普通光學顯微鏡

1、 課程簡介：課程簡介： 本實驗課程主要面向本實驗課程主要面向“食品科學與工程食品科學與工程”、“食食品質量與安全品質量與安全”等專業(yè)本科生，以專業(yè)基礎課程等專業(yè)本科生，以專業(yè)基礎課程食食品微生物學品微生物學為理論基礎，是對學生進行獨立的相關為理論基礎，是對學生進行獨立的相關微生物研究能力培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)。共有學時數(shù)微生物研究能力培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)。共有學時數(shù)3434學時，學時，教學內容內容包括：教學內容內容包括： “ “細菌、酵母菌、放線菌等的細菌、酵母菌、放線菌等的形態(tài)觀察形態(tài)觀察”、“培養(yǎng)基的制備和滅菌培養(yǎng)基的制備和滅菌”等。實驗教學等。實驗教學包括設計型、技能型和綜合型實驗內容，可提高學生包括

2、設計型、技能型和綜合型實驗內容，可提高學生的動手能力和解決實際問題的能力。的動手能力和解決實際問題的能力。 【實驗目的【實驗目的】【實驗原理【實驗原理】 顯微鏡的構造：機械部分與光學部分顯微鏡的構造：機械部分與光學部分 光線在穿過折射率不同的介質時發(fā)生折射光線在穿過折射率不同的介質時發(fā)生折射介質的折射率對光線通路的影響介質的折射率對光線通路的影響 【實驗內容與步驟【實驗內容與步驟】低倍鏡觀察低倍鏡觀察調節(jié)照明調節(jié)照明確定目標確定目標高倍鏡觀察高倍鏡觀察油鏡觀察油鏡觀察鏡頭的維護鏡頭的維護正確放置顯微鏡正確放置顯微鏡 【】 【實驗目的【實驗目的】【實驗原理【實驗原理】電鏡照片 細菌的芽孢壁比營養(yǎng)

3、細胞壁厚，致密，透性細菌的芽孢壁比營養(yǎng)細胞壁厚，致密，透性差，著色和脫色都比營養(yǎng)細胞困難，故一般采用差，著色和脫色都比營養(yǎng)細胞困難，故一般采用一種堿性染料并在微火上加熱，或延長染色時間，一種堿性染料并在微火上加熱，或延長染色時間，使菌體和芽孢都染上顏色以后水洗或稀酸沖去菌使菌體和芽孢都染上顏色以后水洗或稀酸沖去菌體的染料，芽孢仍保留顏色，再用另一種對比鮮體的染料，芽孢仍保留顏色，再用另一種對比鮮明的染料使菌體著色，如此可明顯區(qū)分芽孢和營明的染料使菌體著色，如此可明顯區(qū)分芽孢和營養(yǎng)體結構。養(yǎng)體結構。4 4、莢膜染色原理、莢膜染色原理 莢膜與染料親和力低。在用簡單染色法時，莢膜與染料親和力低。在用

4、簡單染色法時，可以辨認出來。而通過莢膜染色也可以把它和細可以辨認出來。而通過莢膜染色也可以把它和細胞區(qū)別開來胞區(qū)別開來 細菌莢膜細菌莢膜涂片涂片固定固定染色染色干燥干燥水洗、吸干水洗、吸干 鏡鏡檢檢【實驗內容與步驟【實驗內容與步驟】 革蘭氏陽性菌（左）和革蘭氏陰性菌（右）革蘭氏陽性菌（左）和革蘭氏陰性菌（右）細胞壁結構的比較細胞壁結構的比較 2、革蘭氏染色過程、革蘭氏染色過程金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌枯草桿菌枯草桿菌（G+） 細菌芽孢細菌芽孢3、芽孢染色過程、芽孢染色過程 5 5、菌落特征的觀察、菌落特征的觀察細菌菌落特征圖細菌菌落特征圖涂片涂片固定固定染色染色干燥干燥水洗、吸干水洗、吸干

5、鏡鏡檢檢電鏡照片 革蘭氏陽性菌（左）和革蘭氏陰性菌（右）革蘭氏陽性菌（左）和革蘭氏陰性菌（右）細胞壁結構的比較細胞壁結構的比較 革蘭氏染色過程革蘭氏染色過程金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌枯草桿菌枯草桿菌（G+） 細菌的芽孢壁比營養(yǎng)細胞壁厚，致密，透性細菌的芽孢壁比營養(yǎng)細胞壁厚，致密，透性差，著色和脫色都比營養(yǎng)細胞困難，故一般采用差，著色和脫色都比營養(yǎng)細胞困難，故一般采用一種堿性染料并在微火上加熱，或延長染色時間，一種堿性染料并在微火上加熱，或延長染色時間，使菌體和芽孢都染上顏色以后水洗或稀酸沖去菌使菌體和芽孢都染上顏色以后水洗或稀酸沖去菌體的染料，芽孢仍保留顏色，再用另一種對比鮮體的染料，芽孢仍

6、保留顏色，再用另一種對比鮮明的染料使菌體著色，如此可明顯區(qū)分芽孢和營明的染料使菌體著色，如此可明顯區(qū)分芽孢和營養(yǎng)體結構。養(yǎng)體結構。細菌芽孢細菌芽孢莢膜染色原理莢膜染色原理 莢膜與染料親和力低。在用簡單染色法時，莢膜與染料親和力低。在用簡單染色法時，可以辨認出來。而通過莢膜染色也可以把它和細可以辨認出來。而通過莢膜染色也可以把它和細胞區(qū)別開來胞區(qū)別開來 細菌莢膜細菌莢膜 菌落特征的觀察菌落特征的觀察細菌菌落特征圖細菌菌落特征圖 【】 【實驗目的【實驗目的】【實驗原理【實驗原理】 放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。類革蘭氏陽性細菌。 常見

7、放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內生長的叫基內菌絲，基內菌表面或深入培養(yǎng)基內生長的叫基內菌絲，基內菌絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲，絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲，并進一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。孢子的表面光并進一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。孢子的表面光滑或粗糙、圓或橢圓，孢子有各種顏色，這些形滑或粗糙、圓或橢圓，孢子有各種顏色，這些形態(tài)特點都是鑒定放線菌的重要依據(jù)。態(tài)特點都是鑒定放線菌的重要依據(jù)。一、實驗材料一、實驗材料1. 菌種：菌種： 啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、啤酒酵母、面包酵母、裂殖酵母、熱帶假絲酵母。熱帶假

8、絲酵母。 白色鏈霉菌、紅色鏈霉菌白色鏈霉菌、紅色鏈霉菌2. 2. 0.1%美藍染液，載玻片，蓋玻片美藍染液，載玻片，蓋玻片 【實驗內容與步驟【實驗內容與步驟】二、酵母菌二、酵母菌啤酒酵母菌落啤酒酵母菌落紅酵母菌落紅酵母菌落各種酵母的菌落各種酵母的菌落 細菌菌落細菌菌落 細菌菌落細菌菌落 橢圓形酵母橢圓形酵母 2個體形態(tài)特征觀察個體形態(tài)特征觀察酵母個體形態(tài)酵母個體形態(tài)酵母菌的芽殖酵母菌的芽殖 酵母菌的芽殖過程酵母菌的芽殖過程1 1泡；泡；2 2小管；小管；3 3核；核；4 4液泡液泡 酵母菌子囊孢子的形成過程酵母菌子囊孢子的形成過程 1 1、2 2、3 3、4 4：兩個細胞結合：兩個細胞結合5

9、5：接合子；：接合子；6 6、7 7、8 8、9 9：核分裂；：核分裂；1010、1111：核形成孢子：核形成孢子酵母菌假菌絲的形成酵母菌假菌絲的形成 圖中圖中1 1、2 2、3 3、4 4 是出芽的順是出芽的順序序 1. 1. 放線菌落形態(tài)及菌苔特征的觀察放線菌落形態(tài)及菌苔特征的觀察 觀察放線菌菌落的表面形狀、大小、顏色和邊觀察放線菌菌落的表面形狀、大小、顏色和邊緣等；用接種環(huán)挑取菌落，注意放線菌在基質上著緣等；用接種環(huán)挑取菌落，注意放線菌在基質上著生緊密情況。區(qū)別基內菌絲、氣生菌絲及孢子絲的生緊密情況。區(qū)別基內菌絲、氣生菌絲及孢子絲的著生部位，取斜面培養(yǎng)的白色鏈霉菌、紅色鏈霉菌著生部位，取

10、斜面培養(yǎng)的白色鏈霉菌、紅色鏈霉菌觀察菌苔特征，注意孢子顏色，營養(yǎng)菌絲顏色和色觀察菌苔特征，注意孢子顏色，營養(yǎng)菌絲顏色和色素分泌情況等。素分泌情況等。 三、放線菌三、放線菌放線菌菌落特征放線菌菌落特征放線菌菌絲形態(tài)放線菌菌絲形態(tài) 2個體形態(tài)特征觀察：個體形態(tài)特征觀察：用接種鏟連同菌苔一薄用接種鏟連同菌苔一薄層培養(yǎng)基取下一小塊，平置于載玻片上進行觀察，層培養(yǎng)基取下一小塊，平置于載玻片上進行觀察，注意放線菌菌絲直徑大小，孢子絲的形狀。在低倍注意放線菌菌絲直徑大小，孢子絲的形狀。在低倍鏡下觀察基內菌絲和氣生菌絲，在高倍鏡下觀察孢鏡下觀察基內菌絲和氣生菌絲，在高倍鏡下觀察孢子絲。子絲。 鏈霉菌形態(tài)鏈霉菌

11、形態(tài) 放線菌菌絲放線菌菌絲 放線菌孢子絲放線菌孢子絲 放線菌的孢子絲描繪圖放線菌的孢子絲描繪圖 報告內容報告內容1. 繪出啤酒酵母、假絲酵母、裂殖酵母的個體形繪出啤酒酵母、假絲酵母、裂殖酵母的個體形態(tài)圖，并標明死活細胞。態(tài)圖，并標明死活細胞。2. 在同一平板培養(yǎng)基上長有細菌及酵母兩種菌在同一平板培養(yǎng)基上長有細菌及酵母兩種菌落，你如何區(qū)別？落，你如何區(qū)別？3. 3. 繪出白色鏈霉菌的氣生菌絲、孢子絲和孢子繪出白色鏈霉菌的氣生菌絲、孢子絲和孢子的形態(tài)圖。的形態(tài)圖。4. 4. 在顯微鏡下，如何區(qū)分基內菌絲和氣生菌絲？在顯微鏡下，如何區(qū)分基內菌絲和氣生菌絲？ 【實驗目的【實驗目的】 【實驗原理【實驗原

12、理】1 1 菌種：毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉。菌種：毛霉、黑根霉、青霉、黑曲霉。2 2 乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉藍溶液，乳酸石炭酸溶液、乳酸石炭酸棉藍溶液，接種鉤，接種鏟。接種鉤，接種鏟。一、實驗材料一、實驗材料 【實驗內容與步驟【實驗內容與步驟】二、菌落特征的觀察二、菌落特征的觀察 用肉眼觀察生長在用肉眼觀察生長在PDA瓊脂平板上的各瓊脂平板上的各種霉菌菌落，并根據(jù)下列要求對每種霉菌的菌種霉菌菌落，并根據(jù)下列要求對每種霉菌的菌落特征加以描述。落特征加以描述。1.菌落的大?。壕窒奚L或蔓延生長，菌菌落的大?。壕窒奚L或蔓延生長，菌落的直徑和高度。落的直徑和高度。2.菌落的顏色：正面和背面的

13、顏色，培養(yǎng)菌落的顏色：正面和背面的顏色，培養(yǎng)基的顏色變化?；念伾兓?.菌落的形態(tài)：棉絮狀、網(wǎng)狀、疏松或緊菌落的形態(tài)：棉絮狀、網(wǎng)狀、疏松或緊密、同心輪紋、放線狀的皺褶等。密、同心輪紋、放線狀的皺褶等。 青霉菌落青霉菌落 曲霉菌落曲霉菌落三、霉菌個體形態(tài)的觀察三、霉菌個體形態(tài)的觀察 1 1乳酸石炭酸制片法觀察乳酸石炭酸制片法觀察 在干凈的載玻片上加一滴乳酸石炭酸，用接種在干凈的載玻片上加一滴乳酸石炭酸，用接種針從菌落邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置于液體中，針從菌落邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置于液體中，再小心地把菌絲放開，然后用蓋玻片蓋上，注意不再小心地把菌絲放開，然后用蓋玻片蓋上，注意不要產(chǎn)生

14、氣泡。要產(chǎn)生氣泡。A：無隔膜菌絲：無隔膜菌絲 B：有隔膜菌絲：有隔膜菌絲 霉菌的靜孢子霉菌的靜孢子左：毛霉的孢子囊；右：囊軸左：毛霉的孢子囊；右：囊軸中：孢子囊壁破裂，露出靜孢子中：孢子囊壁破裂，露出靜孢子 曲霉的分生孢子曲霉的分生孢子梗和頂囊上的分梗和頂囊上的分生孢子生孢子 青霉的帚狀分青霉的帚狀分生孢子梗和分生孢子梗和分生孢子生孢子 曲霉的分生孢子曲霉的分生孢子頭彩圖頭彩圖 根霉根霉毛霉毛霉霉菌的厚垣孢子霉菌的厚垣孢子 孢囊孢子孢囊孢子 【實驗目的【實驗目的】 【實驗原理【實驗原理】 【實驗內容與步驟【實驗內容與步驟】培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基分裝 棉塞的做法棉塞的做法 移液管包扎法移液管包扎法高壓

15、蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋 斜面的擺放方法斜面的擺放方法幾種常用培養(yǎng)基幾種常用培養(yǎng)基 【思考題【思考題】 【實驗目的【實驗目的】 從混雜的微生物群體中獲得只含有某從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。分離與純化。 需要嚴格的無菌操作，否則使得微生需要嚴格的無菌操作，否則使得微生物實驗毫無意義。物實驗毫無意義。 【實驗原理【實驗原理】 【實驗內容與步驟【實驗內容與步驟】無菌操作環(huán)節(jié)無菌操作環(huán)節(jié)分離接種前，將無菌室、接種室、實驗臺消毒；分離接種前，將無菌室、接種室、實驗臺消毒；進入無菌室前，工作人員應肥皂洗雙手，穿戴工作服

16、、進入無菌室前，工作人員應肥皂洗雙手，穿戴工作服、鞋、帽。鞋、帽。接種的試管、三角瓶作好標記，注明培養(yǎng)基、菌種名接種的試管、三角瓶作好標記，注明培養(yǎng)基、菌種名稱、日期，移入接種室內的物品，需消毒；稱、日期，移入接種室內的物品，需消毒；操作過程不能離開酒精燈火焰，不許交談；操作過程不能離開酒精燈火焰，不許交談；接種工具使用前、后均要經(jīng)火焰灼燒滅菌。接種工具使用前、后均要經(jīng)火焰灼燒滅菌。操作動作應正確，輕而迅速。操作動作應正確，輕而迅速。實驗內容與步驟實驗內容與步驟二、稀釋平板分離法二、稀釋平板分離法制備樣品稀釋液制備樣品稀釋液加入加入15ml15ml、45455050培養(yǎng)基，混勻，凝固，制成平板

17、培養(yǎng)基，混勻，凝固，制成平板吸取吸取1ml1ml稀釋樣液注入相應編號的無菌平皿中稀釋樣液注入相應編號的無菌平皿中倒置，適溫培養(yǎng)倒置，適溫培養(yǎng)(24(2448h48h），觀察計數(shù)），觀察計數(shù)稱?。ǚQ?。ㄎ∪?0ml ）10g樣品樣品 放入裝放入裝90ml無菌水的三角瓶里無菌水的三角瓶里 震蕩混勻震蕩混勻20min ，制成稀釋液制成稀釋液10-1 用無菌吸管吸取用無菌吸管吸取1ml的的10-1稀釋液，注入裝稀釋液，注入裝9ml無菌水試管中無菌水試管中 制成稀釋液制成稀釋液10-2 以同樣的方法進一步稀釋成以同樣的方法進一步稀釋成10-3、10-4、10-5 、 10-6每稀釋一個濃度，必須更換

18、一支無菌吸管。每稀釋一個濃度，必須更換一支無菌吸管。選取三個高稀釋度，每個稀釋度制二套平板。選取三個高稀釋度，每個稀釋度制二套平板。吸樣時應來回吹吸三次。吸樣時應來回吹吸三次。用稀釋平板計數(shù)時，待測菌稀釋度的選擇應根據(jù)樣用稀釋平板計數(shù)時，待測菌稀釋度的選擇應根據(jù)樣品確定。品確定。樣品中所含待測菌的數(shù)量多時，稀釋度應高，反之樣品中所含待測菌的數(shù)量多時，稀釋度應高，反之則低。則低。 樣品稀釋流程圖樣品稀釋流程圖 固體培養(yǎng)基溶化，冷卻至固體培養(yǎng)基溶化，冷卻至5050在酒精燈火焰旁，倒制平板在酒精燈火焰旁，倒制平板灼燒接種環(huán)灼燒接種環(huán)取樣取樣伸入培養(yǎng)皿伸入培養(yǎng)皿輕輕劃線輕輕劃線倒置，適溫培養(yǎng)倒置，適溫

19、培養(yǎng)(24(2448h48h），觀察計數(shù)），觀察計數(shù)三、平板劃線分離法三、平板劃線分離法平板劃線分離法平板劃線分離法平板劃線分離和分區(qū)示意圖平板劃線分離和分區(qū)示意圖平板劃線分離生長的菌落平板劃線分離生長的菌落平板劃線操作要點平板劃線操作要點【實驗目的【實驗目的】【實驗原理【實驗原理】【】【實驗【實驗】手指的實驗手指的實驗未洗的手指未洗的手指清水洗凈的手指清水洗凈的手指肥皂洗凈的手肥皂洗凈的手指指 微生物的溫度存活試驗微生物的溫度存活試驗 根據(jù)微生物最適生長的溫度范圍，可分高根據(jù)微生物最適生長的溫度范圍，可分高溫菌、中溫菌、低溫菌。自然界中絕大部分微溫菌、中溫菌、低溫菌。自然界中絕大部分微生物屬

20、于中溫菌，但不同微生物對溫度的抵抗生物屬于中溫菌，但不同微生物對溫度的抵抗力不同，特別是芽孢桿菌對溫度抵抗力強。力不同，特別是芽孢桿菌對溫度抵抗力強。化學藥物對微生物的影響化學藥物對微生物的影響青霉素的殺菌過程青霉素的殺菌過程【實驗目的【實驗目的】【實驗原理【實驗原理】【】【】細菌細菌37黃為陰性黃為陰性E.coli、腸細菌、腸細菌 1-2環(huán)環(huán)48h加加2-3滴甲基紅液滴甲基紅液桔紅為陽性桔紅為陽性細菌細菌產(chǎn)氣桿菌、腸細菌產(chǎn)氣桿菌、腸細菌1-2環(huán)環(huán)3724h加加1/2培養(yǎng)液的培養(yǎng)液的40% NaoH與等量的與等量的5% -萘酚萘酚否則為陰性否則為陰性紅色為陽性紅色為陽性縮合縮合脫羧脫羧加強堿液

21、加強堿液3715-30分鐘分鐘M中的胍基中的胍基葡萄糖2COCOOHCH3CH3COCOHCOOHCH3CH3COCHOHCH3-2HCH3CHOHCHOHCH3乙酰甲基甲醇CH3COCOCH3-2H+OH-二乙酰丙酮酸乙酰乳酸2,3-丁二醇-CO2-CO2CH3COCOCH3二乙酰+ HN=CNH2NH2NNHNCCCCH3CH3+2H2OV.P試驗反應過程試驗反應過程細菌細菌E.coil、腸細菌、腸細菌1-2環(huán)環(huán)3748h否則為陰性否則為陰性紅色為陽性紅色為陽性加加23滴吲哚試劑滴吲哚試劑否則為否則為陰性陰性紅色為紅色為陽性陽性E.coli、腸細菌、腸細菌1-2環(huán)環(huán)3748h注意：加入試劑

22、后不可再搖動，否則被混合，紅色不明顯。注意：加入試劑后不可再搖動，否則被混合，紅色不明顯。吲哚試驗反應過程吲哚試驗反應過程E.coil、腸細菌、腸細菌1-2環(huán)環(huán)3748h加格里斯試劑加格里斯試劑A和和B液各一滴液各一滴陰性陰性立即或立即或10分鐘分鐘紅色為紅色為陽性陽性產(chǎn)生桿菌、腸細菌產(chǎn)生桿菌、腸細菌1-2環(huán)環(huán)372-4d二苯胺和濃硫酸二苯胺和濃硫酸無蘭色為無蘭色為陽性陽性蘭色為蘭色為陰性陰性陰性陰性加格里斯試劑加格里斯試劑A和和B液各一滴液各一滴立即或立即或10分鐘分鐘紅色為紅色為陽性陽性產(chǎn)氣桿菌、腸細菌產(chǎn)氣桿菌、腸細菌1-2環(huán)環(huán)372-4d二苯胺和濃硫酸二苯胺和濃硫酸無蘭色為無蘭色為陽性陽

23、性蘭色為蘭色為陰性陰性HNO2+NH2SO3H重氮化作用N2SO3+H2O對重氮苯磺酸N2SO3NH2N=NO3SNH2-N-萘胺偶氮苯磺酸（紅色）硝酸鹽還原反應過程硝酸鹽還原反應過程黑色沉淀為陽性黑色沉淀為陽性E.coli、淡、淡6112 1-2環(huán)環(huán)3724h細菌細菌否則為否則為陰性陰性細菌細菌否則為否則為陰性陰性綠色變藍色為綠色變藍色為陽性陽性E.coli、產(chǎn)氣桿菌、產(chǎn)氣桿菌1-2環(huán)環(huán)372-4d溴麝香草酚溴麝香草酚藍由藍由綠色變綠色變?yōu)樯钐m色為深蘭色。E.coil、腸細菌、腸細菌1-2環(huán)環(huán)3748h呈固體為呈固體為陰性陰性呈液體為呈液體為陽性陽性E.coli、產(chǎn)氣桿菌、產(chǎn)氣桿菌1-2環(huán)環(huán)

24、室溫室溫2-3dE.coli加碘液加碘液蘇云金桿菌蘇云金桿菌否則為陰性否則為陰性有透明圈為有透明圈為陽性陽性1d【】【】【實驗要求與安排實驗要求與安排】要求：根據(jù)國標檢驗程序每個小組從準備材料到檢驗結要求：根據(jù)國標檢驗程序每個小組從準備材料到檢驗結果要獨立完成檢驗任務，并呈交檢驗報告。果要獨立完成檢驗任務，并呈交檢驗報告。安排：安排：1、根據(jù)學號順序、根據(jù)學號順序4個人為一個檢驗小組。個人為一個檢驗小組。 2、每個小組購置四種不同的罐頭產(chǎn)品（最好購、每個小組購置四種不同的罐頭產(chǎn)品（最好購買到可能會有問題的產(chǎn)品）。買到可能會有問題的產(chǎn)品）。 3、 利用課余時間提前準備實驗材料，并最終由利用課余時間提前準備實驗材料，