測(cè)1.定義：是一類缺乏細(xì)胞壁，能在無生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小原核生物；2.分類：16種， 5種對(duì)人有致病性(1) 肺炎支原體(2) 解脲支原體(3) 人型支原體(4) 生殖支原體(5) 發(fā)酵支原體支原體示意圖三、生殖系感染的

13、免疫學(xué)檢測(cè)3.檢測(cè)方法(1) 病原培養(yǎng) 采用間接培養(yǎng)法(2) 血清學(xué)試驗(yàn) 1) 特異性血清學(xué)檢測(cè)方法：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 2) 非特異性血清學(xué)檢測(cè)方法：肺炎支原體冷凝集試驗(yàn)等支原體培養(yǎng)基三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)(3) 抗原檢測(cè)ELISA、間接免疫熒光法、反向間接血凝法等直接檢測(cè)分泌物和體液中支原體抗原，具有較高的特異性和靈敏度。（4）核酸檢測(cè)基因探針、PCR等方法三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)（二）衣原體檢測(cè)定義：是一類能通過細(xì)菌濾器，有獨(dú)特發(fā)育周期，專性細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞類微生物。分類：沙眼衣原體，鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體。衣原體三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)3. 檢測(cè)方法（1）尋找抗原 1）雞胚分離

14、培養(yǎng)； 2）細(xì)胞分離培養(yǎng)； 3）涂片檢查包涵體； 4）ELISA或熒光法檢查衣原體抗原； 5）金標(biāo)法衣原體快速檢測(cè)。衣原體包涵體三、生殖系感染的免疫學(xué)檢測(cè)（2）尋找抗體 微量免疫熒光法（3）尋找特異性核酸 1）連接酶鏈反應(yīng) 2）轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增試驗(yàn) 3）聚合酶鏈反應(yīng) 4）實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng) 四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)（一）生殖系腫瘤常用的免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)1. 血清糖蛋白腫瘤標(biāo)志物（1）鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCCA）：可作為宮頸癌的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因子和預(yù)后指標(biāo)。（2）CA-125（3）CA15-3（4）CA19-9（5）癌胚抗原（CEA）（6）前列腺特異性抗原（PSA）四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)2. 胎兒-

15、胎盤蛋白腫瘤標(biāo)記物（1）甲胎蛋白（AFP）（2）人絨毛膜促性腺激素（HCG）-HCG用于早孕的診斷，對(duì)葡萄胎、絨毛膜癌等有重要的診斷和療效監(jiān)測(cè)價(jià)值。四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)3. 酶類腫瘤標(biāo)記物（1）堿性磷酸酶（ALP）胎盤型ALP常作為宮頸癌和卵巢上皮性癌的腫瘤標(biāo)記物。（2）乳酸脫氫酶（LDH）用于卵巢上皮性和生殖細(xì)胞腫瘤的檢測(cè)。（3）端粒酶與細(xì)胞衰老，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及分化程度具有相關(guān)性。四、生殖系腫瘤的免疫學(xué)檢測(cè)（二）生殖系腫瘤免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè) 1. 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 2. 化學(xué)發(fā)光酶免疫試驗(yàn)（CLEIA） 3. 電化學(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)（ECLIA） 4. 時(shí)間分辨熒光免疫試驗(yàn)（TRFIA） 5. 液相芯片技術(shù)五、生殖系內(nèi)分泌功能的免疫學(xué)檢測(cè)（一）激素1.絨毛膜促性腺激素（HCG）2. 雌三醇3. 胎盤泌乳素（hPL）4. 垂體催乳素（PRL）5. 孕酮6. 胎兒纖連蛋白（fFN）7. 促卵泡激素（FSH）和黃體生成素（LH）五、生殖系內(nèi)分泌功能的免疫學(xué)檢測(cè)（二）激素受體1.雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）2. LH-CG受體和FSH受體本章小結(jié)抗精子抗體