常規(guī)標本制作程序

1、常規(guī)標本制作程序第一節(jié) 組織標本收集取材固定一， 標本收集和查驗程序。對于所有送檢的標本，必須認真執(zhí)行查驗程序，方能進入下一程序，其主要程序是：1， 收集標本時：要仔細查對申請單上的姓名與標本上的姓名，序號是否一致；標本的件數(shù)與申請單是否相符；標本是否用固定液固定過。2， 標本經(jīng)上述驗收后，進行編號登記，以防錯亂。編號按年份和流水號兩種方法，如果為了今后的查找較為方便，按年份編號為較好。二， 活檢組織取材：在外科送檢的諸多材料中，對于每一例病例的材料，大小都不一樣，但對于較大的標本，不可能都對其進行制作切片，因此，選擇適合于病理技術(shù)制作，適合于病理診斷且有利于回顧性研究等各方面的材料，是病理活

2、檢的關(guān)鍵，通常把這過程稱為取材。（一）取材時必須注意以下問題： 取出所有送檢的標本，量其大小，稱其重量，描寫其色澤，質(zhì)地，形狀和肉眼所見表面情況。當標本切開后，應詳細描寫其切面的顏色，硬度，病變部位等，必要時繪圖說明。 對于細小標本如肺支氣管穿刺物標本胃腸鏡活檢標本1等，應將其染上伊紅顏色后，用擦鏡紙或特別脫水袋將其包上或裝上，以防漏出脫水盒的小孔。 對于有傳染性的標本，讓標本徹底固定后再取材。如結(jié)核瘤標本等。 對于罕見特殊的標本，應小心保存好，在不影響診斷的情況下，盡量保存好大體標本。以利于教學標本，陳列標本的收集。 邊取材邊固定，組織標本較多的單位，取材經(jīng)常要花上幾個小時，如果從下午2：3

3、0開始取材，至5：30完成，那么先取的材料就可以多固定幾個小時，如此可以防止固定時間不足，同時也可防止組織發(fā)生自溶。 對于骨髓穿刺的組織，可先用10%硝酸浸泡30分鐘左右，然后再與其它組織進行處理。 骨組織和鈣化組織，應徹底脫鈣后，方能進行制作。具體用大頭針能順利扎入骨組織則可。 活檢組織取材，不能太厚，以不超過2mm為宜。以防脫水不徹底，不利于制片。 每取完一例標本后，所有的工具如刀，剪，盤鑷，切板等，必須用水沖洗干凈，以免污染，混淆于其它病例。 組織取完即刻放入打印好號碼的盒內(nèi)，放入固定液中固定。（二） 各種器官及其腫瘤取材的方法1、乳腺： 纖維腺瘤：肉眼觀察其形狀、體積、包膜是否完整，切

4、面是否均勻，有無壞死，取材：腫瘤連包膜1-3塊（即周邊組織1塊，包膜與周邊組織1塊，如果腫瘤不大，上述幾種即周邊包膜和腫瘤可取1塊）。乳腺癌：體積，皮膚顏色，有無水腫或變硬，腫大淋巴結(jié)，數(shù)量，組別，硬度，及切面情況。沿乳腺的最長徑經(jīng)過乳頭切開，觀察腫瘤的面積，顏色，硬度及浸潤情況等。取材：乳頭及其下組織，腫瘤及腫瘤交界處，腫瘤下胸肌，全部淋巴結(jié)（注明組別），根據(jù)各種病變的情況，確定取材的塊數(shù)，如切緣、包膜、腫瘤等均應取到各組淋巴結(jié)分別全部切材。2、食管癌： 切除的食管長度及周徑，管壁有無水腫或粘連，腫大淋巴結(jié)的位置，大小，硬度及數(shù)目。沿腫瘤對側(cè)縱形切開，腫瘤大小及形狀。取材：腫瘤上下交界處各取

5、一塊?；蜓亻L軸通過腫瘤全徑取出大切片或分成數(shù)段，全部淋巴結(jié)，分別切塊包埋3、胃潰瘍及胃癌：全胃或部分切除，大彎及小彎長度，腫大淋巴結(jié)的部位、大小，硬度及數(shù)目，病變處相應漿膜面有何變化。一般沿大彎剪開，觀察病變大小，深度，邊緣及周圍變化，如為癌瘤，屬何種類型，與大小切端的距離。取材：病變及與其交界處胃壁全層的胃組織（盡量側(cè)重于小彎，并注意沿長軸切取組織塊），上下切端組織，腫大的淋巴結(jié)（注明組別）4、闌尾：一般于近、中、遠三段各取一組織塊，遠端一塊盡量靠近尖端，以免遺漏尖癌。已被剖開者，沿縱軸取組織塊，如檢查時不能發(fā)現(xiàn)病變所在，需多做斷面，以尋覓病變部位和取組織塊。5、腸癌：切除腸管的長度，腫瘤

6、生長部位、大小、局部漿膜等情況。如為十二指腸癌，則應注意與特氏壺腹的關(guān)系。取材：腫瘤 及交界處腸壁全層組織，上下切端，腫大的淋巴結(jié)。6、腸梗阻：梗阻部位、長度、直徑及表面變化（顏色、水腫、充血、出血）；檢查腸系膜 的變化，沿病變血管解剖，作多數(shù)橫斷面，觀察血管壁是否變厚，尋找栓塞的起止部位；腸粘膜有無潰瘍。取材：病變最顯著處及腸的兩端各切一塊，病變血管（帶些系膜）各切一塊。7、腸套疊：注意套疊部位及套疊 關(guān)系，尋找闌尾，腸壁是否增厚及變硬，以手指放入小腸為引導，沿腸系膜 剪開，尋找有無原發(fā)病變（在套入部位的最前端尋找有無腫瘤、潰瘍等到變化）。切面觀察各層腸壁的厚度、水腫、充血、出血、壞死及硬變

7、等到情況。取材：原發(fā)病變（如腫塊，潰瘍等）。有變化的腸壁厚度，闌尾，腫大淋巴結(jié)。8、腸結(jié)核：外部有無粘連，白色斑塊、結(jié)節(jié)、狹窄，病變上下的腸段有何改變，有無淋巴結(jié)腫大。沿病變對側(cè)切開，觀察病變情況（潰瘍、突起、體積、有無息肉樣改變，腸道是否變?yōu)楠M窄或增厚）。取材：病變部，上下切緣，腫大的淋巴結(jié)。9、肝活體組織：大小、形狀、顏色、表面及切面有無結(jié)節(jié)狀或纖維組織增生，有無灰白色結(jié)節(jié)等。取材：包含各病變的組織，如標本較小，全部切取。10、陰莖癌：腫瘤生長的部位，大小，潰爛及向陰莖浸潤情況，切端與腫瘤明顯浸潤處的距離?？v切（通過尿管）觀察切面情況。取材：腫瘤切面一塊，陰莖截除端一塊。11、腎結(jié)核：注入

8、福爾馬林固定一周再切，體積，表面是否光滑，有無粘連、灰白色小結(jié)節(jié)，輸尿管長度，直徑，及硬度。沿輸尿管及腎盂切開，腎盂是否擴張，切面破壞情況，粘膜變化，主質(zhì)變化，乳頭情況，（注明哪一個）；輸尿管厚度，有否梗塞，粘膜情況。取材：腎主質(zhì)包括病變及交界處，輸尿管及切端。12、腎盂積水：先抽去積液，再注入固定液后再檢查。腎體積、表面性狀（色澤、平滑否、結(jié)節(jié)、粘連）。沿腎、腎盂及輸尿管切開，注意阻塞部位及原因。觀察腎盞、腎盂及輸尿管擴張情況，腎實質(zhì)厚度。取材：腎實質(zhì)厚處及薄處各取一塊，輸尿管各取一塊。13、腎癌：腎及腫瘤之體積及重量，腫瘤部位及與腎的關(guān)系，表面有無水腫或粘連，有無腫大淋巴結(jié)。切面：腫瘤位置

9、、形狀、大小、顏色、包膜、壞死、出血、囊性變，腎盂與輸尿管中有無蔓延。取材：腫瘤包括其旁的正常組織，腫瘤 以外的腎組織、輸尿管。14、膀胱癌：全部或部代分膀胱切除，除非癌瘤位于前側(cè)，一般沿前側(cè)切開，腫瘤位置，與輸尿管中及膀胱的關(guān)系、體積、生長情況及浸潤情況，有無淋巴結(jié)（大小，硬度，切面變化）。取材：沿縱軸方向取材。腫瘤及膀胱壁全層組織；乳頭狀瘤應包括蒂部組織，三角區(qū)組織。15、前列腺：形態(tài)，體積，顏色，硬度，包膜情況。切面：顏色，質(zhì)均勻否，有無壞死，出血，囊性變。作多個與尿道垂直的平行切面觀察。取材：顏色均勻處取一塊，不均勻時在發(fā)黃處盡量多切，包含尿道。16、肺葉或肺段：先自支氣管注入福爾馬林

10、固定。檢察前應觀察X線片。病變與支氣管有關(guān)者，沿支氣管切開；病變不沿支氣管者，可作書頁狀切開： 肺癌：位置在支氣管哪一支，距切端多遠，大小，形狀，質(zhì)地是否均勻，有無壞死、空洞、邊緣有無纖維組織圍繞或不規(guī)則浸潤，是否壓迫支氣管干，肺門淋巴結(jié)情況。取材：癌組織，癌與正常組織的交界處，支氣管斷端，肺門或局部淋巴結(jié)。 支氣管擴張：新鮮時剪開，系囊形或圓柱形（管形）擴張，屬哪級支氣管，擴張的支氣管之直徑，或?qū)挾?，管壁厚度，顏色周圍組織有何變化，粘膜光滑或呈皺紋，管腔有無膿液，是否穿破形成肺膿腫。取材：擴張的支氣管，支氣管周圍發(fā)炎組織，膿腫壁。 肺膿腫：部位、直徑、單腔或多腔，其中膿液性質(zhì)及氣味，有無懸梁

11、狀血管，腔壁光滑度，厚度，是否與支氣管相通，有無散布的小膿腫，有無支氣管擴張，支氣管中有無異物，膿腫內(nèi)有無硫磺樣顆粒。取材：膿腫壁，與膿腫有關(guān)的支氣管，肺組織。 肺結(jié)核空洞：部位，直徑，單腔或多腔，腔中有無膿液、干革命酷樣壞死、懸梁狀血管，空洞壁厚度，及硬度，腔內(nèi)為肉芽或纖維組織，尋找與支氣管連通的瘺管及所散播的病變，肺門淋巴結(jié)情況。取材：空洞壁，散播的病變，肺門淋巴結(jié)。 肺囊腫：數(shù)目，部位，直徑，囊腫壁光滑度及厚度，與支氣管的關(guān)系，收集囊內(nèi)液體檢查其性狀。取材：囊腫壁及其旁肺組織，如為包蟲病，則應在包蟲囊的液體中尋找子囊及幼蟲頭節(jié)（離心后）。17、脾臟：重量，大小、顏色，表面有否粘連，然后沿

12、脾長軸作多個平行切開，在切面上看包膜及脾髓情況。 淤血性脾腫大或脾功能亢進，注意靜脈內(nèi)有無血栓，靜脈壁有無變化，有無梗死，切面上有無含鐵小結(jié)節(jié)。 脾破裂：注意踴裂部位，長度，有無血凝塊充填破裂口。取材：帶有包膜的脾組織，脾中心組織，脾門附近包括較大的血管，如有副脾，淋巴結(jié)各一塊，脾破裂應包括裂呂充物。18、淋巴結(jié)：大小，形狀，包膜情況，成群者注意相互間粘連情況，切面的顏色，均勻度，質(zhì)地，包膜，等情況。取材：整個短軸切面，互相粘連者包括粘連部位。19、骨腫瘤：檢查前先看其X片。有皮膚軟組織者將與腫瘤無關(guān)部剔除，然后鋸開，有條件者，可與鋸開前攝X線片以作比較。檢查腫瘤體積及形狀，切面顏色，硬度，出

13、血，壞死，囊變，何處為原發(fā)，與骨膜 ，骨皮質(zhì)及骨髓之間關(guān)系，有無破壞情況，有無包膜，其厚度及硬度，無包膜者注意其對軟組織浸潤情況。取材：腫瘤及與組織交界處，骨破壞處，軟組織浸潤處。20、甲狀腺：重量，大小，形狀，有無結(jié)節(jié)，尋找背面有無甲狀旁腺，切面質(zhì)地是否均勻，含膠質(zhì)狀況，有無結(jié)節(jié)，出血，壞死，鈣化，囊變等，有無細小灰白色疤痕樣病變。甲狀腺腺瘤與腺癌：腫瘤部位， 大小， 包膜完整否，切面質(zhì)地，有無出血，壞死，鈣化，囊性變及其內(nèi)容物，有無乳頭或絨毛狀改變，腫瘤以外組織有無灰白色小節(jié)。取材：最大面積，切成數(shù)塊全作切片，如為根治術(shù)，要取全部淋巴結(jié)。21、刮宮或陰道排出物標志：疑有妊娠者，須仔細尋找有

14、無胎盤絨毛，眼觀不能判斷時，須取組織塊，尤應注意檢查血凝塊。22、子宮標本：除按要求檢查病變外，如須研究宮頸癌，可與子宮頸12點，3點，6點，9點處取宮頸及宮頸內(nèi)膜交界處組織，必要時取其他各點組織。23、卵巢腫瘤：形狀大小，較大者應稱其重量，表面色澤，光滑度，與輸卵管的關(guān)系，有無粘連，囊性者自膨大部遠端剪開，查囊與輸卵管腔是否相通，單房或多房，內(nèi)壁光滑度，有無質(zhì)或乳頭狀生長區(qū)，乳頭脆性，囊內(nèi)容物性質(zhì)。實性腫瘤切面色澤、硬度，有無出血，壞死，變性等。 取材：囊性瘤取囊壁較厚處，實質(zhì)，突起處，囊與輸卵管相連處及輸卵管。實性瘤取邊緣及中央不同結(jié)構(gòu)組織及輸卵管。24、胎盤：形狀，大小，重量，母體面絨毛

15、有無缺損、出血、鈣化、變性壞死，及其范圍大小，羊膜和血管情況，臍帶長度，直徑，有無扭轉(zhuǎn)打結(jié)、血管栓塞等。取材：母體面、子體面臍帶各一塊。25、瘺管或竇道組織：應作多數(shù)橫斷面檢查，適當取材。26、眼球標本：標本固定后，先經(jīng)緩慢脫水至今95%酒精，然后切開，除病變部位特殊取材外，一般取水平切面，通過視神經(jīng)和瞳孔。要求保存眼球隊的完整性，如結(jié)膜、視神經(jīng)、黃斑及晶狀體等，都應完整無缺，切時刀刃銳利，以免人為地損壞眼球結(jié)構(gòu)。若須行火棉膠切片，而本單位無條件時，可送到有關(guān)單位檢查。27、軟組織腫瘤標本：部位、大小、形狀、色澤、表面有無包膜，完整否，硬度，切面有無出血、壞死、囊性變等，與周圍組織的關(guān)系，切面

16、暴露最大面，必要時多作幾個平行切面。取材：腫瘤，周圍組織，切端組織。28、其它標本：依上述原則檢查及取材，如標本有特殊情況，則依其特點處理。2第三節(jié) 常規(guī)病理標本的制作程序 常規(guī)組織固定在組織病理學中，不管是組織切片乃至電鏡還是大體標本的保存，都必須進行及時的適當?shù)暮陀行У墓潭?。組織只有經(jīng)過固定，才能完成隨后的一系列的制作，直至切片的最后完成。每個醫(yī)務工作人員都能容易地把組織固定起來，但是，要清楚了解固定的過程及其定義是一件十分不易的事，下面我們將逐一解答如下。（一）、固定的作用 組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進行固定，當然有的組織是先固定，再進行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學的角度其簡

17、單的定義是，保持細胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使之盡量保持細胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，而從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅是使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質(zhì)；以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)；更重要的是保持組織或細胞的抗原性，不但要使抗原不導致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時，不產(chǎn)生過深的背景，影響對陽性物的判斷。（二）固定的目的1、 能防止細菌的腐蝕和組織的自溶。細菌無處不存在，它們隨時都可污染腐蝕未經(jīng)處理的組織。固定液可以固定任何蛋白質(zhì)，凡有生命的東西，都 由蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)被固定，生命就停止，細菌也就失

18、去了活力。另者，在日常生活中，人們常可碰到這樣的問題，一塊肉不經(jīng)處理放了幾天后就會變質(zhì)，這是為什么呢？除了細菌參與外，其本身也是很重要的。因為組織離體后，供應這此組織的血液隨之消失，細胞缺氧，細胞內(nèi)溶酶體膜的結(jié)構(gòu)受到破壞，破壞后釋放出溶酶體酶，日常生活中常碰到的肉變質(zhì)，就是細菌污染加組織自溶的結(jié)果。2、 保存細胞固有的物質(zhì)，能凝固或沉淀細胞內(nèi)或組織液，糖元等，使細胞或組織基本上保持與生活時的物質(zhì)一樣。細胞的固有物質(zhì)，即細胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體、高爾基器、溶酶體、過氧體，細胞骨架，組織液，抗原、糖元等。這些物質(zhì)，如果不將其及時固定，是很容易喪失的，尤其是溶酶體，很容易受到破壞，因此應特別小心。3、

19、 使組織硬化，便于切塊。剛離體的組織，除了胃組織以外，都是柔軟的組織，尤其是胃腸道的組織，如果在沒有固定時就取材，效果就很差，不是取材不規(guī)整，就是厚薄不均，粘膜和肌層很容易分開，因此，要取得規(guī)整標致的材料，就必須將組織徹底固定，再行取材。4、 對某些具有傳染性的標本，能防止疾病的擴散。病理標本、種類繁多，成份復雜，各種病例都有，具有傳染性的病種也不少，如結(jié)核、肝炎、麻風、性病等等。對于此類標本，應進行徹底的固定后，再行取材，如結(jié)核球，固定時間應在3-5天。5、 保存好大體標本。對于有教學任務的醫(yī)院病理科，除搞好疾病的診斷外，還有收集有價值的大體標本，有些大體標本，是很難得到的。因此要求在平時就

20、要留心觀察，小心處理。遇到有教學價值的罕見的典型的標本，就必須及時固定，認真給予對待。6、 可增強染色的作用。組織經(jīng)過及時的固定，最終可見到切片有鮮艷的染色，而些時如果有一批未經(jīng)及時固定的組織，將看到最終的結(jié)果是，核染色不清楚，灰淡色，由此可得結(jié)論，固定可以增強染色的作用。（三）固定的注意事項1、 組織固定越新鮮越好。組織一經(jīng)離體，就能及時地固定，這是最好的。根據(jù)實驗，如果要獲得某些酶的染色，固定最好在組織離體后30秒至1分鐘。對于其它達不到些要求是越快越好。2、 組織固定，組織塊不宜過大。凡是需要固定的組織，都不應該太大太厚，這是因為所有的固定液穿透力不夠強，浸透度不夠快的緣故。如果較大厚的

21、組織，不經(jīng)處理就進行固定，那么待固定液進入至中間對可能這些組織早就發(fā)生自溶了。因此，對于較大的組織，必須先進行處理，切成制片材料再行固定，這是最佳的處理方法，如遇到胃腸的器官，則應將其剪開，放平后，再行固定，若非特急病例，最好在固定后才取材，因這類組織、粘膜和肌層容易分開，沒固定時，難以取得最佳制片材料，對于產(chǎn)酶類的器官如肝、腎、脾等，更要處理好，否則更容易出現(xiàn)自溶現(xiàn)象。3、 對不同類型的組織應適當合理地選擇固定液。有的固定液對于組織有膨脹作用。固定劑是一種化學試劑，有液體和固體之分，一般使用較多的是液體，而固體固定劑如多聚甲醛，則多用于實驗研究的組織固定。固定劑的種類繁多，成份復雜，對組織的

22、作用不盡相同，英國著名的組織化學專家Pearse指出：對于每個既定的組織化學方法來說，選擇最合適的方法是極為重要：在組織化學研究準備階段不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道它們對于各種組織成分的反應基團的效用。Jones（1973），指出理想的固定劑必須具備的條件是，防止?jié)B透損傷和妝縮，以達到在各級可見度的水平皆無形態(tài)變化；要求組織所有的成分能保留于原位。他認為有三種試劑即甲醛、戊二醛和丙稀醛接近于達到上述要求。4 為了更好地把組織中各種成分盡量保存好，盡量好給予顯示出來，就決不能千篇一律地使用一種固定液，而必須認真地深入研究各種固定液的性能和使用方法。例如：丙酮，它對組織有明顯的皺縮，

23、硬化作用，平常它是決不會被用來作固定液的，用它不但太浪費，造價太高，而且也使切片較為困難，但是，對于某些酶的研究，狂犬病腦組織的固定，某些細胞的培養(yǎng)等。最好的固定液還是丙酮。因為如果使用福爾馬林固定液、石蠟切片顯示酸堿磷酸酶就顯示不好，狂犬病病毒的包函體就會消失掉，又如醋酸，它對膠原纖維等有膨脹的作用。由于各種固定液對不同的組織有不同的作用，因此許多專家將根據(jù)各種固定液的優(yōu)缺點，配制出許多混合液的方法來，給組織的良好固定起到了非常積極的作用。但是，值得指出的是并非所有的固定液都不是十全十美的，例如，酒精、甲醛、醋酸固定液，對組織固定很好，組織中各物質(zhì)的染色也十分清晰，但對固定脫水盒為銅質(zhì)的組織

24、時，效果就不好，原因是醋酸跟酮可發(fā)生反應，產(chǎn)生醋酸銅，沉淀于組織中，可造成對抗原的損害，對于免疫組織化學的顯示，經(jīng)實驗證明：可呈弱陽性乃至陰性。由此可見，固定液的選擇正確與否決定著對某些病例的免疫組化標記的成敗關(guān)鍵。在我們的日常工作科研中，對于組織的固定，應有針對性的選擇，方能獲得滿意的效果。4、 組織固定，時間不宜太短，也不宜太長。時間太短，就不能很多的固定組織，因為不管組織大小，固定液浸入組織之中，都需要有一定的時間，時間太短，就會影響組織固定的效果，對以后一系列關(guān)系的處理都有影響，切片質(zhì)量難以保證，固定時間太長，也不好。組織長時間的固定，福爾馬林會產(chǎn)生一種酸，影響核的染色。對于固定很長時

25、間的陳列性標本制片后切片染色不鮮艷，顯得非常陳舊。另外，長時間的固定往往會出現(xiàn)福爾馬林色素，尤其是造血器官的標本，更應注意。固定時間過長，可降低抗原的活性。5、 固定液的量要充分。固定液量的足夠與否決定著組織固定的成敗，有的人認為，固定液的量與組織的比應是20：1，這個要求對于小組織來說是完全可以達到的，但對于大標本來說，則是一件非常困難的事情。因為對于大醫(yī)院來說，每天都有幾十上百例的標本，小如大頭針大小，大的達幾十斤的腫瘤，對于這樣大的標本，按20：1的比例來做，顯然是不可能的事，既要做到組織能固定好，又不使組織吹干就必須具體情況具體處理。對于大的標本，原則上是不讓其暴露部分被吹干，這是因為

26、在現(xiàn)實111當中，大的標本往往露出容器一大半，因此對于這種情況，應取些脫脂棉或紗布，浸濕固定液后，蓋于組織表面，以免使組織被風干，影響制片效果。6、 特殊病例或特殊物質(zhì)應選擇特殊的固定液。一般的病例標本，如沒特殊的要求，都可以應用甲醛配成的各種固定液來固定。但是，如果要顯示狂犬病毒的包含體時，應用上述的的固定液就不行了，必須采用丙酮來固定，顯示糖元，可選擇無水酒精或丙酮來固定組織。固定劑是一種化學語試劑，有液體和固體及之分，平常使用的多為液體，Pearse指出，對每個既定的組織化學方法來說，選用最合適的固定方法是極為重要的；在組織化學研究中的準備階段，不論采用什么固定劑，都必須盡可能確切地知道

27、它們對于各種組織成分反應基團的效用。7、 組織的第二次固定或后固定。在一般的常規(guī)病理活檢組織中，往往用一種固定液，就能夠達到目的，獲得滿意的結(jié)果。但是，對于某些特殊病例光用一種固定液是不夠的，必須根據(jù)不同的情況，使用特殊的固定液再次將組織固定，或者在切片后染色前再行固定。這種方法稱為二次固定或后固定。例如：胚胎性橫紋肌肉瘤，由于腫瘤細胞發(fā)育較幼稚，完全不象成熟的橫紋肌組織所固有的橫紋，在進行特殊染色前，就必須用Zenker氏固定液進行第二次固定，方能較好地顯示出橫紋肌纖維來。否則，效果不佳。另外，電鏡固定的標本，通常都需要后固定。其使用方法是先用戊二醛固定，再用奧酸固定。（四）固定液的使用當前

28、，應用于固定試劑的種類較多，它們對于固定不同的組織成分起著不同的作用，因此我們在使用時應該了解不同固定劑的效能，才能合理的固定組織。根據(jù)Bencroft的分類法，將不同的固定劑分為四種類型：類：醛類，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。類：氧化劑類，四氧化鋨（奧酸），高錳酸鉀，重鉻酸鉀等。類：蛋白變性類，甲醇，乙醇，醋酸等。類：其他，氯化汞，苦味酸等。5上述四種類型的固定劑，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技術(shù)方面中用到。下面根據(jù)使用的需要，將著重介紹幾種常用的固定劑。（十）甲醛甲醛商品名為福爾馬林，一般市售的含甲醛3740%，由甲醛氣體飽和于水而成，比重為1.12。它也可以

29、穩(wěn)定的固體形式存在，它的成分為高分子量的聚合體，稱為多聚甲醛。甲醛溶液較難純化，在每批市售商品中，都含有不少的雜質(zhì)如甲醇，這種在組織化學方法當中，能使酶鈍化，影響其反應。甲酸，它可使固定液變酸，在陳列標本或長時間固定的組織，由于酸的作用，往往細胞核染色欠佳。甲醛有效固定作用的要點是，在蛋白質(zhì)末端基團之間形成交聯(lián)鏈。參與甲醛固定蛋白質(zhì)的基團，主要為氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環(huán)。甲醛與組織蛋白類的反應是多樣和復雜的，因為它能和多種不同的功能基團結(jié)合，在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵。甲醛有這種交聯(lián)的功能，也是它的缺點，在用甲醛固定過的組織中，需要做免疫組化的，往往提倡用酶消化或熱抗

30、原修復法來使蛋白與甲醛交聯(lián)的醛鍵斷裂開，以利于后來的染色。甲醛可配成簡單的或混合的固定液，最簡單和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，這就是10%的福爾馬林.當然,現(xiàn)在使用的固定液要求較為嚴格些,最好是使用緩沖福爾馬林固定液,這將有利于后來的免疫組化染色的需要.從組織學的觀點來說,甲醛是一種良好的固定劑,它有很多的優(yōu)點:1. 組織收縮較少,損傷少,保存固有物質(zhì)好.2. 固定均勻,穿透力強.3. 能使組織硬化,增進組織彈性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂類物質(zhì).5. 成本較低.雖然甲醛有上述的優(yōu)點,但這都是相對而言,任何物質(zhì)都不可能十全十美的,它也有許多缺點:1. 雜質(zhì)含量較

31、多,如甲醇,可鈍化酶類,影響反應.2. 含有微量甲酸,導致固定液酸變,影響染色.3. 可產(chǎn)生福爾馬林色素,影響觀察.4. 不能固定尿酸和糖類物質(zhì).5. 容易揮發(fā),污染環(huán)境,可導致標本干涸.6. 可長期存在于固定過的組織上.有人做過實驗,組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時后,仍留有相當多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合,但需要經(jīng)過長時間的流水沖洗(24天的沖洗)方能除去.可見存在于組織上的甲醛是不可能除去的.因為臨床活檢不可能有這么長的時間來沖洗組織.因此要特別指出的是,在其后的各種技術(shù)操作中,要特別注意到甲醛的存在,必須要想辦法除去它,否則將會給各種染色造成影響,甚至導致失敗.應用甲醛,可以配成許多種固定

32、液:1. 10%緩沖福爾馬林固定液甲醛 100ml蒸餾水 900mlNaH2PO4H2O 4gNa2HPO4 (無水) 6.5g該固定液是當今流行的固定液,因它對組織固定較好,損傷較少,因?qū)ζ浜蟮母鞣矫娴难芯慷驾^好,尤其是對免疫組化的染色.2、10%福爾馬林固定液甲醛100 ml自來水900ml這是一種最簡單的固定液，適合于邊遠地區(qū)攜帶的固定液，但由于它的單一性，因此，只要有條件的單位都不要求使用這種固定液。3、10%福爾馬林鹽固定液甲醛100 ml自來水900mlNacl9克先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種較為簡單的固定液，但由于加入Nacl，它是一種重金屬鹽物質(zhì)，加入了它可促進和

33、改善染色，增加染色的強度。4、Bouin氏固定液苦味酸飽和水溶液75 ml甲醛2 ml冰醋酸5 ml該固定液中的冰醋酸，對膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲醛對組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使組織固定達到優(yōu)良的固定水平。5醛糖鈣固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸鈣20g蒸鎦水90ml先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。該固定液對于做酶的組織化學的研究效果較好，組織固定后，做冰凍切片，再給予顯示。當前國內(nèi)外基本上都還是要用甲醛來固定組織。從免疫組織化學的角度來說，甲醛固定的組織大部分都可以用免疫組化的手段來檢測，據(jù)多人認為，它對lgA ，lgM，J鏈，K鏈和鏈的

34、標記效果較好，且背景清晰。但美中不足的是：經(jīng)它固定的組織，可與蛋白形成醛交聯(lián)蛋白，這種醛鍵可封閉抗原。固此，在免疫組化實際檢測中，應根據(jù)不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修復如微波、高壓等的方法，以便破壞醛鍵重新暴露抗原。（2）酒精：又稱乙醇，為無色透明的液體，沸點是78度，工業(yè)酒精是95%。酒精它有許多優(yōu)點：1、 可保存尿酸結(jié)晶和糖原等物質(zhì)。高濃度的酒精如95%，無水酒精可保存上述兩種物質(zhì)，因它們易溶于水，因此，要證明上述兩種物質(zhì)的存在，就不能用含水的固定液來固定組織。2、 能在任何比例的情況下與水混合，在病理技術(shù)中，酒精是一種十分重要的試劑，它起著關(guān)鍵的作用。如果沒有酒精，將會無法完

35、成必要的工作。如組織的脫水，切片染色前后都離不開酒精，在常規(guī)的工作中，通常都用95%的工業(yè)酒精來配成60%、70%、80%、90%等不同的濃度來使用。3、 可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑。常規(guī)活檢等切片上的石蠟必須除去，才能進行染色，能除去石蠟的物質(zhì)有苯及汽油等，常用的有苯類試劑，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在這里充擔著除去苯和連接水的作用，為切片入水架起了橋梁，因此稱它為橋梁試劑。4、 能除去切片上的水份，使切片無水化。切片經(jīng)染色后，由于所用的試劑都為水溶液，因此在切片上含有大量的水份，這些水份經(jīng)系列梯度酒精的置換吸附后，到無水酒精中已完全無水，這樣處理對于切片的保存是有好處的，否則

36、，切片將會褪色。5、 可用來保存標本。大體標本經(jīng)福爾馬林固定后，如為了陳列保存，必須取出沖冼。然后移入75%的酒精中。如果用福爾馬林作陳列標本的固定液，則因為福爾馬林含有雜質(zhì)較多，液體容易酸化，時間一長，會逐漸變?yōu)槲ⅫS色或淡黃色，影響美觀，影響陳列的效果。6、 可與其它試劑配成多種的混合固定液，有時為了加快固定，常采用酒精和其它試劑來配成混合固定液，這種固定液在固定的同時，兼有對組織脫水的作用。應用酒精配成的混合固定液有： Carnoy氏固定液氯仿 300ml冰醋酸 100 ml95%酒精 600 ml該固定液固定組織快速，在固定的同時兼有脫水的作用。溶液中的氯仿和酒精，對組織的收縮較厲害，但

37、應用了冰醋酸，這種現(xiàn)象便被中和去。 AF固定液甲醛 100 ml 冰醋酸 50 ml95%酒精 850 ml這種固定液的作用與上液有相似之處，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脫水用具不能使用銅制的脫水盒，因冰醋酸跟銅離子起反應，生成醋酸銅，這種物質(zhì)可沉淀于組織間，可破壞組織中的抗原，造成免疫組化檢測的失敗。應用時應多加注意。酒精也有許多不足之處，它的缺點是：1、 可溶解脂類物質(zhì)，凡要證明組織是否含有脂類和類脂物時，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片，因為酒精可將它們?nèi)芙馊?，而石蠟切片組織中含有的脂類物質(zhì)，則在組織脫水時被溶解去，只留下脂類或類脂物所占有的空間。2、 對

38、組織收縮較大，不宜作單純固定液。高濃度的酒精，對組織有顯著的收縮作用，造成組織發(fā)硬易脆，難以切片等現(xiàn)象。因此，它不作為單純的固定液。3、 滲透力不強。當用酒精固定組織時，組織表面很快就被固定，并形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成了中間組織固定不佳的現(xiàn)象。4、 可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經(jīng)酒精固定的組織，核的染色都不好。5、 可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經(jīng)染色后，一是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時，必須仔細地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的酒精脫色力強，稍不注意，便可脫去切片上大部分的顏色。切片脫水時，要較快地通過低濃度的酒

39、精，以免使已著染的顏色被脫去。6、 價格較貴。從經(jīng)濟學的角度，應用酒精固定組織劃不來，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例標本需要100ml計，可固定50例標本，而一瓶 500ml的酒精，即使配成80%酒精，也只能固定6例標本，因此，若用酒精固定組織，其價格比用甲醛固定組織的要高8倍。（1） 冰醋酸。冰醋酸為無色透明的液體，易揮發(fā)，氣味大，一打開瓶蓋，整個文章都可聞其味道，純醋酸在17時常為結(jié)晶狀，因稱為冰醋酸，在冬天使用時，可用微波爐進行解凍，再行使用，它的優(yōu)點有：1、 能迅速固定染色質(zhì)，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均勻，對于染色質(zhì)的固定快，因此，

40、用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明礬蘇木素和伊紅時，常常需加入一定量的醋酸，以促進染色。2、 能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。各種固定液對組織都有收縮的作用，尤其是對富含纖維的組織。而它不但不會使組織收縮，而且還會令許多組織發(fā)生膨脹的作用。根據(jù)這個特點，用它配成許多種不同的混合固定液，以達到固定好，收縮少，易切片，效果好等目的。用它配成的混合固定液有：（1） Zenker氏固定液：6重鉻酸鉀 25G升汞 50G蒸餾水 1000ml冰醋酸 50ml先將重鉻酸鉀和升汞溶于水中，尢其是重鉻酸鉀，應用熱水或加溫的方法將其溶解，然后過濾貯存于帶蓋的玻璃瓶中，如暴露于空氣中，該溶液將會被慢慢氧化

41、而便顏色加深，導致失效。臨用時，取貯存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。應用該固定液固定的組織，一般不要超過24h，取出組織，流水沖冼12小時以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必須用碘除去汞鹽的沉著。應用該固定液的組織，細胞核及細胞漿染色十分清晰，特別是要顯示骨骼肌的橫紋時，應用本液可獲得滿意的結(jié)果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存細胞顆粒，紅細胞及含鐵血黃素。（2） Flemming氏液2%酸水溶液 200ml1%鉻酸水溶液 700ml冰醋酸 100ml該液中的奧酸對脂肪組織既有固定作用，又有染色作用，對有髓神經(jīng)纖維也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，該

42、液不適合。應用該液固定的組織，切片不能太大過厚，一般1-2毫米厚固定時間1-3天，后經(jīng)水洗，保存于80%酒精中，除上述兩液體外，還有Bouin氏液和Carnoy氏液等。冰醋酸也有許多不足之處：1、 不能作為單一的固定劑。冰醋酸在實際應用中，常被作為添加劑來使用，如許多種固定液，都加入了冰醋酸。另外，在蘇木素和伊紅染液中，也常加入了冰醋酸。2、 不能凝固蛋白質(zhì)，不能保存白細胞顆粒，紅細胞及含血鐵黃素等。3、 價格較貴。(4) 重鉻酸鉀是一種固體，粉末狀，桔紅色，具有毒 性，較難溶解于涼水，因此在配制時用較高溫度的水來溶解，也較易發(fā)生沉淀。它的優(yōu)點是：1、 能固定脂肪及類脂物。2、 為髓鞘及嗜鉻細

43、胞優(yōu)良的媒染劑。3、 可配成多種的混合固定液（1） Helly氏液7重鉻酸鉀 25g升汞 50g蒸餾水 1000ml甲醛 50ml臨用時加入甲醛，因其加入后于24小時后可發(fā)生沉淀而失效，因用時應特別注意。該液是白細胞顆粒的優(yōu)良固定劑，因此凡為白細胞或造血器官如骨髓，脾臟及患先天性梅毒之肝臟等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉，但據(jù)我們經(jīng)驗認為，硫酸鈉在液中對組織無任何作用，故省去。（2） Orth氏液重鉻酸鉀 20g蒸餾水 1000ml甲醛 100ml該液固定組織較緩慢，不適合于作臨床的活檢固定液，4毫米厚的組織固定時間需36-72小時，該液對于染色質(zhì)的固定好，顯示清晰，但可溶解部分紅細

44、胞和含鐵血黃素。重鉻酸鉀的不足之處有：1、 不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白質(zhì)。2、 具有毒性及產(chǎn)生高溫。在配制液體時，如清洗劑，當加入硫酸時，可產(chǎn)生很高的溫度，并揮發(fā)出刺鼻的氣體，應特別注意。3、 它不能長期固定組織，經(jīng)它固定的組織應充分水洗后保存于80%酒精中。（六） 氯化汞又稱升汞，具有毒性。單獨用于固定組織，對組織有較大的收縮力，故很少單獨使用。它可使組織蛋白凝固，迅速硬化而形成白色硬膜，這是由于它穿透力極弱所致，因此它不適合固定較厚的組織。它常與其它的試劑配成混合固定液，彼此抵消各自存在的不足，使固定組織的效果非常好。應用升汞配成的固定液的

45、優(yōu)點有：1、 細胞核及細胞漿染色清晰。2、 對白細胞顆粒，造血器官如骨髓和脾臟等是優(yōu)良的固定劑。3、 可配成許多混合固定液如：Zenker氏、Helly氏和Stieve氏等。它的不足之處是：1、 容易產(chǎn)生汞鹽沉淀。經(jīng)升汞配成的混合固定液固定的組織，一是不能固定太長時間，經(jīng)24h后沖水，然后保存于70%或80%的酒精中，二是在洗色前，都必須用碘除去汞鹽的沉淀，以免由于汞鹽沉淀在切片上而影響對切片的觀察。2、 對組織有較大的收縮力且穿透力弱，用它不能固定過厚的組織，因穿透力弱，組織中間部分固定不好。3、 具有毒性。（五）、微波輻射固定組織。89組織固定的結(jié)果是組織中的蛋白質(zhì)凝固，以保存組織中原有的

46、微細結(jié)構(gòu)。常規(guī)固定用的是甲醛或酒精等。但是這些固定劑從某些方面來說其穿透力不很強，因而需要較長時間的固定，另者，臨床上的冰凍切片，有的應用快速加熱法預先固定組織，造成福爾馬林的極度揮發(fā)，污染環(huán)境，影響人們的身體健康，因此尋找其它固定組織的方法就成為研究的重點。微波輻射固定組織，就是在這種情況下產(chǎn)生的。微波是一種具有能量的電磁波，在其運動期間可產(chǎn)生瞬間熱。由于微波的快速運動，也導致了物體內(nèi)部極性分子的快速運動，產(chǎn)生了熱量，致使組織蛋白凝固，因此，舊的叫法稱微輻射固定組織。按實際的應稱為微波輻射凝固蛋白。1、 組織固定溫度和時間的選擇。究竟微波產(chǎn)生的熱量需要多高，才級使蛋白凝固的呢：Masson氏

47、等人的研究表明，700-90，對沒有固定的蛋白可發(fā)生變性。Bernard經(jīng)過一系列的研究后認為，肝、腎、肺的最佳固定溫度是70，和77，因為各種組織的結(jié)構(gòu)不同，成分不一，電子密度不一樣，因而固定所需要的溫度也不樣。我們的實驗認為，65左右的溫度可適合于各種組織，條件是固定取小塊材料，時間在截取3-4min。2、 微波爐檔次的選擇目前市售微波爐品種繁多，要選用合適的微波爐，必須根據(jù)各人的使用習慣和愛好。微波爐一般分為高火、中火及低火。使用時要進行系列實驗。例如多少ml的固定液需要多少時間達到多少溫度，用的是哪一檔次的火等。3、 微波輻射需固定液的選擇張素娟等應用臨床活檢新鮮組織如：甲狀腺、乳腺和

48、淋巴結(jié)，實驗小鼠的腫瘤、肝臟、腎臟、心和肺等組織，分別用10%的福爾馬林和生理鹽水經(jīng)微波輻射后，通過HE、網(wǎng)染、AB-PAS以及幾種抗體如CEA、EMA和L26等的檢測后發(fā)現(xiàn)，生理鹽水的結(jié)果最好。一提固定，以往總與福爾馬林分不開，而經(jīng)微波輻射后的固定效果，竟然比前者好，這就解決了一大難題，即快速石蠟切片及冰凍切片的組織固定，以往用加熱固定的方法，其結(jié)果導致福爾馬林蒸發(fā)，使整個房間都充滿福爾馬林氣味，既污染了環(huán)境，也影響了身體的健康。雖然生理鹽水用微波輻射后對組織有良好的固定效果，但是它只能適合于少量的快速制片和某些研究，絕不可能適合于大批量的活檢。因為活檢取材，現(xiàn)目前組織的制作，都基本上用機器

49、來進行，而所用的脫水盒，有銅和不銹剛的金屬物所制成，組織取材后，一個一個的盒子裝著組織，如果除去金屬來用微波固定，這是不現(xiàn)實的事情。另外，微波輻射，它的穿透力較弱，大量的組織塊，其中間是達不到要求的。第四節(jié) 病理制片程序一常規(guī)石蠟切片制片法組織經(jīng)系列酒精的脫水，經(jīng)透明劑的作用，經(jīng)熔化的石蠟的浸漬，包埋后所切成的切片稱為石蠟切片。它適合于尸體解剖，臨床活檢和某些科研的切片。（一） 組織脫水把含于組織內(nèi)或細胞內(nèi)的水份用脫水劑把其置換出來的過程稱組織脫水。不管是正常的組織，還是有病變的組織，都含有不同程度量的水分。據(jù)測定，人體的物質(zhì)組成約含水5567%，蛋白質(zhì)1518%，脂類1015%，無機鹽34%

50、及糖類12%14。如果不把這些水分脫去，石蠟切片將無法進行，因為石蠟和水不能混合在一起，所以除去組織中的水分成為制片中的關(guān)鍵，用什么物質(zhì)才能擔當起這個重任呢，至今為止，國內(nèi)所用的都是酒精。因它不管在什么樣比例的情況下都能和水混合，所以它可以慢慢地將水從組織中置換出來。酒精脫水力強，對組織又有硬化和易脆的不良影響。在使用時，通常是從低濃度至高濃度，濃度系列通常是70%、80%、90%、95%和100%，組織經(jīng)過這一系列處理后，基本可達到脫水的目的。臨床上如使用含酒精的固定液固定組織時，(Carnoy氏、AAF液)組織不需要經(jīng)過低濃度的酒精，可直接進入95%酒精脫水。組織脫水，目前常用的有兩種方法

51、1、 人工組織脫水法該法經(jīng)濟實惠，靈活度高，可根據(jù)不同的組織及其大小來確定脫水時間，也可根據(jù)不同組織及大小分批進行脫水，其優(yōu)點是：1、 可根據(jù)不同的組織及大小，任意增減脫水時間，達到脫水目的。2、 可隨時觀察組織的變化，隨時中斷組織的脫水，不使組織過度硬脆。3、 可以多層次地進行脫水。缺點1、 需耗費人力，每個步驟的遞增都需要人工完成。2、 不能大批量的進行脫水。3、 必須在班上完成脫水或者定點于某一濃度的酒精中過夜，晚上無法進行梯度遞增。（2）、自動組織脫水機脫水法自動組織脫水機的機型品種繁多，大小不一，國內(nèi)生產(chǎn)的軌道式和圓盤式兩種，國外生產(chǎn)的有圓盤式和柜式兩種，上述國內(nèi)外四種型號的機子，我

52、們都使用過，根據(jù)使用的效果做一簡單介紹。1、 軌道式自動組織脫水機。這種機子容量小，脫水用的試劑不足一升毫升，組織塊脫水用的提籃小，每次只能容納40塊組織左右，它適合于較小的單位，但不適合于大單位。另外，該機在運轉(zhuǎn)時，裝試劑的蓋子打開，試劑容易揮發(fā)，污染環(huán)境，對人身體健康不利。2、 圓盤式自動組織脫水機。國內(nèi)生產(chǎn)的這種機器容量也不夠大，每天處理組織塊，40塊左右，如果大的病理科每天需要處理150塊左右組織塊時，需要這種機器4臺左右。這種機器脫水時也屬于揭蓋式的，因此，試劑容易揮發(fā)，特別在夏天，必須經(jīng)常添加試劑，以補充被揮發(fā)去的試劑。這種機器，對環(huán)境同上述機器一樣。國外生產(chǎn)的也有同類產(chǎn)品。3、

53、全密閉柜式電腦控制自動組織脫水機。這種脫水機由電腦、反應缸和試劑貯存缸三個部分組成，這三部分可以分開使用，也可以結(jié)合在一起，形成一個柜式，一臺電腦可控制5臺脫水機。電腦功能包括時間、溫度和真空負壓等，可在小熒屏上顯示出來，同時可顯示正在進行的脫水程序。根據(jù)需要，該機可編九套程序輸入電腦，我們的編程如下：第一套為正常室溫下脫水程序，該程序在換新試劑的幾天內(nèi)使用。第二套程序組織塊脫水不充分時啟動使用，當?shù)谌壮绦虻慕M織塊脫水不好時，則應更換新液；第四套為周末程序，該套程序根據(jù)兩天的休假時間，安排好組織塊的脫水時間。第五套為“八一”程序，第六套為“十一”程序，第七套為元旦程序，第八套為春節(jié)程序，這后

54、面幾套為節(jié)假日程序，根據(jù)節(jié)假日的放假時間不同，編排不同的程序。反應缸內(nèi)在15秒左右的時間里抽入反應所需的試劑，當按程序表的時間反應完畢后，在15秒左右的時間，將其送回貯存缸，然后則另換其它試劑，如此反復，直至整個程序完畢。試劑貯存箱內(nèi)由12個缸組成，每個缸的容量為2.25升。其中用于裝固定液的缸1個，裝酒精脫水劑的缸7個，裝透明劑的缸為2個，另有2個缸，一個裝二甲苯，當石蠟在反應缸中完成或浸蠟后，被送回蠟缸（在反應缸的右邊）后，用以清除遺存的石蠟，還有一個缸裝無水酒精，用以清除遺存的石蠟，還有一個缸裝有無水酒精，用以清除二甲苯的殘存液。根據(jù)我們對各種不同的脫水機的應用比較，認為這種脫水機有以下

55、特點：1、 該機容量大，每次可處理組織塊250-300塊，這對于大、中等醫(yī)院的病理科較合適。2、 全部密閉，所有的試劑都由管道輸送。這樣一是保證了試劑不揮發(fā)，尤其是夏天，室溫較高，試劑揮發(fā)快，如為揭蓋式的脫水機，試劑揮發(fā)的程度無法形容，幾乎每天都必須添加，這樣試劑用量大，二是對環(huán)境污染不明顯，保證了舒適的工作環(huán)境。3、 帶有定期的攪動裝置，如此可使組織固定均勻，脫水徹底。4、 整個過程過置于真空負壓的條件下來進行，尤其是浸蠟，可節(jié)省1/3以上的時間，浸蠟充分徹底，尤其是對多孔的組織如肺組織，效果更明顯。脫水機脫水的優(yōu)點有：1、 組織脫水均勻；2、 能在無人在的情況下完成組織的梯度遞增，完成脫水

56、，透明和浸蠟程序，如此可節(jié)省人力物力。3、 能大批量地處理標本。脫水機脫水存在的不足：1、 由于機子的的原因，在脫水時，大小組織一窩煮，造成小組織過度處理而產(chǎn)生硬脆的現(xiàn)象，使之難以切成佳片。2、 如為揭蓋式的脫水機，液體容易揮發(fā)，污染環(huán)境，影響工作條件。（二）組織的透明組織經(jīng)過一系列酒精的處理后，雖然組織里所含有的水分已基本上被脫去，但是組織脫水時機里可殘留著許多酒精，如果不將其去除掉，必然影響組織的進一步處理，酒精不能溶解石蠟，必須尋找一種既能與酒精混合，又能溶解石蠟的試劑，方能使石蠟浸入到組織中去，這類物質(zhì)被稱為透明劑。它們是二甲苯、苯、三氯甲烷（氯仿）、香柏油、苯酚、松節(jié)油和汽油等。雖然

57、透明劑種類多，但根據(jù)性能及效果看，還是二甲苯為最好。二甲苯是一種透明無色的液體，揮發(fā)性強，打開后即可聞其味道，能溶解石蠟，能溶于酒精及丙酮等，但不能溶于水，它是一種良好的透明劑，組織經(jīng)充分脫水后放入該試劑，視組織的大小、種類的不同，確定不同的時間，便能達到透明目的。在一般的情況下，胃、腸粘膜透明時間5-10分鐘，鼻咽部及排出物為15-20分鐘左右，子宮肌瘤、平滑肌組織為60-120 分鐘?？傊M織的透明，應視組織的大小而定，不能千篇一律，要經(jīng)常觀察組織的透明情況，組織一經(jīng)透明，就必須從二甲苯中取出。因為二甲苯對組織的硬化程度特強，如果在其放置過長，就會引起組織的硬脆，難切片。如果組織在二甲苯放置到一定時間后