對(duì)分子診斷設(shè)備的要求及應(yīng)用中的問(wèn)題(發(fā)送版)

1、ISO15189ISO15189認(rèn)可認(rèn)可對(duì)對(duì)分子診斷分子診斷設(shè)備設(shè)備的要求及的要求及應(yīng)用中的應(yīng)用中的問(wèn)題問(wèn)題沈佐君沈佐君主要內(nèi)容一、開(kāi)展分子診斷檢測(cè)的國(guó)家及行業(yè)相關(guān)規(guī)定二、開(kāi)展分子診斷檢測(cè)涉及的主要設(shè)備三、ISO 15189在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明簡(jiǎn)介四、ISO 15189對(duì)分子診斷設(shè)備的性能要求五、ISO 15189對(duì)分子診斷檢測(cè)的系統(tǒng)完整性要求六、分子診斷設(shè)備制造商在幫組用戶通過(guò) ISO 15189認(rèn)可過(guò)程中應(yīng)注意的問(wèn)題第一部分開(kāi)展分子診斷檢測(cè)的國(guó)家及行業(yè)相關(guān)規(guī)定 分子診斷的基本概念分子診斷的基本概念 基因體外擴(kuò)增檢驗(yàn)，通常稱(chēng)為基因體外擴(kuò)增檢驗(yàn)，通常稱(chēng)為PCR檢驗(yàn)檢驗(yàn) 2002-2009年

2、年:該檢驗(yàn)項(xiàng)目是目前我國(guó)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目該檢驗(yàn)項(xiàng)目是目前我國(guó)臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目中唯一一項(xiàng)需要通過(guò)衛(wèi)生部或省級(jí)臨床檢驗(yàn)中心中唯一一項(xiàng)需要通過(guò)衛(wèi)生部或省級(jí)臨床檢驗(yàn)中心現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收合格方可開(kāi)展臨床檢驗(yàn)的技術(shù)準(zhǔn)入現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)驗(yàn)收合格方可開(kāi)展臨床檢驗(yàn)的技術(shù)準(zhǔn)入項(xiàng)目。項(xiàng)目。 2009年年5月月1日后：日后：衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)醫(yī)療技術(shù)臨醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法床應(yīng)用管理辦法的通知的通知（衛(wèi)醫(yī)政發(fā)衛(wèi)醫(yī)政發(fā)200918號(hào)號(hào)）和）和醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2010194號(hào)）號(hào)）。醫(yī)療技術(shù)分為三類(lèi)：醫(yī)療技術(shù)分為三類(lèi)：第一類(lèi)第一類(lèi)：醫(yī)療技術(shù)是指安

3、全性、有效性確切，醫(yī)療機(jī)構(gòu)通醫(yī)療技術(shù)是指安全性、有效性確切，醫(yī)療機(jī)構(gòu)通過(guò)常規(guī)管理在臨床應(yīng)用中能確保其安全性、有效性的技術(shù)。過(guò)常規(guī)管理在臨床應(yīng)用中能確保其安全性、有效性的技術(shù)。第二類(lèi)第二類(lèi)：醫(yī)療技術(shù)是指安全性、有效性確切，涉及一定倫醫(yī)療技術(shù)是指安全性、有效性確切，涉及一定倫理問(wèn)題或者風(fēng)險(xiǎn)較高，衛(wèi)生行政部門(mén)應(yīng)當(dāng)加以控制管理的理問(wèn)題或者風(fēng)險(xiǎn)較高，衛(wèi)生行政部門(mén)應(yīng)當(dāng)加以控制管理的醫(yī)療技術(shù)。醫(yī)療技術(shù)。（如（如PCR）第三類(lèi)第三類(lèi)：醫(yī)療技術(shù)是指具有下列情形之一，需要衛(wèi)生行政醫(yī)療技術(shù)是指具有下列情形之一，需要衛(wèi)生行政部門(mén)加以嚴(yán)格控制管理的醫(yī)療技術(shù)：（部門(mén)加以嚴(yán)格控制管理的醫(yī)療技術(shù)：（1）涉及重大倫理）涉及重大

4、倫理問(wèn)題；（問(wèn)題；（2）高風(fēng)險(xiǎn)；（）高風(fēng)險(xiǎn)；（3）安全性、有效性尚需經(jīng)規(guī)范的）安全性、有效性尚需經(jīng)規(guī)范的臨床試驗(yàn)研究進(jìn)一步驗(yàn)證；（臨床試驗(yàn)研究進(jìn)一步驗(yàn)證；（4）需要使用稀缺資源；（）需要使用稀缺資源；（5）衛(wèi)生部規(guī)定的其他需要特殊管理的醫(yī)療技術(shù)。衛(wèi)生部規(guī)定的其他需要特殊管理的醫(yī)療技術(shù)。（共（共19項(xiàng)，項(xiàng)，第第8項(xiàng)項(xiàng)基因芯片診斷技術(shù)基因芯片診斷技術(shù)，現(xiàn)劃為第二類(lèi)，現(xiàn)劃為第二類(lèi)）衛(wèi)生部負(fù)責(zé)第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)的臨床應(yīng)用管理工作。衛(wèi)生部負(fù)責(zé)第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)的臨床應(yīng)用管理工作。第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)目錄由衛(wèi)生部制定公布，并根據(jù)臨床第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)目錄由衛(wèi)生部制定公布，并根據(jù)臨床應(yīng)用實(shí)際情況，予以調(diào)整。應(yīng)用實(shí)際情況，予以

5、調(diào)整。省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)負(fù)責(zé)第二類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)負(fù)責(zé)第二類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理工作。工作。第二類(lèi)醫(yī)療技術(shù)目錄由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)根據(jù)本轄區(qū)第二類(lèi)醫(yī)療技術(shù)目錄由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)根據(jù)本轄區(qū)情況制定并公布，報(bào)衛(wèi)生部備案。情況制定并公布，報(bào)衛(wèi)生部備案。醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用 能力審核能力審核屬于第三類(lèi)的醫(yī)療技術(shù)首次應(yīng)用于臨床前，必須經(jīng)過(guò)衛(wèi)生部組屬于第三類(lèi)的醫(yī)療技術(shù)首次應(yīng)用于臨床前，必須經(jīng)過(guò)衛(wèi)生部組織的安全性、有效性臨床試驗(yàn)研究、論證及倫理審查。織的安全性、有效性臨床試驗(yàn)研究、論證及倫理審查。第二類(lèi)醫(yī)療技術(shù)和第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用前實(shí)行第三方技術(shù)第二類(lèi)醫(yī)療技術(shù)和第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)

6、臨床應(yīng)用前實(shí)行第三方技術(shù)審核制度。審核制度。對(duì)醫(yī)務(wù)人員開(kāi)展第一類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用的能力技術(shù)審核，由對(duì)醫(yī)務(wù)人員開(kāi)展第一類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用的能力技術(shù)審核，由醫(yī)療機(jī)構(gòu)自行組織實(shí)施，也可以由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)規(guī)定。醫(yī)療機(jī)構(gòu)自行組織實(shí)施，也可以由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)規(guī)定。衛(wèi)生部指定或者組建的機(jī)構(gòu)、組織（以下簡(jiǎn)稱(chēng)技術(shù)審核機(jī)構(gòu)）衛(wèi)生部指定或者組建的機(jī)構(gòu)、組織（以下簡(jiǎn)稱(chēng)技術(shù)審核機(jī)構(gòu)）負(fù)責(zé)第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用能力技術(shù)審核工作負(fù)責(zé)第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用能力技術(shù)審核工作（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院院、2.中華醫(yī)學(xué)會(huì)中華醫(yī)學(xué)會(huì)、3.中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)、4.中華醫(yī)師協(xié)會(huì)中華醫(yī)師協(xié)會(huì)、5.中華口腔醫(yī)學(xué)會(huì)中華口腔醫(yī)學(xué)

7、會(huì)）。省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)指定或者組建的技術(shù)審核機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)第二類(lèi)醫(yī)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)指定或者組建的技術(shù)審核機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)第二類(lèi)醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用能力技術(shù)審核工作。療技術(shù)臨床應(yīng)用能力技術(shù)審核工作。衛(wèi)生部可以委托省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)組織對(duì)指定的第三類(lèi)醫(yī)療技衛(wèi)生部可以委托省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)組織對(duì)指定的第三類(lèi)醫(yī)療技術(shù)進(jìn)行臨床應(yīng)用能力技術(shù)審核工作。術(shù)進(jìn)行臨床應(yīng)用能力技術(shù)審核工作。對(duì)開(kāi)展分子診斷檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的要求：對(duì)開(kāi)展分子診斷檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的要求： 實(shí)驗(yàn)室流程布局實(shí)驗(yàn)室流程布局 人員上崗證書(shū)人員上崗證書(shū) 實(shí)驗(yàn)室的管理（參照實(shí)驗(yàn)室的管理（參照ISO 17025，10章章38款）款） 規(guī)范的應(yīng)該是：實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收合格證書(shū)規(guī)范的應(yīng)該是：實(shí)驗(yàn)

8、室驗(yàn)收合格證書(shū)（技術(shù)（技術(shù)審核報(bào)告）審核報(bào)告）+衛(wèi)生行政部門(mén)的登記（診療科衛(wèi)生行政部門(mén)的登記（診療科目）目）第二部分開(kāi)展分子診斷檢測(cè)涉及的主要設(shè)備主要設(shè)備主要設(shè)備（5.5 檢驗(yàn)檢驗(yàn)過(guò)程）過(guò)程）1、核酸提取儀2、PCR （1）普通PCR儀 （2）實(shí)時(shí)熒光PCR儀 （3）液體芯片3、雜交儀4、基因芯片5、一體化/工作站6、測(cè)序儀輔助輔助設(shè)備（設(shè)備（5.2設(shè)施和設(shè)施和環(huán)境條件環(huán)境條件）1、加樣器2、金屬浴3、離心機(jī)4、冰箱5、生物安全柜6、UPS7、純水器（能除RNA酶）第三部分ISO15189在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明簡(jiǎn)介：5.2、5.3、5.5及附錄醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力

9、認(rèn)可準(zhǔn)則在在分子診斷分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明CNAS-CL3620142014年年4 4月月2121日第一次修訂，日第一次修訂，20142014年年1111月月1 1日實(shí)施日實(shí)施1 1 范圍范圍本文件規(guī)定了本文件規(guī)定了CNAS對(duì)分子診斷領(lǐng)域的認(rèn)可要求，包括：對(duì)分子診斷領(lǐng)域的認(rèn)可要求，包括：病原病原體核酸和人體基因等領(lǐng)域涉及的核酸擴(kuò)增試驗(yàn)、雜交試驗(yàn)體核酸和人體基因等領(lǐng)域涉及的核酸擴(kuò)增試驗(yàn)、雜交試驗(yàn)（包括解剖病理中的原位雜交試驗(yàn)）、核酸電泳分析等（包括解剖病理中的原位雜交試驗(yàn)）、核酸電泳分析等。 注：注：“分子診斷分子診斷”包括檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的包括檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的“分子檢驗(yàn)分子檢驗(yàn)”以以及

10、病理學(xué)檢查領(lǐng)域的及病理學(xué)檢查領(lǐng)域的“分子病理分子病理”。2 2 規(guī)范性引用文件規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用用文件僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改單）適用于本文件。文件，其最新版本（包括修改單）適用于本文件。GB/T 20468-2006 臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定室內(nèi)質(zhì)量控制指南臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定室內(nèi)質(zhì)量控制指南CNAS-RL02 能力驗(yàn)證規(guī)則能力驗(yàn)證規(guī)則CNSA-CL31 內(nèi)部校準(zhǔn)要求內(nèi)部校準(zhǔn)要求臨床技術(shù)操作規(guī)范臨床技術(shù)

11、操作規(guī)范病理學(xué)分冊(cè)病理學(xué)分冊(cè)醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則病理科建設(shè)與管理指南（試行），衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)病理科建設(shè)與管理指南（試行），衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)200931號(hào)號(hào)3 3 術(shù)語(yǔ)和定義術(shù)語(yǔ)和定義 標(biāo)本接收與處理：流程和標(biāo)本是否合格的要點(diǎn)標(biāo)本接收與處理：流程和標(biāo)本是否合格的要點(diǎn) 試劑耗材質(zhì)檢：為何要質(zhì)檢、如何做試劑耗材質(zhì)檢：為何要質(zhì)檢、如何做 核酸提?。涸砗筒僮骷夹g(shù)要領(lǐng)核酸提?。涸砗筒僮骷夹g(shù)要領(lǐng) 防污染：措施和意識(shí)防污染：措施和意識(shí) 質(zhì)量控制：程序和實(shí)際運(yùn)行情況、失控的分析處理質(zhì)量控制：程序和實(shí)際運(yùn)行情況、失控的分析處理 結(jié)果分析與判斷：結(jié)果審核、報(bào)告發(fā)放結(jié)

12、果分析與判斷：結(jié)果審核、報(bào)告發(fā)放評(píng)審中考核評(píng)審中考核的主要的主要內(nèi)容內(nèi)容5.2 5.2 設(shè)施和環(huán)境條件設(shè)施和環(huán)境條件 5.2.1 應(yīng)應(yīng)實(shí)施安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，如果設(shè)置了不同的控制區(qū)實(shí)施安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，如果設(shè)置了不同的控制區(qū)域，應(yīng)制定針對(duì)性的防護(hù)措施及合適的警告。域，應(yīng)制定針對(duì)性的防護(hù)措施及合適的警告。 5.2.2 涉及涉及基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室原則上分四個(gè)獨(dú)立的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室原則上分四個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)；樣品制備區(qū)；擴(kuò)增區(qū)；擴(kuò)增工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)；樣品制備區(qū)；擴(kuò)增區(qū)；擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。如使用自動(dòng)分析儀（擴(kuò)增產(chǎn)物閉管檢測(cè)），擴(kuò)產(chǎn)物分析區(qū)。如使用自動(dòng)分析儀（擴(kuò)增產(chǎn)物閉管檢測(cè)），擴(kuò)

13、增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。具體實(shí)驗(yàn)室分區(qū)應(yīng)依據(jù)其所增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。具體實(shí)驗(yàn)室分區(qū)應(yīng)依據(jù)其所使用的技術(shù)平臺(tái)及檢驗(yàn)項(xiàng)目和工作量而定使用的技術(shù)平臺(tái)及檢驗(yàn)項(xiàng)目和工作量而定。 上述每個(gè)區(qū)域應(yīng)有充足空間以保證： 樣品處置符合分析前、后樣品分區(qū)放置； 儀器放置符合維修和操作要求； 樣品制備區(qū)放置生物安全柜、離心機(jī)和冰箱等儀器設(shè)備樣品制備區(qū)放置生物安全柜、離心機(jī)和冰箱等儀器設(shè)備； 打印檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)交叉污染的控制。5.2 5.2 設(shè)施和環(huán)境條件設(shè)施和環(huán)境條件工作區(qū)域應(yīng)符合如下要求：工作區(qū)域應(yīng)符合如下要求： c）實(shí)驗(yàn)室各分區(qū)應(yīng)配置固定和移動(dòng)紫外線燈，波長(zhǎng)為254nm，照射時(shí)離實(shí)驗(yàn)臺(tái)的高度一般為6090

14、cm； e）樣品制備區(qū)應(yīng)配置二級(jí)生物安全柜和洗眼器，實(shí)驗(yàn)室附近應(yīng)有噴淋裝置。 所有分子病理實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)設(shè)置獨(dú)立的標(biāo)本前處理區(qū)，包括切片區(qū)和脫蠟區(qū)，用于組織切片、脫蠟、水化、染色等。脫蠟、水化及染色應(yīng)在通風(fēng)設(shè)施中進(jìn)行。5.2 5.2 設(shè)施和環(huán)境條件設(shè)施和環(huán)境條件 5.2.3用以保存臨床樣品和試劑的設(shè)施應(yīng)設(shè)置目標(biāo)溫度和允許范圍，并記錄。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有溫度失控時(shí)的處理措施并記錄。 5.2.6 不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。工作結(jié)束后應(yīng)立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔，必要時(shí)進(jìn)行消毒及去污染。 應(yīng)依據(jù)所用分析設(shè)備和實(shí)驗(yàn)過(guò)程的要求，制定環(huán)境溫濕度控制要求并記錄。應(yīng)有溫濕度失控時(shí)的處理措施并記錄。 擴(kuò)

15、增擴(kuò)增儀應(yīng)配備不間斷電源（儀應(yīng)配備不間斷電源（UPS）； 應(yīng)應(yīng)依據(jù)用途（如：依據(jù)用途（如：RNA檢測(cè)用水），制定適宜的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（如：檢測(cè)用水），制定適宜的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)（如：應(yīng)除應(yīng)除RNase），并定期檢測(cè)），并定期檢測(cè)。 分子檢驗(yàn)各工作區(qū)域應(yīng)有明確的標(biāo)記。進(jìn)入基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室各工作區(qū)應(yīng)按照單一方向進(jìn)行，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)樣品制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。不同的工作區(qū)域宜使用不同的工作服（如不同的顏色）。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí)，不應(yīng)將工作服帶出。5.35.3實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、試劑和耗材實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、試劑和耗材 5.3.1.1 如從事RNA檢測(cè)，宜配備70的冷凍設(shè)的冷凍設(shè)備。備。需要時(shí)，配備高速冷凍離心機(jī)高速冷

16、凍離心機(jī)。標(biāo)本制備區(qū)使用的一次性加樣器吸頭應(yīng)帶有濾芯。PCR試驗(yàn)用容器應(yīng)可密閉，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不能混用。 組織標(biāo)本前處理區(qū)的設(shè)備通常應(yīng)包括切片機(jī)、裱片機(jī)、切片刀、電熱恒溫箱、脫蠟缸、水化缸及HE染色缸等。5.3 5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備 5.3.1.4 應(yīng)按國(guó)家法規(guī)要求對(duì)強(qiáng)檢設(shè)備進(jìn)行檢定。應(yīng)進(jìn)行外部校準(zhǔn)的設(shè)備，如果符合檢測(cè)目的和要求，可按制造商校準(zhǔn)程序進(jìn)行。應(yīng)至少對(duì)分析設(shè)備的加樣系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和溫控系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)（適用時(shí)）。分析設(shè)備和輔助設(shè)備的內(nèi)部校準(zhǔn)應(yīng)符合CNAS-CL 31內(nèi)部校準(zhǔn)要求。 ABI 5700 FAM/SYBR Green I，VIC/JOE，NED/TAMRA/

17、Cy3，ROX/Texas-Red和Cy5 應(yīng)定期對(duì)基因擴(kuò)增儀、加樣器、溫度計(jì)、恒溫設(shè)備、離心機(jī)和生物安全柜等進(jìn)行校準(zhǔn)。樣本升降溫速率樣本升降溫速率：快速模式：1.6-0.8/秒 標(biāo)準(zhǔn)模式：1.6/秒加熱塊最高升降溫速率加熱塊最高升降溫速率：2.5/秒溫度范圍溫度范圍：4-100溫度精度溫度精度：設(shè)置值/顯示溫度的0.25(35至95)(時(shí)鐘啟動(dòng)后3分鐘開(kāi)始測(cè)量)溫度均一性溫度均一性：0.5(35至95)(時(shí)鐘啟動(dòng)后30秒開(kāi)始測(cè)量)光學(xué)系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)：五色激發(fā)光濾光片，五色發(fā)射光濾光片和CCD成像系統(tǒng)安裝時(shí)已校準(zhǔn)染料安裝時(shí)已校準(zhǔn)染料：SYBR Green I，F(xiàn)AM，VIC，JOE，NED，TA

18、MRA，ROX，Texas Red，Cy3， Cy5。被動(dòng)參照染料被動(dòng)參照染料：ROX5.3 5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備5.3.1.5 設(shè)備故障后，應(yīng)首先分析故障原因，如果設(shè)備故障可能影響了方法學(xué)性能，故障修復(fù)后，可通過(guò)以下合適的方式進(jìn)行相關(guān)的檢測(cè)、驗(yàn)證： (a)可校準(zhǔn)的項(xiàng)目實(shí)施校準(zhǔn)驗(yàn)證，必要時(shí)，實(shí)施校準(zhǔn)； (b)質(zhì)控物檢驗(yàn)； (c)與其他儀器或方法比對(duì)，偏差符合附錄A.3的要求； (d)以前檢驗(yàn)過(guò)的樣品再檢驗(yàn)，偏差符合附錄A.5的要求。5.3 5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備5.3.2.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立試劑和關(guān)鍵耗材（如離心管、帶濾芯的吸頭）的驗(yàn)收程序，相應(yīng)程序中應(yīng)有明確的判斷符合性的方法和質(zhì)

19、量標(biāo)準(zhǔn)（宜參考附錄A）。5.3.2.3 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)新批號(hào)或同一批號(hào)不同貨運(yùn)號(hào)的試劑和關(guān)鍵耗材進(jìn)行驗(yàn)收，驗(yàn)收試驗(yàn)至少應(yīng)包括：外觀檢查：肉眼可看出的，如包裝完整性、有效期等；性能驗(yàn)證：通過(guò)實(shí)驗(yàn)才能判斷的，如試劑的核酸提取效率和核酸擴(kuò)增效率、試劑的批間差異、關(guān)鍵耗材的抑制物等。5.3 5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備 試劑性能驗(yàn)證記錄應(yīng)能反映該批試劑的核酸提取效率和核酸擴(kuò)增效率。一般情況下，臨床實(shí)驗(yàn)室在新批號(hào)試劑或關(guān)鍵耗材使用前，應(yīng)驗(yàn)證試劑批間差異和耗材的抑制物，符合附錄A.6要求即可視為滿足要求。特殊情況下，如實(shí)驗(yàn)室懷疑提取試劑有質(zhì)量問(wèn)題，可采用凝膠電泳試驗(yàn)比較核酸提取物與核酸標(biāo)準(zhǔn)物確認(rèn)核酸片段提取的

20、完整性、260nm紫外波長(zhǎng)測(cè)定確認(rèn)核酸提取的產(chǎn)率、260nm/280nm比值確認(rèn)核酸提取的純度。靶核酸提取的質(zhì)量靶核酸提取的質(zhì)量純化的靶核酸的完整性：純化的靶核酸的完整性：可使用凝膠電泳將樣可使用凝膠電泳將樣本的核酸提取物與一核酸標(biāo)準(zhǔn)比較測(cè)定。本的核酸提取物與一核酸標(biāo)準(zhǔn)比較測(cè)定。 核酸提取的產(chǎn)率：核酸提取的產(chǎn)率：可在可在A260讀數(shù)測(cè)定。讀數(shù)測(cè)定。核酸純度：核酸純度：可通過(guò)提取物可通過(guò)提取物A260/A280比率判定比率判定血清或血漿中病原體核酸純化純度：血清或血漿中病原體核酸純化純度：采用一種采用一種間接的方法，即使用已知病原體含量的溶血和間接的方法，即使用已知病原體含量的溶血和/或脂血標(biāo)本

21、用待評(píng)價(jià)試劑提取，然后進(jìn)行擴(kuò)增或脂血標(biāo)本用待評(píng)價(jià)試劑提取，然后進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，比較所得到的結(jié)果。檢測(cè)，比較所得到的結(jié)果。用于定性檢驗(yàn)的試劑，選擇陰性和弱陽(yáng)性的樣品進(jìn)行試劑批號(hào)驗(yàn)證。用于定量檢驗(yàn)的試劑，應(yīng)進(jìn)行新舊試劑批間的差異驗(yàn)證，方法和要求參照附錄A.6要求。耗材的抑制物驗(yàn)收：對(duì)關(guān)鍵耗材應(yīng)檢測(cè)是否存在核酸擴(kuò)增的抑制物，方法和要求參照附錄A.6要求。5.3 5.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)備試劑質(zhì)檢試劑質(zhì)檢 強(qiáng)調(diào)采用強(qiáng)調(diào)采用患者患者標(biāo)本進(jìn)行試劑質(zhì)檢的意義：標(biāo)本進(jìn)行試劑質(zhì)檢的意義： PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)兩個(gè)關(guān)鍵步驟實(shí)驗(yàn)時(shí)兩個(gè)關(guān)鍵步驟： （1）從標(biāo)本中提取核酸；從標(biāo)本中提取核酸； （2）提取核酸的擴(kuò)增。）提取核酸的

22、擴(kuò)增。 商品化的質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果良好，商品化的質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果良好，并非能反映提取試劑的質(zhì)量。并非能反映提取試劑的質(zhì)量。推薦的試劑質(zhì)檢方案推薦的試劑質(zhì)檢方案 標(biāo)本選擇：標(biāo)本選擇：一般選擇已用老試劑測(cè)定過(guò)一般選擇已用老試劑測(cè)定過(guò)的患者標(biāo)本的患者標(biāo)本5份，其中一份陰性，其余份，其中一份陰性，其余4份一般要盡可能涵蓋高、中、低、臨界份一般要盡可能涵蓋高、中、低、臨界等濃度差。等濃度差。 結(jié)果判斷：結(jié)果判斷：用新試劑重復(fù)測(cè)定上述用新試劑重復(fù)測(cè)定上述5份標(biāo)份標(biāo)本，計(jì)算偏差本，計(jì)算偏差(%)；判斷標(biāo)準(zhǔn)；判斷標(biāo)準(zhǔn)(根據(jù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控室室內(nèi)質(zhì)控RCV和能力驗(yàn)證允許總誤差和能力驗(yàn)證允許總誤差

23、TEa)；關(guān)注臨界值和高值！；關(guān)注臨界值和高值！5.5 5.5 檢驗(yàn)檢驗(yàn)過(guò)程過(guò)程5.5.1.2 定量檢測(cè)方法和程序的分析性能驗(yàn)證內(nèi)容至少應(yīng)包括精密度、正確度、線性、測(cè)量和/或可報(bào)告范圍、抗干擾能力等。定性檢測(cè)項(xiàng)目驗(yàn)證內(nèi)容至少應(yīng)包括測(cè)定下限、特異性、準(zhǔn)確度（方法學(xué)比較或與金標(biāo)準(zhǔn)比較）、抗干擾能力等。驗(yàn)證結(jié)果應(yīng)經(jīng)過(guò)授權(quán)人審核。應(yīng)使用驗(yàn)證過(guò)的核酸抽提和純化方法，必要時(shí)進(jìn)行核酸定量。 對(duì)產(chǎn)前檢驗(yàn)，在完成分子診斷前應(yīng)保留備份培養(yǎng)物并跟蹤監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性；在檢驗(yàn)胎兒標(biāo)本前，應(yīng)檢驗(yàn)父母一方或雙方的突變狀態(tài)，宜由同一實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)；如有足夠的標(biāo)本，應(yīng)從兩份不同標(biāo)本中提取DNA進(jìn)行雙份檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)了解檢驗(yàn)方法受母

24、體細(xì)胞污染的影響，應(yīng)有程序評(píng)估并減少這種影響。 應(yīng)有明確和統(tǒng)一的原位雜交（ISH）陽(yáng)性信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)，并建立本實(shí)驗(yàn)室的陽(yáng)性閾值。組織病理ISH，應(yīng)結(jié)合組織形態(tài)進(jìn)行結(jié)果判讀，并采用國(guó)際通用的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。5.5 5.5 檢驗(yàn)檢驗(yàn)過(guò)程過(guò)程5.6 5.6 檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果質(zhì)量的保證質(zhì)量的保證5.6.2.1 總則應(yīng)制定室內(nèi)質(zhì)量控制程序，定量測(cè)定可參照GB/T 20468 -2006臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定室內(nèi)質(zhì)量控制指南。質(zhì)量控制程序中應(yīng)有針對(duì)核酸檢測(cè)防污染的具體措施。應(yīng)保留DNA質(zhì)量評(píng)價(jià)記錄。需要時(shí)，應(yīng)對(duì)RNA的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，并選擇合適的“管家”mRNA作為內(nèi)對(duì)照以評(píng)價(jià)所提取RNA的完整性，并保留RNA質(zhì)量評(píng)價(jià)記

25、錄及假陰性率監(jiān)測(cè)記錄。對(duì)用于基因突變檢測(cè)的石蠟包埋樣品，應(yīng)有病理醫(yī)師從組織形態(tài)學(xué)對(duì)腫瘤細(xì)胞的存在與否及其數(shù)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，并決定是否需要對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行富集。當(dāng)分子診斷結(jié)果與臨床和其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符時(shí)，應(yīng)記錄并分析原因，適當(dāng)時(shí)采取糾正措施。5.6 5.6 檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果質(zhì)量的保證質(zhì)量的保證5.6.2.2 質(zhì)控物定性檢測(cè)項(xiàng)目，每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰性、弱陽(yáng)性和/或陽(yáng)性質(zhì)控物。如為基因突變、基因多態(tài)性或基因型檢測(cè)，則應(yīng)包括最能反映檢測(cè)情況的突變或基因型樣品，每批檢測(cè)的質(zhì)控至少應(yīng)有一種基因突變或基因型。定量檢測(cè)項(xiàng)目，每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰性、弱陽(yáng)性和陽(yáng)性質(zhì)控物。5.6 5.6 檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果質(zhì)量的保證質(zhì)量的保證5.

26、6.2.3 質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)質(zhì)控規(guī)則應(yīng)確保試驗(yàn)的穩(wěn)定性和檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。定量檢測(cè)項(xiàng)目：控圖應(yīng)包括質(zhì)控結(jié)果、質(zhì)控物名稱(chēng)、濃度、批號(hào)和有效期、質(zhì)控圖的中心線和控制界線、分析儀器名稱(chēng)和唯一標(biāo)識(shí)、方法學(xué)名稱(chēng)、檢驗(yàn)項(xiàng)目名稱(chēng)、試劑和校準(zhǔn)物批號(hào)、每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的日期和時(shí)間、干擾行為的記錄、質(zhì)控人員及審核人員的簽字、失控時(shí)的分析處理程序和糾正措施等。定性檢測(cè)項(xiàng)目：陰陽(yáng)性符合預(yù)期。5.6 5.6 檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果質(zhì)量的保證質(zhì)量的保證5.6.3.2 通過(guò)與其他實(shí)驗(yàn)室（如已獲認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室、使用相同檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室、使用配套系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室）比對(duì)的方式確定檢驗(yàn)結(jié)果的可接受性時(shí)，應(yīng)滿足如下要求：（a）規(guī)定比對(duì)實(shí)驗(yàn)室的選擇原則；（b）

27、樣品數(shù)量：至少5份，包括正常和異常水平或不同常見(jiàn)基因突變或基因型；（c）頻率：至少每年2次；（d）判定標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)有80%的結(jié)果符合要求。5.6 5.6 檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果質(zhì)量的保證質(zhì)量的保證5.6.4 實(shí)驗(yàn)室使用兩套及以上檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)同一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)有比對(duì)數(shù)據(jù)表明其檢測(cè)結(jié)果的一致性，比對(duì)頻次每年至少1次，樣品數(shù)量不少于20，濃度水平應(yīng)覆蓋測(cè)量區(qū)間；應(yīng)定期（至少每年1次，每次至少5份臨床樣品）進(jìn)行檢驗(yàn)人員的結(jié)果比對(duì)、考核并記錄。比對(duì)結(jié)果應(yīng)符合附錄A的要求。使用不同生物參考區(qū)間的檢測(cè)系統(tǒng)間不宜進(jìn)行比對(duì)。比對(duì)記錄應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人審核并簽字，并應(yīng)保留至少2年。n一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理n

28、核酸的分離純化n靶核酸提取的質(zhì)量 n臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) n核酸樣本制備及擴(kuò)增檢測(cè)的質(zhì)控 n產(chǎn)物檢測(cè)的質(zhì)控 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理靶核酸可以與宿主細(xì)胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構(gòu)形存在于細(xì)胞內(nèi)，如測(cè)定的是病原微生物,則靶核酸存在于細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)或真菌細(xì)胞內(nèi)，如果上述細(xì)胞破裂,則靶核酸亦可存在于細(xì)胞外。 一般均使用去垢劑(如Triton-100)裂解細(xì)胞，用一種蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。核酸的分離純化核酸的分離純化核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類(lèi)等干擾核

29、酸擴(kuò)增的物質(zhì)去除。 經(jīng)典方法硅吸附法磁珠吸附法對(duì)于商品核酸提取試劑盒，臨床實(shí)驗(yàn)室在使用前，必須對(duì)其核酸提取純度和效率進(jìn)行評(píng)價(jià)。臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì)臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì)臨床標(biāo)本中：臨床標(biāo)本中：血清或血漿中的血紅素及其代謝血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、降解靶、降解靶核酸的核酸酶等。核酸的核酸酶等。核酸提取中：核酸提取中：許多試劑如乙二胺四乙酸許多試劑如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和和chaotrope試試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿

30、、乙醇劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機(jī)溶劑等有機(jī)溶劑 。 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方案實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方案實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)控方案和室間質(zhì)評(píng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)控方案和室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃計(jì)劃1. 室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序；室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序； 陽(yáng)性陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、試劑空白對(duì)照對(duì)照、陰性對(duì)照、試劑空白對(duì)照、 陽(yáng)性陽(yáng)性（臨界值）對(duì)照臨界值）對(duì)照 2. 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加EQA。失控失控結(jié)果的分析，糾正措施及其效果評(píng)價(jià)等結(jié)果的分析，糾正措施及其效果評(píng)價(jià)等。質(zhì)控物的質(zhì)量保證質(zhì)控物的質(zhì)量保證無(wú)商品化質(zhì)控物時(shí)，可采用自制的質(zhì)控物。無(wú)商品化質(zhì)控物時(shí)，可采用自制的質(zhì)控物。質(zhì)控物的評(píng)價(jià)：均一性、瓶間差、穩(wěn)

31、定性等。質(zhì)控物的評(píng)價(jià)：均一性、瓶間差、穩(wěn)定性等。理想質(zhì)控物：理想質(zhì)控物：基質(zhì)與待測(cè)樣本一致；基質(zhì)與待測(cè)樣本一致；所含待測(cè)物濃度接近試驗(yàn)的決定性水平；所含待測(cè)物濃度接近試驗(yàn)的決定性水平；穩(wěn)定；穩(wěn)定；靶值或預(yù)期結(jié)果已定；靶值或預(yù)期結(jié)果已定；無(wú)已知的生物傳染危險(xiǎn)性；無(wú)已知的生物傳染危險(xiǎn)性；單批可大量獲得；單批可大量獲得；價(jià)廉。價(jià)廉。定量定量PCR試驗(yàn)試驗(yàn)HCV-RNA使用使用GBW09151標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗(yàn)證準(zhǔn)確性，定值確性，定值1.090.27105 IU/ml，實(shí)測(cè)實(shí)測(cè)0.79105 IU/ml，偏差偏差27.5%，超出定值范圍，未進(jìn)行處理超出定值范圍，未進(jìn)行處理（5.6.3）。）。直接

32、計(jì)算：偏差 =（1.09-0.79）105/1.09105 100% = 27.5 %（同不符合項(xiàng)）；但是，取對(duì)數(shù)計(jì)算：log 1.09105 =5.0374； log 0.79105=4.8976；偏差 =（5.0374-4.8976）/5.0374100% = 2.78 %。即：直接用IU/ml計(jì)算為27.5%（數(shù)值較大），取對(duì)數(shù)后為2.78%（數(shù)值較小）。假定一個(gè)樣品靶值為1104，如果檢測(cè)結(jié)果為1103，則（1103 -1104）/ 1104=0.9=90%;如果檢測(cè)結(jié)果為1105，則（1105 -1104）/ 1104=9=900%。取對(duì)數(shù)計(jì)算：log 1103=3，og 1104=

33、4，log 11 05 =5，則（4-3）/4=0.25=25%（非90%）,（4-5）/4=-0.25=-25%（非900%）。以上數(shù)據(jù)說(shuō)明，如果直接按IU/ml或copies/ml繪制質(zhì)控圖或計(jì)算CV%會(huì)導(dǎo)致失真，原因是我們通過(guò)體外擴(kuò)增來(lái)推算樣本中核酸的模板量，但擴(kuò)增的產(chǎn)物是2的N次方，放大了。這是強(qiáng)調(diào)為什么要取對(duì)數(shù)計(jì)算的原因。附錄附錄A A（規(guī)范性附錄）（規(guī)范性附錄）分子診斷項(xiàng)目分析性能標(biāo)準(zhǔn)分子診斷項(xiàng)目分析性能標(biāo)準(zhǔn)A.1 應(yīng)不低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方法規(guī)要求。A.2 自建檢測(cè)系統(tǒng)不精密度要求：以能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評(píng)評(píng)價(jià)界限（靶值0.4對(duì)數(shù)值）作為允許總誤差（TEa），重復(fù)性精密度3/5

34、TEa；中間精密度4/5TEa。A.3 設(shè)備故障修復(fù)后，分析系統(tǒng)比對(duì)：5份樣品，覆蓋測(cè)量區(qū)間，至少4份樣品測(cè)量結(jié)果偏倚7.5%。A.4 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分析系統(tǒng)定期比對(duì)：樣品數(shù)n20，濃度應(yīng)覆蓋測(cè)量區(qū)間，計(jì)算回歸方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)7.5%。A.5 留樣再測(cè)判斷標(biāo)準(zhǔn)：按照項(xiàng)目穩(wěn)定性要求選取最長(zhǎng)期限樣品，5個(gè)樣品，覆蓋測(cè)量區(qū)間，至少4個(gè)樣品測(cè)量結(jié)果偏倚7.5%。A.6試劑批間差異、耗材的抑制物的驗(yàn)收判斷標(biāo)準(zhǔn)：選取5個(gè)舊批號(hào)檢測(cè)過(guò)的樣品，覆蓋測(cè)量區(qū)間（包括陰性、臨界值、低值、中值和高值），至少4個(gè)樣品測(cè)量結(jié)果偏倚7.5%，其中陰性和臨界值樣品必須符合預(yù)期。A.7 沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)和室間質(zhì)評(píng)要求時(shí)，實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果比對(duì)合格

35、標(biāo)準(zhǔn)可依據(jù)制造商聲明的性能標(biāo)準(zhǔn)而制定。附錄附錄B B（規(guī)范性附錄）（規(guī)范性附錄）分子診斷分子診斷領(lǐng)域申請(qǐng)認(rèn)可項(xiàng)目要求領(lǐng)域申請(qǐng)認(rèn)可項(xiàng)目要求B.1 以下分子檢驗(yàn)項(xiàng)目，每一組項(xiàng)目為完整能力項(xiàng)目，如果實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展以下項(xiàng)目組合，則申請(qǐng)?jiān)摻M中任一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)同時(shí)申請(qǐng)其它項(xiàng)目（第3系列除外，但須至少申請(qǐng)其中的3項(xiàng)）。同一項(xiàng)目使用不同儀器 /方法報(bào)告結(jié)果時(shí)，全部?jī)x器 /方法均應(yīng)申請(qǐng)認(rèn)可。1. 肝炎系列：HBV、HCV（實(shí)驗(yàn)室僅開(kāi)展1項(xiàng)者除外）；2. 優(yōu)生優(yōu)育（TORCH）系列：TXO、RV、CMV、HSV；3. 泌尿生殖道性傳播疾病病原體系列：CT、NG、UU、HPV、HSV、TP。B.2分子病理檢測(cè)項(xiàng)目，至少應(yīng)

36、申請(qǐng)以下任意兩個(gè)系列，每個(gè)系列至少申請(qǐng)一項(xiàng)。同一項(xiàng)目使用不同儀器 /方法報(bào)告結(jié)果時(shí)，全部?jī)x器 /方法均應(yīng)申請(qǐng)認(rèn)可。1. 突變檢測(cè)：EGFR、KRAS、BRAF、C-KIT、PDGFRA 等；2. 擴(kuò)增系列：Her-2等；3. 易位：EWS、Bcl-2、C-MYC、Bcl-6、ALK等；4. 基因重排：IGH、IGK、IGL、TCR等。第四部分ISO15189對(duì)分子診斷設(shè)備的性能要求5.55.5.1 檢驗(yàn)程序的檢驗(yàn)程序的選擇、驗(yàn)證和確認(rèn)選擇、驗(yàn)證和確認(rèn)5.5.1.1 總則總則實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇預(yù)期用途預(yù)期用途經(jīng)過(guò)確認(rèn)的檢驗(yàn)程序經(jīng)過(guò)確認(rèn)的檢驗(yàn)程序。每每一檢驗(yàn)程序的規(guī)定要求（性能特征）應(yīng)與該一

37、檢驗(yàn)程序的規(guī)定要求（性能特征）應(yīng)與該檢驗(yàn)的預(yù)期用途相關(guān)。檢驗(yàn)的預(yù)期用途相關(guān)。首選首選程序可以是體外診斷醫(yī)療器械使用說(shuō)明中程序可以是體外診斷醫(yī)療器械使用說(shuō)明中規(guī)定的程序，或公認(rèn)的規(guī)定的程序，或公認(rèn)的/權(quán)威的教科書(shū)、經(jīng)同權(quán)威的教科書(shū)、經(jīng)同行審議過(guò)的文章或雜志發(fā)表的，或國(guó)際公認(rèn)標(biāo)行審議過(guò)的文章或雜志發(fā)表的，或國(guó)際公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)或指南中的，或國(guó)家、地區(qū)法規(guī)中的程序準(zhǔn)或指南中的，或國(guó)家、地區(qū)法規(guī)中的程序。1. 篩查篩查：靈敏度：靈敏度2. 確認(rèn)確認(rèn)：特異性：特異性3. 治療治療：定量定量預(yù)期用途：預(yù)期用途：篩查篩查、確認(rèn)、定性、定量、診斷和治療確認(rèn)、定性、定量、診斷和治療1. 篩查：篩查：靈敏度高靈敏度高、快

38、速和方便（如、快速和方便（如POCT）。）。2. 確認(rèn)：確認(rèn)：特異性好特異性好。3. 診斷和治療：診斷和治療：定量準(zhǔn)確定量準(zhǔn)確、測(cè)量區(qū)間寬、檢測(cè)、測(cè)量區(qū)間寬、檢測(cè)限（如超敏方法，要關(guān)注最低檢出限、線性限（如超敏方法，要關(guān)注最低檢出限、線性、測(cè)量區(qū)間等性能參數(shù)）。、測(cè)量區(qū)間等性能參數(shù)）。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有項(xiàng)目性能特征的清單！實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有項(xiàng)目性能特征的清單！預(yù)期用途預(yù)期用途預(yù)期用途Procleix Ultrio Assay* 是一種體外核酸定性檢測(cè)系統(tǒng)，用于篩查篩查來(lái)自人類(lèi)血漿樣本中的人類(lèi)免疫缺陷病毒型（HIV-1）RNA、丙型肝炎病毒（HCV）RNA和乙型肝炎病毒（HBV）DNA。本試劑盒可用于檢測(cè)單份的

39、血漿樣本，也可用于檢測(cè)由不超過(guò)16個(gè)單份的血漿樣本等量混合后的人血漿混合物。此檢測(cè)不能用于協(xié)助診斷診斷HIV-1、HCV或HBV感染。預(yù)期用途預(yù)期用途INTENDED USEThe ARCHITECT HBsAg assay is a chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA) for the quantitative （定量）determination of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in human serum and plasma. HBsAg assays are routinely

40、used to aid in the diagnosis（輔助診斷） of suspected hepatitis B viral (HBV) infection and to monitor the status of infected individuals, i.e., whether the patients infection has resolved or the patient has become a chronic carrier of the virus.預(yù)期用途預(yù)期用途預(yù)期用途預(yù)期用途INTENDED USEThe ARCHITECT HBsAg Qualitative

41、II assay is a chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA) for the qualitative detection of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in human serum and plasma. The ARCHITECT HBsAg Qualitative II assay is intended to be used as an aid in the diagnosis of HBV infection and as a screening test for dona

42、ted blood and plasma.HBsAg assays are used to identify persons infected with HBV and to prevent transmission of the virus by blood and blood products as well as to monitor the status of infected individuals in combination with other hepatitis B serological markers. In most countries, testing for HBs

43、Ag is part of the antenatal screening program to identify HBV infected mothers and to prevent perinatal HBV infection by subsequent immunization.預(yù)期用途預(yù)期用途預(yù)期用途預(yù)期用途預(yù)期用途預(yù)期用途INTENDED USEAxSYM Anti-HCV (hepatitis C virus) is a Microparticle Enzyme Immunoassay (MEIA) for the qualitative detection of anti-H

44、CV IgG to HCV recombinant proteins in human serum or plasma (potassium EDTA, sodium EDTA, sodium heparin, lithium heparin, sodium citrate and potassium oxalate).Assay results, in conjunction with other laboratory results and clinical information, may be used to provide presumptive evidence of infect

45、ion with HCV virus (state of infection or associated disease not determined) in persons with signs or symptoms of hepatitis and in persons at risk for hepatitis C infection.WARNING:Not intended for use in screening blood, plasma, or tissue donors.The effectiveness of AxSYM Anti-HCV for use in screen

46、ing blood, plasma, or tissue donors has not been established. Assay performance characteristics have not been established for prenatal screening or testing a pediatric population less than 10 years of age.檢驗(yàn)程序驗(yàn)證驗(yàn)證( (Verification) ) n 未經(jīng)修改而使用的已確認(rèn)的檢驗(yàn)程序在常規(guī)使用前，應(yīng)經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室的獨(dú)立驗(yàn)證。 n 應(yīng)從制造商或方法開(kāi)發(fā)者處獲得相關(guān)信息，以確定檢驗(yàn)程序的性

47、能特征。 n 進(jìn)行的獨(dú)立驗(yàn)證，應(yīng)通過(guò)獲取客觀的證據(jù)（以性能特以性能特征形式征形式）證實(shí)檢驗(yàn)程序的性能與其聲明相符。驗(yàn)證過(guò)程證實(shí)的檢驗(yàn)程序的性能指標(biāo)，應(yīng)與檢驗(yàn)結(jié)果的預(yù)期用途相關(guān)。 n 應(yīng)將驗(yàn)證程序制定成文件，并記錄驗(yàn)證結(jié)果。驗(yàn)證結(jié)果應(yīng)由適當(dāng)?shù)氖跈?quán)人員審核并記錄審核過(guò)程。 n 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)以下來(lái)源的檢驗(yàn)程序進(jìn)行確認(rèn)： （a）非標(biāo)方法；（b）實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)或制定的方法；（c）超出預(yù)期范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法；（d）修改過(guò)的確認(rèn)方法。n 方法確認(rèn)應(yīng)盡可能全面，并通過(guò)客觀的證據(jù)（以性能以性能特征形式）特征形式）證實(shí)滿足檢驗(yàn)預(yù)期用途的特定要求。n 應(yīng)將確認(rèn)程序制定成文件，并記錄確認(rèn)結(jié)果。確認(rèn)結(jié)果應(yīng)由授權(quán)人員審核并記錄

48、審核過(guò)程。 n 當(dāng)對(duì)確認(rèn)過(guò)的檢驗(yàn)程序進(jìn)行變更時(shí)，應(yīng)將改變所引起的影響形成文件，適當(dāng)時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)。 檢驗(yàn)程序的確認(rèn)確認(rèn)(Validation) 1.測(cè)量正確度測(cè)量正確度(measurement trueness)：2.測(cè)量準(zhǔn)確度測(cè)量準(zhǔn)確度(measurement accuracy)：3.測(cè)量測(cè)量精密度（含測(cè)量重復(fù)性和測(cè)量中間精密度（含測(cè)量重復(fù)性和測(cè)量中間精密度精密度, measurement precision， including measurement repeatability and measurement intermediate precision ）：3.測(cè)量不確定度測(cè)量不確

49、定度(measurement uncertainty)：4.分析分析特異度（含干擾特異度（含干擾物物,analytical specificity, including interfering substances ）；5.分析靈敏度分析靈敏度(analytical sensitivity)：6.檢出限檢出限(detection limit )：7.定量限定量限(quantitation limit)：8.測(cè)量區(qū)間測(cè)量區(qū)間(measuring interval)：9.診斷診斷特異特異度度(diagnostic specificity )：10. 診斷靈敏度診斷靈敏度(diagnostic se

50、nsitivity)：測(cè)量正確度測(cè)量正確度(measurement trueness)：無(wú)窮多次重復(fù)測(cè)量所得量值的平均值與一個(gè)參考量值間的一致程度。注 1：測(cè)量正確度不是一個(gè)量，不能用數(shù)值表示。注 2：測(cè)量正確度與系統(tǒng)測(cè)量誤差有關(guān)，與隨機(jī)測(cè)量誤差無(wú)關(guān)。注 3：術(shù)語(yǔ)“測(cè)量正確度”不能用“測(cè)量準(zhǔn)確度”表示。反之亦然。測(cè)量準(zhǔn)確度測(cè)量準(zhǔn)確度(measurement accuracy)：被測(cè)量的測(cè)得值與其真值間的一致程度。注 1：概念“測(cè)量準(zhǔn)確度”不是一個(gè)量，不給出有數(shù)字的量值。當(dāng)測(cè)量提供較小的測(cè)量誤差時(shí)就說(shuō)該測(cè)量是較準(zhǔn)確的。注 2：術(shù)語(yǔ)“測(cè)量準(zhǔn)確度”不應(yīng)與“測(cè)量正確度”、“測(cè)量精密度”相混淆，盡管它與

51、這兩個(gè)概念有關(guān)。注 3：測(cè)量準(zhǔn)確度有時(shí)被理解為賦予被測(cè)量的測(cè)得值之間的一致程度。正確度驗(yàn)證方法-溯源性方法類(lèi)：方法類(lèi)：1、決定性決定性方法：方法：與決定性與決定性方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較而建立方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較而建立；2、參考方法：、參考方法：與與參考方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較而建立參考方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較而建立；3、常規(guī)方法：、常規(guī)方法：與與已建立可比性的方法進(jìn)行結(jié)果比較而已建立可比性的方法進(jìn)行結(jié)果比較而驗(yàn)證驗(yàn)證。物質(zhì)物質(zhì)類(lèi)：類(lèi)：1、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：檢測(cè)有證書(shū)說(shuō)明其材料特性的適當(dāng)參考檢測(cè)有證書(shū)說(shuō)明其材料特性的適當(dāng)參考物質(zhì)物質(zhì)；2、校準(zhǔn)品：、校準(zhǔn)品：由供應(yīng)商或制造商提供溯源性，應(yīng)有關(guān)于試劑、程序

52、由供應(yīng)商或制造商提供溯源性，應(yīng)有關(guān)于試劑、程序或檢驗(yàn)系統(tǒng)溯源性的聲明或檢驗(yàn)系統(tǒng)溯源性的聲明文件文件；3、質(zhì)控品：、質(zhì)控品：經(jīng)經(jīng)PT，EQA，CAP等活動(dòng)使用過(guò)質(zhì)控品等活動(dòng)使用過(guò)質(zhì)控品。第五部分ISO15189對(duì)分子診斷檢測(cè)的系統(tǒng)完整性要求 ABI ViiA7ABI7500LC480CFX96Mx3000pSlan96P激發(fā)光源 鹵鎢燈鹵鎢燈氙燈LED鹵鎢燈LED檢測(cè)器CCD成像系統(tǒng)CCD成像系統(tǒng)CCD成像系統(tǒng)光敏二極管 光電倍增管 光電傳感器檢測(cè)通道 6個(gè)5個(gè)6個(gè)5個(gè)4-5個(gè)4個(gè)激發(fā)波長(zhǎng) 450-670nm400-660nm430-630nm450-730nm350-750nm通道1：470n

53、m通道2：530nm通道3：580nm通道4：630nm檢測(cè)波長(zhǎng) 500-720nm500-660nm430-630nm450-730nm350-750nm通道1：510nm；通道2：565nm；通道3：620nm；通道4：665nm支持的熒光染料FAM、 SYBR、 SYTO9(MeltDoctor)、 Fluorescein、 SYPROOrange、VIC、JOE、TET、HEX、TAMRA、 NED、 BODIPY TMR-X、ROX、Texas Red、LIZ、Alexa Fluor、Joda-4FAM/SYBR Green、VIC/JOE、NED/TAMRA/Cy3、ROX/Tex

54、as Red、Cy5等，軟件支持ROX校正去除誤差LightCycler Cyan 500、YBR Green I、FAM、HEX,、VIC、LightCycler Red 610、LightCycler Red 640、Cy5FAM、SYBR,、HEX/JOE、ROX、Cy5、TAMRA等SYBR Green I、FAM、Texas Red、ROX、TET、Cy3、C y5、HEX、JOE、VIC、TAMRA、ALEXA Fluor 350等通道1：FAM/SYBR green I； 通道2：VIC/ HEX/TET/JOE；通道3：Texas Red/ ROX；通道4：Cy5國(guó)內(nèi)外主流熒光

55、定量國(guó)內(nèi)外主流熒光定量PCR儀器情況簡(jiǎn)介儀器情況簡(jiǎn)介國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上主要使用的乙肝試劑情況國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上主要使用的乙肝試劑情況 圣湘羅氏達(dá)安科華凱杰方法學(xué)一步法磁珠法磁珠法煮沸法柱提法煮沸法煮沸法目的基因檢測(cè)熒光FAMFAMFAMFAMFAMFAMFAM內(nèi)標(biāo)檢測(cè)熒光HEXHEXVIC無(wú)VIC無(wú)VIC靈敏度（IU/ml）1001019500100500500線性范圍（IU/ml）5005109202109201.7108110311082505108500110811035107重復(fù)性好好好較差一般較差較差抗干擾能力較強(qiáng)強(qiáng)較強(qiáng)一般一般一般一般ROX熒光校正有有無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)有操作簡(jiǎn)便性簡(jiǎn)便一般自動(dòng)化，復(fù)雜一般復(fù)

56、雜一般一般 圣湘達(dá)安科華凱杰方法學(xué)磁珠法酚-氯仿抽提法柱提法柱提法目的基因檢測(cè)熒光FAMFAMFAMFAM內(nèi)標(biāo)檢測(cè)熒光HEX無(wú)無(wú)VIC靈敏度（IU/ml）25定性檢測(cè)5001000線性范圍（IU/ml）501108定性檢測(cè)1103110711031107重復(fù)性好較差一般一般抗干擾能力強(qiáng)弱一般一般ROX熒光校正有無(wú)無(wú)有操作簡(jiǎn)便性簡(jiǎn)便復(fù)雜復(fù)雜復(fù)雜國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上主要使用的丙肝試劑情況國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上主要使用的丙肝試劑情況醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室量值溯源的要求CNAS承認(rèn)的檢定證書(shū)承認(rèn)的檢定證書(shū)/校準(zhǔn)報(bào)告包括校準(zhǔn)報(bào)告包括： （1）國(guó)家計(jì)量主管部門(mén)承認(rèn)的； （2）衛(wèi)生醫(yī)藥行業(yè)主管部門(mén)承認(rèn)的； （3）CNAS認(rèn)可或互認(rèn)的校準(zhǔn)機(jī)構(gòu)

57、出具的； （4）設(shè)備制造商提供的。CNAS承認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)承認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品標(biāo)準(zhǔn)樣品包括：包括：（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng)） （1）國(guó)家計(jì)量和標(biāo)準(zhǔn)化主管部門(mén)承認(rèn)的； （2）衛(wèi)生醫(yī)藥行業(yè)主管部門(mén)承認(rèn)的； （3）CNAS認(rèn)可或互認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品生產(chǎn)者（RMP）提供的； （4）設(shè)備制造商提供的。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提供溯源到更高等級(jí)、國(guó)家或國(guó)際計(jì)量基準(zhǔn)/參考方法的有效證據(jù)。 當(dāng)以上溯源方式不可行或不適用時(shí)，評(píng)審組應(yīng)要求實(shí)驗(yàn)室提供確保檢驗(yàn)結(jié)果可靠性的相關(guān)證據(jù)。來(lái)自來(lái)自2012年年12月月1日日B版版“醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可評(píng)審工作指導(dǎo)書(shū)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可評(píng)審工作指導(dǎo)書(shū)”醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室量值溯源的要求醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室

58、測(cè)量結(jié)果溯源性的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量結(jié)果溯源性的要求要求：評(píng)審組應(yīng)評(píng)價(jià)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量結(jié)果的溯源性滿足CNAS-CL06：2014測(cè)量結(jié)果的溯源性要求的情況，并參考CNAS-GL18量值溯源要求在醫(yī)學(xué)測(cè)量領(lǐng)域的實(shí)施指南。應(yīng)要求實(shí)驗(yàn)室提供溯源到更高等級(jí)、國(guó)家或國(guó)際計(jì)量基準(zhǔn)/參考方法的有效證據(jù)。當(dāng)溯源不可行或不適用時(shí)，評(píng)審組應(yīng)要求實(shí)驗(yàn)室提供確保檢驗(yàn)結(jié)果可靠性的相關(guān)證據(jù)。來(lái)自來(lái)自2014年年5月月1日日B版第版第1次修訂次修訂“醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可評(píng)審工作指導(dǎo)書(shū)認(rèn)可評(píng)審工作指導(dǎo)書(shū)”根據(jù)計(jì)量可追溯至SI 的可能性及測(cè)量程序和校準(zhǔn)品的不同計(jì)量水平的可用性，有如下五種典型的計(jì)量溯源鏈的上端

59、。（1) 測(cè)量結(jié)果可以在計(jì)量上溯源至測(cè)量結(jié)果可以在計(jì)量上溯源至 SI 的量的量。有可用的一級(jí)參考測(cè)量程序和一個(gè)或多個(gè)（經(jīng)承認(rèn)的）一級(jí)參考物質(zhì)（用作校準(zhǔn)品）。達(dá)到這樣水平的有約2530 個(gè)類(lèi)型的量，具有良好確定的組分，如：一些電解質(zhì)、代謝物、甾體激素和一些甲狀腺激素。在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供的常規(guī)結(jié)果中，這些量占較大部分。（2）有可用的國(guó)際約定的參考測(cè)量有可用的國(guó)際約定的參考測(cè)量程序程序（不能不能稱(chēng)為一級(jí)參考稱(chēng)為一級(jí)參考測(cè)量測(cè)量程序）程序）和一個(gè)或多個(gè)由此程序賦值的國(guó)際約定校準(zhǔn)和一個(gè)或多個(gè)由此程序賦值的國(guó)際約定校準(zhǔn)物。物。如HbA1C（糖化血紅蛋白）即是符合該情況的量的組分。（3）有可用的國(guó)際約定的參考測(cè)量程序，但沒(méi)有國(guó)際約定校準(zhǔn)物質(zhì)。有可用的國(guó)際約定的參考測(cè)量程序，