DB37T5962006醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)

1、ICS13.030.99DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/5962006醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)Dischargestandardofmedicalpollutants2006-01-10實(shí)施2006-01-04發(fā)布山東省環(huán)境保護(hù)局君希山東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局友用DB37/5962006DB37/5962006 # I本標(biāo)準(zhǔn)的全部技術(shù)內(nèi)容為強(qiáng)制性。為了貫徹中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國水污染防治法中華人民共和國海洋環(huán)境保護(hù)法、中華人民共和國人氣污染防治法、中華人民共和國固體廢物污染環(huán)境防治法、中華人民共和國傳染病防治法以及醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例，促進(jìn)醫(yī)療廢物處置系統(tǒng)的建設(shè)和管理，加強(qiáng)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)廢物的

2、排放控制，保障人民身體健康，維護(hù)良好的生態(tài)壞境。特制定本地方標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄E、附錄C、附錄D為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)聶托濟(jì)南市環(huán)境工程設(shè)計(jì)院、濟(jì)南市環(huán)保局直屬分局起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張成志、高旭光、遲智香、張建國、周蓬、徐書浩本標(biāo)準(zhǔn)于2006年1月4口首次發(fā)布。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)境保護(hù)局負(fù)責(zé)解釋。DB37/5962006DB37/5962006 醫(yī)療污染物排放標(biāo)準(zhǔn)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了山東省醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的污染物限值。本標(biāo)準(zhǔn)適用山東省醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療污水排放和醫(yī)療廢物處置（控制）的管理，也適用r獸醫(yī)院的污水和醫(yī)療廢物的排放管理

3、。2規(guī)范性引用文件卜列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注口期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB3097海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB3838地表水環(huán)境質(zhì)昴標(biāo)準(zhǔn)GB5085.3危險(xiǎn)廢物鑒別標(biāo)準(zhǔn)浸出毒性鑒別GB15981消毒與滅菌效呆的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)GB15982醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB18466醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)GB18484危險(xiǎn)廢物焚燒污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB18598危險(xiǎn)廢物填埋污染控制標(biāo)準(zhǔn)GB18918城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)G

4、B19218醫(yī)療廢物焚燒爐技術(shù)要求（試行）町/T91地表水和污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）（環(huán)發(fā)20031206號(hào)）3術(shù)語及定義卜列術(shù)語及定義適用J：本標(biāo)準(zhǔn)。3.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)從事與醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動(dòng)的，由各級(jí)衛(wèi)生行政主管部門負(fù)貴管理或監(jiān)管的單位。3.2醫(yī)療污水醫(yī)療機(jī)構(gòu)門診、病房、手術(shù)室、各類檢驗(yàn)室、病理解剖室、放射室、洗衣房、人平間等處排出的診療、生活及糞便污水。當(dāng)醫(yī)療機(jī)構(gòu)其他污水與上述污水混合排出時(shí)一律視為醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水。3.3醫(yī)療廢物醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)在醫(yī)療、預(yù)防、保健以及其他相關(guān)活動(dòng)中產(chǎn)生的具有直接或者間接感染性、毒性以及其他危害性的廢物。具體分類名錄依照國家危

5、險(xiǎn)廢物名錄和國務(wù)院衛(wèi)生行政主管部門和環(huán)境保護(hù)行政主管部門共同制定的醫(yī)療廢物分類目錄執(zhí)行。3.4醫(yī)療廢物集中處置中心具有壞境保護(hù)行政主管部門頒發(fā)的醫(yī)療廢物處置資格的區(qū)域性醫(yī)療廢物集中處置單位。4技術(shù)內(nèi)容4.1水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)4.1.1處理要求4.1.1.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將傳染病房的污水與其他污水分別收集。傳染病醫(yī)院（包括設(shè)傳染病房的綜合性醫(yī)院）應(yīng)設(shè)專用化糞池，進(jìn)行預(yù)消毒處理。4.1.1.2醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的各種特殊排水，如含重金屬廢水、含油廢水、洗印廢水等應(yīng)單獨(dú)收集，分別采取不同的預(yù)處理措池后排入醫(yī)療污水處理系統(tǒng)。4.1.1.3同位素治療和診斷產(chǎn)生的放射性廢水，必須單獨(dú)收集處理。4.1.1.4醫(yī)療污

6、水不得排入GB3838中的I、II類水域和1【1類水域的集中式生活飲用水地表水源地二級(jí)保護(hù)區(qū)、游泳區(qū)以及GB3097中的一、二類海域。4.1.2排放要求4.1.2.1根據(jù)水污染物的來源及性質(zhì)，將水污染物控制項(xiàng)目分為必測(cè)項(xiàng)目和選測(cè)項(xiàng)目兩類。必測(cè)項(xiàng)目為環(huán)境保護(hù)行政主管部門為了保護(hù)水壞境，在口常監(jiān)測(cè)過程中必須監(jiān)測(cè)的水污染物控制項(xiàng)目，主要包括影響水環(huán)境和污水處理系統(tǒng)一般處理工藝可以去除的基本控制項(xiàng)目及部分一類污染物，共15項(xiàng)。選測(cè)項(xiàng)目為地方環(huán)境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)蒯t(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的污染狀況及水壞境保護(hù)狀況對(duì)污水排放可以選擇監(jiān)測(cè)的控制項(xiàng)目，共計(jì)4項(xiàng)。4.1.2.2必測(cè)項(xiàng)目必須執(zhí)行。選測(cè)項(xiàng)目由縣級(jí)及其以上

7、人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門根據(jù)當(dāng)?shù)蒯t(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的具體情況和水環(huán)境質(zhì)量要求選擇控制。4.1.3標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)根據(jù)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)排入地表水域壞境功能和保護(hù)目標(biāo),將必測(cè)項(xiàng)目的常規(guī)污染物標(biāo)準(zhǔn)值分為一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)、四級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。一類重金屬污染物和選測(cè)項(xiàng)目不分級(jí)。4.1.3.1排入GB3838III類水域中除集中式生活飲用水地表水源地二級(jí)保護(hù)區(qū)及游泳區(qū)Z外的區(qū)域，執(zhí)行一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.1.3.2排入GB3838IV、V類水域或排入GB3097中三類海域以及排入未設(shè)置城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn)污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.1.3.3排入設(shè)置城鎮(zhèn)污水處理廠的城鎮(zhèn)污水排放系統(tǒng)的醫(yī)療污水，執(zhí)行三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.

8、1.3.4床位小20床以及不設(shè)床位的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)產(chǎn)生的醫(yī)療污水，應(yīng)當(dāng)設(shè)消毒處理設(shè)施，執(zhí)行四級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.1.3.5傳染病爆發(fā)期間，應(yīng)當(dāng)根據(jù)壞境保護(hù)行政主管部門和醫(yī)療衛(wèi)生行政主管部門的要求執(zhí)行應(yīng)急處置措施要求。4.1.4標(biāo)準(zhǔn)值4.1.4.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)水污染物排放，必測(cè)項(xiàng)目執(zhí)行表1和表2的規(guī)定。4.1.4.2選測(cè)項(xiàng)目按表3的規(guī)定執(zhí)行。表1一類污染物最高允許排放濃度（日均值）單位為亳克每升序號(hào)污染物最高允許排放濃度1總汞0.052總伽0.5表2基本控制項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）單位為亳克毎升序號(hào)基本控制項(xiàng)13一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)四級(jí)標(biāo)準(zhǔn)1糞大腸菌群數(shù)（MPN/L）5010050050002腸

9、道致病菌不得檢出不得檢出3腸道病毒不得檢出不得檢出4結(jié)核桿菌不得檢出不得檢出5化學(xué)需氧雖（CODc.）40601206生化需氧雖（bod5）1020307懸浮物（SS）a10(5)20608動(dòng)植物油1.05159揮發(fā)酚0.10.50.510氨氮b5(8)15(20)25(30)11磷酸鹽（以P計(jì)）0.50.51.012余氯0.50.5813PH69a括號(hào)內(nèi)為用丁沖洗地面及洗車用水水質(zhì)指標(biāo)。b括號(hào)外數(shù)值為水溫12C時(shí)的控制指標(biāo)，括號(hào)內(nèi)數(shù)值為水溫W12C時(shí)的控制指標(biāo)。c消毒接觸池接觸時(shí)間Mlh,接觸池出口總余氯3mg/llOmg/1。表3選測(cè)項(xiàng)目最高允許排放濃度（日均值）單位為亳克每升序號(hào)污染物最

10、高允許排放濃度1氛化物102氯化物2503甲醛類1.04總有機(jī)碳仃0C）304.1.4,3污水處理過程中產(chǎn)生的廢氣按照GB18466執(zhí)行4.1.5取樣與監(jiān)測(cè)4.1.5.1水質(zhì)取樣在污水處理站處理工藝末端排放II。其中一類污染物的取樣按照HJ/T91執(zhí)行。4.1.5.2檢測(cè)取樣頻率為至少每2h次，取24h混合樣，以口均值計(jì)。4.1.5.3監(jiān)測(cè)分析方法按表4或國家環(huán)境保護(hù)總局認(rèn)定的替代方法.等效方法執(zhí)行。表4水污染物監(jiān)測(cè)分析方法序號(hào)控制項(xiàng)目測(cè)定方法測(cè)定下限（mg/1）方法來源1總汞冷腹子吸收分光光度法0.0001GB7168雙硫腺分光光度法0.002GB71692總種二乙基一硫代氨基甲酸銀分光光度

11、法0.007GB74853糞大腸菌祥數(shù)多管發(fā)酵法附錄A4沙門氏菌附錄B5志賀氏菌附錄C6結(jié)核桿菌附錄D7化學(xué)需氧雖（C0%）重鉆酸鹽法30GB119148BODS稀釋與接種法2GB7188微生物傳感器快速測(cè)定法1HJ/T869懸浮物（SS）重雖法GB1190110動(dòng)植物汕紅外分光光度法0.1GB/T1648811揮發(fā)酚4-氨基安替比林分光光度法0.002GB749012總氮（以N計(jì)）堿性過硫酸鉀-消解紫外分光光度法0.05GB1189413磷酸鹽（以P計(jì)）創(chuàng)酸錢分光光度法0.01GB1189314pH玻璃電極法GB692015F離子選擇電極法0.05GB7484茜索磺酸鉗目視比色法GB7482

12、氟試劑分光光度法GB748316氯化物硝酸銀滴定法GB1189617甲醛乙酰丙刖分光光度法0.05GB1319718TOC非紅外吸收法0.5GB1318319余氯NN-二乙基-1，4-苯二胺滴定法GB11897N,N-二乙基-1.4-苯二胺分光光度法GB118984.2醫(yī)療廢物控制標(biāo)準(zhǔn)4.2.1醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)不得將醫(yī)療廢物隨意棄置。4.2.2醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)將醫(yī)療廢物與生活垃圾分開收集；醫(yī)療廢物應(yīng)進(jìn)行無害化集中處置，生活垃圾按城市生活垃圾處理原則進(jìn)行處理。4.2.3醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)醫(yī)療廢物進(jìn)行分類，并采用醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中要求的容器、轉(zhuǎn)運(yùn)器械進(jìn)行包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)，包裝、轉(zhuǎn)運(yùn)期間應(yīng)注意防護(hù)

13、措施。4.2.4醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)置醫(yī)療廢物的暫存場所。具有100張床位以上的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)建立專門的醫(yī)療廢物暫存庫房，暫存庫房必須滿足醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中關(guān)J：暫存庫房的設(shè)計(jì)要求；具有100張床位以卜的醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)及門診、部、所應(yīng)設(shè)立專門的醫(yī)療廢物暫存場所，并滿足醫(yī)療廢物集中處置技術(shù)規(guī)范（試行）中暫存場所的要求。4.2.5醫(yī)療廢物可以根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r采用表5的處置方法進(jìn)行處置。表5醫(yī)療廢物處置方法序號(hào)醫(yī)療廢物種類醫(yī)療廢物處置方法備注1橋理性廢物（包括人體組織、死胎、器官、肢體和動(dòng)物F體、血液、體液）火化或焚燒按國家有關(guān)法律法規(guī)處代2感染性廢物（包括傳染病人手術(shù)或尸解后的廢棄物，如污染

14、的材料和儀器；來|傳染病房的廢棄物，如排泄物、手術(shù)或感染傷口的敷料.嚴(yán)重污染的衣物：傳染病人血透析中產(chǎn)生的廢棄物：實(shí)驗(yàn)室感染的動(dòng)物：傳染病人或動(dòng)物接觸過的任何其他設(shè)備和材料；實(shí)驗(yàn)室所用的菌落及病凍株培養(yǎng)基和保菌液；使用過的一次性注射器、輸液器.輸血器等廢棄物）焚燒或消毒3鋒利物（銳器）（包括針頭、手術(shù)丿J、解剖刀、針管、手術(shù)鋸、玻璃制品等易對(duì)人體造成損傷的廢物焚燒4藥物性廢物（包括過期、被淘汰、壓碎或污染的藥品、疫苗、血涓）焚燒5遺傳犧毒性廢棄物（包括C明確的抑制細(xì)胞的藥物，化學(xué)或放射治療病人的嘔吐物、尿或糞便。如苯、環(huán)砲霉索、環(huán)磷酰胺等）焚燒對(duì)環(huán)磷醸胺、異環(huán)磷醸胺、硫酸長春新堿等可采用化學(xué)降

15、解法或封存或使之|動(dòng)失效6化學(xué)性廢棄物（包括在診斷、試驗(yàn)、清潔、管理、消毒過程中產(chǎn)生的，具有毒性、腐蝕性、易燃性、反應(yīng)性或遺傳毒性的物質(zhì)。如甲醛、攝影用劑、有機(jī)化合物等）焚燒或化學(xué)處理對(duì)丁一般的化學(xué)廢棄物，如糖、氨基酸和特定的鹽類可按城市生活垃圾進(jìn)行處芒或扌豐入下水道。7低放射性廢物（包括診斷或治療用的棉簽、注射器、輸液器等焚燒8污水處理過程中產(chǎn)生的污泥焚燒4.2.6醫(yī)療廢物進(jìn)行無害化處置的技術(shù)要求4.2.6.1采用高溫?zé)崽幚砑夹g(shù)要求按GB19218執(zhí)行。4.2.&2咼溫蒸汽滅菌按GB15982執(zhí)行4.2.&3其他處理技術(shù)采用微波處理法、化學(xué)消毒法、電熱去活技術(shù)（EDT）等其它經(jīng)環(huán)境保護(hù)行政主

16、管部門及衛(wèi)生行政主管部門認(rèn)可的醫(yī)療廢物處理技術(shù)時(shí)，污染物的排放應(yīng)當(dāng)達(dá)到環(huán)境保護(hù)行政主管部門及衛(wèi)生行政主管部門的要求。4.2.7無害化處置后的醫(yī)療廢物應(yīng)達(dá)到的排放標(biāo)準(zhǔn)4.2.7.1采用焚燒法處置醫(yī)療廢物，其焚燒爐排放氣體的排放限值不應(yīng)高J-GB18484規(guī)定的限值。檢測(cè)方法按GB18484執(zhí)行。4.2.7.2采用焚燒法處置醫(yī)療廢物，其焚燒殘留物中的含菌量應(yīng)為零。4.2.7.3醫(yī)療廢物焚燒過程中除塵設(shè)備收集到的飛灰必須密閉收集貯存，并按照GB18598固化填埋處理；焚燒產(chǎn)生的爐渣可以送生活垃圾填埋場填埋處理；其他煙氣凈化裝置產(chǎn)生的固體廢物按GB5085.3進(jìn)行鑒別，并確定是否屬危險(xiǎn)廢物，如屬危險(xiǎn)廢

17、物，按危險(xiǎn)廢物處置，否則可以送生活垃圾填埋場填埋處理，無法進(jìn)行鑒別實(shí)驗(yàn)的，按危險(xiǎn)廢物處置。4.2.7.4采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物產(chǎn)生的固體廢物將其粉碎后按城市生活垃圾進(jìn)行處置。4.2.7.5采用高溫蒸汽滅菌法處置醫(yī)療廢物，生物指示劑應(yīng)選擇耐熱的嗜熱性脂肪桿菌芽m（Bacillusstearothermophilusspores）,檢測(cè)方法按GB15981執(zhí)行。4.2.7.6每批醫(yī)療廢物進(jìn)行高溫蒸汽滅菌處置需用化學(xué)檢測(cè)方法對(duì)滅菌效呆進(jìn)行檢測(cè)，可采用化學(xué)指示管（卡）檢測(cè)方法或化學(xué)指示膠帶檢測(cè)法，檢測(cè)需將化學(xué)指示管（卡）放入滅菌室內(nèi)滅菌效果最難保證的空間位置，或?qū)⒒瘜W(xué)指示膠帶粘貼J：每一待滅菌

18、物品包外，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，觀察所放置的指示管（卡）或膠帶的性狀或顏色，如果均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格：若未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。5標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與監(jiān)督本標(biāo)準(zhǔn)由縣級(jí)以上人民政府環(huán)境保護(hù)行政主管部門負(fù)責(zé)監(jiān)替實(shí)施。DB37/5962006DB37/5962006 附錄A（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中糞大腸菌群的檢驗(yàn)方法A.1儀器和設(shè)備A.1.1高壓蒸汽滅菌器A.1.2干燥滅菌箱A.1.3培養(yǎng)箱：37CA.1.4恒溫水浴箱A.1.5電爐A.1.6天平A.1.7滅菌平皿A.1.8滅菌刻度吸管A.1.9酒精燈A.2培養(yǎng)基和試劑A.2.1乳糖膽鹽培養(yǎng)液A.2.1.1成分蛋白豚20g豬膽鹽（或牛、羊膽

19、鹽）5g乳糖5g0.4%漠甲酚紫水溶液2.5mL蒸飾水lOOOmLA.2.1.2制法將蛋白月東、豬膽鹽及乳糖溶解J-1000mL蒸飾水中，調(diào)整pH到7.4,加入指示劑，充分混勻，分裝于內(nèi)有倒管的試管中。115C卜滅菌20min。貯存于冷喑處備用。A.2.2三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液A.2.2.1成分蛋白豚60g豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）15g乳糖15g0.4%漠甲酚紫水溶液7.5mL蒸館水lOOOmLA.2.2.2制法制法同附錄A.2.1.2oA.2.3伊紅美蘭培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）A.2.3.1成分蛋白豚l(xiāng)Og乳糖lOg磷酸氫二鉀2g瓊脂20g2%伊紅水溶液20mL0.5%美藍(lán)水溶液13mL蒸館水A

20、.2.3.2制法lOOOmL將瓊脂加到900mL蒸飴水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀和蛋白腺，混勻使溶解，再加入蒸餉水補(bǔ)足至1000mL，調(diào)整pH至7.27.4。趁熱用脫脂棉和砂布過濾，再加入乳糖，混勻，定鼠分裝丁燒瓶內(nèi)，115C滅菌20mino作為儲(chǔ)備培養(yǎng)基貯存于冷喑處備用。臨用時(shí)，加熱融化儲(chǔ)備培養(yǎng)基，待冷至60C左右，根據(jù)燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基的容量，加入一定鼠的已滅菌的2%伊紅水溶液和0.5%美藍(lán)水溶液，充分搖勻（防止產(chǎn)生氣泡）。傾注平皿備用。A.2.4乳糖蛋白豚培養(yǎng)液A.2.4.1成分蛋白腺牛肉膏乳糖氯化鈉1.6%漠甲酚紫乙醇溶液蒸館水A.2.4.2制法10g3g5g5gImLlOOOmL將蛋

21、白腺、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解J-1000mL蒸館水中，調(diào)整pH至07.27.4,加入1.6%澳甲酚紫乙醇溶液ImL,充分混勻，分裝J：內(nèi)有倒管的試管中。115C卜滅菌20min。貯存冷喑處備用。A.2.5革蘭氏染色液A.2.5.1結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫95%乙醇溶液1%草酸錢水溶液lg20mLlOOOmL將結(jié)晶紫溶乙醇中，然后與草酸釵水溶液混合。A.2.5.2革蘭氏碘液碘碘化鉀蒸館冰lg2g300mL將碘與碘化鉀混合，加入蒸怖水少許，充分搖勻，待完全溶解，再加入蒸餡水至300mL。A.2.5.3脫色液95%乙醇A.2.5.4沙黃復(fù)染液沙黃95%乙醇蒸館水lg2g90mL將沙黃溶J-95%乙醇

22、中，然后用蒸餉水稀釋。A.2.6染色法染色的基本步驟為：a）涂片：在載玻片上滴加一滴生理鹽水，用滅菌的接種環(huán)取菌落少許，與生理鹽水混勻，涂布成薄膜；b）干燥：在室溫中使自然干燥；c）固定：將涂片迅速通過火焰23次，以載玻片反面接觸皮膚，熱而不燙為度；d）染色：滴加結(jié)晶紫染色液，染色lmin,水洗：e）媒染：滴加革蘭氏碘液，作用lmin,水洗：f）脫色：滴加95%乙醇脫色，約30s,水洗；g）復(fù)染：滴加復(fù)染液，復(fù)染lmin,水洗。革蘭氏陽性菌染色后呈紫色，革蘭氏陰性菌染色后呈紅色。亦可用1：10稀釋的石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染劑，復(fù)染時(shí)間為10soA.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖A.lo圖A.1污水中糞大

23、腸菌群檢驗(yàn)程序A.4操作步驟A.4.1樣品準(zhǔn)備污水樣品應(yīng)至少取200mL,使用前應(yīng)充分混勻。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。根據(jù)預(yù)計(jì)的污水樣品中糞人腸菌群數(shù)確定污水樣品接種糞人腸菌群數(shù)最相對(duì)較少的接種帚一般為10mL、ImL、0.ImL。糞大腸菌群數(shù)較多時(shí)接種量為ImL、0.ImL、0.OlmL或0.ImL、0.OlinL、0.OOlmL等。接種量少丁-lmL時(shí)，水樣應(yīng)制成稀釋樣品后供發(fā)酵試驗(yàn)使用。接種鼠為0.ImL、0.OlmL時(shí)，取稀釋比分別為1:10、1:100。其它接種量的稀釋比依此類推。1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取ImL水樣，注入到盛有

24、9mL滅菌水的試管中，混勻，制成1:10稀釋樣品。因此，取lmLl:10稀釋樣品，等丁取0.ImL污水樣品。其它稀釋比的稀釋樣品同法制作。DB37/5962006DB37/5962006A.4.2發(fā)酵試驗(yàn)將樣品接種J：裝有乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管（內(nèi)有小倒管）中，44C培養(yǎng)24h。樣品接種體積以及管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積根據(jù)以卜條件確定：取三個(gè)接種最、每個(gè)接種最的樣品分別接種5個(gè)試管內(nèi)，共需15個(gè)試管。試管內(nèi)乳糖膽鹽培養(yǎng)液的濃度與體積應(yīng)根據(jù)接種起確定。若接種駅為10mL,吸取10mL樣品接種裝有5mL三倍濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種屋為ImL時(shí)，吸取ImL樣品接種裝有10mL普通濃度乳

25、糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)；若接種殖少J：lmL時(shí)，吸取ImL稀釋樣品接種裝有10mL普通濃度乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管內(nèi)。A.4.3平板分離人腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)培養(yǎng)液變色、產(chǎn)氣時(shí)小倒管內(nèi)出現(xiàn)氣泡。經(jīng)24h培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸的試管內(nèi)培養(yǎng)液分別劃線接種J：EMB培養(yǎng)基上。置J：37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h24h。A.4.4鑒定挑選可疑糞人腸菌群菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢?？梢删溆校篴）深紫黑色，貝有金屬光澤的菌落；b）紫黑色，不帶或略帶金屑光澤的菌落；c）淡紫紅色，中心色較深的菌落。上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽抱桿菌，則挑取上述典型菌落13個(gè)接種盛有5mL乳糖蛋白丿陳培養(yǎng)液倒管和倒管的試管內(nèi)，置J：4

26、4C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。產(chǎn)酸產(chǎn)氣試管為糞人腸菌群陽性管。A.5計(jì)數(shù)根據(jù)證實(shí)有糞大腸菌群存在的陽性管數(shù)，查表A.1可得lOOmL污水中糞大腸菌群值。由丁表A.1是按一定的三個(gè)10倍濃度差接種量設(shè)計(jì)的（接種量為10mL、ImL和0.ImL）,當(dāng)采用其他三個(gè)10倍濃度差接種量時(shí)，需要修正表內(nèi)MPN值，具體方法如卜：表內(nèi)所列污水最人接種帛:増加10倍時(shí)表內(nèi)MPN值相應(yīng)降低10倍；污水最人接種最減少10倍時(shí)表內(nèi)MPN值相應(yīng)増加10倍。如污水接種量改為ImL、0.ImL和0.OlmL時(shí)，表A內(nèi)MPN值相應(yīng)増加10倍。其它的三個(gè)10倍濃度差接種量的MPN值相應(yīng)類推。由丁表A.lrtMPN值的單位為每lOOm

27、L污水樣品中MPN值，而污水以1L為報(bào)告單位，因此需將查表A.1得到的MPN值乘上10,換算成1L污水樣品中的MPN值。表A.1污水中糞大腸菌群最可能數(shù)（MPN）檢索表（污水樣品接種量為5份10ml水樣，5份lml水樣和O.lml水樣）陽性管數(shù)陽性管數(shù)陽性管數(shù)每接種接種接種100ml接種接種接種lOOinl接種接種接種100ml100m10mlO.lnil水樣中100m10mlO.lnil水樣中100m10mlO.lml水樣中1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN0000200540013001220174011700242029402210035203124032500

28、472041440430005920516405360102210741017011421194112101252121241226DB37/5962006DB37/5962006 # 表A.1（續(xù)）陽性管數(shù)每陽性管數(shù)行.陽性管數(shù)毎接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100m10ml0.11111水樣中100m10ml0.11111水樣中100m10ml0.1ml水樣中1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN013721314413310149214174143601511215194154202042209420220216221124212

29、602272221442232023922317423380241122419424440251322522425500306230124302703172311443133032923217432390331123320433450341323422434520351523525435590408240154403404192411744140042112422044247043132432344354044152442544462045172452844569050925017450410511125120451480521325223452560531525326453640541725

30、429454720551925532455811002300850023101430111501311026302135024310383031650358104103042050476105123052350595110431011510331116311145114611283121751263113103132051384DB37/5962006DB37/5962006表A.1（續(xù)）陽性管數(shù)每陽性管數(shù)4陽性管數(shù)毎接種接種接種100ml接種接種接種100ml接種接種接種100ml100m10mlO.lnil水樣中100m10mlO.lnil水樣中100m10ml0.1ml水樣中1水樣水樣水

31、樣MPN1水樣水樣水樣MPN1水樣水樣水樣MPN114123142351411011514315275151301206320145204912183211752170122103222052294123123232452312012415324275241501251732531525180130833017530791311033121531110132123322453214013315333285331801341733432534210135193353653525014011340215401301411334124541170142153422854222014317343325

32、432S01441934436544350145223454054543015013350255502401511535129551350152173523255254015319353375539201542235441554160015524355455551600DB37/5962006DB37/5962006 附錄B（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中沙門氏菌的檢驗(yàn)B.1儀器和設(shè)備B.1.1高壓蒸汽滅菌器B.1.2干燥滅菌箱B.1.3培養(yǎng)箱B.1.4恒溫水浴箱B.1.5電爐B.1.6天平B.1.7滅菌平皿B.1.8滅菌刻度吸管B.1.9酒精燈B.2培養(yǎng)基和試劑B.2.1亞硒酸鹽增菌液（SF增菌液）

33、B.2.1.1成分幀蛋白腺（或多價(jià)豚）10g磷酸氫二鈉（Na2HP03）16g磷酸二氫鈉（NaH2P03）2.5g乳糖4g亞硒酸氫鈉4g蒸飾水lOOOmL2.1.2制法除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放入蒸飴水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調(diào)整pH到7.07.1,分裝于三角燒杯內(nèi)。12VCT滅菌15min備用。B.2.2二倍濃度亞硒酸鹽增菌液（二倍濃度SF增菌液）2.2.1成分除蒸餡水改為500mL夕卜，其它成分同附錄B.2.I.1。2.2.2制法制法同附錄B.2.1.2o2.3SS培養(yǎng)基B.2.3.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基B.2.3.1.1成分牛肉膏5g示腺5g三號(hào)膽鹽3.5g瓊脂17g蒸館

34、冰lOOOmLB.2.3.1.2制法將牛肉育、示關(guān)和膽鹽溶解J-lOOmL蒸餡水中。將瓊脂加到600mL蒸館水中，煮沸使其溶解。再將二者混合，121C卜滅15min,保存?zhèn)溆谩.2.3.2完成培養(yǎng)基B.2.3.2.1成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基lOOOmL乳糖10g檸檬酸鈉8.5g硫代硫酸鈉8.5g10$檸檬酸鐵溶液lOmL1%中性紅溶液2.5mL0.1%煌綠溶液0.33mLB.2.3.2.2制法加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入除中性紅和煌綠溶液以外的各成分，允分混合均勻，調(diào)整pH到7.0,加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)口使用，或保存J：冰箱內(nèi)J18h內(nèi)使用?；途G溶液配好后應(yīng)在10大以內(nèi)使

35、用。B.2.4亞硫酸錘瓊脂培養(yǎng)基（BS培養(yǎng)基）B.2.4.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基B.2.4.1.1成分蛋白腺10g牛肉膏5g氯化鈉5g瓊脂20g蒸館水lOOOmLB.2.4.1.2制法加熱溶解各成分,按每份100mL的量分裝f-250mL三角瓶中,1219卜滅菌20min備用。B.2.4.2亞硫酸祕(mì)貯備液B.2.4.2.1成分檸檬酸蝕鏤2g亞硫酸鈉20g磷酸氯二鈉lOg葡萄糖lOg蒸館水200mLB.2.4.2.2制法將檸檬酸蝕錢溶解J-50mL沸水中，同時(shí)將壓硫酸鈉溶解J-lOOmL沸水中，混合兩液并煮沸3min趁熱加入磷酸氯二鈉攪拌至溶解。冷卻后，加入剩余的50mL葡萄糖水溶液，貯存丁冰箱中。B.2

36、.4.3檸檬酸鐵煌綠貯備液B.2.4.3.1成分檸檬酸詵2g煌綠（1%水溶液）25mL蒸館水200mLB.2.4.3.2制法將上述成分溶解水中，盛j:已滅菌的玻璃瓶內(nèi)，貯存j:冰箱。B.2.4.4完成培養(yǎng)基B.2.4.4.1成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基lOOmL亞硫酸飩貯備液20mL檸檬酸詵煌綠貯備液4.5mLB.2.4.4.2制法加熱融化基礎(chǔ)培養(yǎng)某并冷卻至50C,同時(shí)分別加熱亞硫酸蝕貯備液和檸檬酸鐵煌綠貯備液至50C。在無菌操作卜將后者加入到前者去，充分混合，無菌傾入已滅菌的培養(yǎng)皿中。B.2.5三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI培養(yǎng)基）B.2.5.1成分蛋白腺20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖lg氯化鈉5g

37、硫酸亞鐵鏤0.2g硫代硫酸鈉0.2g瓊脂12g酚紅0.025g蒸飾水lOOOmLB.2.5.2制法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解J：蒸飾水中，調(diào)pH到7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，再加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121C卜滅菌15min放置高層斜面?zhèn)溆谩.2.6沙門氏菌診斷血清B.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖Blo圖B.1污水中沙門氏菌檢驗(yàn)程序B.4操作步驟B.4.1樣品處理和增菌取200mL污水，用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾。用100mL二倍濃度SF增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到滅菌三角燒瓶內(nèi)，充公搖勻，置于37C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)1224h。若樣品為

38、經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。B.4.2平板分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種J：SS培養(yǎng)基平板和BS培養(yǎng)基平板，置J：37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h48h。觀察各平板上生長的菌落形態(tài)。挑取在SS培養(yǎng)基平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑12mm的菌落；挑取在BS培養(yǎng)基平板上呈黑色的菌落或灰綠色的可疑腸道病原菌菌落。每個(gè)平板最少挑取5個(gè)菌落，接種J-TSI培養(yǎng)基中，置于37C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18h24hB.4.3鑒定B.4.3.1血清學(xué)試驗(yàn)在TSI培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫，有動(dòng)力者，先與沙門氏A-F群0多價(jià)血清作玻璃片凝集

39、，凡與多價(jià)0血清凝集者，再與0因子血清凝集，以確定所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應(yīng)證實(shí)兩和的H抗原，有Vi抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應(yīng)用Vi因子血清檢驗(yàn)。B.4.3.2生化試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、It露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產(chǎn)氣外，通過發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵卄露醇和麥芽糖（但豬沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫化氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的0型菌株無動(dòng)力外，通常均有動(dòng)力。如遇多價(jià)0血清不凝集而一般生化反應(yīng)符合上述情況時(shí)，可加做側(cè)金盞花醇

40、、水楊素和氛化鉀試驗(yàn),沙門氏菌均為陰性。5檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，報(bào)告一定體積的樣品中存在或不存在沙門氏菌。DB37/5962006DB37/5962006附錄c（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中志賀氏菌的檢驗(yàn)方法C.1儀器和設(shè)備C.1.1高壓蒸汽滅菌器C.1.2干燥滅菌箱C.1.3培養(yǎng)箱C.1.4恒溫水浴箱1.5電爐C.1.6天平C.1.7滅菌平皿C.1.8滅菌刻度吸管C.1.9酒精燈C.2培養(yǎng)基和培養(yǎng)液C.2.1革蘭氏陰性增菌液（GN增菌液）C.2.1.1成分幀蛋白腺（或多價(jià)腺）20g葡萄糖lg什露醇2g枸椽酸鈉5g去氧膽酸鈉0.5g磷酸氫二鉀16g磷酸二氫鉀2.5g氯化鈉5g蒸館水lOOOmLC

41、.2.1.2制法將以上各成分加入蒸飴水中溶化，調(diào)整pH至7.0,煮沸過濾，115C卜滅菌20mina貯存冷暗處備用。C.2.2二倍濃度革蘭氏陰性增菌液（二倍濃度GN增菌液）2.2.1成分除蒸餡水改為500mL夕卜，其它成分同附錄C2.1.1o2.2.2制法制法同附錄C.2.1.2。2.3SS培養(yǎng)基同附錄B.2.3。C.2.4伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）同附錄A.2.3。C.2.5三糖鐵瓊脂（TSI培養(yǎng)基）同附錄B.2.5。C.2.6志賀氏菌診斷血清DB37/5962006DB37/5962006 C.3檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)程序見圖C.1。圖C.1污水中志賀氏菌檢驗(yàn)程序C.4操作步驟C.4.1樣品

42、處理和增菌培養(yǎng)取200mL污水，用滅菌濾膜進(jìn)行抽濾。若樣品為經(jīng)過氯消毒的污水，應(yīng)在采樣后立即用5%硫代硫酸鈉溶液充分中和余氯。用100mL二倍濃度GN增菌液把濾膜上截留的雜質(zhì)洗脫到已滅菌的三角燒瓶內(nèi)，搖勻，置于37C恒溫培養(yǎng)箱，增菌培養(yǎng)68hC.4.2分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種SS培養(yǎng)基平板和EMB培養(yǎng)基平板，置J-37C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h挑取在SS培養(yǎng)基平板和EHB培養(yǎng)基平板上呈無色透明，直徑11.5mL的可疑腸道病原菌菌落。每個(gè)平板最少挑取5個(gè)菌落,接種J-TSI培養(yǎng)基,置于379培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824h。挑取在TSI中,葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動(dòng)力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜而乳糖不分解的菌株，

43、可做血清學(xué)和生化試驗(yàn)。C.4.3鑒定C.4.3.1血清學(xué)試驗(yàn)志賀氏菌屬分為四個(gè)群，先與多價(jià)血清作玻璃片凝集試驗(yàn)，如為陽性，再分別與A、B、C、D群血清凝集，并進(jìn)一步與分型血清做玻璃片凝集，最后確定其血清型。C.4.3.2生化試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行葡萄糖、It露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗(yàn)。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產(chǎn)氣（福氏忐賀氏菌6型有時(shí)產(chǎn)生少最氣體），一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內(nèi)氏雷賀氏菌對(duì)乳糖和蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，無動(dòng)力。対It鋸醇、麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生，則因菌株不同而異。如遇多價(jià)血清玻璃片凝集試驗(yàn)為陰性，而生化反應(yīng)符合上述情況時(shí)，可加做肌醇、水楊酸、V-P、椽酸鹽、亂化鉀等試驗(yàn)。志賀氏菌屬均為陰性反應(yīng)。5檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告根據(jù)檢齡結(jié)果，報(bào)告一定體積的樣品中存在或不存在，忐賀氏菌。DB37/5962006DB37/5962006 附錄D（規(guī)范性附錄）醫(yī)療污水中結(jié)核桿菌的檢驗(yàn)方法D.1儀器