微生物與食品安全性(2)

1、第三節(jié) 微生物與食品安全性第一部分 食品安全性的基本概念第二部分 細(xì)菌及病毒對食品安全性的影響第三部分 真菌對食品安全性的影響第四部分 食品安全性的控制整理ppt第一部分 食品安全性的基本概念 一、食品安全性的一般概念 世界衛(wèi)生組織1984： “生產(chǎn)、加工、儲存、分配和制作食品過程中確保食品安全可靠，有益健康并且適合人消費的種種必要條件和措施”。 1996年： “對食品按其原定用途進行制作和/或食用時不會使消費者受害的一種擔(dān)?！?對食品衛(wèi)生作的解釋： “為確保食品安全性和 適合性在食物鏈的所有階段必須采取的一切條 件和措施”。 整理ppt第一部分 食品安全性的基本概念 一、食品安全性的一般概念

2、關(guān)注的焦點發(fā)達(dá)國家在70年代： 主要關(guān)注食品添加劑對食品的安全問題80年代 殺蟲藥劑殘留和輻射食品的安全性問題90年代 生物工程技術(shù)生產(chǎn)食品的安全性問題。整理ppt第一部分 食品安全性的基本概念食品安全性的標(biāo)準(zhǔn)與生產(chǎn)力水平有關(guān)與人們對食品中有害物質(zhì)特性的認(rèn)識水平有關(guān)與有害物質(zhì)在食品中的實際含量有關(guān)與檢測水平緊密聯(lián)系 整理ppt二、食品安全性的影響因素整理ppt三、食品安全性的評價方法 常用指標(biāo)最大無作用劑量（簡稱：MNL） 人體每日容許攝入量 （Acceptable daily intake，簡稱ADI） 允許殘留量 整理ppt第二部分 細(xì)菌及病毒對食品 安全性的影響 一、細(xì)菌性食物中毒 人吃

3、了含有細(xì)菌毒素或致病細(xì)菌的食物而引起的中毒現(xiàn)象 感染型食物中毒毒素型食物中毒 整理ppt 1、沙門氏菌食物中毒病原菌的特性 革蘭氏陰性短桿菌 60經(jīng)15 分鐘以上處理死亡引起人類食物中毒的沙門氏菌主要有十幾個血清型，大都屬于鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌 整理ppt 1、沙門氏菌食物中毒中毒機理及癥狀 食物帶菌量在105109個g 菌體可在小腸和結(jié)腸內(nèi)繁殖 可產(chǎn)生腸道毒素和菌體內(nèi)毒素 潛伏期1224h主要表現(xiàn)急性胃腸炎癥狀病程通常37天，一般預(yù)后良好 整理ppt 1、沙門氏菌食物中毒 發(fā)病率 整理ppt 1、沙門氏菌食物中毒病菌的來源及中毒的預(yù)防 家畜、家禽和野生動物 常引起中毒的食品有雞蛋、牛

4、奶及家禽等 食品煮熟、燒透低溫存放食用前重新加熱 整理ppt2、金黃色葡萄球菌食物中毒病原菌的特性 對熱較敏感，通常6612分鐘可使菌體失活可產(chǎn)生多肽類腸毒素毒素1g可引起中毒毒素耐熱性高，10030min處理仍不能破壞全部毒素。 整理ppt 2、金黃色葡萄球菌食物中毒中毒機理及癥狀 中毒由攝食菌體產(chǎn)生的腸毒素引起 毒素刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)而引起中毒反應(yīng)中毒的潛伏期短病程通常12天，預(yù)后良好 整理ppt2、金黃色葡萄球菌食物中毒病菌的來源及中毒的預(yù)防 化膿性皮膚病、上呼吸道炎癥及有口腔疾患的病人 毒素刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)而引起中毒反應(yīng)中毒的潛伏期短病程通常12天，預(yù)后良好 整理ppt 3、副溶血性弧菌

5、食物中毒病原菌的特點 海洋性細(xì)菌，在含食鹽24的基質(zhì)中生長最佳該菌對酸敏感，在普通食醋內(nèi)1分鐘可致死不耐熱，80加熱1分鐘可殺滅 繁殖速度快，在適宜的條件下，其代時僅812分鐘有些菌株在生長時可產(chǎn)生腸毒素及一種耐熱性的溶血毒素整理ppt3、副溶血性弧菌食物中毒中毒的機理及癥狀 中毒與攝食量有關(guān)，人體攝食106個以上的致病性活菌幾小時后就可出現(xiàn)急性胃腸炎癥狀發(fā)病的潛伏期為幾小時至十幾小時預(yù)后良好 整理ppt3、副溶血性弧菌食物中毒病菌的來源及中毒的預(yù)防 主要存在于各種海產(chǎn)品中，經(jīng)廚具等介質(zhì)傳播人和動物被該菌感染后可成為病菌的傳布者應(yīng)盡可能不要食用生的或半熟的海產(chǎn)品夏季食用其它冷食品應(yīng)避免接觸海產(chǎn)

6、品食用涼拌海產(chǎn)品加食醋調(diào)味并殺菌 整理ppt 4、肉毒桿菌食物中毒病原菌的特點 專性厭氧的產(chǎn)芽孢細(xì)菌，耐熱性強 可產(chǎn)生毒性極強的肉毒素，1g毒素能使人致死毒素耐熱性低于芽孢基質(zhì)pH值4.5或以下不能生長 整理ppt 4、肉毒桿菌食物中毒中毒的機理及癥狀 屬于毒素型食物中毒 可作用于人體的神經(jīng)系統(tǒng) 潛伏期短的為幾小時，長的為數(shù)天早期癥狀為頭痛、頭暈；隨之出現(xiàn)視力模糊、眼瞼下垂、張目困難、復(fù)視等癥狀。繼續(xù)發(fā)展可出現(xiàn)呼吸麻痹、呼吸困難，最后引起呼吸和心臟功能的衰竭而死亡。中毒患者可始終保持神志清醒、知覺正常 整理ppt 4、肉毒桿菌食物中毒病菌的來源及中毒的預(yù)防 肉毒桿菌廣泛分布于自然界的土壤中 國

7、外報道，引起肉毒中毒的食品主要有魚類、肉類、奶制品、水果罐頭及蔬菜類等國內(nèi)引起肉毒中毒的食品主要是發(fā)酵類食品，密封越冬牛肉、自制的醬類，如腐乳、豆醬、面醬等整理ppt 4、肉毒桿菌食物中毒由胡椒引發(fā)，緬因州由土豆色拉引發(fā)， 新墨西哥州由酸洋蔥引發(fā)，伊利諾伊州由發(fā)酵魚、海產(chǎn)品引發(fā)， 亞特蘭大州由焙烤土豆引發(fā)， 德克薩斯州整理ppt 4、肉毒桿菌食物中毒 病菌的來源及中毒的預(yù)防 徹底殺滅食品中的肉毒桿菌，避免再度感染對于一些可疑食品在食用前要進行加熱處理 整理ppt 5、椰毒假單胞菌酵米面亞種食物中毒 曾用名：酵米面黃桿菌 引發(fā)中毒的食品 酵米面變質(zhì)銀耳中毒機理 病原菌可產(chǎn)生的米酵菌酸毒素 毒素耐

8、熱性強，一般的烹飪不能破壞毒性 整理ppt5、椰毒假單胞菌酵米面亞種食物中毒中毒癥狀及危害性 輕型：主要以胃腸癥狀為主中型：表現(xiàn)肝、腎功能一定程度的損害，但經(jīng)急救 治療一般不危及生命重型：常表現(xiàn)多種臟器同時明顯損傷的癥狀，出現(xiàn)昏迷、抽搐、休克等癥狀，死亡率極高 中毒平均死亡率大于40 整理ppt 二、細(xì)菌性傳染病細(xì)菌性痢疾 病源菌 志賀氏痢疾桿菌等四個群主要癥狀畏寒，發(fā)熱，腹痛，腹瀉 傳染途徑 經(jīng)口入胃，可在小腸上部的粘膜上生長繁殖并產(chǎn)毒 整理ppt 二、細(xì)菌性傳染病傷寒及副傷寒 病源菌 傷寒沙門氏菌、副傷寒沙門氏菌 主要癥狀發(fā)病初期有頭痛、發(fā)熱癥狀，然后可出現(xiàn)持續(xù)高熱，伴有食欲不振、腹脹、便

9、秘或腹瀉等癥狀 傳染途徑 病人或帶菌者的糞便 整理ppt 二、細(xì)菌性傳染病霍亂及副霍亂 病源菌 霍亂弧菌及副霍亂弧菌 主要癥狀發(fā)病突然，為劇烈無痛性嘔吐和腹瀉，使水和鹽過量排出，導(dǎo)致嚴(yán)重失水傳染途徑 病人、帶菌者 整理ppt 三、 病毒甲型肝炎 病源菌 甲型肝炎病毒，該病毒專性寄生于人體，但在其它生物體中可長時間保持傳染性 傳染途徑餐具、食品水體污染使某些動物成為傳染源。如毛蚶濾水速度達(dá)56L/h，牡蠣可達(dá)40L/h 整理ppt 三、 病毒瘋牛病 病源菌及其特點 致病因子是朊病毒（Prion），在134138下60min仍不能被全部失活；1.6的氯、2M的氫氧化鈉及醫(yī)用福爾馬林溶液等均不能使病

10、原因子失活 整理ppt 三、 病毒瘋牛病 病癥及特點臨床表現(xiàn)為腦組織的海綿體化、空泡化、星形膠質(zhì)細(xì)胞和微小膠質(zhì)細(xì)胞的形成以及致病型蛋白積累，無免疫反應(yīng) ，至今尚無辦法治療，一般患者均在發(fā)病后半年內(nèi)死亡 整理ppt第三部分 真菌對食品安全性的影響一、 真菌毒素 （一）真菌毒素的一般概念 真菌毒素的研究歷史對真菌毒素的全面研究起始于1960年主要的真菌毒素黃曲霉毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、伏馬菌素真菌毒素致病的特點 中毒與某些食物有聯(lián)系中毒發(fā)生有季部分性和地區(qū)性機體對真菌毒素不能產(chǎn)生抗體，也不能免疫 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF) 黃曲霉毒素的種類和結(jié)構(gòu) 基本結(jié)構(gòu)

11、是一個雙氫呋喃和一個氧雜萘鄰?fù)?香豆素)。目前已發(fā)現(xiàn)的黃曲霉毒素相關(guān)化合物有Bl、B2、G1、G2、B2a、G2a、M1、M2、Pl等二十種左右 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF)黃曲霉毒素的理化性質(zhì) 一般特性 幾乎是無色，B1的分子量為312，熔點為268269 熒光特點 黃曲霉毒素在 365毫微米波長紫外照射下可產(chǎn)生熒光，B族毒素顯藍(lán)紫色熒光；G族毒素顯黃綠色熒光 溶解特性 難溶于水、己烷，石油醚和乙醚；易溶于氯仿、甲醇、丙酮、苯、乙腈等多種有機溶劑 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF)黃曲霉毒素的理化性質(zhì) 穩(wěn)定性對熱穩(wěn)定，分解

12、溫度300 中性和酸性溶液中很穩(wěn)定，在強堿(pH9-10)溶液中可被迅速分解 5的次氯酸鈉溶液可瞬時破壞毒素有很高的儲藏穩(wěn)定性 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF)黃曲霉毒素的毒性 急性毒性（小鼠LD50）對動物毒害作用的靶器官主要是肝臟，可引起肝實質(zhì)細(xì)胞壞死，膽管上皮增生，肝出血等病變 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF)黃曲霉毒素的毒性 慢性毒性長期攝食含低劑量的AFT可導(dǎo)致慢性中毒 動物肝臟出現(xiàn)亞急性或慢性損傷，引起肝臟纖維細(xì)胞增生，肝硬化動物表現(xiàn)生長發(fā)育緩慢、體重減輕等生長障礙現(xiàn)象 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxi

13、n，簡稱AFT或AF)黃曲霉毒素的毒性 致癌性 其誘發(fā)動物肝癌的能力比二甲基亞硝胺大75倍 黃曲霉毒素可在動物體內(nèi)代謝，進行脫甲基、羥化和環(huán)氧化反應(yīng)，形成具有強致癌活性的物質(zhì) 可誘發(fā)所有實驗動物致癌 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF)黃曲霉毒素的產(chǎn)毒條件 產(chǎn)毒微生物 黃曲霉產(chǎn)毒菌株的比例在6094之間 寄生曲霉的產(chǎn)毒菌株可達(dá)100產(chǎn)毒的基質(zhì) 玉米、花生容易滋長黃曲霉和被黃曲霉毒素污染 有時可在田間被黃曲霉毒素污染 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF)黃曲霉毒素的產(chǎn)毒條件 產(chǎn)毒的環(huán)境條件適應(yīng)生長的溫度范圍一般為1242，最適溫度為33

14、適應(yīng)的最低生長水活度（aw）為0.78，最適aw為0.930.98產(chǎn)毒的適合溫度一般在2428之間隨著分生孢子的形成而開始產(chǎn)毒 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF) 食品和飼料中黃曲霉毒素的允許殘留標(biāo)準(zhǔn) 允許殘留量玉米、花生仁、花生油 20 g/kg玉米及花生仁制品（按原料折算） 20 g/kg大米、其它食用油 10 g/kg其它糧食、豆類、發(fā)酵食品 5 g/kg嬰兒代乳品 不得檢出 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF) 黃曲霉毒素的檢測 薄層層析法酶聯(lián)免疫法檢測靈敏度為5g/kg 整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱

15、AFT或AF)黃曲霉毒素的去除 去毒要求能保持被處理物的原有品質(zhì)屬性確保去毒徹底，無可逆性不引入新的有害物質(zhì)或在處理過程中產(chǎn)生新的有害物質(zhì)處理的成本必須遠(yuǎn)低于被處理物的價值方法簡捷，處理量大整理ppt（二）黃曲霉毒素(Aflatoxin，簡稱AFT或AF) 黃曲霉毒素的去除 常用去毒方法吸附法活性炭、天然白土等用于油脂水合硅鋁酸鈉鉀等用于飼料 堿煉法熏蒸法 整理ppt（三）伏馬菌素（Fumonisin）伏馬菌素的理化性質(zhì)分子結(jié)構(gòu)整理ppt（三）伏馬菌素（Fumonisin）伏馬菌素的理化性質(zhì)溶解特性可溶于水穩(wěn)定性不易被蒸煮、加熱所破壞含毒培養(yǎng)物煮沸30min，然后在60下經(jīng)24h干燥，培養(yǎng)物中

16、的FB1沒有降低現(xiàn)象含毒素5mg/kg的玉米制品在204下焙烤30min，毒素含量也沒有顯著變化將含毒玉米面包在232下焙烤20min，毒素含量可有顯著下降 整理ppt（三）伏馬菌素（Fumonisin）毒性 引起馬屬動物的腦白質(zhì)軟化病 引起實驗鼠發(fā)生原發(fā)性肝細(xì)胞癌 流行病學(xué)調(diào)查分析表明，某些食管癌高發(fā)病率地區(qū)玉米中伏馬菌素含量顯著高于低發(fā)病率地區(qū) 整理ppt（三）伏馬菌素（Fumonisin）伏馬菌素的產(chǎn)毒條件 可在作物田間生長時感染未成熟的谷物 可在不能及時干燥的谷物上生長產(chǎn)毒適合產(chǎn)毒溫度20毒素在穩(wěn)定期形成產(chǎn)毒適合的水活度值在0.925以上。 整理ppt（三）伏馬菌素（Fumonisin

17、）伏馬菌素的檢測 色譜檢測法酶聯(lián)免疫檢測法 整理ppt二、毒蘑菇我國可食蕈約有300多種，有毒蕈80多種，其中含劇毒能使人致死的有10多種 肝腎損害型毒性強烈，一般50g毒傘能使70kg的人中毒死亡 神經(jīng)精神型 引起幻覺、精神錯亂等癥狀，預(yù)后良好溶血毒型 該類毒素耐熱性不強 胃腸毒型引起胃腸炎癥狀，病程短，很少發(fā)生死亡 整理ppt第四部分 食品安全性的控制一、HACCP的形成和發(fā)展 始于60年代，最初用于宇航員食品制造質(zhì)量控制 1971年美國首次公布了HACCP體系，開始被美國食品和藥品管理局（FDA）應(yīng)用于低酸性罐頭中 1989年美國國家食品微生物標(biāo)準(zhǔn)顧問委員會將該體系標(biāo)準(zhǔn)化整理ppt第四部

18、分 食品安全性的控制二、HACCP的原則 1、對食品有關(guān)的各個環(huán)節(jié)進行危害分析和風(fēng)險評價對食品生產(chǎn)中包括種植、養(yǎng)殖，收獲，原料成分，食品加工，食品制造，食品配送，食品銷售，及消費者進行食品烹飪準(zhǔn)備和消費等環(huán)節(jié)受到生物的、物理的、化學(xué)的因素污染并對人體產(chǎn)生危害的可能性進行分析，對危害的嚴(yán)重性進行預(yù)測，評估對消費者可能的風(fēng)險程度 整理ppt第四部分 食品安全性的控制二、HACCP的原則 2、確定關(guān)鍵控制點 關(guān)鍵控制點（critical control point，簡稱：CCP）是指失去控制將導(dǎo)致不可接受的健康危害的環(huán)節(jié)或步驟 可以消除和預(yù)防危害的點能夠最大程度地減少、降低或延遲危害，但不能保證對危

19、害全部控制的點 整理ppt第四部分 食品安全性的控制二、HACCP的原則 3、建立CCP的范圍或限值例如確定有害物質(zhì)的最大允許殘留量，原料儲存的最高和最低溫度等整理ppt第四部分 食品安全性的控制二、HACCP的原則 4、建立監(jiān)控每個CCP的方法 列出用于監(jiān)察CCP確保能夠滿足關(guān)鍵限值的程序及檢驗頻率。例如一種產(chǎn)品的安全性與酸的添加量有關(guān)，那么就需通過檢測pH值或酸的含量來加以監(jiān)控 整理ppt第四部分 食品安全性的控制二、HACCP的原則 5、糾正偏差 當(dāng)監(jiān)察手段發(fā)現(xiàn)CCP發(fā)生偏離（如某項指標(biāo)超過規(guī)定的最大限值）時立即實施糾正這一行動一般包括調(diào)整工藝，處理異常產(chǎn)品，確定偏離原因并進行糾正，保留

20、記錄等 整理ppt第四部分 食品安全性的控制二、HACCP的原則 6、建立有效記錄系統(tǒng)，確保HACCP的運行有完整的記錄 7、驗證步驟 整理ppt第四部分 食品安全性的控制三、HACCP應(yīng)用概況美國從1995年起對國內(nèi)的食品工業(yè)全面推行HACCP體系 我國從1990年代開始在一些出口食品生產(chǎn)企業(yè)試點應(yīng)用HACCP系統(tǒng) 1997年國家商檢部門對有關(guān)出口美國的水產(chǎn)品加工企業(yè)實施了強制性的HACCP方案 整理pptTHE END整理ppt6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlT

21、iQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3

22、B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYn

23、VjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!lUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C

24、1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoW

25、kThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6

26、E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRg9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlU

27、iQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3

28、C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%r#oWlThQeN7F4C1z)w&s!pYmUj

29、RgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)w&s!pXmUjRfOcL9H6E2B+y(u%r#oWlThQeNbJ8G5D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1A-w*t!qYnVjSgPdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C

30、1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x*u$rZnWkThPeMaJ7G4C1z-w&t!pYmVjRgOdL9I6E3B0y(v%s#oXlTiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B+y(v%r#oXlTiQeNbK8G5D2A-x*t$qZnVkShPdMaI7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qYnVkS

31、gPdMaI7F3C0z)v&s!pXmUiRfOcK9H6E2B+x(u%rZoWlThQeMbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfNcK9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2

32、A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7Fy(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVkSgPdLaI7F3C0z)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*uYnVjSgOdLaI6F3C0y)v&s#pXlUiRfNcK9H5E2A+x(u$rZoWkThPeMbJ7G4D1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+