大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠

1、細(xì)胞工廠 細(xì)胞工廠細(xì)胞工廠 產(chǎn)品與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品與競(jìng)爭(zhēng) 市場(chǎng)市場(chǎng) 應(yīng)用應(yīng)用內(nèi)容 一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工廠 二）生物制品 三）疫苗 四）現(xiàn)代生物技術(shù)與基因工程 五）單克隆抗體與抗體藥物 六）干細(xì)胞與體細(xì)胞治療我們熟知的細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1）無(wú)菌環(huán)境：超凈臺(tái)、安全柜2）生長(zhǎng)環(huán)境：CO2培養(yǎng)箱3）營(yíng)養(yǎng)環(huán)境：培養(yǎng)基4）貼壁環(huán)境：培養(yǎng)瓶（皿）等、貼壁環(huán)境：培養(yǎng)瓶（皿）等、細(xì)胞工廠細(xì)胞工廠動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài) 貼壁細(xì)胞：細(xì)胞的生長(zhǎng)必須有可以貼附的支持物表面，依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長(zhǎng)、增殖，當(dāng)細(xì)胞在該表面生長(zhǎng)后，一般形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細(xì)胞型或上皮樣細(xì)胞型 懸浮細(xì)

2、胞：懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)，如淋巴細(xì)胞、Namalwa細(xì)胞 兼性貼壁細(xì)胞：中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、小鼠L929細(xì)胞 （一）貼附型：（一）貼附型：大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞貼附貼附: :是大多數(shù)有機(jī)體是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞細(xì)胞在體內(nèi)在體內(nèi)生存生存和和生長(zhǎng)發(fā)育生長(zhǎng)發(fā)育的的基本基本存在方式存在方式結(jié)果結(jié)果: : 基于貼附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組基于貼附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須織，有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須貼附貼附于一于一固相表面固相表面才能才能生生存存和和生長(zhǎng)生長(zhǎng)。培養(yǎng)時(shí)：培養(yǎng)時(shí)：這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后這些

3、細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要貼附于同樣需要貼附于某一固相表面才能生存和生長(zhǎng)，因而某一固相表面才能生存和生長(zhǎng)，因而屬于貼附型細(xì)胞屬于貼附型細(xì)胞貼附貼附(錨定或錨著錨定或錨著)依賴型依賴型(性性)細(xì)胞：細(xì)胞：唯有貼附于固相表面唯有貼附于固相表面才能生存的細(xì)胞才能生存的細(xì)胞貼附生長(zhǎng)型細(xì)胞生長(zhǎng)型細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)皿、6孔板、孔板、96孔板孔板細(xì)胞貼附材料與表面貼附的固相表面材料：貼附的固相表面材料：玻璃、塑料（聚苯乙烯）玻璃、塑料（聚苯乙烯）玻璃：本身具有親水性，適于細(xì)胞貼壁玻璃：本身具有親水性，適于細(xì)胞貼壁塑料：沒(méi)有親水性，不能使細(xì)胞貼壁，所以必須在塑

4、料：沒(méi)有親水性，不能使細(xì)胞貼壁，所以必須在 塑料表面進(jìn)行親水性接枝（等離子處理）塑料表面進(jìn)行親水性接枝（等離子處理）（二）懸浮型：（二）懸浮型：見(jiàn)于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。見(jiàn)于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長(zhǎng)。這類細(xì)胞容易胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長(zhǎng)。這類細(xì)胞容易大量繁殖。大量繁殖。概念：概念：培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)來(lái)源：來(lái)源：自血，脾或骨髓，血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞自血，脾或骨髓，血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞特點(diǎn)：特

5、點(diǎn)：在在懸浮中生長(zhǎng)良好懸浮中生長(zhǎng)良好細(xì)胞細(xì)胞圓形圓形，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)，單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán)優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：生存空間大，生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便提供數(shù)量大，傳代方便( (不需消化不需消化) )，易于收獲，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：純化不方便，不能通過(guò)離心將死、活細(xì)胞分離純化不方便，不能通過(guò)離心將死、活細(xì)胞分離懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)型細(xì)胞懸浮培養(yǎng)磁力攪拌器大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞工廠培養(yǎng)技術(shù)在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用.doc轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的缺點(diǎn) 轉(zhuǎn)瓶技術(shù)為傳統(tǒng)的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，細(xì)胞接種在旋轉(zhuǎn)的圓筒形培養(yǎng)器-轉(zhuǎn)瓶中，培養(yǎng)過(guò)程中轉(zhuǎn)瓶不斷旋轉(zhuǎn)，使細(xì)胞交替接觸培養(yǎng)液和空氣。 缺點(diǎn)：勞動(dòng)強(qiáng)度大，占

6、地空間大，單位體積提供細(xì)胞生長(zhǎng)的表面積小，細(xì)胞生長(zhǎng)密度低，瓶間差異較難控制等，因而難以產(chǎn)業(yè)化或規(guī)模化生產(chǎn)。 重要的是：轉(zhuǎn)瓶由于不是靜止培養(yǎng)，產(chǎn)品質(zhì)量經(jīng)常達(dá)不到要求或由于細(xì)胞易破碎而存在DNA毒性潛在危險(xiǎn)，據(jù)稱國(guó)家準(zhǔn)備淘汰轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)技術(shù)。 細(xì)胞工廠 用于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)與生產(chǎn)細(xì)胞工廠關(guān)鍵技術(shù)：貼壁處理：高真空等離子接枝表面處理（know-how: 接枝材料與接枝技術(shù)）材料性能：生物相容性（無(wú)細(xì)胞毒性）多層焊接技術(shù)：密封性與牢固性滅菌技術(shù)：Y射線輻照細(xì)胞工廠競(jìng)爭(zhēng) Nunc Corning DHS DHS 細(xì)胞工廠 DHS大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng) 單頁(yè).pdfNunc Cell FactoryCorning

7、CellSTACK ChamberChoice of traditional surface treatment(TC), new Corning CellBIND Surface for enhanced cell attachment, or Ultra-Low Attachment Surface for reduced cell attachmentCorning CellSTACK Chamber三種細(xì)胞工廠的比較 材料：均為PS塑料 表面處理：各自的Know-how 頂層：DHS同Nunc, 便于顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況 焊接工藝：Nunc采用超聲焊接，Corning采用特殊膠粘接，Corning的更加牢固（不易開(kāi)裂），所以DHS采用Corning的粘接工藝 只有DHS是可以定制任意層的細(xì)胞工廠細(xì)胞工廠的使