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文檔簡介

1、實驗二土壤中好氣性細菌、真菌土壤中好氣性細菌、真菌及放線菌的分離與計數(shù)及放線菌的分離與計數(shù) 一、目的與要求：1、了解微生物的分離與純化原理。2、學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)。3、了解活菌計數(shù)法要點。 二、實驗原理 微生物常以群落狀態(tài)存在，這種群落往往是不同種類微生物的混合體。研究某種微生物的特性或者要大量培養(yǎng)和使用某種微生物，必須從這些混雜的微生物群落中獲得純培養(yǎng)，這種獲得純培養(yǎng)的方法稱為微生物的分離與純化。 細菌數(shù)量大于放線菌，真菌量最少 三、操作步驟 1 樣品稀釋液的制備 準確稱取待測土壤10g，放入裝有90mL無菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手搖勻，使微生物細胞分散，靜置約20-30s，

2、即10-1稀釋液；再用移液槍吸取10-1稀釋液1mL裝入有9mL無菌水的試管中，依次類推，連續(xù)稀釋，制成10-4 、10-5、 10-6 、10-7等一系列稀釋度菌液，供平板接種用。10g 2 平板接種培養(yǎng) （1）稀釋倒平板法（pour plate method） 無菌吸管按無菌操作要求吸取不同稀釋液1mL，與已熔化并冷卻至50左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過的培養(yǎng)皿中。 （2）涂布平板法（spread plate method） 先將已熔化的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量的某一稀釋度樣品懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃棒將菌液均勻分散至整個平板表面。（3）平板

3、劃線分離法（streak plate method）用接種環(huán)沾取少許待分離的材料，在曲菌平板表面進行平行或者扇形連續(xù)劃線分離。 （1）稀釋倒平板法 （2）涂抹平板計數(shù)法 細菌培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基真菌培養(yǎng)基：馬（Martin）孟加拉紅-鏈霉素培養(yǎng)基1234（3）劃線法無菌操作三要點無菌操作三要點 靜靜 使無菌操作室空氣流動盡可降低 關(guān)好門窗關(guān)好門窗, 避避免空免空氣流動過快氣流動過快; 不宜不宜四四處走動處走動; 操作者不講話操作者不講話,他人也不要在他人也不要在操操作處講話作處講話. 快 操作熟煉, 動作快速, 使接種器具暴露在 空氣中的時間縮短. 輕輕 打開或蓋上瓶口的動作要輕; 接種操作動作要輕.稀釋平板計數(shù)法稀釋平板計數(shù)法 將實驗

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