殺蟲劑生物測定技術(shù)學習教案

1、殺蟲劑生物測定技術(shù)殺蟲劑生物測定技術(shù)(jsh)第一頁，共62頁。一、標準(biozhn)試蟲 標準試蟲是指數(shù)種被普遍(pbin)采用的具有一定代表性和經(jīng)濟意義及耐藥能力較穩(wěn)定而均勻的昆蟲群體。標準試蟲的大量供應與質(zhì)量均勻是影響生物測定結(jié)果正確、穩(wěn)定與可靠的最基本因子，同時也是保證順利地開展和完成生物測定最基本的條件之一。 第1頁/共61頁第二頁，共62頁。（1）粘蟲（Leucania separate Walker），代表鱗翅目咀嚼式口器食葉性害蟲。（可人工飼養(yǎng)(syng)）（2）玉米螟（Ostrinia nubilalis），代表為害雜糧作物的鉆蛀性害蟲。（可人工飼養(yǎng)(syng)）（3）二化

2、螟（Chilo suppressalis）,代表鉆蛀性水稻害蟲。（可人工飼養(yǎng)(syng)）常用(chn yn)的供試昆蟲有：第2頁/共61頁第三頁，共62頁。（4）還有三化螟、棉鈴蟲、地老虎農(nóng)業(yè)害蟲(hichng)等。（5）衛(wèi)生害蟲(hichng)（如蚊、蠅類）（6）倉庫害蟲(hichng)（米象、赤擬谷盜等）（7）刺吸性害蟲(hichng)（蚜螨類）第3頁/共61頁第四頁，共62頁。供試昆蟲供試昆蟲(knchng)(knchng)的要求的要求第4頁/共61頁第五頁，共62頁。二、殺蟲劑生物(shngw)測定方法 （1）胃毒作用(zuyng)（2）觸殺作用(zuyng)（3）熏蒸作用(zuyn

3、g)（4）內(nèi)吸作用(zuyng) 第5頁/共61頁第六頁，共62頁。u夾毒葉片夾毒葉片(ypin)(ypin)法法u液滴飼喂法液滴飼喂法 u口腔注射法口腔注射法 胃毒作用胃毒作用(zuyng)(zuyng)（stomach actionstomach action）的測定方法的測定方法 第6頁/共61頁第七頁，共62頁。 葉片夾毒法適合于植食性、取食量大的咀嚼式口器(kuq)的昆蟲，如鱗翅目幼蟲、蝗蟲等。其基本原理是用2張葉片，中間均勻地分布一層殺蟲藥劑，飼喂試蟲，按吞食葉片的面積計算吞食藥量。夾毒葉片夾毒葉片(ypin)法（法（sandwich method）第7頁/共61頁第八頁，共62頁

4、。對于舐吸式口器的昆蟲(knchng)不宜用夾毒葉片法，如家蠅、果蠅、蜜蜂等昆蟲(knchng)喜歡食糖液，可將一定量的殺蟲劑加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.0010.01ml），直接飼喂昆蟲(knchng)。液滴飼喂液滴飼喂(s wi)法法（Feeding of measured drops）第8頁/共61頁第九頁，共62頁。 一般適用個體較大的咀嚼式昆蟲，如家蠶，鱗翅目幼蟲等，處理時，將藥劑溶解后用微量注射器或手細管點滴定量的藥液注入試蟲口器中，昆蟲吞食藥液后，轉(zhuǎn)入放有新鮮飼料的容器中培養(yǎng)觀察(gunch)。這種方法由于從口腔注入藥液時易刺破口腔內(nèi)軟組織，技術(shù)難以掌握。因

5、此，應用較少。口腔口腔(kuqing)注射法注射法第9頁/共61頁第十頁，共62頁。觸殺作用觸殺作用(zuyng)（contact action）測定方法測定方法u點滴法點滴法u藥膜法或殘膜法藥膜法或殘膜法u浸液法浸液法第10頁/共61頁第十一頁，共62頁。 室內(nèi)(sh ni)定量測定觸殺毒力最常用的方法。在測定觸殺毒力時，應盡量避免藥劑從口器或氣孔進入蟲體。直接將藥液點滴到昆蟲的某一部位。多為幼蟲的前胸背板，溶劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁上形成藥膜而侵入體內(nèi)。點滴法點滴法第11頁/共61頁第十二頁，共62頁。 用噴霧法及噴粉法將藥劑定量地分布于一定表面上，如濾紙、玻璃容器內(nèi)壁及植物葉片等而形成一層

6、均勻的藥膜。使昆蟲(knchng)在藥膜上接觸一定時間（424h），檢查擊倒率或死亡率。求出藥劑對試蟲的毒力。藥膜法或殘膜法藥膜法或殘膜法第12頁/共61頁第十三頁，共62頁。 對于水生昆蟲（蚊幼蟲、螨類和蚜蟲）將藥劑配成57個不同濃度有藥液，摘取有一定數(shù)量蚜蟲的豆苗(du mio)葉片，在不同藥液中浸35s，取出后，用吸水紙吸去多余的藥液，統(tǒng)計葉片上的蚜蟲數(shù)量，對照用清水處理。保濕24h，檢查蚜蟲的死亡數(shù)，計算死亡率及校正死亡率，求出LC50。浸液法第13頁/共61頁第十四頁，共62頁。 某些藥劑有內(nèi)吸性如許多(xdu)有機磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑可以通過植株的根、莖、葉等部位吸收到植株的內(nèi)部

7、，隨著植物體液在體內(nèi)的傳導，當害蟲取食或刺吸植物時，藥劑也隨之進入害蟲的體內(nèi)并將其殺死。內(nèi)吸作用（內(nèi)吸作用（Systemic action）的試驗）的試驗(shyn)方方法法第14頁/共61頁第十五頁，共62頁。 內(nèi)吸殺蟲劑毒力的測定方法分為直接測定法和間接測定法2種。直接法包括(boku)莖或葉的局部涂藥、根際施藥及種子處理等。間接法是用處理后的植物，取其葉片研磨成為水劑，加在水中，測定對水生昆蟲的毒力。第15頁/共61頁第十六頁，共62頁。定義殺蟲藥劑以氣體的方式通過害定義殺蟲藥劑以氣體的方式通過害蟲的呼吸系統(tǒng)進入蟲體，而起到毒殺的作蟲的呼吸系統(tǒng)進入蟲體，而起到毒殺的作用稱熏蒸作用。用稱熏

8、蒸作用。目的熏蒸作用毒力的測定的目的主目的熏蒸作用毒力的測定的目的主要有要有2個：一是用鑒別殺蟲劑有無熏蒸作個：一是用鑒別殺蟲劑有無熏蒸作用；二是測定熏蒸劑的殺蟲毒力。用；二是測定熏蒸劑的殺蟲毒力。注意要求在一個密閉的條件下進行注意要求在一個密閉的條件下進行(jnxng)，且藥劑不與試蟲接觸。，且藥劑不與試蟲接觸。熏蒸熏蒸(xnzhng)作用（作用（fumigation action）測定方法測定方法第16頁/共61頁第十七頁，共62頁。毒力的表示方法(fngf)及計算致死中量（LD50：Median lethal dose）或致死中濃度（LC50：Median lethal concentr

9、ation）：藥劑(yoj)殺死某種生物群體50所需的劑量（LD50）或濃度（LC50）。第17頁/共61頁第十八頁，共62頁。結(jié)果檢查結(jié)果檢查(jinch)(jinch)與與LD50LD50計算計算u胃毒作用(zuyng)u觸殺作用(zuyng)第18頁/共61頁第十九頁，共62頁。以夾毒葉片法為例以夾毒葉片法為例 昆蟲取食后放在干凈容器中，加入新鮮的昆蟲取食后放在干凈容器中，加入新鮮的植物葉片，在植物葉片，在2472h后檢查死亡率。由于后檢查死亡率。由于(yuy)各昆蟲的取食量不同，因此必須單各昆蟲的取食量不同，因此必須單獨觀察記錄。獨觀察記錄。第19頁/共61頁第二十頁，共62頁。根據(jù)取

10、食面積、單位面積上的著藥量（g/g），根據(jù)單位體重受藥量，由小至大順序排列，由于在取食量較小時試蟲無死亡；隨著取食量加大，出現(xiàn)死、活均有出現(xiàn)的劑量范圍；再加大取食量，試蟲全部死亡。這三種表現(xiàn)自然分成三組：（1）生存組（2）生死組（3）死亡組。如實驗(shyn)中三組數(shù)值均出現(xiàn)，則說明實驗(shyn)成功，如缺其中一組，應重做。生存組和死亡組是劃分生死組（中間組）界線的。第20頁/共61頁第二十一頁，共62頁。 將中間組死蟲的每項單位(dnwi)體重藥量累加，除以總死蟲數(shù)得A；中間組活蟲的每項單位(dnwi)體重相加除以活蟲數(shù)得B。將AB除2即得致死中量（g/g），計算公式為 致死中量（LD50

11、）（AB）/2第21頁/共61頁第二十二頁，共62頁。 供試藥劑設(shè)計56個濃度(nngd)梯度，每個濃度(nngd)為一個處理，每個處理4060頭，重復46次，每個重復10頭。 用微量點樣器在供試昆蟲的前胸背板上點一定體積的藥量，2448h后檢查死亡蟲數(shù)。統(tǒng)計死亡率，計算LD50。 觸殺毒(sh d)力結(jié)果檢查第22頁/共61頁第二十三頁，共62頁。LD50（LC50）的計算(j sun)死亡(swng)率（%）死蟲數(shù)/供試蟲數(shù)X100% 校正死亡(swng)率（%）處理組死亡(swng)率對照組死亡(swng)度/100對照組死亡(swng)率X100 單位體重受藥量（g/g）處理濃度（pp

12、m）X點滴藥量(l)/試蟲平均體重(g)X100第23頁/共61頁第二十四頁，共62頁。LD50的計算方法u作圖法作圖法uExcelExcel法法u最小最小2 2乘法乘法(chngf)(chngf)第24頁/共61頁第二十五頁，共62頁。 例：用點滴法測定辛硫磷對玉米螟5齡幼蟲的毒力，試蟲平均體重為0.046g/頭，每頭試蟲點滴0.8l藥劑丙酮液，48h檢查(jinch)試蟲死亡率，結(jié)果如表1-1。試計算辛硫磷對玉米螟5齡幼蟲的LD50。第25頁/共61頁第二十六頁，共62頁。第26頁/共61頁第二十七頁，共62頁。第27頁/共61頁第二十八頁，共62頁。第28頁/共61頁第二十九頁，共62頁

13、。第29頁/共61頁第三十頁，共62頁。第30頁/共61頁第三十一頁，共62頁。第31頁/共61頁第三十二頁，共62頁。第32頁/共61頁第三十三頁，共62頁。第33頁/共61頁第三十四頁，共62頁。第34頁/共61頁第三十五頁，共62頁。第35頁/共61頁第三十六頁，共62頁。第36頁/共61頁第三十七頁，共62頁。按INV7顯示(xinsh)的數(shù)字為a值按INV8顯示(xinsh)的數(shù)字為b值按INV9顯示(xinsh)的數(shù)字為r值已知 a b ，就可寫出回歸方程y=a+bx第37頁/共61頁第三十八頁，共62頁。求LC50或LD50、LC90、LC95 求LC50 ，按5INVYX；再按

14、INVLog，顯示(xinsh)的數(shù)字為LC50求LC90按6.2816 INV Y X ；再按INVLog，顯示(xinsh)的數(shù)字為LC90 LC95 按6.6449 INV Y X ；再按INVLog，顯示(xinsh)的數(shù)字為LC95 第38頁/共61頁第三十九頁，共62頁。第39頁/共61頁第四十頁，共62頁。（1）死亡(swng)率的校正：一般情況，若有對照死亡(swng)，需要校正，若對照死亡(swng)超過20%，應重做；如對照死亡(swng)率小于5%時，也可不必校正。（2）死亡(swng)率的范圍：一般，至少有4個濃度處理試蟲的死亡(swng)率應在1090%。這樣計算得到

15、的LD50更可靠。 （3）相關(guān)系數(shù)R：一般應在0.9以上。注意事項注意事項第40頁/共61頁第四十一頁，共62頁。葉片(ypin)浸液法玻片浸液法葉片(ypin)殘毒法 殺螨劑的毒力測定方法第41頁/共61頁第四十二頁，共62頁。1 用盆栽豆苗（大豆苗）繁殖(fnzh)葉螨（如棉葉螨），測定時用成螨，且發(fā)育時間（日齡）一致。2 將成螨轉(zhuǎn)到無蟲豆苗上，每株40頭左右。葉片(ypin)浸液法第42頁/共61頁第四十三頁，共62頁。3 將待測藥劑（乳油或可濕性粉劑）用水稀釋成系列濃度，每一濃度可配4050ml，置于小燒杯中。4 將接上螨的豆苗浸入藥液6s，取出后用吸水紙吸去多余(duy)藥液。處理時

16、先用清水處理對照 (CK)，再由低濃度至高濃度處理，每一濃度重復45次。第43頁/共61頁第四十四頁，共62頁。5 處理(chl)后豆苗置于25恒溫箱中，保持24h后檢查死亡率。為了防止紅蜘蛛逃逸，可在葉柄基部涂上一圈凡士林。 6 將藥劑濃度取對數(shù)值，24h校正死亡率（或減退率）取機率值，用統(tǒng)計分析法求出毒力回歸式Y(jié)a+bx及LC50值。第44頁/共61頁第四十五頁，共62頁。 本法適于測定各種雌成螨，飼養(yǎng)時必須將螨種鑒別、純化，使之為單一(dny)種類。以蘋果實生苗飼養(yǎng)山楂紅蜘蛛，以柑桔苗飼養(yǎng)柑桔紅蜘蛛，螨的齡期應一致。浸玻片法第45頁/共61頁第四十六頁，共62頁。1將雙面尼龍膠帶剪成2c

17、m長，貼在常用的載玻片的一端。2用零毫毛筆(mob)挑起34日齡的雌成螨，將其背部粘在膠帶上，每行10頭，粘23行或用毛筆(mob)將雌成螨集中在一起。然后將貼在膠帶的玻片的膠面部分輕輕地壓向成螨背部，以粘著為準，再用毛筆(mob)將重疊或不規(guī)則的或死亡的挑去，使其成行保留，這樣比較省時也省工。第46頁/共61頁第四十七頁，共62頁。3用水將藥劑配成系列濃度，置于小燒杯中，用手持紙片無螨的一端(ydun)，將粘有螨的一端(ydun)置藥液中浸5秒鐘，取出后用吸水紙吸去多余藥液。對照用清水處理。各處理重復4次。 第47頁/共61頁第四十八頁，共62頁。4取一白瓷盤，盤底鋪厚2cm的海綿，其上鋪一

18、塊略小一點的藍布，再鋪一層塑料薄膜，然后(rnhu)加蒸餾水至藍布。將粘有螨的玻片平放在盤中，再用紗布罩住，置25，相對濕度85左右溫室中，經(jīng)24h檢查死亡率。用毛筆尖輕輕觸動螨足，以不動者為死亡。求出毒力回歸式及LC50值。 第48頁/共61頁第四十九頁，共62頁。編號(bin ho)濃度名稱日期。浸玻片法示意圖浸玻片法示意圖注：。表示(biosh)為成螨第49頁/共61頁第五十頁，共62頁。葉片殘效法此法適用于測定葉片殘效法此法適用于測定卵、若螨及背部剛毛卵、若螨及背部剛毛(gngmo)過長的雌成螨（不易用浸玻片過長的雌成螨（不易用浸玻片法）。法）。 1 在直徑為9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)放入保溫的

19、葉片2 在葉片上接20頭雌成雌成螨，讓其在葉片上產(chǎn)卵(chn lun)，24h后移去成螨，保留螨卵。3 將待測藥劑用水稀釋成5個系列濃度第50頁/共61頁第五十一頁，共62頁。4 將有螨卵的葉片在待測藥液中浸5s，每一藥液濃度重復5次，對照用清水處理。5 將培養(yǎng)皿保持在22，相對濕度(xingdu shd)95恒溫箱內(nèi)，每天觀察記載卵的孵化數(shù)及若螨存活數(shù)，直至對照組全部孵化成若螨。6 計算藥劑各濃度的殺卵或殺死若蟲的效果。求出藥劑殺卵或若蟲的毒方程及LC50。第51頁/共61頁第五十二頁，共62頁。殺蟲劑田間藥效(yo xio)試驗第52頁/共61頁第五十三頁，共62頁。 處理組死亡率對照組死亡率校正死亡率（%）1對照組死亡率X100注意：自然(zrn)死亡在20 以內(nèi)，可以用上面的公式計算，否則不行；自然(zrn)死亡在5以內(nèi)，不必校正死亡率。第53頁/共61頁