組織學(xué)與胚胎學(xué)教學(xué)課件西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院人體解剖與組

1、1組織學(xué)組織學(xué) 與胚胎學(xué)與胚胎學(xué) 教學(xué)課件教學(xué)課件西西 安安 交交 通通 大大 學(xué)學(xué) 醫(yī)醫(yī) 學(xué)學(xué) 院院人體解剖與組織胚胎學(xué)系人體解剖與組織胚胎學(xué)系2Dr. Jinsong Zhou緒論緒論(Introduction) I. 什么是組織學(xué)什么是組織學(xué)(Histology)?組織學(xué)是研究人體組織學(xué)是研究人體正常正常細(xì)微細(xì)微結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)。的科學(xué)。A. 微觀結(jié)構(gòu)微觀結(jié)構(gòu): 1. 光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡(Light microscope，LM): 計量單計量單位是位是微米微米( m )。(1 m =0.001 mm) 。2. 電子顯微鏡電子顯微鏡(Electron microsc

2、ope，EM): 計量單計量單位是位是納納米米(nm )。(1 nm =0.001 m) 。3光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)：1. 照明燈照明燈(Lamp)2. 聚光器聚光器(Condenser)3. 載物臺和切片夾載物臺和切片夾(Mechanical stage and specimen retainer)4. 推進(jìn)器推進(jìn)器(Mechanical stage adjustment knob)5. 物鏡物鏡(Objectives)6. 粗細(xì)螺旋粗細(xì)螺旋(Course and fine focus knob)7. 目鏡目鏡(Oculars)8. 照相機等接口照相機等接口(Connectio

3、n to camera, etc.)4B. 相關(guān)功能相關(guān)功能: 微觀結(jié)構(gòu)和其功能微觀結(jié)構(gòu)和其功能相適應(yīng)相適應(yīng)，反之亦然反之亦然。C. 人體結(jié)構(gòu)的人體結(jié)構(gòu)的4個層次個層次:1. 細(xì)胞細(xì)胞(Cell): 人體結(jié)構(gòu)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位。人體結(jié)構(gòu)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位。2. 組織組織(Tissue): 由一群結(jié)構(gòu)和功能相同或相似的細(xì)胞由一群結(jié)構(gòu)和功能相同或相似的細(xì)胞(及其及其細(xì)胞間質(zhì)細(xì)胞間質(zhì))構(gòu)成。人體內(nèi)有構(gòu)成。人體內(nèi)有4種基本組織：上皮組織，結(jié)締種基本組織：上皮組織，結(jié)締組織，肌組織和神經(jīng)組織。組織，肌組織和神經(jīng)組織。3. 器官器官(Organ): 由組織有機地結(jié)合起來而構(gòu)成。由組織有機地結(jié)合起來而構(gòu)

4、成。4. 系統(tǒng)系統(tǒng)(System): 由結(jié)構(gòu)相似且功能相關(guān)的器官構(gòu)成。由結(jié)構(gòu)相似且功能相關(guān)的器官構(gòu)成。5II. 為什么要學(xué)習(xí)組織學(xué)為什么要學(xué)習(xí)組織學(xué)?1. 組織學(xué)又叫組織學(xué)又叫微觀解剖學(xué)微觀解剖學(xué)(Microanatomy)，是，是解剖學(xué)解剖學(xué)知識知識的進(jìn)一步完善。的進(jìn)一步完善。2. 結(jié)構(gòu)是功能的基礎(chǔ)，學(xué)好組結(jié)構(gòu)是功能的基礎(chǔ)，學(xué)好組織學(xué)是學(xué)好織學(xué)是學(xué)好生理學(xué)生理學(xué)(Physiology)的基礎(chǔ)。的基礎(chǔ)。3. 只有了解正常結(jié)構(gòu)，才能學(xué)只有了解正常結(jié)構(gòu)，才能學(xué)習(xí)其異常變化。因此組織學(xué)是習(xí)其異常變化。因此組織學(xué)是病理學(xué)病理學(xué)(Pathology)的基礎(chǔ)。的基礎(chǔ)。4. 組織學(xué)成績不及格，必須補組織學(xué)成

5、績不及格，必須補考，重修和留級。考，重修和留級。6III. 怎樣學(xué)習(xí)組織學(xué)怎樣學(xué)習(xí)組織學(xué)?A. LM技術(shù)技術(shù):分辨率分辨率(Resolution)是指能夠是指能夠分辨相鄰兩點之間的分辨相鄰兩點之間的最小距最小距離離。LM的分辨率約為的分辨率約為200m。1. 切片切片(Section): 將組織切薄將組織切薄使使光線可以透過光線可以透過。a. 固定固定(Fixation): 為為保存保存新鮮新鮮組織的微觀結(jié)構(gòu)，盡快將組組織的微觀結(jié)構(gòu)，盡快將組織浸入到酒精，甲醛，苦味織浸入到酒精，甲醛，苦味酸，酸，Bouins 液或液或Zenkers液液等固定劑中。等固定劑中。7b. 石蠟包埋石蠟包埋(Para

6、ffin embedding):* 脫水脫水(Dehydration): 用濃度用濃度逐漸升高的逐漸升高的酒精酒精 (70100%)將組織中的水完全置換出將組織中的水完全置換出來。來。* 透明透明(Clearing): 用用二甲苯二甲苯完全置換出酒精。完全置換出酒精。* 浸蠟浸蠟(Infiltration): 在在6062 C時，用時，用液態(tài)石蠟液態(tài)石蠟完完全置換出二甲苯。室溫時全置換出二甲苯。室溫時石蠟?zāi)淌災(zāi)坛晒虘B(tài)，內(nèi)含待成固態(tài)，內(nèi)含待切組織。切組織。8c. 切片切片: 用切片機將組織切成用切片機將組織切成120m厚厚的蠟片，然后將其的蠟片，然后將其放放到溫水上，待其完全展開后，到溫水

7、上，待其完全展開后，裱到裱到有粘附劑的載玻片上。有粘附劑的載玻片上。9除切片外，還有其他處理組織的方法：除切片外，還有其他處理組織的方法：* 鋪片鋪片(Whole mount): 用于很薄的組織，如腸系膜。用于很薄的組織，如腸系膜。* 磨片磨片(Ground section): 用于很堅硬的組織，如骨和牙。用于很堅硬的組織，如骨和牙。* 涂片涂片(Smear): 用于液態(tài)組織，如血液，精液和唾液。用于液態(tài)組織，如血液，精液和唾液。102. 染色染色(Staining): 染料可以將微觀結(jié)構(gòu)顯示不同的顏色染料可以將微觀結(jié)構(gòu)顯示不同的顏色以便觀察鑒別。在染色前，需要以便觀察鑒別。在染色前，需要脫蠟

8、入水脫蠟入水，因為染料，因為染料是水溶性的。是水溶性的。11a. 最常用的染料是最常用的染料是蘇木素蘇木素(Hematoxylin, H)和和伊紅伊紅(Eosin, E)。* 蘇木素是蘇木素是堿性堿性染料，染料，藍(lán)紫色藍(lán)紫色，可以使細(xì)胞核等著色。被蘇木，可以使細(xì)胞核等著色。被蘇木素著色的結(jié)構(gòu)本身為素著色的結(jié)構(gòu)本身為酸性酸性，具有，具有嗜堿性嗜堿性(Basophilic)。12 * 伊紅是伊紅是酸性染料酸性染料，粉紅色粉紅色?？梢詫⒋蠖鄶?shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染成?？梢詫⒋蠖鄶?shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染成紅色。紅色。被伊紅著色的結(jié)構(gòu)本身為被伊紅著色的結(jié)構(gòu)本身為堿性堿性，具有，具有嗜酸性嗜酸性(Acidophilic)

9、。* 不易被蘇木素和伊紅著色的結(jié)構(gòu)具有不易被蘇木素和伊紅著色的結(jié)構(gòu)具有嗜中性嗜中性(Neutrophilic)。13 肥大細(xì)胞的顆粒被甲苯銨藍(lán)肥大細(xì)胞的顆粒被甲苯銨藍(lán)(一種藍(lán)色染料一種藍(lán)色染料)染成紫紅色染成紫紅色b. 如果某結(jié)構(gòu)顯示的顏色和染料本身的顏色不同，該結(jié)如果某結(jié)構(gòu)顯示的顏色和染料本身的顏色不同，該結(jié)構(gòu)具有構(gòu)具有異染性異染性(Metachromasia)。c. 如果某結(jié)構(gòu)能將銀離子還原成銀原子，并吸附銀原子如果某結(jié)構(gòu)能將銀離子還原成銀原子，并吸附銀原子而使自身顯示棕黑色，該結(jié)構(gòu)具有而使自身顯示棕黑色，該結(jié)構(gòu)具有嗜銀性嗜銀性(Argyrophilic)。14網(wǎng)狀纖維具有嗜銀性，因此可以

10、用銀鹽染色來顯示。網(wǎng)狀纖維具有嗜銀性，因此可以用銀鹽染色來顯示。15 H&E染色的中等動靜脈染色的中等動靜脈d. 不同的染色方法，其結(jié)果不同。不同的染色方法，其結(jié)果不同。16醛復(fù)紅染色的中等動靜脈醛復(fù)紅染色的中等動靜脈17在染色后，重新進(jìn)入酒精和二甲苯，最后用中性樹膠在染色后，重新進(jìn)入酒精和二甲苯，最后用中性樹膠封片封片，以便長期保存。，以便長期保存。* 切片切片: 固定固定 梯度酒精梯度酒精 二甲苯二甲苯 石蠟。石蠟。* 染色染色: 石蠟石蠟 二甲苯二甲苯梯度酒精梯度酒精 水。水。* 保存保存: 水水 梯度酒精梯度酒精 二甲苯二甲苯中性樹膠。中性樹膠。18B. EM技術(shù)技術(shù):1. EM可分為

11、可分為透射電透射電鏡鏡(TEM)和和掃描電鏡掃描電鏡(SEM)2類。類。 2. EM的原理和的原理和LM相相似，但用似，但用電子束電子束代替代替光線，光線，磁場磁場代替玻璃代替玻璃透鏡。分辨率約為透鏡。分辨率約為0.2 nm。 193. EM的組織的制備與的組織的制備與LM的相似，但有以下不同的相似，但有以下不同:a. 通常使用戊二醛和四氧化鋨作通常使用戊二醛和四氧化鋨作雙重固定雙重固定。b. 切片切片超薄超薄 (厚度小于厚度小于90nm)，塑膠塑膠包埋。包埋。c. 用用重金屬鹽重金屬鹽如醋酸鈾或醋酸鉛等染色。因此，所有如醋酸鈾或醋酸鉛等染色。因此，所有 原始的電鏡圖片都是原始的電鏡圖片都是黑

12、白黑白的。的。20SEM顯示巨噬細(xì)胞表面顯示巨噬細(xì)胞表面21TEM顯示胰腺腺泡顯示胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。22C. 特殊的染色方法特殊的染色方法:1. 組織化學(xué)組織化學(xué)(Histochemistry, 細(xì)胞化學(xué)細(xì)胞化學(xué))法法: 通過生物化學(xué)的通過生物化學(xué)的 方法在原位產(chǎn)生不溶解的有顏色的反應(yīng)產(chǎn)物，來顯示方法在原位產(chǎn)生不溶解的有顏色的反應(yīng)產(chǎn)物，來顯示 微細(xì)結(jié)構(gòu)的位置，然后用顯微鏡觀察。微細(xì)結(jié)構(gòu)的位置，然后用顯微鏡觀察。 PAS 反應(yīng)反應(yīng): 用來顯示用來顯示多糖多糖的分布。先用過碘酸的分布。先用過碘酸(Periodic acid )將多糖氧化，在多糖表面形成戊二醛結(jié)構(gòu)，然后將多糖氧化，

13、在多糖表面形成戊二醛結(jié)構(gòu)，然后用無色亞硫酸品紅用無色亞硫酸品紅( Schiff試劑試劑) 還原戊二醛形成還原戊二醛形成紫紅色紫紅色沉淀沉淀。23肝臟的肝臟的PAS染色染色242. 免疫細(xì)胞化學(xué)免疫細(xì)胞化學(xué)(Immunocytochemistry)染色法染色法:a. 待測結(jié)構(gòu)或化學(xué)物質(zhì)被看作抗原待測結(jié)構(gòu)或化學(xué)物質(zhì)被看作抗原(Antigen)，通過非常敏感，通過非常敏感和專一的免疫反應(yīng)使抗原和被標(biāo)記的抗體和專一的免疫反應(yīng)使抗原和被標(biāo)記的抗體(Antibody)結(jié)合，結(jié)合，然后顯示標(biāo)記物，在原位產(chǎn)生不溶有色的反應(yīng)產(chǎn)物，最后然后顯示標(biāo)記物，在原位產(chǎn)生不溶有色的反應(yīng)產(chǎn)物，最后用顯微鏡觀察。用顯微鏡觀察。25b. 2種基本染色法種基本染色法: * 直接法直接法: 第一抗體被標(biāo)記。第一抗體被標(biāo)記。* 間接法間接法: 第一抗體也被看作抗原，而第二抗體被標(biāo)記。因第一抗體也被看作抗原，而第二抗體被標(biāo)記。因為信號被放大，因此更加敏感。為信號被放大，因此更加敏感。3. 放射自顯影放射自顯影(Autoradiography): 給細(xì)胞所要代謝的物質(zhì)分子給細(xì)胞所要代謝的物質(zhì)分子上