顯微鏡的操作

1、顯微鏡操作概述廣州微域光學(xué)儀器有限公司研發(fā)部廣州微域光學(xué)儀器有限公司研發(fā)部第一節(jié)：相差顯微鏡原理：原理：一般由于被檢物體（如不染色的細(xì)胞）所能產(chǎn)生的相差太小，肉眼很難分辨，只有在變相差為振幅差（明暗差）之后才能被區(qū)分。相差顯微鏡就是利用直射光與衍射光（阿貝原理認(rèn)為，任何物體的像均是由直射光與衍射光干涉而形成）的相位改變而實現(xiàn)兩種的干涉，形成對比度可以被人眼所分辨的圖像。結(jié)構(gòu)特點：結(jié)構(gòu)特點： 相差物鏡、具有環(huán)狀光闌的轉(zhuǎn)盤聚光器、調(diào)中望遠(yuǎn)鏡等使用方法使用方法: 相差裝置為多功能系列顯微鏡中的附屬裝置與普通顯微鏡配合使用。 (1) 相差裝置的調(diào)換安裝卸下普通顯微鏡使用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支

2、架上，把綠色濾光片放在上面，它可吸收紅色和藍(lán)色光，使波長范圍小的單色光線進(jìn)行照明，并有吸熱作用，能使相差觀察獲得良好的效果。再從轉(zhuǎn)換器上旋下普通物鏡，換上相差物鏡。 (2)調(diào)焦 打開光源，旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤，將“o”對準(zhǔn)標(biāo)示孔，使普通聚光器部分進(jìn)入光路。先使用低倍相差物鏡，按普通顯微鏡操作方法進(jìn)行對光和調(diào)焦。 旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應(yīng)，如相差物鏡為40 x時，應(yīng)用x40標(biāo)示孔的光闌。 (3)合軸調(diào)整 拔出目鏡，插入合軸望遠(yuǎn)鏡，一邊從望遠(yuǎn)鏡內(nèi)觀察，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動望遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其下降，當(dāng)對準(zhǔn)焦點就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的黑環(huán)，此時可將望遠(yuǎn)鏡固定住。

3、再升降集光器并調(diào)節(jié)其下的螺旋使亮環(huán)的大小與黑環(huán)一致，然后左右前后調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)節(jié)鈕，使兩環(huán)完全重合，如亮環(huán)比黑環(huán)小而位于內(nèi)側(cè)時，應(yīng)降低集光器使亮環(huán)放大；反之，則應(yīng)升高聚光器，使亮環(huán)縮小。如若升到最高限度仍不能完全重合，則可能是載玻片過厚之故，應(yīng)更換。合軸調(diào)整完畢，抽出望遠(yuǎn)鏡，換回目鏡，按常規(guī)進(jìn)行觀察。 注意：注意：在更換不同倍率的相差物鏡時，要使用相匹配的環(huán)狀光闌和重新合軸調(diào)節(jié)。使用油鏡時，集光器上透鏡表面與載玻片之間要同時加上香柏泊。 （4）觀察 在相差顯微鏡下觀察活細(xì)胞，可清楚地分辨細(xì)胞的形態(tài)，細(xì)胞核、核仁以及胞質(zhì)中存在的顆粒狀結(jié)構(gòu)。 相差顯微鏡相差顯微鏡照明原理第二節(jié) 偏光顯微

4、鏡原理原理 偏光顯微鏡必須具備以下附件：起偏鏡，檢偏鏡，補償器或相位片，專用無應(yīng)力物鏡，旋轉(zhuǎn)載物臺。將普通光改變?yōu)槠窆膺M(jìn)行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）。雙折射性是晶體的基本特性。因此，偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物、化學(xué)等領(lǐng)域，在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中也有應(yīng)用。 結(jié)構(gòu)特點：結(jié)構(gòu)特點：a.光源：最好采用單色光，因為光的速度，折射率，和干涉現(xiàn)象由于波長的不同而有差異。一般鏡檢可使用普通光。 b.目鏡：要帶有十字線的目鏡。 c.聚光鏡：為了取得平行偏光，應(yīng)使用能推出上透鏡的搖出式聚光鏡。 d.伯特蘭透鏡：聚光鏡光路中的輔助部件，這是把物體所有造成的初級相放大為次級相的

5、輔助透鏡。它可保證用目鏡來觀察在物鏡后焦平面中形成的干涉圖樣。 偏光鏡要求：偏光鏡要求： a.載物臺的中心與光軸同軸。 b.起偏鏡和檢偏鏡應(yīng)處于正交位置。 c.制片不宜過薄。 偏光顯微鏡 第三節(jié) 倒置顯微鏡原理：原理： 倒置顯微鏡的組成與普通顯微鏡相同,不同的是光源在載物臺上,物鏡在載物臺下,與其它顯微鏡的結(jié)構(gòu)位置相反,故稱倒置顯微鏡.結(jié)構(gòu)特點：結(jié)構(gòu)特點： 1、長工作距離聚光器，其上一般帶有濾光片，孔徑光闌。 2、物鏡有較長的工作距離。 3、紀(jì)錄裝置：攝影鏡筒，縮時電影，生命活動過程實驗步驟：實驗步驟： 1、熟悉安裝各部件 2、調(diào)中 3、放置標(biāo)本，調(diào)焦，觀察，紀(jì)錄倒置顯微鏡第四節(jié) 暗視野顯微鏡

6、原理：原理： 暗視野顯微鏡是利用丁達(dá)爾現(xiàn)象設(shè)計的。它的結(jié)構(gòu)特點主要是使用了暗視野聚光器，使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標(biāo)本上，標(biāo)本遇光發(fā)生反射或散射，散射的光線投入物鏡內(nèi)，因而整個視野是黑暗的。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像，并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)。但被檢物體為非均質(zhì)時，并大于12波長，則各級衍射光線同時進(jìn)入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構(gòu)造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運動等。使

7、用方法：使用方法： a. 把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上. b.選用強的光源，但又要防止直射光線進(jìn)入物鏡，所以一般用顯微鏡燈照明。 c.在聚光器和標(biāo)本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線于聚光鏡上面進(jìn)行全反射，達(dá)不到被檢物體，而得不到暗視野照明. d.升降集光器，將集光鏡的焦點對準(zhǔn)被檢物體，即以圓錐光束的頂點照射被檢物。如果聚光器能水平移動并附有中心調(diào)節(jié)裝置，則應(yīng)首先進(jìn)行中心調(diào)節(jié)，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)格位于一直線上. e.選用與聚光器相應(yīng)的物鏡，調(diào)節(jié)焦距(操作方法與普通顯微鏡相同)，找到所需觀察的物像。觀察：觀察： 觀察暗視野顯微鏡下的活細(xì)胞。在黑暗的背景里，可見細(xì)胞、細(xì)

8、胞核和細(xì)胞器的衍射光圖像。暗視野顯微鏡暗視野照明方式落射式明暗視場正置金相顯微鏡第五節(jié) 熒光顯微鏡原理：原理： 落射光激發(fā)的熒光法是近代顯微鏡檢術(shù)中新發(fā)展出來的一種強有力的反差增強法。它將激發(fā)熒光用的光源改在物鏡的上方，光由物鏡上方經(jīng)反光鏡射入物鏡去激發(fā)樣品，從樣品上被激發(fā)的熒光經(jīng)物鏡成像并穿透反光鏡而由目鏡觀察。使用方法：使用方法： 1、打開燈源，超高壓汞燈要預(yù)熱幾分鐘才能達(dá)到最亮點。 2、透射式熒光顯微鏡需在燈源與聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的阻斷濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片雙色束分離器阻斷濾片的插塊。 3、用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。4、放置標(biāo)本片，調(diào)焦后即可觀察。 使用中應(yīng)注意：末裝濾光