殺蟲(chóng)劑生物測(cè)定技術(shù)學(xué)習(xí)教案

1、殺蟲(chóng)劑生物測(cè)定技術(shù)殺蟲(chóng)劑生物測(cè)定技術(shù)(jsh)第一頁(yè)，共62頁(yè)。一、標(biāo)準(zhǔn)(biozhn)試蟲(chóng) 標(biāo)準(zhǔn)試蟲(chóng)是指數(shù)種被普遍(pbin)采用的具有一定代表性和經(jīng)濟(jì)意義及耐藥能力較穩(wěn)定而均勻的昆蟲(chóng)群體。標(biāo)準(zhǔn)試蟲(chóng)的大量供應(yīng)與質(zhì)量均勻是影響生物測(cè)定結(jié)果正確、穩(wěn)定與可靠的最基本因子，同時(shí)也是保證順利地開(kāi)展和完成生物測(cè)定最基本的條件之一。 第1頁(yè)/共61頁(yè)第二頁(yè)，共62頁(yè)。（1）粘蟲(chóng)（Leucania separate Walker），代表鱗翅目咀嚼式口器食葉性害蟲(chóng)。（可人工飼養(yǎng)(syng)）（2）玉米螟（Ostrinia nubilalis），代表為害雜糧作物的鉆蛀性害蟲(chóng)。（可人工飼養(yǎng)(syng)）（3）二化

2、螟（Chilo suppressalis）,代表鉆蛀性水稻害蟲(chóng)。（可人工飼養(yǎng)(syng)）常用(chn yn)的供試?yán)ハx(chóng)有：第2頁(yè)/共61頁(yè)第三頁(yè)，共62頁(yè)。（4）還有三化螟、棉鈴蟲(chóng)、地老虎農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)(hichng)等。（5）衛(wèi)生害蟲(chóng)(hichng)（如蚊、蠅類）（6）倉(cāng)庫(kù)害蟲(chóng)(hichng)（米象、赤擬谷盜等）（7）刺吸性害蟲(chóng)(hichng)（蚜螨類）第3頁(yè)/共61頁(yè)第四頁(yè)，共62頁(yè)。供試?yán)ハx(chóng)供試?yán)ハx(chóng)(knchng)(knchng)的要求的要求第4頁(yè)/共61頁(yè)第五頁(yè)，共62頁(yè)。二、殺蟲(chóng)劑生物(shngw)測(cè)定方法 （1）胃毒作用(zuyng)（2）觸殺作用(zuyng)（3）熏蒸作用(zuyn

3、g)（4）內(nèi)吸作用(zuyng) 第5頁(yè)/共61頁(yè)第六頁(yè)，共62頁(yè)。u夾毒葉片夾毒葉片(ypin)(ypin)法法u液滴飼喂法液滴飼喂法 u口腔注射法口腔注射法 胃毒作用胃毒作用(zuyng)(zuyng)（stomach actionstomach action）的測(cè)定方法的測(cè)定方法 第6頁(yè)/共61頁(yè)第七頁(yè)，共62頁(yè)。 葉片夾毒法適合于植食性、取食量大的咀嚼式口器(kuq)的昆蟲(chóng)，如鱗翅目幼蟲(chóng)、蝗蟲(chóng)等。其基本原理是用2張葉片，中間均勻地分布一層殺蟲(chóng)藥劑，飼喂試蟲(chóng)，按吞食葉片的面積計(jì)算吞食藥量。夾毒葉片夾毒葉片(ypin)法（法（sandwich method）第7頁(yè)/共61頁(yè)第八頁(yè)，共62頁(yè)

4、。對(duì)于舐吸式口器的昆蟲(chóng)(knchng)不宜用夾毒葉片法，如家蠅、果蠅、蜜蜂等昆蟲(chóng)(knchng)喜歡食糖液，可將一定量的殺蟲(chóng)劑加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.0010.01ml），直接飼喂昆蟲(chóng)(knchng)。液滴飼喂液滴飼喂(s wi)法法（Feeding of measured drops）第8頁(yè)/共61頁(yè)第九頁(yè)，共62頁(yè)。 一般適用個(gè)體較大的咀嚼式昆蟲(chóng)，如家蠶，鱗翅目幼蟲(chóng)等，處理時(shí)，將藥劑溶解后用微量注射器或手細(xì)管點(diǎn)滴定量的藥液注入試蟲(chóng)口器中，昆蟲(chóng)吞食藥液后，轉(zhuǎn)入放有新鮮飼料的容器中培養(yǎng)觀察(gunch)。這種方法由于從口腔注入藥液時(shí)易刺破口腔內(nèi)軟組織，技術(shù)難以掌握。因

5、此，應(yīng)用較少?？谇豢谇?kuqing)注射法注射法第9頁(yè)/共61頁(yè)第十頁(yè)，共62頁(yè)。觸殺作用觸殺作用(zuyng)（contact action）測(cè)定方法測(cè)定方法u點(diǎn)滴法點(diǎn)滴法u藥膜法或殘膜法藥膜法或殘膜法u浸液法浸液法第10頁(yè)/共61頁(yè)第十一頁(yè)，共62頁(yè)。 室內(nèi)(sh ni)定量測(cè)定觸殺毒力最常用的方法。在測(cè)定觸殺毒力時(shí)，應(yīng)盡量避免藥劑從口器或氣孔進(jìn)入蟲(chóng)體。直接將藥液點(diǎn)滴到昆蟲(chóng)的某一部位。多為幼蟲(chóng)的前胸背板，溶劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁上形成藥膜而侵入體內(nèi)。點(diǎn)滴法點(diǎn)滴法第11頁(yè)/共61頁(yè)第十二頁(yè)，共62頁(yè)。 用噴霧法及噴粉法將藥劑定量地分布于一定表面上，如濾紙、玻璃容器內(nèi)壁及植物葉片等而形成一層

6、均勻的藥膜。使昆蟲(chóng)(knchng)在藥膜上接觸一定時(shí)間（424h），檢查擊倒率或死亡率。求出藥劑對(duì)試蟲(chóng)的毒力。藥膜法或殘膜法藥膜法或殘膜法第12頁(yè)/共61頁(yè)第十三頁(yè)，共62頁(yè)。 對(duì)于水生昆蟲(chóng)（蚊幼蟲(chóng)、螨類和蚜蟲(chóng)）將藥劑配成57個(gè)不同濃度有藥液，摘取有一定數(shù)量蚜蟲(chóng)的豆苗(du mio)葉片，在不同藥液中浸35s，取出后，用吸水紙吸去多余的藥液，統(tǒng)計(jì)葉片上的蚜蟲(chóng)數(shù)量，對(duì)照用清水處理。保濕24h，檢查蚜蟲(chóng)的死亡數(shù)，計(jì)算死亡率及校正死亡率，求出LC50。浸液法第13頁(yè)/共61頁(yè)第十四頁(yè)，共62頁(yè)。 某些藥劑有內(nèi)吸性如許多(xdu)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)劑可以通過(guò)植株的根、莖、葉等部位吸收到植株的內(nèi)部

7、，隨著植物體液在體內(nèi)的傳導(dǎo)，當(dāng)害蟲(chóng)取食或刺吸植物時(shí)，藥劑也隨之進(jìn)入害蟲(chóng)的體內(nèi)并將其殺死。內(nèi)吸作用（內(nèi)吸作用（Systemic action）的試驗(yàn)）的試驗(yàn)(shyn)方方法法第14頁(yè)/共61頁(yè)第十五頁(yè)，共62頁(yè)。 內(nèi)吸殺蟲(chóng)劑毒力的測(cè)定方法分為直接測(cè)定法和間接測(cè)定法2種。直接法包括(boku)莖或葉的局部涂藥、根際施藥及種子處理等。間接法是用處理后的植物，取其葉片研磨成為水劑，加在水中，測(cè)定對(duì)水生昆蟲(chóng)的毒力。第15頁(yè)/共61頁(yè)第十六頁(yè)，共62頁(yè)。定義殺蟲(chóng)藥劑以氣體的方式通過(guò)害定義殺蟲(chóng)藥劑以氣體的方式通過(guò)害蟲(chóng)的呼吸系統(tǒng)進(jìn)入蟲(chóng)體，而起到毒殺的作蟲(chóng)的呼吸系統(tǒng)進(jìn)入蟲(chóng)體，而起到毒殺的作用稱熏蒸作用。用稱熏

8、蒸作用。目的熏蒸作用毒力的測(cè)定的目的主目的熏蒸作用毒力的測(cè)定的目的主要有要有2個(gè)：一是用鑒別殺蟲(chóng)劑有無(wú)熏蒸作個(gè)：一是用鑒別殺蟲(chóng)劑有無(wú)熏蒸作用；二是測(cè)定熏蒸劑的殺蟲(chóng)毒力。用；二是測(cè)定熏蒸劑的殺蟲(chóng)毒力。注意要求在一個(gè)密閉的條件下進(jìn)行注意要求在一個(gè)密閉的條件下進(jìn)行(jnxng)，且藥劑不與試蟲(chóng)接觸。，且藥劑不與試蟲(chóng)接觸。熏蒸熏蒸(xnzhng)作用（作用（fumigation action）測(cè)定方法測(cè)定方法第16頁(yè)/共61頁(yè)第十七頁(yè)，共62頁(yè)。毒力的表示方法(fngf)及計(jì)算致死中量（LD50：Median lethal dose）或致死中濃度（LC50：Median lethal concentr

9、ation）：藥劑(yoj)殺死某種生物群體50所需的劑量（LD50）或濃度（LC50）。第17頁(yè)/共61頁(yè)第十八頁(yè)，共62頁(yè)。結(jié)果檢查結(jié)果檢查(jinch)(jinch)與與LD50LD50計(jì)算計(jì)算u胃毒作用(zuyng)u觸殺作用(zuyng)第18頁(yè)/共61頁(yè)第十九頁(yè)，共62頁(yè)。以?shī)A毒葉片法為例以?shī)A毒葉片法為例 昆蟲(chóng)取食后放在干凈容器中，加入新鮮的昆蟲(chóng)取食后放在干凈容器中，加入新鮮的植物葉片，在植物葉片，在2472h后檢查死亡率。由于后檢查死亡率。由于(yuy)各昆蟲(chóng)的取食量不同，因此必須單各昆蟲(chóng)的取食量不同，因此必須單獨(dú)觀察記錄。獨(dú)觀察記錄。第19頁(yè)/共61頁(yè)第二十頁(yè)，共62頁(yè)。根據(jù)取

10、食面積、單位面積上的著藥量（g/g），根據(jù)單位體重受藥量，由小至大順序排列，由于在取食量較小時(shí)試蟲(chóng)無(wú)死亡；隨著取食量加大，出現(xiàn)死、活均有出現(xiàn)的劑量范圍；再加大取食量，試蟲(chóng)全部死亡。這三種表現(xiàn)自然分成三組：（1）生存組（2）生死組（3）死亡組。如實(shí)驗(yàn)(shyn)中三組數(shù)值均出現(xiàn)，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)(shyn)成功，如缺其中一組，應(yīng)重做。生存組和死亡組是劃分生死組（中間組）界線的。第20頁(yè)/共61頁(yè)第二十一頁(yè)，共62頁(yè)。 將中間組死蟲(chóng)的每項(xiàng)單位(dnwi)體重藥量累加，除以總死蟲(chóng)數(shù)得A；中間組活蟲(chóng)的每項(xiàng)單位(dnwi)體重相加除以活蟲(chóng)數(shù)得B。將AB除2即得致死中量（g/g），計(jì)算公式為 致死中量（LD50

11、）（AB）/2第21頁(yè)/共61頁(yè)第二十二頁(yè)，共62頁(yè)。 供試藥劑設(shè)計(jì)56個(gè)濃度(nngd)梯度，每個(gè)濃度(nngd)為一個(gè)處理，每個(gè)處理4060頭，重復(fù)46次，每個(gè)重復(fù)10頭。 用微量點(diǎn)樣器在供試?yán)ハx(chóng)的前胸背板上點(diǎn)一定體積的藥量，2448h后檢查死亡蟲(chóng)數(shù)。統(tǒng)計(jì)死亡率，計(jì)算LD50。 觸殺毒(sh d)力結(jié)果檢查第22頁(yè)/共61頁(yè)第二十三頁(yè)，共62頁(yè)。LD50（LC50）的計(jì)算(j sun)死亡(swng)率（%）死蟲(chóng)數(shù)/供試蟲(chóng)數(shù)X100% 校正死亡(swng)率（%）處理組死亡(swng)率對(duì)照組死亡(swng)度/100對(duì)照組死亡(swng)率X100 單位體重受藥量（g/g）處理濃度（pp

12、m）X點(diǎn)滴藥量(l)/試蟲(chóng)平均體重(g)X100第23頁(yè)/共61頁(yè)第二十四頁(yè)，共62頁(yè)。LD50的計(jì)算方法u作圖法作圖法uExcelExcel法法u最小最小2 2乘法乘法(chngf)(chngf)第24頁(yè)/共61頁(yè)第二十五頁(yè)，共62頁(yè)。 例：用點(diǎn)滴法測(cè)定辛硫磷對(duì)玉米螟5齡幼蟲(chóng)的毒力，試蟲(chóng)平均體重為0.046g/頭，每頭試蟲(chóng)點(diǎn)滴0.8l藥劑丙酮液，48h檢查(jinch)試蟲(chóng)死亡率，結(jié)果如表1-1。試計(jì)算辛硫磷對(duì)玉米螟5齡幼蟲(chóng)的LD50。第25頁(yè)/共61頁(yè)第二十六頁(yè)，共62頁(yè)。第26頁(yè)/共61頁(yè)第二十七頁(yè)，共62頁(yè)。第27頁(yè)/共61頁(yè)第二十八頁(yè)，共62頁(yè)。第28頁(yè)/共61頁(yè)第二十九頁(yè)，共62頁(yè)

13、。第29頁(yè)/共61頁(yè)第三十頁(yè)，共62頁(yè)。第30頁(yè)/共61頁(yè)第三十一頁(yè)，共62頁(yè)。第31頁(yè)/共61頁(yè)第三十二頁(yè)，共62頁(yè)。第32頁(yè)/共61頁(yè)第三十三頁(yè)，共62頁(yè)。第33頁(yè)/共61頁(yè)第三十四頁(yè)，共62頁(yè)。第34頁(yè)/共61頁(yè)第三十五頁(yè)，共62頁(yè)。第35頁(yè)/共61頁(yè)第三十六頁(yè)，共62頁(yè)。第36頁(yè)/共61頁(yè)第三十七頁(yè)，共62頁(yè)。按INV7顯示(xinsh)的數(shù)字為a值按INV8顯示(xinsh)的數(shù)字為b值按INV9顯示(xinsh)的數(shù)字為r值已知 a b ，就可寫出回歸方程y=a+bx第37頁(yè)/共61頁(yè)第三十八頁(yè)，共62頁(yè)。求LC50或LD50、LC90、LC95 求LC50 ，按5INVYX；再按

14、INVLog，顯示(xinsh)的數(shù)字為L(zhǎng)C50求LC90按6.2816 INV Y X ；再按INVLog，顯示(xinsh)的數(shù)字為L(zhǎng)C90 LC95 按6.6449 INV Y X ；再按INVLog，顯示(xinsh)的數(shù)字為L(zhǎng)C95 第38頁(yè)/共61頁(yè)第三十九頁(yè)，共62頁(yè)。第39頁(yè)/共61頁(yè)第四十頁(yè)，共62頁(yè)。（1）死亡(swng)率的校正：一般情況，若有對(duì)照死亡(swng)，需要校正，若對(duì)照死亡(swng)超過(guò)20%，應(yīng)重做；如對(duì)照死亡(swng)率小于5%時(shí)，也可不必校正。（2）死亡(swng)率的范圍：一般，至少有4個(gè)濃度處理試蟲(chóng)的死亡(swng)率應(yīng)在1090%。這樣計(jì)算得到

15、的LD50更可靠。 （3）相關(guān)系數(shù)R：一般應(yīng)在0.9以上。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)第40頁(yè)/共61頁(yè)第四十一頁(yè)，共62頁(yè)。葉片(ypin)浸液法玻片浸液法葉片(ypin)殘毒法 殺螨劑的毒力測(cè)定方法第41頁(yè)/共61頁(yè)第四十二頁(yè)，共62頁(yè)。1 用盆栽豆苗（大豆苗）繁殖(fnzh)葉螨（如棉葉螨），測(cè)定時(shí)用成螨，且發(fā)育時(shí)間（日齡）一致。2 將成螨轉(zhuǎn)到無(wú)蟲(chóng)豆苗上，每株40頭左右。葉片(ypin)浸液法第42頁(yè)/共61頁(yè)第四十三頁(yè)，共62頁(yè)。3 將待測(cè)藥劑（乳油或可濕性粉劑）用水稀釋成系列濃度，每一濃度可配4050ml，置于小燒杯中。4 將接上螨的豆苗浸入藥液6s，取出后用吸水紙吸去多余(duy)藥液。處理時(shí)

16、先用清水處理對(duì)照 (CK)，再由低濃度至高濃度處理，每一濃度重復(fù)45次。第43頁(yè)/共61頁(yè)第四十四頁(yè)，共62頁(yè)。5 處理(chl)后豆苗置于25恒溫箱中，保持24h后檢查死亡率。為了防止紅蜘蛛逃逸，可在葉柄基部涂上一圈凡士林。 6 將藥劑濃度取對(duì)數(shù)值，24h校正死亡率（或減退率）取機(jī)率值，用統(tǒng)計(jì)分析法求出毒力回歸式Y(jié)a+bx及LC50值。第44頁(yè)/共61頁(yè)第四十五頁(yè)，共62頁(yè)。 本法適于測(cè)定各種雌成螨，飼養(yǎng)時(shí)必須將螨種鑒別、純化，使之為單一(dny)種類。以蘋果實(shí)生苗飼養(yǎng)山楂紅蜘蛛，以柑桔苗飼養(yǎng)柑桔紅蜘蛛，螨的齡期應(yīng)一致。浸玻片法第45頁(yè)/共61頁(yè)第四十六頁(yè)，共62頁(yè)。1將雙面尼龍膠帶剪成2c

17、m長(zhǎng)，貼在常用的載玻片的一端。2用零毫毛筆(mob)挑起34日齡的雌成螨，將其背部粘在膠帶上，每行10頭，粘23行或用毛筆(mob)將雌成螨集中在一起。然后將貼在膠帶的玻片的膠面部分輕輕地壓向成螨背部，以粘著為準(zhǔn)，再用毛筆(mob)將重疊或不規(guī)則的或死亡的挑去，使其成行保留，這樣比較省時(shí)也省工。第46頁(yè)/共61頁(yè)第四十七頁(yè)，共62頁(yè)。3用水將藥劑配成系列濃度，置于小燒杯中，用手持紙片無(wú)螨的一端(ydun)，將粘有螨的一端(ydun)置藥液中浸5秒鐘，取出后用吸水紙吸去多余藥液。對(duì)照用清水處理。各處理重復(fù)4次。 第47頁(yè)/共61頁(yè)第四十八頁(yè)，共62頁(yè)。4取一白瓷盤，盤底鋪厚2cm的海綿，其上鋪一

18、塊略小一點(diǎn)的藍(lán)布，再鋪一層塑料薄膜，然后(rnhu)加蒸餾水至藍(lán)布。將粘有螨的玻片平放在盤中，再用紗布罩住，置25，相對(duì)濕度85左右溫室中，經(jīng)24h檢查死亡率。用毛筆尖輕輕觸動(dòng)螨足，以不動(dòng)者為死亡。求出毒力回歸式及LC50值。 第48頁(yè)/共61頁(yè)第四十九頁(yè)，共62頁(yè)。編號(hào)(bin ho)濃度名稱日期。浸玻片法示意圖浸玻片法示意圖注：。表示(biosh)為成螨第49頁(yè)/共61頁(yè)第五十頁(yè)，共62頁(yè)。葉片殘效法此法適用于測(cè)定葉片殘效法此法適用于測(cè)定卵、若螨及背部剛毛卵、若螨及背部剛毛(gngmo)過(guò)長(zhǎng)的雌成螨（不易用浸玻片過(guò)長(zhǎng)的雌成螨（不易用浸玻片法）。法）。 1 在直徑為9cm的培養(yǎng)皿內(nèi)放入保溫的

19、葉片2 在葉片上接20頭雌成雌成螨，讓其在葉片上產(chǎn)卵(chn lun)，24h后移去成螨，保留螨卵。3 將待測(cè)藥劑用水稀釋成5個(gè)系列濃度第50頁(yè)/共61頁(yè)第五十一頁(yè)，共62頁(yè)。4 將有螨卵的葉片在待測(cè)藥液中浸5s，每一藥液濃度重復(fù)5次，對(duì)照用清水處理。5 將培養(yǎng)皿保持在22，相對(duì)濕度(xingdu shd)95恒溫箱內(nèi)，每天觀察記載卵的孵化數(shù)及若螨存活數(shù)，直至對(duì)照組全部孵化成若螨。6 計(jì)算藥劑各濃度的殺卵或殺死若蟲(chóng)的效果。求出藥劑殺卵或若蟲(chóng)的毒方程及LC50。第51頁(yè)/共61頁(yè)第五十二頁(yè)，共62頁(yè)。殺蟲(chóng)劑田間藥效(yo xio)試驗(yàn)第52頁(yè)/共61頁(yè)第五十三頁(yè)，共62頁(yè)。 處理組死亡率對(duì)照組死亡率校正死亡率（%）1對(duì)照組死亡率X100注意：自然(zrn)死亡在20 以內(nèi)，可以用上面的公式計(jì)算，否則不行；自然(zrn)死亡在5以內(nèi)，不必校正死亡率。第53頁(yè)/共61頁(yè)