紫杉醇的性質(zhì)及色譜分析方法

1、 紫杉醇的性質(zhì)及色譜分析方法 摘要 紫杉醇是從紫杉(Taxus brevifolia)樹皮中所提得，是紅豆杉屬植物中的一種復雜的次生代謝產(chǎn)物， 也是目前所了解的惟一一種可以促進微管聚合和穩(wěn)定已聚合微管的藥物。已成為目前全球銷售量排名第一的抗腫瘤藥物。綜述紫杉醇的發(fā)現(xiàn)歷史、來源、性質(zhì)及色譜分析方法。 Abstract Paclitaxel is extracted from Taxus brevifolia bark,whichnot only is one of the plants of the genus Taxus chinensis complex secondary metaboli

2、tes, also is the only kind of antitumor drugs that can promote microtubule polymerization and stable microtubule polymerization till now. It has become the top sales in the worldwide . Review of Paclitaxel history, origin, nature and chromatographic methods. 關鍵詞：發(fā)現(xiàn)歷史； 來源； 性質(zhì)； 紫杉醇； 色譜Keyword：Discover

3、y history; Source; Properties; Paclitaxel; The chromatographic1.紫杉醇簡介：1.1發(fā)現(xiàn)歷史1963年美國化學家瓦尼（M.C. Wani）和沃爾（Monre E. Wall）首次從一種生長在美國西部大森林中稱謂太平洋杉（Pacific Yew）樹皮和木材中分離到了紫杉醇的粗提物。在篩選實驗中，Wani和 Wall發(fā)現(xiàn)紫杉醇粗提物對離體培養(yǎng)的鼠腫瘤細胞有很高活性，并開始分離這種活性成份。由于該活性成份在植物中含量極低，直到1971年，他們才同杜克（Duke）大學的化學教授姆克法爾（Andre T. McPhail）合作，通過x-射線分

4、析確定了該活性成份的化學結構一種四環(huán)二萜化合物，并把它命名為紫杉醇（taxol）。1.2來源 由于野生紅豆杉資源有限且紫杉醇含量極低，限制了紫杉醇制藥業(yè)的發(fā)展，全世界紫杉醇的需求量約為4000公斤/年，而總產(chǎn)量只有到300-400公斤/年。所以，從天然的紅豆杉中提取紫杉醇的方法遠遠不能滿足人們對紫杉醇日益增長的需要。因此，采用各種手段積極尋求紫杉醇新藥源生產(chǎn)途徑，擴大紫杉醇原料供應能力，已成為紫杉醇產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重點研究方向之一, 目前已取得了一定的進展, 其途徑可歸結為以下幾種：1.2.2天然紅豆杉植物提取 紫杉醇的最直接來源是對天然植物紅豆杉屬種樹皮和葉片中中提取。但由于紅豆杉數(shù)量極少,自身繁

5、殖率低，生長緩慢，且紫杉醇的含量又極低。在這種情況下，要獲得足夠的紫杉醇用于臨床研究和基礎研究，單純靠從天然植物中提取必將給紅豆杉屬植物的在自然界中的生存帶來極大的威脅。但由于從紅豆杉中提取紫杉醇的工藝已經(jīng)成熟且工業(yè)化。因此,人們可利用人工栽培的方法來解決天然資源不足的問題。規(guī)?；?、集約化營造紅豆杉人工原料林, 是目前解決紫杉醇原料短缺的最現(xiàn)實、最快捷解決紫杉醇原料緊缺的方法。近年來，我國紅豆杉人工種植發(fā)展迅速，云南農(nóng)科院高山經(jīng)濟植物所繁育了5萬株，成活率達94.3%，湖南綏寧縣林業(yè)局繁殖幼苗3000多株,現(xiàn)已移栽大田，黑龍江中醫(yī)藥大學人工育苗也獲成功。人工植物栽培的成功,為紫杉醇的獲取開辟了

6、廣闊的前景1。據(jù)不完全統(tǒng)計, 我國現(xiàn)有紅豆杉種植企業(yè)140多家, 現(xiàn)已在云南、福建、湖南、四川、黑龍江等地擁有一定規(guī)模的紅豆杉種植基地, 種植面積近15萬畝。紅豆杉人工種植對保護野生資源和滿足紫杉醇制藥工業(yè)的發(fā)展發(fā)揮了積極的作用。1.2.3化學合成 紫杉醇的全合成1994年初,Holto和Nicolaou幾乎同時宣告紫杉醇的全合成獲得成功2-3。此后紫杉醇全合成又在不同的研究小組獲得成功4-5，但由于紫杉醇是分子結構復雜的化合物,全合成途徑都包括25-40步化學反應,合成路線極其復雜,反應條件極難控制，所用化學試劑昂貴且收率低, 產(chǎn)品成本極高、效率低，目前尚未進入產(chǎn)業(yè)化。1.2.

7、3.2 紫杉醇的半合成 半合成法指的是將紅豆杉屬植物中所含的紫杉醇類似物經(jīng)過某些化學反應,將其轉(zhuǎn)化為紫杉醇。目前紫杉醇半合成法是為從天然紅豆杉針葉中提取分離10-去乙?；涂ㄍII(10-deacetylbaccatin III)或巴卡亭III (baccatin III)原料, 通過選擇性保護7位羥基, 然后再酰化10位羥基，得到7位保護的巴卡亭III, 然后與側鏈縮合,最后去掉保護基團得到紫杉醇。由于10-去乙酰基巴卡亭III和巴卡亭III在紅豆杉屬植物枝葉中含量較高，而且紅豆杉枝葉量大,再生能力強，為紫杉醇半合成提供了豐富的原料。現(xiàn)在紫杉醇的半合成方法已比較成熟，國外紫杉醇生產(chǎn)的主要企

8、業(yè)如美國Bristol-Myers Squibb Co.，現(xiàn)已利用半合成法進行工業(yè)化生產(chǎn)紫杉醇。目前,半合成紫杉醇被認為是除人工種植外,擴大紫杉醇來源的有效途徑。半合成法可以更大限度地利用植物資源, 但與直接提取紫杉醇的辦法并無本質(zhì)上區(qū)別,需要消耗大量紅豆杉樹木，仍然不能從根本上解決植物資源的匱乏問題。1.2.4 植物組織細胞培養(yǎng)利用植物細胞培養(yǎng)法生產(chǎn)紫杉醇，是各種研究方向中十分有吸引力的一個方向，細胞培養(yǎng)能夠連續(xù)均勻生產(chǎn)，受外界條件影響不大，而且可以在反應器中大規(guī)模培養(yǎng)，易于提高產(chǎn)量和進行產(chǎn)物的提取純化。美國農(nóng)業(yè)部于1991年就批準了Christen和 Gibson 等用細胞培養(yǎng)法生產(chǎn)紫杉醇

9、及其類似物的專利6-7。 1994年ESCAgenetics(CA, USA)也宣布用細胞培養(yǎng)的方法生產(chǎn)紫杉醇，用細胞培養(yǎng)法所得產(chǎn)物紫杉醇含量為樹皮的2-5倍8，但這個工作的細節(jié)沒有報道。中國的甘煩遠等發(fā)現(xiàn)云南紅豆杉細胞在發(fā)酵罐中生長速率達到12 g/L，紫杉醇含量為0.119%，約為成年樹樹皮中含量的12倍，為栽培植株的40倍9，但未見實際應用的報道，短期內(nèi)成功應用的可能性較小。目前，雖然紅豆杉細胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇取得了很大的進展，紫杉醇生物合成途徑基本清楚，細胞的生長和紫杉醇的產(chǎn)量已基本得到解決，有的已經(jīng)得到生物反應器放大階段，如美國一公司現(xiàn)在已經(jīng)完成4000 L的培養(yǎng)技術，正在進行2000

10、0 L規(guī)模的工業(yè)放大研究10，但植物細胞遺傳與生理的不穩(wěn)定性、細胞間的不一致性使得在培養(yǎng)工程中高產(chǎn)細胞系不能實現(xiàn)高產(chǎn)率，而且易發(fā)生遺傳變異產(chǎn)生其它代謝產(chǎn)物。另外，植物細胞培養(yǎng)技術較復雜，對反應器要求較高，也阻礙了通過細胞培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)紫杉醇的實現(xiàn)11。1.2.5微生物發(fā)酵法1993 年 Stierle 與 Stroble 首次報道了從太平洋紫杉樹中分離出 200 多個內(nèi)生真菌，對培養(yǎng)產(chǎn)物運用了 TLC、HPLC、ELISA、MS 和同位素標記等多種手段分析研究，發(fā)現(xiàn)一個真菌新種在培養(yǎng) 3 周后具有穩(wěn)定地產(chǎn)生紫杉醇的能力，被命名為Taxomyces andreanae，紫杉醇含量為 24-50

11、ng/L12, 隨后一系列產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌被分離到13-19，為人們展示了一個可能生產(chǎn)紫杉醇的誘人的新途徑。除已經(jīng)報道的內(nèi)生真菌外，加拿大的科研人員還從加拿大紅豆杉(Taxuscanadensis)的針葉中分離出一株產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生細菌 Brawinia taxi，其紫杉醇的產(chǎn)量為 200-1000 ng/L，該菌株已經(jīng)被保存在 ATCC (American Type Culture Collection)，遺憾的是目前分離到的內(nèi)生真菌紫杉醇產(chǎn)量都不高，尚達不到產(chǎn)業(yè)化的要求。但是真菌的遺傳操作比植物更簡單，通過發(fā)酵條件和應用現(xiàn)代生物技術，可望提高紫杉醇的產(chǎn)量，降低紫杉醇的價格來滿足市場的需求。所

12、以篩選產(chǎn)高產(chǎn)紫杉醇內(nèi)生真菌，用微生物發(fā)酵的方法生產(chǎn)紫杉醇，是目前解決藥源問題的有效途徑之一。1.2.6 從山榛等植物中提取紫杉醇榛子為樺木科(Bet ulaceae)、榛屬(Coryl us linn), 堅果樹種，世界有15個種, 廣泛分布在亞洲、歐洲、北美洲的溫帶地區(qū)。被學術界確認的有9個種，即美洲榛(C.America)、歐洲榛(C. avellana)、土耳其榛(C. colurna)等。榛子原產(chǎn)于我國，我國北方主要有兩個種，即平榛(C. heterophylla Fisch)和毛榛(C. mandshurica Maxim)，其分布范圍廣，遍布黃河、秦嶺以北地區(qū)。1998年美國俄勒崗

13、大學化學系Angela Hoffman博士等人發(fā)現(xiàn)從歐洲榛子中可以提取紫杉醇，她們發(fā)現(xiàn)至少從12個榛子樹中提取到紫杉醇，特別是Gasaway, Halls Giant, Lewis and Willamette這四個品種紫杉醇含量較高20-25。2006年意大利科學家Federica Bestoso等人也從歐洲榛子的愈傷組織提取到紫杉醇且在愈傷組織中紫杉醇水平與紅豆杉相當26。盡管山榛中的紫杉醇含量只有紅豆杉的1/10，但是山榛是被子植物，世界上被子植物的種類比裸子植物要大數(shù)百倍。另外，山榛生長十分迅速、資源極其豐富，且不怕任何病蟲害，更可貴的是山榛不僅枝葉、樹皮中能夠分離出了紫杉烷和紫杉醇等

14、活性成分，它的果實-山榛子殼中也含有紫杉醇。他們的發(fā)現(xiàn)為紫杉醇藥用新資源開發(fā)帶來了新的希望，既可降低紫杉醇的價格，又有助于保護紅豆杉這一珍稀植物資源。1999年美國科學家Roy Stahlhut等人從東非羅漢松(Podocarpaceae)中提取到紫杉醇，但含量較低(0.54 mg/kg 干重)27。張長河等對可能與紅豆杉有共同的起源的三尖杉(Cephalotaxus fortunei Hook.F.)的當年生幼莖和未成熟假種皮誘導出愈傷組織，HPLC分析發(fā)現(xiàn)含有紫杉醇和合成紫杉醇的前體10-去乙?；涂ㄍII等物質(zhì)28。周榮漢等從白豆杉(Pseudotaxus chienii)中分離到了紫

15、杉醇和短葉醇的存在29。這些發(fā)現(xiàn)可望為擴大紫杉醇原料來源的途徑之一。如果上述幾種紫杉醇技術開發(fā)的成功，將可大大緩解人們對紅豆杉的依賴，避免人為造成紅豆杉屬植物的物種的生存危機，有效降低紫杉醇應用成本，為臨床的廣泛應用提供可能。1.2.7 基因工程隨著基因工程技術的飛速發(fā)展和廣泛應用，利用現(xiàn)代生物技術提高植物或微生物中紫杉醇及其前體含量的研究成為近年來科研工作者研究的一個熱點。將紫杉醇生物合成途徑中的關鍵酶基因(或轉(zhuǎn)錄因子)導入植物或微生物中，獲得轉(zhuǎn)基因的細胞系、組織、再生植株，轉(zhuǎn)基因的真菌或細菌，并進行大規(guī)模的培養(yǎng)，有可能從根本上改變紫杉醇供應不足的局面，最終實現(xiàn)紫杉醇的商業(yè)化生產(chǎn)。利用基因工

16、程方法增加紅豆杉中紫杉醇的含量取決于兩個條件：一是分離紅豆杉中與紫杉醇生物合成相關的酶和基因；二是紅豆杉遺傳轉(zhuǎn)化和再生體系的建立。美國華盛頓州立大學的 Rodney Croteau 院士領導的研究小組對紫杉醇在植物體內(nèi)合成代謝機制的研究已經(jīng)取得一些重大意義的進展，目前除了有限的幾步反應尚不清晰外，其中編碼大部分催化反應的關鍵酶基因已經(jīng)被克隆并做了功能驗證30。 紅豆杉遺傳轉(zhuǎn)化比較困難，目前為止還沒有成功的再生植株文獻報道。但在這方也取得了一些重要進展，Richard等1993年用發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化太平洋紅豆杉獲得發(fā)根并檢測到了紫杉醇31。Ermanno等的專利則是用發(fā)根農(nóng)桿菌ATCC15834轉(zhuǎn)化

17、東北紅豆杉葉片, 獲得發(fā)根并提取到紫杉醇。但是這個專利沒有透露發(fā)根生長狀況和紫杉醇含量。Hamada等利用發(fā)根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化紅豆杉獲得發(fā)根,發(fā)根中紫杉醇含量比愈傷組織中增加50倍32。黃遵錫等報道用發(fā)根農(nóng)桿菌A4感染短葉紅豆杉芽外植體,30-35天后誘導發(fā)根, 誘導率達到30%，紅豆杉發(fā)根在無激素的B5培養(yǎng)液中懸浮培養(yǎng)20天，生物量增加9倍，是同等條件下短葉紅豆杉愈傷組織的2.9倍33。Han等利用根癌農(nóng)桿菌使太平洋紅豆杉和歐洲紅豆杉無菌莖段產(chǎn)生冠纓瘤，并用Southern雜交檢測到T-DNA的存在，從而首次證明紅豆杉可被農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化34。盛長忠等用土壤農(nóng)桿菌C58感染東北紅豆杉(T. cuspid

18、ate)的外植體、愈傷組織, 結果,處于對數(shù)生長期的愈傷組織感染5min時, 冠癭誘導率較高35。羅建平等用根癌農(nóng)桿菌T-DNA對云南紅豆杉原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化而實現(xiàn)插入誘變。所有這些研究結果為今后將目的基因?qū)爰t豆杉細胞奠定了一個良好的基礎36。目前部分微生物全基因組測序的完成, 促使人們利用基因工程技術, 將合成紫杉醇的基因簇轉(zhuǎn)移到宿主微生物里，實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)成為可能。Huang 等的研究報道將紫杉醇合成途徑中編碼三個酶異戊烯基焦磷酸(IPP)異構酶、香葉基香葉基焦磷酸(GGPP)合成酶和紫杉二烯(taxadiene)合成酶的基因轉(zhuǎn)到大腸桿菌Escherichia coli.中，使之過量表達來合成

19、紫杉二烯一種非常重要的紫杉醇的前體物。結果表明，本不產(chǎn)紫杉二烯的 Escherichia coli.中紫杉二烯的產(chǎn)量達 1.3 mg/l37。最近，Jennewein 等(2005)報道，將紅豆杉中的細胞色素 P450 還原酶與細胞色素 P450氧化酶基因轉(zhuǎn)到酵母中共表達，均在轉(zhuǎn)化菌中檢測到了它們的活性38。1.3主要性質(zhì) 【英文 名稱】 Paclitaxel 【別 名】 泰素，紫素，特素 【化學名稱】 5，20-環(huán)氧-1，2，4，7，10，13-六羥基紫杉烷-11-烯-9-酮-4，10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13（2R，3S）-N-苯甲酰-3-苯基異絲氨酸酯【分 子 式】 【分 子 量】

20、853.92【CA S NO】 33069-62-4【產(chǎn)品來源】 為紅豆杉科植物紅豆杉的干燥根、枝葉以及樹皮?！疽?guī)格含量】 99.5%【物理性質(zhì)】 白色結晶體粉末。無臭，無味。不溶于水，易溶于氯仿、丙酮等有機溶劑。2. 色譜分析方法2.1反相HPLC法分析紅豆杉樹皮和樹葉中紫杉醇及其類似物含量的研究39色譜條件：(l)等梯度洗脫:流動相為乙睛+水(45+55),流量1.0ml/min,紫外227nm檢測;每個樣品的分析時間為20mim。(2)梯度洗脫:流動相A為乙睛+水(25+75),B為乙睛+水(60+40)。流量1.0ml/min,紫外227nm檢測。梯度程序為:從0min到35min,B

21、的濃度從100%0%到;從35min到min,B的濃度保持在100%;從45min到46min,B的濃度從100%下降到O%,回到起始狀態(tài);繼續(xù)洗脫10min至色潛柱平衡和基線穩(wěn)定后進行下一次分析,整個分析時間約60min。2.2 高效液相色譜法測定南方紅豆杉中紫杉醇的含量40 色譜條件: 色譜柱：Kromasil ODS C18色譜柱；流動相 ：水 - 甲醇 - 乙腈（40：30：30）；檢測波長 ：227 nm ；流速為 1 mLmin-1；柱溫為 35 ；進樣量10 L。理論板數(shù)按紫杉醇峰計算不得低于 2 000。測定波長的確定 取紫杉醇對照品適量，加甲醇制成對照品溶液，置紫外分光光度計

22、記錄紫外吸收圖譜，結果顯示在 227 nm 處有最大吸收。2.3高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術測定毛榛中的紫杉醇含量41色譜條件： 色譜柱：Waters XBridge C18高效液相色譜柱(250 mm×46mm，5m)；洗脫梯度：流動相A為甲醇乙腈混合溶液(甲醇+乙腈=1+1)，B為含01乙酸銨的水溶液。005min，90A，10B；3035 min，A相從90升至100；45min 90A，10B。流速為04 mL·min；進樣量5斗L；柱溫35。2.4苯基-硅膠色譜介質(zhì)的合成及其在紫杉醇提純中的應用42紫杉醇的定性定量分析:采用4.6mmi.d×250mm的C

23、18柱，流動相為甲醇-乙腈-水（體積比為25:45:30）溶液，等度洗脫，流速為1.0mL/min，檢測波長為227nm。用紫杉醇標準品對照定性，外標法定量。2.5 HPLC法測定加拿大紫杉中紫杉醇的含量43色譜條件： 色譜柱為Agilent ZOBAX C18(250×4.6mm，5m)；流動相：甲醇：水(65：35)；流速：lmLmin；檢測波長：227nm；進樣量：20L：柱溫為室溫。2.6 D4020大孔樹脂提純發(fā)酵液中紫杉醇的研究44采用高效液相法(HPLC)進行檢測，色譜條件： 日本島津HPLC 2010CHT高效液相色譜儀，固定相：VP-0DS(C18)柱(D 46 m

24、m x 150 mm；5m)；流動相：V(乙腈)：V(甲醇)：V(水)=35：20：45；體積流量07 mLmim檢測波長227 rim；靈敏度：01AUFS；柱溫35；進樣量lOL。2.7 HPLC測定比較曼地亞紅豆杉和南方紅豆杉不同部位的紫杉醇含量45Chromatographic conditions: Chromatographic Colum: Phenomenex-C18( 250 mm×4.6mm,5m), flow rate: 0.8 mL/min, mobile phase:MeOH-water( gradient elution: 0 10 min, 65%met

25、hano;1325 min, 67% methano; 2675 min,100% methano;7680 min, 65% methanol), wave length: 227 nm, column temperature: 30e, injection volume: 20L.2.8 HPLC法測定南方紅豆杉種子中紫杉醇的含量46色譜條件： 色譜柱：Whatman C18(250×4.6mm，5m).流動相：乙腈-水（35:65-80；20）梯度洗脫，運行時間30min。柱溫：30。流速：1mL/min。紫杉醇檢測波長為227nm。進樣量為20L。2.9 HPLC法測定紫杉醇

26、血藥濃度條件的篩選47色譜條件: 色譜柱：C18(150minx46mm，5m)；檢測波長：227 nm；柱溫：25 ；流速：10 mL·min-1；流動相：分別用甲醇一乙腈一水(16：40：44 V/v)，甲醇一乙腈一磷酸鹽緩沖液(pH分別為3.0和4.0)(16：40：44V/v)，乙腈一磷酸水溶液(pH=3.0)(50：50V/v)和乙腈一磷酸鹽緩沖液(pH=40)(50：50V/v)為流動相，比較紫杉醇、多西紫杉醇及地西泮的出峰時間和峰形以及三者的分離度。2.10 RPHPLC 法測定新鄉(xiāng)種植紅豆杉樹皮中的紫杉醇48色譜條件: Agilent色譜柱(型號TCC18 250 m

27、m×46 mm，5 m)，流動相V(乙腈)：V(水)=50：50，流速1.0 mL/min，紫外檢測波長227 nm；進樣量為10L；柱溫為35。2.11 SPE-HPLC法快速檢測發(fā)酵液中紫杉醇的含量49色譜條件： 島津HP 2010C高效液相色譜儀，VP-ODS C18柱(150mm ×46mm)；流動相為甲醇：(v)水：(v)：乙腈(v)=20：45：35；流速0.7mlmin，檢測波長227 nm，靈敏度，01 AUFS，柱溫35，進樣量20L。2.12 高效液相色譜法測定不同生長年限南方紅豆杉中紫杉醇的含量50色譜條件： 色譜柱為大連伊利特Hypersil BDS

28、 C18柱(200 mm×4.6mm，5 m)，流動相為甲醇一水(58：42)，流速10ml.min-1，檢測波長為227nm，柱溫為25。理論板數(shù)經(jīng)紫杉醇峰計>3 000，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度>15。2.13 云南紅豆杉枝葉中紫杉醇和三尖杉寧堿含量的測定51色譜條件: 色譜柱：Angilent Hypersil ODS2柱（46mm×250mm×5m）；流動相：甲醇-乙腈-水（20:30:50）；柱溫：30：流速：1.0ml/min;檢測波長：227nm；進樣量：10L2.14 正相和反相柱層析組合分離純化紫杉醇52色譜分析： 采用HPLC對紫杉醇進

29、行分析，檢測波長為227nm，4.6mm×250mm的C18柱（BECKMAN公司），同溶劑洗脫（Isocratic elution),流動相為甲醇/乙腈/水（25:35:40），流速為1.0mL/min.2.15 正相色譜法分離純化紫杉醇工藝過程的研究53分析檢測用TLC法結合HPLC法， TLC法采用EMERCK公司生產(chǎn)的鋁制60F254硅膠板，板上硅膠厚度0 . 2 mm，HPLC為島津SCL14Avp液相色譜儀，檢測器型號SPD10Avp .流動相（體積比）甲醇：水（65 ： 35），流速1 . 0 mL / min .2.17 中性氧化鋁固相萃取-HPLC法測定紫杉醇含量5

30、4色譜條件: Hypersii C18柱（250mm × 4 . 6mm，5m）；流動相：甲醇-水-乙腈（22：45：33）；流速：1mL/ min；檢測波長：230nm。2.18 紫杉醇高產(chǎn)菌發(fā)酵產(chǎn)物的分離、純化和鑒定55 HPLC法測定純度及含量: Waters1525液相色譜儀，大連依利特 C18 柱 (150mm×46mm，5 m)，流動相：甲醇一水(70：30)，流速 07mLmin，檢測波長 227nm。3.結論 本文對紫杉醇進行了簡單概述，介紹了紫杉醇的發(fā)現(xiàn)歷史、來源、性質(zhì)。并對相應的檢識方法進行了簡單介紹，同時，還對紫杉醇的分布及存在形式進行了簡略描述。此外

31、，對紫杉醇的提取方式進行了一定的歸納，主要敘述了幾種提取方法。最后，討論了紫杉醇的色譜分析，主要高效液相色譜法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、固相萃取-高效液相色譜法、正相和反相柱層析組合法、反相高效液相色譜等幾種方法進行了探討。 References:1.王正平. 天然抗癌藥物-紫杉醇. 應用科技, 2004, 31(1): 56-58.2.Nicolaou KC, Yang Z, Liu JJ, et al. Total synthesis of taxol. Nature, 367(6464):630-634.3. Holton RA, Somoza C, Kim HB, et al. Fi

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