醫(yī)學(xué)微生物學(xué) 實(shí)驗(yàn) 膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)(3)ppt課件

1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)三空氣的細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析空氣的細(xì)菌學(xué)檢查組號(hào)時(shí)間地點(diǎn)菌落形成單位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直徑7cm平板）N：平板上的菌落數(shù) A：平板面積(38.5cm2)T：采樣時(shí)間(15分鐘) CFU：colony forming unit WHO推薦的醫(yī)院各部門(mén)空氣細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別cfu/m3適用范圍級(jí)區(qū)10器官移植、心血管、矯形等外科手術(shù)室，保護(hù)性隔離室，灌注或配制注射液實(shí)驗(yàn)室級(jí)區(qū)200無(wú)菌室、手術(shù)室、供應(yīng)室、嬰兒室、中心滅菌單位、術(shù)后恢復(fù)室、早產(chǎn)兒及產(chǎn)房、重癥

2、監(jiān)護(hù)病房級(jí)區(qū)200500一般病房、治療室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手術(shù)室浴室我國(guó)公共場(chǎng)所空氣衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn)（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直徑9cm）撞擊法cfu/m3沉降法個(gè)/皿適用范圍10001035星級(jí)賓館、飯店1500202星級(jí)以下賓館和非星級(jí)帶空調(diào)賓館、飯店250030普通飯店、招待所、酒吧、茶座、咖啡廳、圖書(shū)館、博物館、美術(shù)館、飛機(jī)客艙400040音樂(lè)廳、影劇院、錄像廳（室）、游藝廳、舞廳、理發(fā)店、美容院（店）、游泳館、體育館、醫(yī)院候診室、候機(jī)室、旅客列車(chē)車(chē)廂、輪船客艙、飯館（餐廳）700075展覽館、商場(chǎng)（店）、書(shū)店、候車(chē)室、候船室液體或固

3、體標(biāo)本菌落總數(shù)測(cè)定可將標(biāo)本作十倍、百倍、千倍、萬(wàn)倍稀釋。分別取1ml注入直徑9cm的滅菌平皿內(nèi)。傾注46營(yíng)養(yǎng)瓊脂培育基大約15ml，混合均勻。瓊脂完全凝固以后，37培育48小時(shí)。選擇菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測(cè)定規(guī)范。將計(jì)數(shù)得到的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出cfu/g(ml)。 1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查第1格為洗手前，第2格為洗手后，第3格為消毒后，第4格空白對(duì)照。 2人1塊平板上:甲、丙常規(guī)洗手下:乙、丁規(guī)范洗手甲丙乙丁丙丁手指皮膚細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果分析第1格為洗手前：+ 第2格為洗手后 常規(guī)(甲、丙)洗手方法：? 標(biāo)準(zhǔn)(乙、丁)洗手方法：?第3格為消毒后：？

4、第4格空白對(duì)照：-醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測(cè)三菌落特征察看P11細(xì)菌純培育P10膿汁和糞便標(biāo)本檢驗(yàn)錄像油鏡運(yùn)用方法講解細(xì)菌在固體培育基中的生長(zhǎng)景象菌落定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培育基上生長(zhǎng)繁衍，構(gòu)成單一肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)。菌落特征：大小、外形、邊緣、顏色、外表、透明度、潮濕度、黏度、溶血性。菌落類(lèi)型：光滑型S、粗糙型R、黏液型M。菌苔：指多個(gè)菌落交融在一同構(gòu)成的細(xì)菌堆積物。菌落特征P11大?。捍?直徑約3mm以上)，中(直徑約13mm)，小(直徑約1mm以下)。外形：圓形，卵圓形、假根形、絲狀、不規(guī)那么等。邊緣：整齊，鋸齒狀，波浪狀，羽毛狀。外表：隆起、平坦、中心凸起

5、、臍形凹陷；光滑或粗糙、潮濕或枯燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周?chē)什菥G色、不透明)，溶血(菌落周?chē)霈F(xiàn)透明環(huán))。色素：普通為無(wú)色或灰白色，特殊色素有兩類(lèi)：脂溶性色素(菌落本身著色，培育基不著色)和水溶性色素(菌落及培育基均著色)。 細(xì)菌的溶血景象根據(jù)細(xì)菌對(duì)血平板中紅細(xì)胞的溶解才干可分為以下三種溶血類(lèi)型甲型溶血:產(chǎn)生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周?chē)?2mm半透明的草綠色溶血環(huán)。乙型溶血: 呈完全性溶血，在血平板上菌落周?chē)?4mm寬，界限清楚，無(wú)色透明的溶血環(huán)。丙型溶血:不產(chǎn)生溶血素，在血平板上的菌落周?chē)鸁o(wú)溶血環(huán)。細(xì)菌的純培育挑選單菌落:膿汁標(biāo)本在普通平板上有黃色、白色兩種菌落

6、，菌落的色素是脂溶性的，是細(xì)菌本身的顏色。菌落直徑2mm左右、圓形、隆起、外表光滑、潮濕、邊緣整齊、不透明。糞便標(biāo)本在伊紅美藍(lán)平板上，有紫黑色、淡粉紅色兩種菌落，菌落顏色是水溶性的，不是細(xì)菌本身的顏色，顏色的產(chǎn)生是由于大腸埃希菌分解乳糖產(chǎn)酸，酸使伊紅與美藍(lán)結(jié)合，構(gòu)成紫黑色具有金屬光澤、大而隆起、不透明的菌落；菌落直徑23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊紅的顏色，很淡的粉紅色，半透明，直徑12mm。選擇平板上一樣的菌落數(shù)多的、典型的、容易挑取的單菌落，進(jìn)展接種。37培育24小時(shí) 37培育24小時(shí) 紫黑色通常描畫(huà)的菌落直徑和顏色是特指培育1824小時(shí)，菌落分布比較稀少的區(qū)域、典型的菌落。假設(shè)培育物

7、放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或者平板上某個(gè)部位細(xì)菌比較多、菌落比較密集，大腸桿菌菌落顏色能夠會(huì)發(fā)生改動(dòng)。由于大腸桿菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)分解大多產(chǎn)生堿性物質(zhì)，中和了乳糖分解時(shí)產(chǎn)生的酸。大腸桿菌菌落能夠會(huì)由原來(lái)的紫黑色變成粉紅色，和致病菌顏色一樣。不要在菌落密集的區(qū)域挑選菌落，它能夠是菌落構(gòu)成單位CFU，不是單菌落，很容易選錯(cuò)。37培育36小時(shí) 由紫黑色變成粉紅色斜面接種法P10 1組4支甲普通平板黃色菌落1支斜面乙普通平板白色菌落1支斜面丙伊紅美藍(lán)紫黑菌落1支斜面丁伊紅美藍(lán)粉紅菌落1支斜面斜面標(biāo)志：組號(hào)、黃色、白色、紫黑、粉紅。在平皿底部玻璃上，畫(huà)個(gè)大圈選菌落，同組同窗認(rèn)可，才干挑取。培育

8、時(shí)間不得超越18小時(shí)。斜面接種法P10甲黃色,乙白色。丙紫黑,丁粉紅。標(biāo)志：組號(hào)，顏色平安警告接種環(huán)接種斜面一次，可產(chǎn)生幾十個(gè)微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑100um沉降很快,50um在0.4s內(nèi)分散開(kāi),5um經(jīng)過(guò)呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對(duì)實(shí)驗(yàn)室感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明緣由的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中分散引起的。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)坐著，在酒精燈半徑20厘米范圍內(nèi)操作，堅(jiān)持安靜、有序，盡量少說(shuō)話、少走動(dòng)，以免感染病原菌。奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)，每人一臺(tái)留意：只能橫放，不得豎放。奧林巴斯 CX21型 生物顯微鏡運(yùn)用須知顯微鏡是精細(xì)光學(xué)儀器，請(qǐng)不要讓其遭到撞擊，請(qǐng)小心操作

9、。在搬運(yùn)顯微鏡時(shí)，請(qǐng)按右圖所示，以雙手抓住鏡臂孔的兩側(cè)，小心搬運(yùn)。假設(shè)拿住載物臺(tái)和鏡筒等部位搬運(yùn)的話，有能夠會(huì)呵斥損壞。顯微鏡各部件稱(chēng)號(hào)開(kāi)關(guān)與調(diào)整光強(qiáng)開(kāi)或關(guān)之前，必需將亮度調(diào)整旋鈕按箭頭相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)到最小位置，以免損壞燈泡。電源開(kāi)關(guān)撥到側(cè)為開(kāi)，撥到側(cè)為封鎖。按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)亮度調(diào)整旋鈕變亮，相反方向轉(zhuǎn)動(dòng)那么變暗。放置標(biāo)本按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕降下載物臺(tái)。按箭頭方向拉開(kāi)載物臺(tái)標(biāo)本夾 ，自前向后將標(biāo)本片放入平臺(tái)，標(biāo)本夾 悄然放回原位。轉(zhuǎn)動(dòng)上側(cè)垂直挪動(dòng)桿和下側(cè)程度挪動(dòng)桿，挪動(dòng)標(biāo)本至光路中間。載物臺(tái)位置刻度載物臺(tái)上的刻度方便確定標(biāo)本位置，標(biāo)本挪動(dòng)后可以快速回到原位。程度刻度的標(biāo)識(shí)位置以機(jī)械載物臺(tái)的位置來(lái)

10、讀取。垂直刻度的標(biāo)識(shí)線以的位置來(lái)讀取。聚焦從顯微鏡的側(cè)面察看，按箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕，使物鏡盡能夠接近標(biāo)本。一邊看目鏡，一邊漸漸逆箭頭方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)旋鈕， 使載物臺(tái)下降?？吹綐?biāo)本以后，用微調(diào)旋鈕來(lái)正確對(duì)焦。10倍物鏡的任務(wù)間隔WD，從物鏡到標(biāo)本的 間隔為10.5mm。 油鏡的WD為0.13mm。調(diào)整瞳距調(diào)整瞳距是調(diào)整雙目間的間隔，使兩眼同時(shí)看到一個(gè)顯微鏡像，能防止察看時(shí)的疲勞。方法：一邊看目鏡，一邊挪動(dòng)雙目鏡筒，讓左右的視野一致。標(biāo)識(shí)的位置表示瞳距。請(qǐng)記住本人的瞳距值，以便下次察看時(shí)調(diào)整。調(diào)整屈光度數(shù)調(diào)整察看者左右視力。以右眼看右側(cè)的目鏡，旋轉(zhuǎn)粗微調(diào)旋轉(zhuǎn)盤(pán)，對(duì)好焦距。以左眼看左側(cè)的目鏡，旋轉(zhuǎn)屈光

11、度調(diào)整環(huán)，對(duì)好焦距。調(diào)整聚光鏡位置和孔徑光闌用聚光鏡上下挪動(dòng)旋鈕，將聚光鏡轉(zhuǎn)到最上面。在孔徑光闌環(huán)上刻有物鏡倍率10倍，100倍等，察看時(shí)將與運(yùn)用物鏡相對(duì)應(yīng)的倍率放到正面。轉(zhuǎn)換物鏡旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤(pán)，將希望運(yùn)用的物鏡10倍、100倍轉(zhuǎn)到標(biāo)本的上方。100倍浸油物鏡運(yùn)用方法油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的察看部位上加一滴浸油。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤(pán)，使油鏡進(jìn)入光路，用微調(diào)旋鈕對(duì)好焦距。假設(shè)浸油內(nèi)有氣泡，會(huì)影響察看，可略微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤(pán)，使油鏡來(lái)回經(jīng)過(guò)12次浸油，排除油內(nèi)氣泡。顯微鏡油鏡的運(yùn)用P1310物鏡標(biāo)本位置滴加香柏油100油鏡浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸任務(wù)間隔0.13mm細(xì)調(diào)理調(diào)焦，察看物像記錄結(jié)果封鎖電源。

12、油鏡處置：擦鏡紙拭去香柏油 擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚7:3混合液擦拭擦鏡紙擦拭油鏡。顯微鏡罩上防塵罩 橫放在實(shí)驗(yàn)柜內(nèi)。(順德校區(qū)實(shí)驗(yàn)臺(tái)兩側(cè)的電源插座，只能插入一個(gè)插頭，請(qǐng)選擇離他最近的電源插座。校本部實(shí)驗(yàn)臺(tái)中間，三個(gè)位的插座，中間那位插孔沒(méi)有電，不能運(yùn)用，只能用兩側(cè)的插座。 細(xì)菌的顯微鏡檢查法顯微鏡：光學(xué)顯微鏡目鏡：10倍物鏡：油鏡頭90或100倍放大倍數(shù)：1090或100900或1000鏡油：香柏油或石蠟油香柏油折射率n1.515，玻片折射率n1.52，石蠟油n1.46，空氣n1.00。油鏡運(yùn)用終了必需擦拭油鏡頭。油透鏡光線載玻片思索題在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,怎樣才干防止雜菌的污染?空氣的衛(wèi)生規(guī)范規(guī)定如何?他的實(shí)驗(yàn)結(jié)果闡明了什么問(wèn)題?怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分別和鑒定金黃色葡萄球菌?菌落特征主要描畫(huà)哪幾方面問(wèn)題？任何挑選單菌落？ 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn)