2015-動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作

1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作一固定、性別判定、標(biāo)識(shí)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭谧鰟?dòng)物試驗(yàn)時(shí)，為確保給藥、實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，防止被動(dòng)物咬傷、準(zhǔn)確區(qū)分動(dòng)物性別、準(zhǔn)確標(biāo)識(shí)動(dòng)物，要學(xué)會(huì)用正確方法捉拿實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、掌握區(qū)分動(dòng)物性別的方法以及掌握標(biāo)識(shí)動(dòng)物的方法?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，體重180-250g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、美式圖釘、細(xì)繩、防護(hù)手套藥品：苦味酸80%90酒精飽和溶液、20%；拉坦【實(shí)驗(yàn)步驟】一、小鼠的捉拿1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上。向后上方輕拉，此時(shí)，小鼠前肢緊緊抓住粗糙外表。左手拇指和食指迅速捏住小鼠頸背部皮膚，再置小鼠于左手心，并以左手

2、掌心和中指夾住小鼠背部皮膚，無(wú)名指壓住小鼠尾根部，將其固定于手中。右手可行注射或其它操作。2、固定器固定：尾靜脈注射或給藥時(shí)，將小鼠放進(jìn)固定器中或者大小和重量適當(dāng)?shù)娜萜魅鐭?，只露出尾巴，該類容器能夠壓住尾部，防止其活?dòng)。勿固定過緊造成窒息死亡。進(jìn)行腹腔手術(shù)或心臟采血時(shí)，先準(zhǔn)備一個(gè)15-20cm的方木板，邊緣釘入五顆釘子。將小鼠四肢分別用20-30cm的線繩捆綁，線的另一頭分別綁在方木板的釘子上，并且在頭部上顆切齒牽引一根線繩，也固定在釘子上，到達(dá)完全固定。二、大鼠的捉拿4-5周內(nèi)的大鼠，方法同小鼠。周齡較大的，貝U:1、首先戴好防護(hù)手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大

3、鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。3、左手順勢(shì)按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。三、性別判定小鼠、大鼠性別判定1幼鼠夕卜生殖器與肛門間隔短的是旱，夕卜生殖器與肛門間隔長(zhǎng)的是8。2成年動(dòng)物可直接肉眼識(shí)別，雄性有膨起的陰囊和陰莖，雌性動(dòng)物有陰道口。四、動(dòng)物的標(biāo)記小鼠的短期標(biāo)記法：苦味酸80%90斕精飽和溶液黃色，標(biāo)出屬于自己的編號(hào)【注意事項(xiàng)】1、實(shí)驗(yàn)人員要有精神準(zhǔn)備：掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)。2、動(dòng)物興奮的時(shí)候不要抓取，待其安靜下來(lái)。3、根據(jù)受試動(dòng)物的給藥部位或采血方法的不同，事先選擇徒手固定還是固定器固定

4、。4、固定時(shí)把握好力度，過分用力會(huì)使小鼠頸椎脫臼或窒息死亡，假設(shè)用力過輕頭部能反轉(zhuǎn)過來(lái)咬傷實(shí)驗(yàn)者的手。1. 【思考題】在固定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)如何才能快、準(zhǔn)、穩(wěn)？動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作二給藥途徑、采血【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭谧鰟?dòng)物試驗(yàn)時(shí)，為確保給藥、采血實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，要掌握根據(jù)不同的情況進(jìn)行動(dòng)物給藥以及采血的正確方法?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠180-250g，KM小鼠18-22g，雌雄各半?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、長(zhǎng)釘、細(xì)繩、防護(hù)手套，灌胃針，注射器1ml,5ml、棉球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑲子藥品：生理鹽水、75%酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管【實(shí)驗(yàn)步驟】一、給藥途徑1

5、、大、小鼠的灌胃法用左手固定鼠，右手持灌胃器（安好灌胃針并已吸好藥物），將灌胃針從鼠的嘴角插入口腔，壓迫鼠的頭部，使口腔和食管成一直線，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)針頭刺激鼠的吞咽，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食管，如果動(dòng)物掙扎厲害，退出灌胃針，待動(dòng)物安靜下來(lái)，重新插入。灌胃針前端到達(dá)膈肌水平，即可慢慢推灌藥液，如很通暢，則說(shuō)明已進(jìn)入胃內(nèi)。如不通將注射針刺入皮下，假稍微用手指壓片刻針刺暢，且動(dòng)物掙扎厲害，須拔出重新操作。2、皮下注射左手拇指和食指輕輕提起動(dòng)物皮膚，右手持注射器，設(shè)針頭容易擺動(dòng)則證明針頭已在皮下，推送藥液，緩慢拔出注射針，部位，以防藥物外漏。肌肉注射比皮下和常采用肌3、肌肉注射選用肌肉發(fā)達(dá)，無(wú)大血管經(jīng)過

6、的部位，如臀部或股部。腹腔注射用得較少，但當(dāng)給動(dòng)物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí),肉注射4、腹腔注射A、左手抓取并固定好動(dòng)物，將腹部朝上。B、右手持注射器將針頭在下腹部腹白線稍左或偏右的位置，從下腹部朝頭方向幾乎平行地刺入皮下，進(jìn)針3-5mniG再使針頭與皮膚呈45。角斜穿過腹肌，當(dāng)針尖穿過腹肌進(jìn)入腹腔時(shí)，有落空感，然后固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽，無(wú)回血，無(wú)腸液、尿液，便可緩緩?fù)迫胨幰骸?、靜脈注射尾靜脈注射A、大、小鼠尾靜脈共有3根（左、中、右），一般常選用兩側(cè)的靜脈。注射前，先把動(dòng)物固定在暴露尾部的鼠尾固定器內(nèi)（可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替）.B、拔去尾部靜脈走向的毛，用

7、75%酒精棉球反復(fù)擦拭鼠尾，以到達(dá)消毒、血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的。C、盡量從靜脈的遠(yuǎn)心端刺入血管，回一下血，將藥液緩慢注入。以注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘。二、采血1、心臟采血將動(dòng)物仰臥固定在鼠板上，剪去胸前區(qū)部位的被毛，消毒。在左側(cè)第3-4肋間，用左手食指摸到心搏處，右手持注射器選擇心搏最強(qiáng)處穿刺。當(dāng)針穿刺入心臟時(shí)，血液由于心臟搏動(dòng)的力量自動(dòng)進(jìn)入注射器。如不需保留動(dòng)物存活時(shí)，也可麻醉后切開動(dòng)物胸膛，直接用注射器刺入心臟內(nèi)采血，也可剪破心臟直接用注射器或吸管吸血。2、摘眼球采血用左手抓住動(dòng)物頸部皮膚，并將動(dòng)物輕壓在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，稍微側(cè)臥，左手拇指盡量將動(dòng)物眼周圍皮膚往眼后

8、壓，使動(dòng)物眼球突出并充血，用彎頭鑲子迅速摘除眼球，眼眶內(nèi)很快流出血液。3、眶靜脈叢竇采血將動(dòng)物麻醉，采用側(cè)眼向上固定體位，用左手拇指和食指從背部較緊地握住大小鼠頸部。取血時(shí)，左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)，是頭部靜脈血液回流困難，眼球充分外突，眶靜脈叢充血?！咀⒁馐马?xiàng)】1、掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)。2、常用灌胃量：小鼠：0.21ml,大鼠14ml3、摘取眼球采血法一般可取約為小鼠體重4-5%的血液量。1. 【思考題】如何熟練掌握大小鼠的給藥途徑和采血方法？動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作三安樂死【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭诳茖W(xué)應(yīng)用和教學(xué)實(shí)驗(yàn)中，因?qū)嶒?yàn)終結(jié)、研究所需提供血液或其他組織臟器、不適合繁殖或者是當(dāng)動(dòng)物的疼

9、痛與窘迫程度超過預(yù)期等情況下，需要我們以人道的方式使動(dòng)物死亡，使動(dòng)物在最低程度的疼痛、恐懼，并在最短的時(shí)間內(nèi)失去知覺和痛覺?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】KM小鼠，雌雄各半，體重18-22g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、注射器1ml、棉球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑲子、燒杯100ml、方木板藥品：吸入性麻醉劑、注射型麻醉劑、75%酒精棉球【實(shí)驗(yàn)步驟】1、頸椎脫臼法用拇指和食指用力往下按住鼠頭，另一只手抓住鼠尾鼠尾根部，用力往后上方一拉，使頸椎脫臼，造成脊髓與腦髓斷離，動(dòng)物立即死亡。2、放血法麻醉動(dòng)物后，將動(dòng)物股、頸動(dòng)脈、靜脈全切斷，血液立即噴出；用一塊濕紗布不斷擦去股動(dòng)脈切周圍處的血

10、液和血凝塊，同時(shí)不斷的用自來(lái)水沖洗流血，使股動(dòng)脈切口處保持暢通，動(dòng)物35分鐘內(nèi)即可致死。3、藥物致死法A、藥物吸入藥物吸入是將有毒氣體或揮發(fā)性麻醉劑，被動(dòng)物經(jīng)呼吸道吸入體內(nèi)而致死，將KM小鼠放入含有乙酰的密封燒杯中，3-5分鐘后可死亡8藥物注射將藥物腹腔注射硫酸鎂通過注射的方式注入動(dòng)物體內(nèi)，使動(dòng)物死亡【注意事項(xiàng)】1、實(shí)驗(yàn)人員要有精神準(zhǔn)備：掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)、克服心理緊張等因素1. 【思考題】安樂死的意義是什么？1. 實(shí)驗(yàn)二家兔的氣管及動(dòng)脈插管實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)捉拿家兔的正確方法和固定。2. 掌握常用手術(shù)器械的正確使用方法。學(xué)習(xí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)，包括麻醉、切口與止血、氣管插管術(shù)、頸動(dòng)脈

11、插管術(shù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象健康家兔，雌雄均可，體重2.02.5Kg實(shí)驗(yàn)內(nèi)容家兔的捉拿、麻醉與固定頸總動(dòng)脈、神經(jīng)等的別離技術(shù)氣管插管動(dòng)脈插管器材與藥品器材：兔手術(shù)臺(tái)、哺乳類動(dòng)物手術(shù)器械一套、三通、動(dòng)脈夾、動(dòng)脈插管、氣管插管、紗布、棉線、注射器、綁腿帶、污物杯。20%氨基甲酸乙酯溶液(烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用)步驟和方法一、家兔的捉拿與稱重1、家兔的捉拿：右手抓住家兔頸背部皮膚，輕輕將家兔提起，迅速以左手托住其臀部，使家兔體重主要落左掌心上，以免損傷動(dòng)物頸部。一、/A汪息點(diǎn)：家兔一般不咬人，但腳爪銳利，在掙扎易抓傷捕捉者，所以捕捉時(shí)要特別注意其四肢。2、家兔的稱重：將家兔放在嬰兒秤上，待家兔安靜的

12、時(shí)候觀察體重并記錄。一、/A汪息點(diǎn)：(1)調(diào)零(2)切勿使勁按壓稱面二、家兔的麻醉1、麻醉藥的注射如圖1:助手的一側(cè)上肢彎曲與同側(cè)的軀干夾住家兔的后半部位，同時(shí)該側(cè)的手托住家兔的腹部，另一只向上抓住家兔的頸背部，充分暴露耳背外緣耳緣靜脈。實(shí)驗(yàn)者的左食指、中指輕夾耳根部使靜脈充盈，從遠(yuǎn)心端以30C角度進(jìn)針刺入靜脈后順血管平行方向深入1cm,左手拇指、食指在刺入部位將針頭與兔耳固定，即可注入麻醉藥。2、麻醉效果判定：可以通過觀察動(dòng)物呼吸平穩(wěn)深慢、角膜反射退鈍或消失、肢體肌肉松弛、皮膚夾捏反射消失四方面來(lái)判定是否到達(dá)理想的麻醉效果三、家兔的氣管與動(dòng)脈插管1、仰臥固定：頭部用一根粗棉線拉住兔的兩只門齒

13、后栓在兔板的鐵柱或固定于鉤上。兩前肢平直放在胸腰部?jī)蓚?cè)，用粗棉繩的一端縛扎腕關(guān)節(jié)以上部位，縛繩從背后左右交叉穿過，壓在對(duì)側(cè)前肢的前臂上，再緊扎于兔板兩側(cè)的木鉤上，兩后肢左右分開，縛繩扎踝關(guān)節(jié)以上部位，另一端分別固定于兔板后兩側(cè)的木鉤上，如下列圖2。2、氣管插管操作要點(diǎn)1）用手術(shù)刀時(shí)，先用手或器械使兩側(cè)組織牽拉緊張情況下，以刀刃作垂直的輕巧的切開，不要作刮削的動(dòng)作。2）氣管插管術(shù)操作要點(diǎn): 頸部正中切開皮膚，鈍性別離暴露氣管、穿線備用。 于氣管中段第三或第四軟骨環(huán)上向頭端作一縱向倒“T”形切口。 將氣管導(dǎo)管由切口向胸部方向插入氣管腔內(nèi)。 在氣管軟骨環(huán)之間進(jìn)行結(jié)扎，并將棉線固定于插管分叉處。3、動(dòng)

14、脈插管操作要點(diǎn) 于氣管一側(cè)小心別離頸總動(dòng)脈約3cm穿兩線備用。 遠(yuǎn)心端結(jié)扎、近心端用動(dòng)脈夾夾緊。 用眼科剪與血管呈45C的角度從遠(yuǎn)心端開始在向心一側(cè)剪開管壁的1/3。 插管前導(dǎo)管和壓力換能器的肝素化。 插管后結(jié)扎固定。注意事項(xiàng)1、麻醉動(dòng)物時(shí)，注射速度先快后慢，邊注射邊觀察動(dòng)物麻醉指征。如麻醉過淺，動(dòng)物掙扎時(shí)可適量追加麻醉藥，切忌麻醉過深引起家兔死亡；2、手術(shù)過程中操作應(yīng)輕柔，盡量防止不必要的損傷和出血；3、手術(shù)時(shí)，切開頸部皮膚后，盡量鈍性別離，以免損傷血管；4、氣管插管前，應(yīng)注意止血，并將氣管分泌物清理干凈；5、動(dòng)脈導(dǎo)管的插入端要光滑，不能過尖，以防刺破動(dòng)脈壁，引起大出血。6、未扎緊動(dòng)脈插管前

15、不要松動(dòng)動(dòng)脈夾。實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)性肺水腫【實(shí)驗(yàn)原理與目的】肺水腫是臨床上常見的危重癥之一，肺水腫是指過多的液體積聚在肺間質(zhì)或溢入肺泡腔內(nèi)的病理狀態(tài)。當(dāng)肺毛細(xì)血管流體靜脈壓增高、血漿膠體滲透壓降低，肺微細(xì)管壁通透性增高、肺淋巴回流障礙等因素的某個(gè)或多個(gè)同時(shí)或相繼作用，一般水腫液先在組織間隙中積聚，形成間質(zhì)性肺水腫，然后發(fā)展為肺泡性肺水腫。肺水腫發(fā)生后，可引起氣體彌散障礙以及肺泡通氣與血流比例失調(diào)如果氣道內(nèi)存在水腫液，還會(huì)引起通氣障礙，最終導(dǎo)致呼吸功能不全。大劑量腎上腺素可引起機(jī)體血液重新分布，外周血管廣泛收縮，血液由體循環(huán)急速轉(zhuǎn)移到肺循環(huán)，使左心房壓力和肺毛細(xì)血管有效濾過壓增高，液體流入肺間質(zhì)增多而

16、出現(xiàn)肺水腫。本實(shí)驗(yàn)的目的是用大劑量腎上腺素復(fù)制肺水腫模型，觀察急性肺水腫的表現(xiàn)，分析發(fā)病機(jī)理?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠，雌雄不限，體重180-250g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：彈簧磅秤，電子天平，手術(shù)器械1套，2ml，5ml注射器，聽診器1具，濾紙。藥品：生理鹽水，0.1%鹽酸腎上腺素注射液，20%氨基甲酸乙酯溶液（烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用）。1. 【實(shí)驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo)】取180-250g左右體重相近的大鼠兩只，做好標(biāo)記甲鼠、乙鼠，稱重，觀察動(dòng)物的一般情況、呼吸和膚色。甲鼠腹腔注射0.1%鹽酸腎上腺素注射液1.52ml;乙鼠腹腔注射同體積生理鹽水。觀察動(dòng)物變化如活動(dòng)情況、呼吸、膚色并做肺部聽診肺呼吸音，注意口鼻有無(wú)泡沫液體流出。如動(dòng)物死亡，記錄時(shí)間；假設(shè)注射藥物20min后動(dòng)物未死亡，可按0.3%戊巴比妥鈉溶液1ml/100g腹腔注射，帶麻醉成