增溫和不同土壤對(duì)夏蠟梅幼苗生長(zhǎng)及生理的影響

1、西 南 大 學(xué)碩士學(xué)位論文選題報(bào)告學(xué) 號(hào) 112009317001699姓 名 徐興利 培養(yǎng)類(lèi)別 全日制研究生 學(xué)科專(zhuān)業(yè) 生態(tài)學(xué) 研究方向 植物生態(tài)學(xué) 培養(yǎng)單位 西南大學(xué) 指導(dǎo)教師 金則新教授 2010年11月06日增溫和不同土壤對(duì)夏蠟梅(Sinocalycanthus chinensis)幼苗生長(zhǎng)及生理的影響1 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀1.1 夏蠟梅概況夏蠟梅（Sinocalycanthus chinensis）為蠟梅科(Calycanthaceae)夏蠟梅屬（Sinocalycanthus）的落葉灌木，高23m；花口徑4.57cm；外輪花被片1014，白色，邊緣淡紫紅色，內(nèi)輪花被片716，肉質(zhì)；雄蕊

2、1619；心皮1112；聚合果托鐘形或近頂端微收縮；瘦果褐色，長(zhǎng)1.21.5cm；花期為5月中下旬，果期10月（章紹堯和丁炳揚(yáng), 1993）。夏蠟梅群落分布區(qū)主要位于海拔5501200米中山地帶的山坡或溪谷林下。分布區(qū)屬于亞熱帶季風(fēng)氣候，氣候溫和，年平均氣溫1216，極端最低氣溫不低于-13，極端最高氣溫約42，年降水量約14001600mm；相對(duì)濕度不低于80%。群落土壤是由花崗巖發(fā)育而成的山地黃壤，土層深厚，疏松濕潤(rùn)，富含有機(jī)質(zhì)，pH值4.65.5（徐耀良等, 1997）。夏蠟梅為較耐蔭樹(shù)種，蔭蔽濕潤(rùn)且土壤稍酸性的環(huán)境下生長(zhǎng)較好，不耐強(qiáng)光和干旱，主要集中生長(zhǎng)在溪溝兩旁的溝谷地段和常綠闊葉林

3、下，成為常綠闊葉林下木層的優(yōu)勢(shì)種以及次生灌叢的主要建群種（張方鋼等，2001）。夏蠟梅作為第三紀(jì)孑遺物種，現(xiàn)資源極少，目前主要分布于浙江臨安市西部狹小的范圍內(nèi)、天臺(tái)縣大雷山和安徽績(jī)溪龍須山，已列為國(guó)家二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)植物。其花朵美麗、觀賞價(jià)值高；其葉對(duì)感冒、咳嗽、氣喘等具有一定的療效；并且分類(lèi)地位獨(dú)特，具有重要的植物系統(tǒng)學(xué)研究?jī)r(jià)值。1.2 夏蠟梅的研究進(jìn)展夏蠟梅自60年代在臨安被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，受到眾多研究工作者的廣泛關(guān)注。前期的研究主要局限于孢粉學(xué)（李林初, 1990）、細(xì)胞學(xué)（李林初, 1986; 黃堅(jiān)欽, 1998）、分類(lèi)學(xué)、系統(tǒng)與進(jìn)化（李林初, 1988; 1989; 張若惠和沈湘林,1999）

4、以及種群與群落學(xué)（張方鋼等, 2001）等方面，近幾年開(kāi)展了較多栽培繁殖方面的研究（陳輝, 1992; 蘭偉, 2001），同時(shí)在生理生態(tài)特性（柯世省和金則新, 2007; 2008; 馬金娥, 2007b）、繁育系統(tǒng)（張文標(biāo), 2007）、次生代謝（金則新等, 2006a; 2006b; 2007a; 李鈞敏等, 2006; 2007; 馬金娥等, 2007a）、種子特性（蔡琰林, 2008）和遺傳多樣性（談探等, 2008; 張文標(biāo)等, 2007; 金則新和李鈞敏, 2007; Li Jin, 2006）以及分子系統(tǒng)地理學(xué)（談探, 2008）等方面進(jìn)行了深入研究，并取得了巨大進(jìn)展。野外資源

5、調(diào)查顯示，生境片斷化使夏蠟梅局限于互不相連的小區(qū)域內(nèi)，被分隔成若干個(gè)呈島狀分布的小居群，并且不同居群間有不同距離的間隔（張方鋼等, 2001）；現(xiàn)野生資源不多，除了已發(fā)現(xiàn)的臨安和天臺(tái)分布地外，2007年陳香波等（2008）在安徽績(jī)溪縣龍須山新發(fā)現(xiàn)了一個(gè)夏蠟梅自然分布居群，植株共約3000株，使夏蠟梅分布地從原有2個(gè)擴(kuò)展到了3個(gè)。對(duì)臨安和天臺(tái)居群的遺傳多樣性研究表明，夏蠟梅不同居群間出現(xiàn)了遺傳分化，其中，天臺(tái)大雷山居群與臨安各居群之間（>200 km）存在顯著性的遺傳地理隔離，但安徽居群的遺傳特征如何，與天臺(tái)和臨安分布地的遺傳分化以及遺傳隔離情況如何，目前尚未報(bào)道。以往的研究表明，浙江境內(nèi)

6、的夏蠟梅居群除了在遺傳上出現(xiàn)分化外，對(duì)不同居群的夏蠟梅的黃酮、總酚、綠原酸、游離蒽醌等次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析也發(fā)現(xiàn)，各居群間的次生代謝產(chǎn)物含量存在差異，有些居群之間甚至存在極顯著差異（金則新等, 2006a; 2006b; 2007; 李鈞敏等, 2006; 2007; 馬金娥等, 2007）；對(duì)大明山和大雷山夏蠟梅果實(shí)以及種子形態(tài)研究也得到了相似的結(jié)果居群間出現(xiàn)一定程度的表型分化（蔡琰林, 2008）。而花、果實(shí)和種子等繁殖器官在3個(gè)夏蠟梅分布地內(nèi)和分布地間是否存在變異未見(jiàn)報(bào)道。夏蠟梅總生物堿、總酚以及總皂甙等次生代謝產(chǎn)物與環(huán)境因子的相關(guān)性研究表明，部分次生代謝產(chǎn)物含量與環(huán)境因子間存在一定的相

7、關(guān)性（金則新等, 2006a；李鈞敏, 2006）；張文標(biāo)和金則新（2007）對(duì)不同生境夏蠟梅居群的果實(shí)、種子形態(tài)變異及其與環(huán)境因子相關(guān)性進(jìn)行了研究，得出果實(shí)和種子表型性狀在居群間和居群內(nèi)都存在一定程度的變異，且以灌叢生境的性狀最優(yōu)，果實(shí)和種子形態(tài)與光照條件的相關(guān)性最大，與土壤因子的相關(guān)性較??；而夏蠟梅表現(xiàn)型的變異與遺傳變異之間的相關(guān)性如何，也需要進(jìn)一步深入研究。1.3 增溫對(duì)植物的影響研究進(jìn)展溫度升高會(huì)對(duì)植物的光合作用產(chǎn)生影響，溫度對(duì)于植物光合作用的影響有兩種情況：1）環(huán)境溫度高于植物光合的最適溫度時(shí)，植物的光合速率降低。其原因可能是與O2相比溫度升高時(shí)，相對(duì)減少了CO2的溶解度和Rubis

8、co對(duì)CO2的親和性。2）環(huán)境溫度低于植物光合的最適溫度時(shí)，溫度增加與CO2濃度升高對(duì)植物光合速率的影響表現(xiàn)為協(xié)同作用，即溫度增加時(shí)植物的光合速率加快。這可能是由于光合作用屬酶促反應(yīng)，光合速率會(huì)隨溫度的上升而增加。Tissue等（1997）發(fā)現(xiàn)，火炬松（Pinus taeda）的光合作用與溫度的增長(zhǎng)存在正相關(guān)關(guān)系。Hamerlynck等（2000）發(fā)現(xiàn)沙漠多年生灌木Larrea tridentate在9d高溫處理中，用700molmol-1CO2進(jìn)行熏蒸，可增大光合速率。同時(shí)也有研究表明，在光強(qiáng)、二氧化碳濃度相同時(shí)，溫度對(duì)光合作用的影響很大。在光合作用正常進(jìn)行的溫度范圍內(nèi)（1035），光強(qiáng)、C

9、O2充足時(shí)，溫度高，則光合強(qiáng)。在光強(qiáng)度高時(shí)，對(duì)光合作用影響最大的一個(gè)因素就是溫度，應(yīng)適當(dāng)提高溫度，以提高光合速率。對(duì)高溫脅迫下植物光合色素含量的變化研究不多。郭培國(guó)等(1998)對(duì)此進(jìn)行了研究結(jié)果表明，在5 d 高溫(40 )脅迫下 ,多數(shù)水稻材料的葉綠素含量均表現(xiàn)出下降的趨勢(shì) ,但一種雜交水稻母本的葉綠素含量沒(méi)有表現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，這可能與栽培稻的長(zhǎng)期馴化有關(guān)。1.4 植物物候?qū)囟壬叩捻憫?yīng)研究進(jìn)展過(guò)去一個(gè)多世紀(jì)，全球平均溫度已經(jīng)增加了0.6(±0.2)。 根據(jù)IPCC預(yù)測(cè)，到本世紀(jì)末，全球表面溫度可能會(huì)增加1.84.0，而高緯度或高海拔地區(qū)對(duì)溫度升高的響應(yīng)可能會(huì)更為敏感而迅速。溫

10、度控制生態(tài)系統(tǒng)中許多生物和化學(xué)反應(yīng)速率，且?guī)缀跤绊懼猩飳W(xué)過(guò)程，植物物候也不例外。 溫度的升高直接影響著植物的物候。在溫度升高條件下，植物春季芽的展開(kāi)提前，花期提前，秋季植物芽的休眠推后或無(wú)影響。增溫對(duì)植物物候影響可能因物種和處理時(shí)間(短期/長(zhǎng)期)而異。Henry和Molau使用國(guó)際凍原計(jì)劃(ITEX)研究方法，利用開(kāi)頂式同化箱控制環(huán)境溫度，研究增溫對(duì)高寒植物物候的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)物種的物候期發(fā)生了顯著變化，但植物物候?qū)υ鰷氐亩唐诜磻?yīng)只是個(gè)體特征，不能反映一般性的格局和強(qiáng)度。 Dunne等利用輻射加熱器控制環(huán)境溫度研究氣候變化對(duì)11種亞高山灌叢和草本花期的可能影響，結(jié)果表明各物種花期對(duì)增溫的

11、反應(yīng)有所不同，他們認(rèn)為花期對(duì)全球變暖的這種短期響應(yīng)可能導(dǎo)致種間關(guān)系發(fā)生變化。 Suzuki和Kudo利用開(kāi)頂式同化箱法控制環(huán)境溫度研究日本北部Taisetsu山脈高山極地植物物候?qū)δM增溫的響應(yīng)，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)初期各觀測(cè)物種的生長(zhǎng)季延長(zhǎng)、落葉期滯后；在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第3個(gè)生長(zhǎng)季時(shí)，只有篤斯越橘(Vaccinium uliginosum)提前發(fā)芽，而葉杜香(Ledum palustre)、北極果(Arctous alpinus)和巖高蘭(Empetrum nigrum)表現(xiàn)不明顯。植物物候?qū)囟壬叩捻憫?yīng)方式可能在不同功能群間存在一定的差異。Billings認(rèn)為溫度升高對(duì)不同物種的影響不同，但對(duì)同一功

12、能群影響可能是相似的，因?yàn)橥还δ苋浩渖硖匦?、生殖結(jié)構(gòu)和葉形態(tài)特征都相對(duì)一致。Chapin等將極地及高山物種分為木本(落葉型和常綠型)和草本(禾本類(lèi)、非禾本類(lèi)和莎草類(lèi))。Arft等通過(guò)meta-analysis方法對(duì)國(guó)際凍原計(jì)劃(ITEX)13個(gè)站點(diǎn)短期(14 a)主要物候現(xiàn)象(展葉、始花和休眠)觀測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合定量分析，結(jié)果表明，展葉對(duì)模擬增溫的響應(yīng)在不同功能群間存在顯著的差異，而花期和休眠的差異性較小。同樣，Henry和Molau通過(guò)對(duì)國(guó)際凍原計(jì)劃(ITEX)6個(gè)站點(diǎn)研究結(jié)果進(jìn)行歸納，發(fā)現(xiàn)不同功能群物候?qū)囟壬叩捻憫?yīng)存在明顯的差異，響應(yīng)的敏感程度依次為非禾本草本類(lèi)>禾本類(lèi)>

13、落葉型灌叢>常綠型灌叢。植物物候?qū)δM增溫的響應(yīng)是否存在區(qū)域間的差異？Arft等對(duì)國(guó)際凍原計(jì)劃(ITEX)13個(gè)站點(diǎn)短期研究結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析表明，展葉和始花在區(qū)域間沒(méi)有明顯的差異，但秋季葉的枯萎則表現(xiàn)出顯著差異(溫度升高使高山植物枯萎期推遲，而對(duì)極地物種枯萎時(shí)間影響并不顯著)。 同樣，Henry和Molau認(rèn)為除了個(gè)別物種，植物物候?qū)δM增溫響應(yīng)的方式和強(qiáng)度在6個(gè)國(guó)際凍原計(jì)劃(ITEX)站點(diǎn)間胡研究結(jié)果都是相似的。2 研究目的和意義溫度幾乎影響所有的生物學(xué)過(guò)程，特別是光合作用和呼吸作用酶活性，以及 CO2 和 O2 在細(xì)胞中的溶解度等，環(huán)境溫度升高可能對(duì)植物光合作用和呼吸作用產(chǎn)生直接顯著影響

14、。由于研究方法不同，實(shí)驗(yàn)植物種類(lèi)和生態(tài)型對(duì)溫度的敏感性及其光合作用的最適溫度存在差異，溫度升高通常使植物的呼吸速率加快、葉片氣孔導(dǎo)度升高，而對(duì)植物光合作用卻表現(xiàn)出增加、下降或無(wú)影響。以全球變暖和大氣CO2濃度升高為主要特征的全球變化正在改變著陸地生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能，威脅著人類(lèi)的生存與健康，因而倍受世界各國(guó)政府和科學(xué)家的普遍關(guān)注。大量監(jiān)測(cè)和模型模擬研究表明，由上個(gè)世紀(jì)開(kāi)始的全球溫室效應(yīng)在新的世紀(jì)正在繼續(xù)和擴(kuò)大。 政府間氣候變化專(zhuān)門(mén)委員會(huì)(IPCC)第4次評(píng)估報(bào)告預(yù)測(cè)，從現(xiàn)在開(kāi)始到2100年，全球平均氣溫將升高1.84.0目前全球氣候變化已經(jīng)成為不容置疑的事實(shí)。植物物候節(jié)律與氣候等環(huán)境因子密切相

15、關(guān)，全球氣候變化勢(shì)必對(duì)植物物候產(chǎn)生深刻的影響，因此關(guān)于物候?qū)夂蜃兓憫?yīng)的研究正成為一個(gè)新的熱點(diǎn)領(lǐng)域。 基于地面觀測(cè)、遙感監(jiān)測(cè)和物候模型等研究表明，過(guò)去百余年的氣候變化已經(jīng)對(duì)植物物候產(chǎn)生了顯著的影響。雖然植物物候?qū)θ驓夂蜃兓捻憫?yīng)因物種及區(qū)域而異，但在大尺度上存在共性，如春季物候提前、秋季物候延遲和生長(zhǎng)季延伸。本研究擬解決的問(wèn)題：1）模擬升溫對(duì)夏蠟梅種子萌發(fā)、幼苗存活和生長(zhǎng)的影響。2）不同土壤對(duì)夏蠟梅種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響。3）二年生夏蠟梅幼苗物候?qū)δM增溫的響應(yīng)。3 研究特色及創(chuàng)新之處4研究?jī)?nèi)容：4.1升溫對(duì)種子萌發(fā)、幼苗存活和生長(zhǎng)的影響從浙江天臺(tái)大雷山（DLS）夏蠟梅群落中采集表層土壤

16、300公斤（具體土樣由實(shí)際花盆決定），然后裝入花盆中以備實(shí)驗(yàn)需要。種子萌發(fā)用小花盆（10厘米直徑、10厘米高），幼苗存活和生長(zhǎng)用中等大小花盆（20厘米高，15厘米直徑）。種子萌發(fā)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50粒種子，持續(xù)觀察一個(gè)月，記錄出苗情況。幼苗存活至少用5個(gè)重復(fù)、幼苗生長(zhǎng)用10個(gè)重復(fù)，每個(gè)花盆用一株幼苗。所有幼苗由種子萌發(fā)獲得。設(shè)置三種升溫方式：白天升溫（早上6點(diǎn)-晚上6點(diǎn)）、晚上升溫（晚上6點(diǎn)-早上6點(diǎn)）和全天24小時(shí)升溫。升溫幅度為2。將種子萌發(fā)、幼苗存活、幼苗生長(zhǎng)的花盆分別放在四種溫度條件下進(jìn)行處理，即三種升溫和一種對(duì)照（不升溫）。在2010和2011年的三個(gè)季度（春、夏、秋）對(duì)幼苗的

17、光合作用各項(xiàng)參數(shù)、葉綠素含量和葉綠素?zé)晒獾壬碇笜?biāo)測(cè)定，對(duì)葉、根等形態(tài)指標(biāo)和生物量統(tǒng)計(jì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)變化、葉片、根系、生物量、生理變化（光合作用、葉綠素和熒光）等。4.2不同土壤與種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)從浙江天臺(tái)大雷山（DLS）采集表層土壤，從母樹(shù)下采集表層土壤100公斤，然后分成兩部分（每部分50公斤，具體土樣數(shù)量取決于實(shí)驗(yàn)實(shí)際需要的土壤情況），一部分作為對(duì)照，一部分用高壓滅菌方法（120，每次持續(xù)30分鐘，連續(xù)三次）去掉土壤微生物。另外從浙江天臺(tái)大雷山（DLS）4個(gè)生境（常綠闊葉林、灌叢、竹林和杉木林）采集不同類(lèi)型的土壤。于2011年3月將滅菌和沒(méi)滅菌的土壤及不同類(lèi)型的土壤分別裝入花盆（小花盆，1

18、0厘米直徑、10厘米高），然后在每個(gè)花盆中放入3粒種子，種植50盆，持續(xù)觀察一個(gè)月，記錄出苗情況。將滅菌和沒(méi)滅菌的土壤及不同類(lèi)型的土壤分別裝入花盆（中等花盆，20厘米高，15厘米直徑），然后在每個(gè)花盆中種植一株幼苗，10個(gè)重復(fù)，觀察幼苗生長(zhǎng)情況。實(shí)驗(yàn)持續(xù)4個(gè)月，最后收獲，確定生物量。在2010和2011年的三個(gè)季度（春、夏、秋）對(duì)幼苗的光合作用各項(xiàng)參數(shù)、葉綠素含量和葉綠素?zé)晒獾壬碇笜?biāo)測(cè)定，對(duì)葉、根等形態(tài)指標(biāo)和生物量統(tǒng)計(jì)。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)變化、葉片、根系、生物量、生理變化（光合作用、葉綠素和熒光）等。4.3二年生幼苗物候觀測(cè)2011年對(duì)二年生夏蠟梅幼苗各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行物候觀測(cè)，包括爆芽、展葉和落葉，構(gòu)型、

19、構(gòu)件等指標(biāo)。5研究方案5.1土壤生物及不同類(lèi)型土壤與種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)1.1土壤采集和滅菌處理：從夏蠟梅天然群落中采集表層土壤（0-40cm）。取部分土壤通過(guò)高壓滅菌（121，每次持續(xù)30分鐘，連續(xù)三次）方法去掉土壤生物，醫(yī)用垃圾袋即可作為滅菌袋。另外從浙江天臺(tái)大雷山（DLS）4個(gè)生境（常綠闊葉林、灌叢、竹林和杉木林）采集不同類(lèi)型的土壤，每種類(lèi)型土壤分別采集100公斤。1.2種子萌發(fā)和出苗：將滅菌和不滅菌的土壤及不同類(lèi)型土壤分別裝入50個(gè)花盆（直徑10厘米、高10厘米）中，然后在每個(gè)花盆中放入3粒種子，每天記錄出苗情況，持續(xù)記錄一個(gè)月。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，去掉表土，收集花盆中的種子，確定未出苗種子中

20、有多少已經(jīng)萌發(fā)；根據(jù)最終數(shù)據(jù)確定種子萌發(fā)率。多數(shù)萌發(fā)實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)箱的培養(yǎng)皿中進(jìn)行，而本實(shí)驗(yàn)在野外進(jìn)行，用土壤替換了濾紙！需要種子數(shù)量：3×50×2=300粒種子。實(shí)驗(yàn)期間供給等量水分！播種深度2cm。1.3幼苗生長(zhǎng)：將滅菌和不滅菌的土壤及不同類(lèi)型土壤分別裝入花盆（中等花盆，20cm高，15厘米直徑），然后在每個(gè)花盆中種植一株幼苗。每種土壤種10株幼苗，共需要20株苗。實(shí)驗(yàn)大約持續(xù)5個(gè)月。在實(shí)驗(yàn)期間供給等量水分，觀察幼苗生長(zhǎng)（葉片數(shù)量、植株高度）情況，并測(cè)定一些生理指標(biāo)（光合、呼吸、熒光、酶等），實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收獲，確定生物量。特別注意：夏蠟梅需要遮陰！5.2升溫對(duì)種子萌發(fā)、幼苗存

21、活和生長(zhǎng)的影響升溫幅度：2。三種升溫方式：白天升溫（早上6點(diǎn)-晚上6點(diǎn)）、晚上升溫（晚上6點(diǎn)-早上6點(diǎn)）和全天24小時(shí)升溫。土壤采集：從夏蠟梅天然群落中夏臘梅母樹(shù)下采集表層土壤（0-40cm）。將種子萌發(fā)和出苗、幼苗存活、幼苗生長(zhǎng)的花盆分別放在四種溫度處理下，即三種升溫和一種對(duì)照（不升溫）。種子萌發(fā)和出苗：這部分完全同上面相應(yīng)實(shí)驗(yàn)，50個(gè)重復(fù)，每個(gè)花盆3粒種子。需要種子數(shù)量：3×50×4=600粒種子。幼苗存活：將源于“種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)”的幼苗種植在小花盆中。具體而言，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將花盆徹底灌水，然后將10個(gè)花盆放在一塊作為一組，每種溫度處理下放置5組（需要50株幼苗）；實(shí)驗(yàn)植株

22、被放置在4種溫度處理下（共需要200株），實(shí)驗(yàn)期間不在加水，以確定升溫對(duì)土壤蒸發(fā)和植物蒸騰的影響。每天記錄死亡植株數(shù)，直到植株全部死亡為止。幼苗生長(zhǎng)：這部分工作完全同上面的相應(yīng)實(shí)驗(yàn)，包括測(cè)定的各種指標(biāo)。5.3幼苗生理指標(biāo)測(cè)定基本形態(tài)指標(biāo)測(cè)定 從長(zhǎng)葉開(kāi)始，每月中旬測(cè)量一次，每次測(cè)15株夏蠟梅幼苗的基本形態(tài)指標(biāo)：株高、基徑、葉片數(shù)、葉長(zhǎng)和葉寬。保證有3個(gè)月的數(shù)據(jù)。所有處理幼苗光合日進(jìn)程的測(cè)定用美國(guó)LI-COR公司生產(chǎn)的Li-6400便攜式光合作用測(cè)定系統(tǒng)，測(cè)定前對(duì)光合儀進(jìn)行系統(tǒng)校正，以保證測(cè)量值的合理性。選擇晴朗天氣從6:0018:00每隔2小時(shí)進(jìn)行測(cè)定，每種雜交的植物取5-7株，每株取3個(gè)葉子進(jìn)

23、行測(cè)量。重復(fù)3次，取平均值。每月測(cè)定一次。相關(guān)參數(shù)凈光合速率（Pn）、胞間CO2濃度（Ci）、蒸騰速率（E）、氣孔阻力（rs）、暗呼吸速率（Rd）、光合有效輻射（Q）、大氣溫度（Ta）、葉面溫度（Tl）、大氣相對(duì)濕度（RH）、大氣CO2濃度（Ca）等有儀器自動(dòng)讀取。水分利用效率=凈光合速率/蒸騰速率。同時(shí)做光響應(yīng)和二氧化碳響應(yīng)。葉綠素?zé)晒鈪?shù)日變化 每種處理的夏蠟梅取5-7株，每株取3個(gè)葉子進(jìn)行測(cè)量。重復(fù)3次，取平均值。每月測(cè)定一次。用PS30P（美國(guó)OPTI-SCIENCES）便攜式葉綠素?zé)晒鈨x測(cè)定，在葉片自然生長(zhǎng)角度不變的情況下測(cè)定葉綠素?zé)晒饣緟?shù)：初始熒光(F0)、最大熒光(Fm)和光

24、系統(tǒng)最大熒光量子產(chǎn)量(Fv/Fm)。其中，F(xiàn)0是PS反應(yīng)中心全部開(kāi)放時(shí)的熒光水平；Fm是PS反應(yīng)中心全部關(guān)閉時(shí)的熒光水平；Fv是最大熒光與初始熒光之差，稱(chēng)為可變熒光，F(xiàn)v=Fm-F0；Fv/Fm是可變熒光與最大熒光之比，被稱(chēng)為PS的光化學(xué)效率，它是植物經(jīng)過(guò)充分暗適應(yīng)的葉片PS最大或潛在的量子效率指標(biāo)，一般比較恒定，在0.800.85之間。葉綠素含量(崔勤等，2006) 用便攜式葉綠素相對(duì)含量測(cè)定儀測(cè)定各處理的葉綠素相對(duì)含量(SPAR)，每個(gè)處理測(cè)定3株，在每株測(cè)定的葉片中脈兩側(cè)取5個(gè)點(diǎn)。15個(gè)數(shù)據(jù)的均值即為葉片相對(duì)含量。之后用以下方法測(cè)定葉綠素含量： 在每種處理中隨機(jī)選擇幼苗，取無(wú)病蟲(chóng)害、無(wú)干

25、葉的葉片, 暗處保存。在避光室內(nèi), 取出待測(cè)樣品,剪碎, 混勻。準(zhǔn)確稱(chēng)取0.5000g樣品于研缽中, 加80%丙酮25ml研磨, 然后將研磨后的樣品濾入50ml容量瓶中, 用80%丙酮洗凈研缽和濾紙, 洗液并入容量瓶中, 且定容至50ml, 測(cè)鮮樣葉綠素含量。80%丙酮作參比液, 分別在645nm和663nm處測(cè)定樣品液的吸光值, 并且按下列公式計(jì)算葉綠素含量,重復(fù)（每個(gè)授粉3株幼苗，每株植物上所有葉子的混合）3 次，取平均數(shù)，每月測(cè)定一次。CT=Ca+Cb。 (1)Ca=( 12.7 A663- 2.59 A645) *V/m (2)Cb=( 22.9 A645- 4.67 A663) *V

26、/m (3)式中, Ca 為葉綠素a 含量, Cb 為葉綠素b 含量, CT 為總?cè)~綠素含量, V 為提取液體積, m 為樣品重。5.4 幼苗酶液提取、酶活力及蛋白質(zhì)含量的測(cè)定酶液提?。喝?.5g葉片加入預(yù)冷的3ml0.05mol·L-1磷酸緩沖液（內(nèi)含1mmol·L-1EDTA和1%PVP）研磨至勻漿，4冷凍離心(10000rad/s,30min),上清液即為酶提取液。APX的提取液需在提取液中加1mmol·L-1ASA·SODAPXCAT和GR。SOD活性益抑制氮藍(lán)四唑(NBT)光化還原50%的酶量為1個(gè)活力單位（U），活性用U(mg-1 prote

27、in)表示，APX、CAT和GR活性分別用OD290·min-1·mg-1 protein、OD240·min-1·mg-1 protein和OD340·min-1·mg-1 protein表示。POD測(cè)定參照Hammer Schmidt的方法?；钚杂肙D460·min-1·mg-1 protein表示。蛋白質(zhì)含量的測(cè)定：采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。5.5 幼苗形態(tài)指標(biāo)及生物量測(cè)定選取不同增溫處理及對(duì)照組生長(zhǎng)狀況相似的10株幼苗測(cè)以下指標(biāo)。用直尺測(cè)株高( seedling height, SH地上部分）、用游標(biāo)卡尺測(cè)基莖

28、(basal diameter, BSD)、記錄葉片數(shù)( leaf number, LN )，從盆中取出整株植物，保持根系和葉片完整，小心去掉根上的土，將收獲材料洗凈并吸干表面水分。測(cè)主根長(zhǎng)( tap root length, TRL)，用精度為0.0001g的電子天平稱(chēng)量植株鮮重（PFW）、根鮮重（RFW）、莖鮮重（SFW）、葉鮮重（LFW）。 根部形態(tài)分析。將樣品放置在樹(shù)脂玻槽內(nèi)，注水使根部充分散開(kāi)，再用WinRHIZO根系分析系統(tǒng)分析掃描后完整的根系圖像，得到每株總根表面積、總根長(zhǎng)、平均根直徑和總根體積、根尖數(shù)等五個(gè)參數(shù)。葉片形態(tài)分析。將上述掃描根后夏蠟梅的真葉圖像分別掃描存入計(jì)算機(jī)，用

29、WinFOLIA葉片分析系統(tǒng)分析。得到如下參數(shù)：每葉真葉面積、真葉周長(zhǎng)、真葉長(zhǎng)、真葉寬和真葉寬/真葉長(zhǎng)。通過(guò)計(jì)算，既而得到每株幼苗的5個(gè)真葉指標(biāo)：總面積、總周長(zhǎng)、總長(zhǎng)、總寬和長(zhǎng)/寬。之后，將各部分分別于105殺青20min，在75下烘干至恒重，分為莖、葉、主根、側(cè)根，稱(chēng)量各部分干重并計(jì)算如下參數(shù)：冠部干重（CDW）=莖干重（SDW）+葉干重（LDW）植株干重（PDW）=冠部干重（CDW）+根干重（RDW）根生物量比（RMR）=根干重（RDW）/植株干重（PDW）葉生物量比（LMR）=葉干重（LDW）/植株干重（PDW）莖生物量比（SMR）=莖干重（SDW）/植物干重（PDW）根冠比（R/C）=

30、根干重（RDW）/冠部干重（CDW）主根側(cè)根比(Main root to lateral root ratio， MR /LR)= 主根重/側(cè)根重 比葉面積( specific leaf area, SLA)= 葉片面積/葉片干質(zhì)量葉面積比率(leaf area ratio，LAR)=植株葉面積/植株干重；比枝長(zhǎng)(specific branch length，SBL)=枝長(zhǎng)度/枝干重；單位枝長(zhǎng)葉數(shù)(leaves per branch length，LPBL)=葉片數(shù)/枝長(zhǎng)度；葉片含水量（LWC，%）(紅雨和王林和，2008)=（FW-DW）/DW×100%，其中FW為鮮重；DW為干重 整株干物質(zhì)積累率=（干總生物量/鮮總生物量）×100%5.6 二年生幼苗物候觀測(cè)2011年4月，在夏蠟梅芽尚未萌動(dòng)前，應(yīng)用隨即取樣法，在每個(gè)植株上選取35個(gè)標(biāo)準(zhǔn)枝，用標(biāo)記卡標(biāo)記。根據(jù)葉的生長(zhǎng)特點(diǎn)，不定期記錄每個(gè)枝條上葉的數(shù)量，展葉始末時(shí)間，在植物物候活動(dòng)關(guān)