第九章基因突變

1、第九章第九章 基因突變基因突變第一節(jié)第一節(jié) 寡核苷酸介導(dǎo)的基因突變寡核苷酸介導(dǎo)的基因突變第二節(jié)第二節(jié) 盒式突變法盒式突變法第三節(jié)第三節(jié) 利用利用PCR進(jìn)行進(jìn)行DNA序列的突變序列的突變第四節(jié)第四節(jié) 隨機(jī)突變隨機(jī)突變基因突變是研究基因表達(dá)調(diào)控和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能基因突變是研究基因表達(dá)調(diào)控和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能的重要方法的重要方法 位點(diǎn)特異性突變位點(diǎn)特異性突變 寡核苷酸介導(dǎo)的基因突變；盒式突變；寡核苷酸介導(dǎo)的基因突變；盒式突變；PCR 隨機(jī)突變隨機(jī)突變第一節(jié)第一節(jié) 寡核苷酸介導(dǎo)的基因突變寡核苷酸介導(dǎo)的基因突變步驟：步驟：（1）正鏈）正鏈DNA的合成的合成（2）突變引物的合成）突變引物的合成 17-19個(gè)

2、個(gè)特異性特異性避免自身的二級(jí)結(jié)構(gòu)避免自身的二級(jí)結(jié)構(gòu)位置盡量在中間位置盡量在中間（3）異源雙鏈）異源雙鏈DNA分子的制備分子的制備（4）轉(zhuǎn)染）轉(zhuǎn)染（5）突變體的篩選）突變體的篩選（6）突變體的鑒定（測序）突變體的鑒定（測序）1、Kunkel突變法突變法 dUTP dUMP dUTP酶酶 dut- dUTP庫庫 尿嘧啶尿嘧啶N糖基化酶糖基化酶 ung- 胸腺嘧啶殘基被尿嘧啶所取代胸腺嘧啶殘基被尿嘧啶所取代利用利用Kunkel法，以法，以M13噬菌體噬菌體DNA為載體進(jìn)行為載體進(jìn)行寡核苷酸介導(dǎo)的位點(diǎn)特異性突變寡核苷酸介導(dǎo)的位點(diǎn)特異性突變2、硫代磷酸硫代磷酸寡核苷酸介導(dǎo)的突變寡核苷酸介導(dǎo)的突變 某些限

3、制性內(nèi)切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷某些限制性內(nèi)切酶不能水解硫代磷酸（酯）核苷酸間連鍵酸間連鍵硫代磷酸寡核苷酸介導(dǎo)的突變硫代磷酸寡核苷酸介導(dǎo)的突變第二節(jié)第二節(jié) 盒式突變法盒式突變法第三節(jié)第三節(jié) 利用利用PCR進(jìn)行進(jìn)行DNA序列的突變序列的突變1、在基因的、在基因的5或或3末端產(chǎn)生突變末端產(chǎn)生突變2、重疊延伸重疊延伸和基因突變和基因突變（1）取代突變）取代突變（2）插入突變）插入突變（3）缺失突變）缺失突變3、產(chǎn)生分子嵌合體、產(chǎn)生分子嵌合體重疊延伸重疊延伸PCR對(duì)對(duì)DNA片段進(jìn)行剪接的原理圖片段進(jìn)行剪接的原理圖利用雙側(cè)重疊延伸利用雙側(cè)重疊延伸PCR，產(chǎn)生取代突變，產(chǎn)生取代突變利用雙側(cè)重疊延伸利用雙側(cè)重疊延伸PCR，產(chǎn)生插入突變，產(chǎn)生插入突變利用雙側(cè)重疊延伸利用雙側(cè)重疊延伸PCR，產(chǎn)生缺失突變，產(chǎn)生缺失突變雙側(cè)重疊延伸及雙側(cè)重疊延伸及DNA分子嵌合體形成分子嵌合體形成單側(cè)重疊延伸及單側(cè)重疊延伸及DNA分子嵌合體形成分子嵌合體形成第四節(jié)第四節(jié) 隨機(jī)突變隨機(jī)突變1、化學(xué)、物理方法、化學(xué)、物理方法亞硝酸、亞硫酸鹽、羥胺、肼及弱酸水解亞硝酸、亞硫酸鹽、羥胺、肼及弱酸水解2、酶法、酶法3、PCR法法改變