




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞脫分化再分化愈傷組織雜種植株:植物體細(xì)胞雜交過程1植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞細(xì)胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株1、動物細(xì)胞融合的概念是什么? 2、動植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別?這對它們雜交或融合過程有什么影響? 3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些?那動物細(xì)胞融合呢?4、動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同?是什么原理?5、動物細(xì)胞融合有什么意義?主要應(yīng)用在哪些方面?6、植物體細(xì)胞雜交可得
2、到雜種植株,動物細(xì)胞融合后能象電影上一樣形成雜種動物個體嗎?為什么?動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)、融合雜合的細(xì)胞有絲分裂2個完整的雜交細(xì)胞AB2一、動物細(xì)胞融合1.細(xì)胞融合: 是指兩個或兩個以上的細(xì)胞融合為一個細(xì)胞的過程。自然發(fā)生: 受精卵 3鼠細(xì)胞人細(xì)胞人工誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞人工誘導(dǎo):利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合誘導(dǎo)因素:聚乙二醇、滅活的病毒或電激等。 4仙臺病毒紫外線滅活喪失感染活性(不感染細(xì)胞)保留融合活性(誘導(dǎo)細(xì)胞融合)什么是病毒的滅活? 滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力,但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋
3、白發(fā)生作用,使細(xì)胞互相凝聚,細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布,細(xì)胞膜打開,細(xì)胞發(fā)生融合。5滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合,形成雜交細(xì)胞(細(xì)胞膜具有一定的流動性)6物理法的融合效率較高,且對細(xì)胞(原生質(zhì)體)的傷害小,易操作、控制和觀察。太空中處于失重狀態(tài),不同種細(xì)胞(原生質(zhì)體)更容易親近;為什么在太空中細(xì)胞(原生質(zhì)體)融合率會大大上升?為什么選用物理法誘導(dǎo)?7正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞 正在融合的雞血細(xì)胞動物細(xì)胞融合的原理:細(xì)胞膜的流動性8細(xì)胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細(xì)胞進行有絲分裂,形成完整的雜交細(xì)胞誘導(dǎo)的手段:融合后細(xì)胞的類型:
4、AB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點?三種AA、AB、BB(A、B)含兩種生物的遺傳物質(zhì)動物細(xì)胞融合過程原理:92、動物細(xì)胞融合的應(yīng)用1.突破有性雜交方法的局限,使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。2.成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。鼠雞、鼠兔、鼠猴、人鼠、人兔、人雞、人蛙、酵母菌雞 、人胡蘿卜等3、重要用途:制備單克隆抗體。10獲得雜種植株物理、化學(xué)方法(同左)滅活的病毒物理(離心、振蕩、電激)化學(xué)(聚乙二醇)直接誘導(dǎo)細(xì)胞融合去壁原生質(zhì)體融合誘導(dǎo)新壁雜種植株細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性結(jié)果誘導(dǎo)方法步驟融合的原理動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項目植物、動物細(xì)胞融合的比較獲得雜交細(xì)胞小結(jié)
5、111【例1】能使動物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是 ( )A.離心 B.滅活的病毒 C.電刺激 D.振動【例2】融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點( )具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息 B.能無限增殖 C.可形成新個體 D.培養(yǎng)過程會貼壁【例3】動物細(xì)胞融合的作用中最重要的是( )A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體 C.培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞 BB初試牛刀A12使用相應(yīng)的抗體檢測乙肝病毒抗原二、單克隆抗體的制備 醫(yī)院一般怎樣檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒?乙肝病毒模式圖 凡能夠引起機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原。1、什么是抗原? 例如花粉、病菌、病毒等。有時自身的組織或細(xì)胞也會成
6、為抗原,如癌細(xì)胞等。13抗原決定簇:抗原表面具有的某些特定的化學(xué)基團,能決定抗原特異性,是免疫細(xì)胞識別抗原的重要依據(jù)??乖ǔJ怯啥鄠€抗原決定簇組成的14 2、什么是抗體?由何種細(xì)胞產(chǎn)生?主要分布在哪里?起何作用? 當(dāng)機體受到抗原刺激劑后由效應(yīng)B細(xì)胞(漿細(xì)胞)產(chǎn)生的,并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白抗體。 抗體分布于血清中,也分布于組織液及外分泌液中。15抗體與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合163、抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法:從血清中分離抗體多種漿細(xì)胞動物體內(nèi)多種抗體抗原 17血清抗體(也稱多克隆抗體) 由血清中提取的抗體是由不同淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物,可達(dá)百萬種以上,稱為多克隆抗體(抗
7、原通常是由多個抗原決定簇組成的,只針對一個抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體)。特點: 產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏??乖患兛贵w不純 抗原 動物體內(nèi)刺激效應(yīng)B 抗體18 每一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一,特異性強的抗體。 如果利用單個B淋巴細(xì)胞進行無性繁殖(克?。?,形成細(xì)胞群,這樣的細(xì)胞群就有可能產(chǎn)生出化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體單克隆抗體。問題: 怎樣獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體呢?19在體外培養(yǎng)的條件下,一個B淋巴細(xì)胞能無限增殖形成細(xì)胞群嗎?什么樣的細(xì)胞能夠在體外無限增殖呢? 腫瘤細(xì)胞!20 5.技術(shù)思路的重點雜交瘤細(xì)胞 HAT篩選McAb大量培
8、養(yǎng)PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合免 疫B 脾礦物油骨髓瘤瘤 問題: 在培養(yǎng)體系中, 有5種細(xì)胞. B細(xì)胞、瘤細(xì)胞,和雜交細(xì)胞。 我們還是拿不到McAb,怎么辦? 篩選!篩出雜交瘤細(xì)胞。怎么篩? 又是一個思路問題。 關(guān)鍵一步21如何誘導(dǎo)融合? 加入聚乙二醇(PEG)如何得到B淋巴細(xì)胞?6.制備單克隆抗體的過程22細(xì)胞兩兩融合后,有哪些類型?B-B B-瘤(雜交瘤細(xì)胞) 瘤-瘤 如何篩選出雜交瘤細(xì)胞? 單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞,第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的。 首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞23細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑,其中
9、D途徑能被氨基喋呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑,但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑,沒有S途徑,可是能不斷分裂增殖。 你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么? 小資料:24 在培養(yǎng)液中加入氨基喋呤,收集增殖細(xì)胞! 加入氨基喋呤后,使 D 合成途徑阻斷,僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖,但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞因為可以利用淋巴細(xì)胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。25注射抗原效應(yīng)B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合多種雜交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基 篩選1抗原-抗體雜交法克隆化單克隆抗體 篩選24.第一次篩選出的雜交瘤細(xì)胞為何需進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測?26 通
10、常采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法,將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋,接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng),使每孔細(xì)胞不超過一個,再由這些單細(xì)胞克隆生長,然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體,那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細(xì)胞株進行擴大培養(yǎng)。再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞27陽性孔方法抗原-抗體雜交法 在單克隆抗體制備過程中,兩次篩選的原理和方法是不相同的。2829單克隆抗體篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過程:特點:既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁
11、殖特點:特異性強靈敏度高可大量制備注射抗原免疫30單克隆抗體的制備1、怎樣獲得能分泌專一抗體的B淋巴細(xì)胞?2、從何處獲得較多的B淋巴細(xì)胞?3、用什么方法可以使B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合?4、怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞?5、篩選出的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體都一樣嗎?6、怎樣獲得只產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞?7、怎樣獲得大量的單一抗體?反復(fù)注射特定的抗原,免疫小鼠。小鼠的脾臟PEG、滅活的病毒等利用HAT選擇培養(yǎng)基培養(yǎng),篩選否用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng),稀釋度要保證每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞。 抗原抗體雜交法檢測呈陽性反應(yīng)體內(nèi)或體外大量培養(yǎng)特異的雜交瘤細(xì)胞,從中提取單一抗體。31單克隆抗體B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合
12、選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)抗體檢測產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體多種雜交細(xì)胞1、該過程中用到了兩種技術(shù)小結(jié)2單克隆抗體的制備過程:動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)2、單克隆抗體的制備過程的三個“一”:一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法,產(chǎn)生了一種新細(xì)胞,得到了一種優(yōu)勢抗體。滅活病毒誘導(dǎo)融合雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體優(yōu)勢:特異性強、靈敏度高,可大量制備327、單抗隆抗體的應(yīng)用作為診斷試劑定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病 用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定,純度高、特異性強,具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點。用于治療疾病和運載藥物 利用同位素標(biāo)記單抗,在特定組織成像 制成生物導(dǎo)彈,將
13、藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置,在原位殺死癌細(xì)胞,療效高、副作用小。單克隆抗體的優(yōu)點: 特異性強,靈敏度高,并可以大量制備。3334結(jié)合同位素的單抗-生物導(dǎo)彈單抗放射性同位素35項目動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性和植物細(xì)胞的全能性融合前提分散成單個細(xì)胞去除細(xì)胞壁誘導(dǎo)方法聚乙二醇、離心、振動、電激、滅活病毒聚乙二醇、離心、振動、電激、結(jié)果獲得雜種細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物獲得雜種植株用途制備單克隆抗體培育作物新品種意義使遠(yuǎn)緣雜交成為可能克服遠(yuǎn)緣雜交障礙36對比比較項目植物體細(xì)胞雜交單克隆抗體的制備原理融合前處理促融方法用途過程第一步第二步第三步第四步細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞
14、膜的流動性、細(xì)胞增殖酶解法去壁小鼠要免疫處理物理法化學(xué)法物理、化學(xué)、生物法原生質(zhì)體的制備融合親本細(xì)胞的準(zhǔn)備原生質(zhì)體的融合與篩選動物細(xì)胞融合與兩次篩選雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)對產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)雜種植株的鑒定單克隆抗體的分離提純單抗有助于疾病的診斷、治療 獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株37圖中B為_過程,常用_作為誘導(dǎo)劑,該細(xì)胞繼承_的遺傳特性,既能_,又能_ 。B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC 1.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法,設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實驗方案該實驗方案的目是 ;A是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生 ;制備單克隆抗體B細(xì)胞專一抗體細(xì)胞融
15、合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌專一抗體無限增殖381975年Kohler和Milstein的單克隆抗體技術(shù)在生產(chǎn)和使用抗體方面開創(chuàng)了新紀(jì)元,圖10示單克隆抗體制備流程階段示意圖。請據(jù)圖回答下列問題:圖10(1)該技術(shù)是在動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和 技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。(2)圖10中細(xì)胞A體外培養(yǎng)不具有分裂能力,但能分泌 ,細(xì)胞B體外培養(yǎng)能夠 。(3)動物細(xì)胞融合常用的方法是 。圖10(1)動物細(xì)胞融合(2)分泌特異性抗體 、無限增殖(3)PEG(滅活的病毒、電刺激)39(4)細(xì)胞融合是隨機的過程,在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng),要篩選出 細(xì)胞。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,為了促進細(xì)胞攝取葡萄糖,常向培養(yǎng)液中加入 (激素)。
16、(5)培養(yǎng)2周后,即測定培養(yǎng)細(xì)胞的特征,篩選出 細(xì)胞置于不同孔內(nèi)(如圖所示)培養(yǎng)。此操作前要將培養(yǎng)細(xì)胞稀釋到710個細(xì)胞/ml,每孔滴入0.1ml細(xì)胞稀釋液,其目的是 。(6)要獲得大量的單克隆抗體,可對獲得的雜交瘤細(xì)胞進行 培養(yǎng)。(4)雜交瘤、胰島素(5)特異性分泌抗X蛋白抗體的、保證每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞,達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的(單一細(xì)胞培養(yǎng)以保證抗體的純度)、(6)體外或體內(nèi)40知識拓展3.為什么不只用兩個而要用多個細(xì)胞進行動物細(xì)胞間的融合?就目前常用的細(xì)胞融合方法來看,不管是用物理的、化學(xué)的方法,還是生物的方法,其融合率都不可能是100%。僅用兩個細(xì)胞融合,其效率太低,不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是,即使兩個細(xì)胞已發(fā)生融合,但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動物細(xì)胞融合技術(shù)最有價值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來說明這一問題。我們知道,體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上,但是每一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體,如果僅取一個脾細(xì)胞(含B淋巴細(xì)胞)和一個瘤細(xì)胞雜交,我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需要的;若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進行融合,就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 41知識拓展4.如何
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 二零二五年度風(fēng)力發(fā)電項目風(fēng)機設(shè)備采購與投資分析合同
- 2025年度智能制造對賭協(xié)議約定倍收益合作協(xié)議
- 二零二五年度林地使用權(quán)變更及補償合同
- 2025年度藥店藥店藥品知識產(chǎn)權(quán)保護聘用勞動合同
- 股權(quán)代持協(xié)議書標(biāo)準(zhǔn)模板:2025年度股權(quán)激勵適用
- 2025年度森林土地承包與林木撫育合作協(xié)議
- 二零二五年度企業(yè)內(nèi)部員工外出安全免責(zé)合同
- 二零二五年度汽車零部件貨物運輸保險協(xié)議
- 二零二五年度歷史文化街區(qū)拆除搬遷保護協(xié)議
- 2025年度服裝廠職工勞動合同模板書(智能化工廠)
- 鋅精礦價格計算公式
- 舞臺設(shè)計課件
- 高中英語 高中閱讀高頻單詞
- TRD工法施工方案(長業(yè)范本)
- 模板安裝三檢記錄表
- 安全費用提取、使用臺賬
- 部編版六年級語文下冊全冊課件PPT
- 北京市歷年中考語文現(xiàn)代文之記敘文閱讀25篇(2003-2021)
- 新教科版六年級下冊科學(xué)全冊重點題型練習(xí)課件(含答案)
- 鋼筋平法識圖與鋼筋算量經(jīng)典課件
- 現(xiàn)代漢語課件 副詞
評論
0/150
提交評論