儀器分析講稿(液相)-

1、第三章第三章 高效液相色譜分析（高效液相色譜分析（HPLC）3.13.1高效液相色譜的特點(diǎn)高效液相色譜的特點(diǎn)一、定義：液相色譜法是指一、定義：液相色譜法是指流動(dòng)相為液體流動(dòng)相為液體的色譜技術(shù)。的色譜技術(shù)。二、特點(diǎn)二、特點(diǎn)1.1.高壓高壓: : 可達(dá)可達(dá)15015035035010105 5 Pa Pa2.2.高速高速: : 例，分離例，分離2020種氨基酸，經(jīng)典色譜法要種氨基酸，經(jīng)典色譜法要2020多小時(shí)，多小時(shí)， 用用HPLCHPLC只需只需1 1小時(shí)小時(shí). .3.3.高效高效：3 3萬(wàn)塔板萬(wàn)塔板/ /米（米（GC2000GC2000塔板塔板/ /米）米）4.4.高靈敏度高靈敏度： 紫外檢測(cè)

2、器紫外檢測(cè)器1010-9-9 g g 熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器1010-11-11g g3.23.2影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素 一、與與GC GC 比較比較65/165/1；基本概念及理論基礎(chǔ)與；基本概念及理論基礎(chǔ)與GCGC一致；一致； 主要區(qū)別：流動(dòng)相為液體主要區(qū)別：流動(dòng)相為液體. .二、對(duì)色譜峰擴(kuò)展及色譜分離影響的因素：二、對(duì)色譜峰擴(kuò)展及色譜分離影響的因素：1.1.渦流擴(kuò)散項(xiàng)渦流擴(kuò)散項(xiàng) ： H He e = 2d = 2dp p 含義含義同同GCGC法法2.2.縱向擴(kuò)散項(xiàng)縱向擴(kuò)散項(xiàng)65/-165/-1： H Hd d = C = Cd dD Dm m/u/u；

3、 在在LCLC中可略中可略,GC,GC中重要中重要；3.3.傳質(zhì)阻力項(xiàng)：傳質(zhì)阻力項(xiàng)：a.a.固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)；固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)； b.b.流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng). . 結(jié)論結(jié)論66/-166/-1；改進(jìn)固定相就成為提高液相色譜柱效一改進(jìn)固定相就成為提高液相色譜柱效一 個(gè)重要問(wèn)題個(gè)重要問(wèn)題. . 綜合分析，由于柱內(nèi)色譜峰擴(kuò)展所引起的塔板高綜合分析，由于柱內(nèi)色譜峰擴(kuò)展所引起的塔板高度的變化可歸納為：度的變化可歸納為： H=A+B/u+Cu 3-6H=A+B/u+Cu 3-6 形式與形式與GCGC一致，其一致，其主要區(qū)別在于擴(kuò)展項(xiàng)可以忽主要區(qū)別在于擴(kuò)展項(xiàng)可以忽略，影響柱效的主要因素是傳質(zhì)項(xiàng)

4、略，影響柱效的主要因素是傳質(zhì)項(xiàng)。67/167/1；-2.-2. 從從3-63-6式看出，式看出，H H近似正比于近似正比于d d2 2p p ， 所以所以67/2;9:67/2;9:減小粒度是提高柱效的最有效途徑減小粒度是提高柱效的最有效途徑。4.4.其它影響因素其它影響因素68/268/2； 柱外展寬：指色譜柱外各種因素引起的峰擴(kuò)展柱外展寬：指色譜柱外各種因素引起的峰擴(kuò)展. . a.a.柱前展寬：主要由進(jìn)樣所引起；柱前展寬：主要由進(jìn)樣所引起； b.b.柱后展寬：主要由接管、檢測(cè)器流通池體積柱后展寬：主要由接管、檢測(cè)器流通池體積所引起所引起. .為此，連接管的體積、檢測(cè)器的死體積為此，連接管的

5、體積、檢測(cè)器的死體積應(yīng)盡可能小應(yīng)盡可能小. . 3.33.3高效液相色譜的主要類(lèi)型及其分離原高效液相色譜的主要類(lèi)型及其分離原理理類(lèi)型類(lèi)型：液：液- -液色譜；液液色譜；液- -固色譜；離子交換色譜；固色譜；離子交換色譜； 離子對(duì)色譜；離子色譜；空間排阻色譜離子對(duì)色譜；離子色譜；空間排阻色譜一一. .液液- -液分配色譜法及化合鍵合相色譜液分配色譜法及化合鍵合相色譜 1.1.特點(diǎn)特點(diǎn)：a.a.流動(dòng)相和固定相都是液體流動(dòng)相和固定相都是液體 b.b.兩相應(yīng)互不相溶，有明顯的分界面兩相應(yīng)互不相溶，有明顯的分界面 2.2.分離機(jī)制：溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配分離機(jī)制：溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配 K = cs/cm

6、= kVm/Vs 分離的順序分離的順序決定于分配系數(shù)的大小，分配系數(shù)大決定于分配系數(shù)的大小，分配系數(shù)大的組分保留值大的組分保留值大. .而且流動(dòng)相的種類(lèi)對(duì)分配系數(shù)而且流動(dòng)相的種類(lèi)對(duì)分配系數(shù)有較大的影響有較大的影響. . 3.3.分類(lèi)：分類(lèi)： a.a.正相液正相液- -液色譜法液色譜法：流動(dòng)相的極性：流動(dòng)相的極性小于小于固定液固定液的極性；的極性； b.b.反相液反相液- -液色譜法液色譜法：流動(dòng)相的極性：流動(dòng)相的極性大于大于固定液固定液的極性；的極性； c.c.化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相：將各種不同有機(jī)基團(tuán)通過(guò)：將各種不同有機(jī)基團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)共價(jià)鍵合到硅膠（擔(dān)體）表面的游離化學(xué)反應(yīng)共價(jià)鍵合到

7、硅膠（擔(dān)體）表面的游離羥基上，代替機(jī)械涂漬的液體固定相羥基上，代替機(jī)械涂漬的液體固定相. . 反相化學(xué)鍵合相色譜法已成為高效液相色譜法反相化學(xué)鍵合相色譜法已成為高效液相色譜法中應(yīng)用最廣泛的一個(gè)分支中應(yīng)用最廣泛的一個(gè)分支. . 二二. .液液- -固色譜法（或液固色譜法（或液- -固吸附色譜法）固吸附色譜法）1.1.特點(diǎn)特點(diǎn)：流動(dòng)相為液體，固定相為吸附相。：流動(dòng)相為液體，固定相為吸附相。2.2.分離機(jī)制分離機(jī)制 X Xm m + nS + nSa a = X= Xa a + + nSnSm m K = X K = Xa aSSm m n n / X / Xm mSSa a n n 3.3.結(jié)論結(jié)

8、論69/-569/-5： 顯然，分配系數(shù)大的組分，吸附劑對(duì)它顯然，分配系數(shù)大的組分，吸附劑對(duì)它的吸附力強(qiáng)，保留值就大的吸附力強(qiáng)，保留值就大. .4.4.作用作用：a.a.適用分離相對(duì)分子質(zhì)量中等油性試樣。適用分離相對(duì)分子質(zhì)量中等油性試樣。 b.b.對(duì)具有不同官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體對(duì)具有不同官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高的選擇性。有較高的選擇性。 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象：由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象. . 三三. .離子交換色譜法離子交換色譜法 1.1.分離機(jī)制分離機(jī)制70/270/2； 2.2.適用范圍適用范圍70/370/3；凡能在溶劑中電離的物質(zhì)一般；凡能在溶

9、劑中電離的物質(zhì)一般 均可用該法進(jìn)行分離。均可用該法進(jìn)行分離。 3.3.交換交換：K KX X = - NR= - NR4 4+ +X X- -ClCl- - / - NR / - NR4 4+ +ClCl- -XX- - D DX X =- NR=- NR4 4+ +X X- -/X/X- -= K= KX X- NR- NR4 4+ +ClCl- -/Cl/Cl- - 3-9 3-9 4. 4.結(jié)論結(jié)論：a.a.分配系數(shù)分配系數(shù)D D愈大，表示溶質(zhì)的離子與離愈大，表示溶質(zhì)的離子與離 子交換劑的相互作用愈強(qiáng)。子交換劑的相互作用愈強(qiáng)。 b.b.親合力高的，在柱中保留值就愈大親合力高的，在柱中保留

10、值就愈大. . 5. 5.應(yīng)用應(yīng)用：a.a.分離離子或可離解的化合物。分離離子或可離解的化合物。 b.b.已成功地分離氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)已成功地分離氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等等.四、離子對(duì)色譜法四、離子對(duì)色譜法 1.1.特點(diǎn)特點(diǎn)：分離效能高，分析速度快，操作簡(jiǎn)便：分離效能高，分析速度快，操作簡(jiǎn)便. . 2. 2.分離機(jī)制分離機(jī)制（P71P71） 3.3.分離過(guò)程分離過(guò)程：流動(dòng)相中待分離有機(jī)離子與固定相：流動(dòng)相中待分離有機(jī)離子與固定相或流動(dòng)相中帶相反電荷的對(duì)離子結(jié)合，形成離子或流動(dòng)相中帶相反電荷的對(duì)離子結(jié)合，形成離子對(duì)化合物，然后在兩相間進(jìn)行分配對(duì)化合物，然后在兩相間進(jìn)行分配. . X X+ +水

11、相水相 + + Y Y水相水相 X X+ +Y Y水相水相 K KXYXY= = X X+ +Y Y 有機(jī)相有機(jī)相 / / X X+ + 水相水相 Y Y 水相水相 D DX X = = X X+ +Y Y 有機(jī)相有機(jī)相 / / X X+ +水相水相 = = K KXYXY Y Y 水相水相 4.4.分類(lèi)分類(lèi)：a.a.正相離子對(duì)色譜法；正相離子對(duì)色譜法； b.b.反相離子對(duì)色譜法反相離子對(duì)色譜法. . 5. 5.應(yīng)用應(yīng)用：解決了以往難分離混合物的分離問(wèn)題：解決了以往難分離混合物的分離問(wèn)題. .五、離子色譜法五、離子色譜法 1.1.固定相固定相: :離子交換樹(shù)脂離子交換樹(shù)脂 流動(dòng)相流動(dòng)相: :電

12、解質(zhì)溶液電解質(zhì)溶液 檢測(cè)器檢測(cè)器: :電導(dǎo)檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器 主配件：抑制柱主配件：抑制柱 2. 2. 流程圖：流程圖：fig3-2fig3-2 3. 3.分離機(jī)制分離機(jī)制 （陰離子為例陰離子為例） a.a.雙柱型：化學(xué)抑制型離子色譜法；雙柱型：化學(xué)抑制型離子色譜法； b.b.單柱型：非抑制型，用低電導(dǎo)的洗脫液；單柱型：非抑制型，用低電導(dǎo)的洗脫液； 4.4.應(yīng)用應(yīng)用：從無(wú)機(jī)和有機(jī)陰離子到金屬陽(yáng)離子，從：從無(wú)機(jī)和有機(jī)陰離子到金屬陽(yáng)離子，從有機(jī)陽(yáng)離子到糖類(lèi)、氨基酸等均可用該法分析有機(jī)陽(yáng)離子到糖類(lèi)、氨基酸等均可用該法分析. . 六、空間排阻色譜法六、空間排阻色譜法 1.1.固定相：凝膠固定相：凝膠 2

13、.2.機(jī)制機(jī)制73/-973/-9：類(lèi)似于分子：類(lèi)似于分子 篩作用，分離只與凝膠的篩作用，分離只與凝膠的 孔徑分布和溶質(zhì)的流體力孔徑分布和溶質(zhì)的流體力 學(xué)體積和分子大小有關(guān)學(xué)體積和分子大小有關(guān). . 3. 3.分離示意圖，分離示意圖，fig3-3fig3-3 a. a.排斥極限排斥極限A A點(diǎn)點(diǎn)74/2;3:74/2;3: b. b.全滲透極限全滲透極限B B點(diǎn)點(diǎn)74/2;6:74/2;6: 相對(duì)分子質(zhì)量介于上述相對(duì)分子質(zhì)量介于上述 兩個(gè)極限之間的化合物，兩個(gè)極限之間的化合物， 將按相對(duì)分子質(zhì)量降低的將按相對(duì)分子質(zhì)量降低的 次序被洗脫次序被洗脫. . 4. 4.特點(diǎn)特點(diǎn)75/2;3:75/2;

14、3:/3.4 3.4 液相色譜法固定相液相色譜法固定相 色譜柱是色譜法的心臟，固定相及裝柱技術(shù)是關(guān)鍵色譜柱是色譜法的心臟，固定相及裝柱技術(shù)是關(guān)鍵. .一、液一、液- -液色譜法及離子對(duì)色譜法固定相液色譜法及離子對(duì)色譜法固定相1.1.全多孔型擔(dān)體：直徑小于全多孔型擔(dān)體：直徑小于1010m m（75/-475/-4） 2.2.表面多孔型擔(dān)體，表面多孔型擔(dān)體，目前不用目前不用. .3.3.化學(xué)鍵合固定相（化學(xué)鍵合固定相（P76P76及及P69P69） a.a.成相：用化學(xué)的方法通過(guò)化學(xué)鍵把有機(jī)分子結(jié)合成相：用化學(xué)的方法通過(guò)化學(xué)鍵把有機(jī)分子結(jié)合到擔(dān)體表面到擔(dān)體表面. . 常用常用1818碳柱碳柱 b.

15、b.特點(diǎn)特點(diǎn)76/-576/-5：4 4點(diǎn)點(diǎn). .4.4.分離機(jī)制分離機(jī)制77/277/2：既不是全部吸附過(guò)程，亦不是典：既不是全部吸附過(guò)程，亦不是典型的液型的液- -液分配過(guò)程，而是雙重機(jī)制兼而有之，只液分配過(guò)程，而是雙重機(jī)制兼而有之，只是按鍵合量的多少而各有側(cè)重是按鍵合量的多少而各有側(cè)重. .二、液二、液- -固吸附色譜法固定相固吸附色譜法固定相 目前較常用目前較常用5-105-10m m的硅膠微粒（全多孔型）的硅膠微粒（全多孔型）. .三、離子交換色譜法固定相三、離子交換色譜法固定相 1.1.薄膜型離子交換樹(shù)脂，表面涂薄膜型離子交換樹(shù)脂，表面涂1%1%離子交換樹(shù)脂離子交換樹(shù)脂. . 2.

16、 2.離子交換鍵合固定相：離子交換鍵合固定相： a.a.鍵合薄殼型：擔(dān)體，薄殼玻珠；鍵合薄殼型：擔(dān)體，薄殼玻珠； b.b.鍵合微粒擔(dān)體型：擔(dān)體，微粒硅膠鍵合微粒擔(dān)體型：擔(dān)體，微粒硅膠. .四、排阻色譜法固定相四、排阻色譜法固定相 a.a.軟質(zhì)凝膠：葡萄糖凝膠；瓊脂糖凝膠；軟質(zhì)凝膠：葡萄糖凝膠；瓊脂糖凝膠； b.b.半硬質(zhì)凝膠：交聯(lián)聚苯乙烯凝膠；半硬質(zhì)凝膠：交聯(lián)聚苯乙烯凝膠； c.c.硬質(zhì)凝膠：多孔硅膠；多孔玻珠；硬質(zhì)凝膠：多孔硅膠；多孔玻珠；3.5 3.5 液相色譜法流動(dòng)相液相色譜法流動(dòng)相1.1.重要性：重要性：GCGC載氣僅三四種，要提高柱效選擇性，載氣僅三四種，要提高柱效選擇性，主要是改變

17、固定相的性質(zhì)；主要是改變固定相的性質(zhì)； LCLC則不同，當(dāng)固定相選定時(shí)，流動(dòng)相的種類(lèi)，則不同，當(dāng)固定相選定時(shí)，流動(dòng)相的種類(lèi)，配比能顯著地影響分離效果，因此配比能顯著地影響分離效果，因此流動(dòng)相的選擇流動(dòng)相的選擇很重要。很重要。2.2.選擇流動(dòng)相應(yīng)注意的因素選擇流動(dòng)相應(yīng)注意的因素79/279/2：5 5點(diǎn)，點(diǎn)，3.3.溶劑的選擇溶劑的選擇79/-379/-3： a. a. 依據(jù)依據(jù)：溶劑的極性是重要依據(jù)。：溶劑的極性是重要依據(jù)。 b.b.溶劑極性順序，水最大，煤油最小。溶劑極性順序，水最大，煤油最小。 c.c.采用多元組合溶劑系統(tǒng)作為流動(dòng)相（底液和洗采用多元組合溶劑系統(tǒng)作為流動(dòng)相（底液和洗 脫液）

18、脫液） d.d.根據(jù)不同的方法選擇合適的底液和洗脫液根據(jù)不同的方法選擇合適的底液和洗脫液 3.6 3.6 高效液相色譜儀高效液相色譜儀一、概述一、概述80/180/1：二、結(jié)構(gòu)示意圖，二、結(jié)構(gòu)示意圖，fig3-4.fig3-4.三、部件介紹三、部件介紹 1.1.高壓泵（壓力高壓泵（壓力150150 35035010105 5 PaPa）關(guān)鍵關(guān)鍵：a.a.流量要穩(wěn)定；流量要穩(wěn)定；80/-180/-1b.b.壓力平穩(wěn)無(wú)脈動(dòng)；壓力平穩(wěn)無(wú)脈動(dòng)；81/2.81/2.c.c.對(duì)流速要有一定的對(duì)流速要有一定的 可調(diào)范圍可調(diào)范圍.81/4.81/4. 類(lèi)型：類(lèi)型： a .a .往復(fù)式柱塞泵往復(fù)式柱塞泵是目前廣

19、泛使用的是目前廣泛使用的恒流泵恒流泵. . 特點(diǎn)特點(diǎn)81/-2;6:81/-2;6: 1) 1)不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化 的影響，的影響，連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相連續(xù)供給恒定體積的流動(dòng)相； 2 2）可方便地通過(guò)改變柱塞沖程的大小或往復(fù)）可方便地通過(guò)改變柱塞沖程的大小或往復(fù)的頻率來(lái)調(diào)節(jié)流量；的頻率來(lái)調(diào)節(jié)流量； 3 3）由于死體積?。s）由于死體積?。s0.10.1mLmL），更換溶劑方便，），更換溶劑方便， 很適用于梯度洗提很適用于梯度洗提. . 不足不足： 1 1）輸出有脈沖波動(dòng)，會(huì)干擾檢測(cè)器正常工作；）輸出有脈沖波動(dòng)，會(huì)干擾檢測(cè)器正常工作；

20、2 2）由于產(chǎn)生基線噪聲而影響檢測(cè)的靈敏度）由于產(chǎn)生基線噪聲而影響檢測(cè)的靈敏度. .b.b.氣動(dòng)放大泵氣動(dòng)放大泵恒壓泵恒壓泵 原理：原理： p p1 1S SA A = p = p2 2S SB B 特點(diǎn)特點(diǎn)82/-6:82/-6:能供給無(wú)脈沖的穩(wěn)定流量的輸能供給無(wú)脈沖的穩(wěn)定流量的輸出出. . 不足不足82/-882/-8： 1 1）液缸體積大，更換流動(dòng)相不方便；）液缸體積大，更換流動(dòng)相不方便； 2 2）不便于梯度洗提）不便于梯度洗提. .2.2.梯度洗提（梯度洗脫、梯度淋洗）裝置梯度洗提（梯度洗脫、梯度淋洗）裝置82/82/ a. a.作用：作用：與與GC GC 中的程序升溫一樣中的程序升溫

21、一樣. .（P22P22、2323） b.b.定義定義83/183/1：所謂梯度洗提，就是：所謂梯度洗提，就是載液中含有載液中含有兩種以上不同極性的溶劑，兩種以上不同極性的溶劑，在分離過(guò)程中按一在分離過(guò)程中按一定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，定的程序連續(xù)改變載液中溶劑的配比和極性，通過(guò)載液中極性的變化來(lái)改變被分離組分的分通過(guò)載液中極性的變化來(lái)改變被分離組分的分離因素，以離因素，以提高分離效果提高分離效果。應(yīng)用梯度洗提還可。應(yīng)用梯度洗提還可以使分離時(shí)間縮短，分辨能力增加，還可提高以使分離時(shí)間縮短，分辨能力增加，還可提高最小檢測(cè)量和定量分析的精度。最小檢測(cè)量和定量分析的精度。外梯度外梯度（

22、低壓梯度）：先混合后輸入色譜柱；（低壓梯度）：先混合后輸入色譜柱；內(nèi)梯度內(nèi)梯度（高壓梯度）：先泵入梯度混合室再入色（高壓梯度）：先泵入梯度混合室再入色譜柱；譜柱；3.3.進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置 a.a.重要性重要性83/183/1：進(jìn)樣方式及試樣體積對(duì)柱效有很進(jìn)樣方式及試樣體積對(duì)柱效有很大影響大影響. . b. b.進(jìn)樣方式進(jìn)樣方式 1 1）注射器進(jìn)樣裝置：）注射器進(jìn)樣裝置： 由于不能承受高壓，所以需用停流進(jìn)樣方法，但由于不能承受高壓，所以需用停流進(jìn)樣方法，但該方式無(wú)法取得精確的保留時(shí)間，峰形的重現(xiàn)性該方式無(wú)法取得精確的保留時(shí)間，峰形的重現(xiàn)性亦較差亦較差. . 2 2）高壓定量進(jìn)樣閥高壓定量進(jìn)樣閥通

23、過(guò)進(jìn)樣閥（通常是六通閥）直接向壓力系統(tǒng)內(nèi)通過(guò)進(jìn)樣閥（通常是六通閥）直接向壓力系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)樣而不必停止流動(dòng)相的一種裝置（進(jìn)樣而不必停止流動(dòng)相的一種裝置（fig3-7fig3-7） a.a.進(jìn)樣準(zhǔn)備：進(jìn)樣準(zhǔn)備：1 1和和6 6，2 2和和3 3連通，試樣由連通，試樣由5 5、4 4注入注入定量管；定量管；b.b.進(jìn)樣：閥芯順時(shí)針進(jìn)樣：閥芯順時(shí)針旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)60600 0，這時(shí)，這時(shí)1 1和和2 2，3 3和和4 4，5 5和和6 6連通，試連通，試樣送入柱中樣送入柱中. .特點(diǎn)：特點(diǎn)：進(jìn)樣準(zhǔn)確，重現(xiàn)進(jìn)樣準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適于定量分析性好，適于定量分析. .4.4.色譜柱色譜柱 a.a.參數(shù)：參數(shù)：idid，

24、 4.64.6或或3.9 3.9 mmmm； L=15-30cmL=15-30cm； 填料顆粒度，填料顆粒度，5-105-10 m m； n=7000-10000n=7000-10000 b. b.發(fā)展趨勢(shì)發(fā)展趨勢(shì) 1 1）減小填料粒度，）減小填料粒度，3-5 3-5 m m； 2 2）減小柱內(nèi)徑，）減小柱內(nèi)徑， 1 1mmmm； c.c.裝填方式裝填方式 1 1）干法，填料粒度大于）干法，填料粒度大于20 20 m m； 2 2）濕法（勻漿法），粒度小于）濕法（勻漿法），粒度小于20 20 m m；5.5.檢測(cè)器檢測(cè)器 要求要求84/-184/-1：具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、響應(yīng)快、：具有靈敏

25、度高、重現(xiàn)性好、響應(yīng)快、現(xiàn)性范圍寬、適用范圍廣、對(duì)流動(dòng)相和溫度波動(dòng)現(xiàn)性范圍寬、適用范圍廣、對(duì)流動(dòng)相和溫度波動(dòng)不敏感、死體積小等特點(diǎn)不敏感、死體積小等特點(diǎn). .a.a.紫外光度檢測(cè)器紫外光度檢測(cè)器85/185/11 1）原理，被分析試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選）原理，被分析試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，擇性吸收，組分濃度與吸光度關(guān)系遵守比爾定律組分濃度與吸光度關(guān)系遵守比爾定律2 2）光路圖，圖）光路圖，圖3-83-8；3 3）特點(diǎn)特點(diǎn)85/385/3；a.a.具有很高靈敏度；具有很高靈敏度； b. b. 對(duì)溫度和流速不敏感，可用于梯度洗提對(duì)溫度和流速不敏感，可用于梯度洗提. . 缺點(diǎn)缺點(diǎn)

26、：不適用于對(duì)紫外光不吸收的試樣：不適用于對(duì)紫外光不吸收的試樣. .4 4）發(fā)展）發(fā)展85-185-1；光電二極管；光電二極管211/211/10241024個(gè)個(gè)陣列檢測(cè)器陣列檢測(cè)器. .b.b.熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器86/86/ 1 1）原理：許多物質(zhì)，特別是具有對(duì)稱(chēng)共軛結(jié)構(gòu)的）原理：許多物質(zhì)，特別是具有對(duì)稱(chēng)共軛結(jié)構(gòu)的有機(jī)芳環(huán)分子受紫外光激發(fā)后，能輻射出比紫外有機(jī)芳環(huán)分子受紫外光激發(fā)后，能輻射出比紫外光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光，某些不發(fā)射熒光的物質(zhì)亦可光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光，某些不發(fā)射熒光的物質(zhì)亦可通過(guò)通過(guò)化學(xué)衍生化學(xué)衍生轉(zhuǎn)變成能發(fā)出熒光的物質(zhì)而得到檢轉(zhuǎn)變成能發(fā)出熒光的物質(zhì)而得到檢測(cè)。測(cè)。 2 2）光路圖：圖）

27、光路圖：圖3-113-11； 3 3）特點(diǎn)：熒光檢測(cè)器比紫外光度檢測(cè)器的靈敏度）特點(diǎn)：熒光檢測(cè)器比紫外光度檢測(cè)器的靈敏度要高要高2 2個(gè)數(shù)量級(jí)。但線性范圍僅個(gè)數(shù)量級(jí)。但線性范圍僅10103 3，利用可調(diào)諧，利用可調(diào)諧的激光作光源（的激光作光源（激光誘導(dǎo)熒光激光誘導(dǎo)熒光）可使檢測(cè)靈敏度）可使檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度都得到提高。和準(zhǔn)確度都得到提高。c.c.差示折光檢測(cè)器差示折光檢測(cè)器通用型通用型87/87/1 1）原理：借連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率的方法來(lái)）原理：借連續(xù)測(cè)定流通池中溶液折射率的方法來(lái)測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。溶有試樣的流動(dòng)相和純測(cè)定試樣濃度的檢測(cè)器。溶有試樣的流動(dòng)相和純流動(dòng)相之間折射率之差，

28、表示試樣在流動(dòng)相中的流動(dòng)相之間折射率之差，表示試樣在流動(dòng)相中的濃度。濃度。2 2）類(lèi)型：偏轉(zhuǎn)式；反射式）類(lèi)型：偏轉(zhuǎn)式；反射式3 3）定量方法：偏轉(zhuǎn)式是利用測(cè)量折射角偏轉(zhuǎn)值的大）定量方法：偏轉(zhuǎn)式是利用測(cè)量折射角偏轉(zhuǎn)值的大小來(lái)測(cè)定試樣的濃度。小來(lái)測(cè)定試樣的濃度。4 4）特點(diǎn)特點(diǎn)88/-188/-1：幾乎每種物質(zhì)都有各自不同的折射幾乎每種物質(zhì)都有各自不同的折射率率，因此都可用差示折光檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)，如同，因此都可用差示折光檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)，如同GCGC中熱導(dǎo)池一樣，它是一種通用型的濃度檢測(cè)器。中熱導(dǎo)池一樣，它是一種通用型的濃度檢測(cè)器。5 5）不足不足89/189/1：a.a.對(duì)溫度變化敏感；對(duì)溫度變化敏感

29、；b.b.不能梯度洗提不能梯度洗提. .d.d.電導(dǎo)檢測(cè)器電導(dǎo)檢測(cè)器89/ 89/ 1 1）特點(diǎn)特點(diǎn)：是離子色譜法中使用最廣泛的檢測(cè)器：是離子色譜法中使用最廣泛的檢測(cè)器. . 不足不足：電導(dǎo)檢測(cè)器的響應(yīng)受溫度的影響較大，：電導(dǎo)檢測(cè)器的響應(yīng)受溫度的影響較大， 因此要求嚴(yán)格控制溫度因此要求嚴(yán)格控制溫度. .2 2）原理：利用物質(zhì)電離后產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來(lái)測(cè)定）原理：利用物質(zhì)電離后產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來(lái)測(cè)定電離物質(zhì)含量電離物質(zhì)含量. .（參（參P72P72）3 3）類(lèi)型：）類(lèi)型： a.a.兩電極電導(dǎo)檢測(cè)器兩電極電導(dǎo)檢測(cè)器用于低電導(dǎo)背景的抑制型用于低電導(dǎo)背景的抑制型離子色譜離子色譜. . b.b.五電極式電導(dǎo)檢

30、測(cè)器五電極式電導(dǎo)檢測(cè)器90/90/用于單柱型離子色譜，用于單柱型離子色譜，它有效地消除了極化和電解效應(yīng)的影響，在高背它有效地消除了極化和電解效應(yīng)的影響，在高背景電導(dǎo)下仍能獲得極低的噪聲水平，適用于單柱景電導(dǎo)下仍能獲得極低的噪聲水平，適用于單柱型離子色譜系統(tǒng)。型離子色譜系統(tǒng)。3.73.7高效液相色譜分離類(lèi)型的選擇高效液相色譜分離類(lèi)型的選擇90/90/1.1.應(yīng)考慮的因素：應(yīng)考慮的因素： a.a.試樣的性質(zhì)試樣的性質(zhì): :分子質(zhì)量分子質(zhì)量, ,化學(xué)結(jié)構(gòu)極性化學(xué)結(jié)構(gòu)極性, ,溶解度參數(shù)；溶解度參數(shù)； b.b.色譜分離類(lèi)型的特點(diǎn)及應(yīng)用范圍；色譜分離類(lèi)型的特點(diǎn)及應(yīng)用范圍； c.c.實(shí)驗(yàn)室條件：儀器、色譜柱等實(shí)驗(yàn)室條件：儀器、色譜柱等. .2.2.應(yīng)用范圍應(yīng)用范