藥物分析學(xué)：各論第四章生物堿類(lèi)藥物分析

1、第四章 生物堿類(lèi)藥物的分析 藥物分析學(xué)各論 Analysis of alkaloids drugs1教學(xué)目的與要求(The teaching purpose and requirements)掌握生物堿類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)特征；掌握非水酸堿滴定法、提取酸堿滴定法；1熟悉生物堿類(lèi)藥物的鑒別、純度檢查及有關(guān)物質(zhì)分析方法原理與應(yīng)用； 2了解其他定量方法和生物堿的體內(nèi)樣品分析 。32教學(xué)主要內(nèi)容目錄(The main contents of teaching)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1鑒別試驗(yàn)及檢查分析2含量測(cè)定3體內(nèi)藥物分析 4本章小結(jié)5習(xí)題與討論63概述(An overview of the)生物堿(alkaloids

2、)是一類(lèi)存在于生物體內(nèi)的含氮有機(jī)化合物，因多數(shù)具有堿性，故稱(chēng)為生物堿。其多存在于植物體內(nèi)，少數(shù)存在動(dòng)物體內(nèi)，如蟾蜍堿（bufotenine）。4 第二節(jié) 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) structure and properties5一、分類(lèi)(classification) 按植物來(lái)源分類(lèi)如苦參堿、（matrine）罌粟堿（papaverine） 按生源結(jié)合化學(xué)骨架分類(lèi)源于氨基酸途徑 和來(lái)源于異戊烯途徑 根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)中的基本母核分類(lèi) （本教材選用）主要有六大類(lèi)，即苯烴胺類(lèi)、托烷類(lèi)、喹啉類(lèi)、異喹啉類(lèi)、吲哚類(lèi)、黃嘌呤類(lèi) 分類(lèi)方法671、苯烴胺類(lèi)：氮原子不在環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)。如麻黃堿、偽麻黃堿、秋水仙堿 二、典型藥物的結(jié)構(gòu)

3、及其特征 （structure and character of typical drugs） 麻黃堿pKa=9.56 *氨基醇結(jié)構(gòu)，可以與雙縮脲試液反應(yīng)，用于鑒別8特點(diǎn)：苯烴胺，仲胺，堿性較強(qiáng)，易與酸成鹽。氨基醇，與雙縮脲反應(yīng)。芳環(huán)，UV。不對(duì)稱(chēng)碳原子，旋光性。92.托烷類(lèi)（莨菪烷類(lèi)）莨菪烷衍生的氨基醇和不同有機(jī)酸縮合成酯類(lèi)的生物堿，如硫酸阿托品、氫溴酸山莨菪堿、氫溴酸東莨菪堿硫酸阿托品脂環(huán)胺pKb=4.3510特點(diǎn)：酯結(jié)構(gòu)，易水解五元脂環(huán),叔胺，堿性較強(qiáng)，易與酸成鹽不對(duì)稱(chēng)碳原子，呈左旋體阿托品為消旋體，無(wú)旋光性。11奎寧（左旋體）奎尼丁（右旋體）(喹啉環(huán)）（喹核堿）(喹啉環(huán)）（喹核堿） 典

4、型藥物的結(jié)構(gòu) 3 .喹啉類(lèi)藥物 硫酸奎寧、硫酸奎尼丁、喜樹(shù)堿等堿性:pKb1=5.07 pKb2=9.7 pKb1=5.4 pKb2=10 12 特點(diǎn)：堿性：喹啉環(huán)、喹核堿兩部分，喹核堿含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)，可以與硫酸成鹽；喹啉環(huán)系芳環(huán)氮，堿性較弱，不能與硫酸成鹽旋光性：奎寧和奎尼丁的分子式完全相同，但喹核堿部分立體結(jié)構(gòu)不同，因此其旋光性、堿性和溶解性能也不同。奎寧為左旋體，奎尼丁為右旋體，奎寧的堿性大于奎尼丁。134.異喹啉類(lèi) 鹽酸嗎啡、磷酸可待因鹽酸嗎啡（兩性）脂環(huán)胺pKb=6.13pKa=9.8514特點(diǎn)： 堿性：?jiǎn)岱?酚羥基、叔胺，故屬兩性化合物，堿性略強(qiáng)，即可以溶與氫氧化鈉又可溶與鹽酸水

5、溶液。 可待因分子中僅有叔胺基團(tuán)，無(wú)酚羥基，堿性較嗎啡稍強(qiáng)，不能溶與氫氧化鈉溶液。155.吲哚類(lèi)硝酸士的寧、利血平硝酸士的寧pKb1=6.0pKb2=11.7利血平pKb1=7.9316特點(diǎn)： 堿性：士的寧和利血平結(jié)構(gòu)中均含有兩個(gè)堿性強(qiáng)弱不同的氮原子，士的寧結(jié)構(gòu)中的吲哚氮由于與芳香環(huán)共軛，氮上的電子云密度小，幾乎無(wú)堿性，脂環(huán)叔胺氮堿性較強(qiáng)可與一分子硝酸成鹽。 利血平脂環(huán)叔胺氮由于受立體效應(yīng)的影響，堿性較弱，不能與酸形成穩(wěn)定的鹽，而以游離狀態(tài)存在。利血平具有酯結(jié)構(gòu)，與弱堿接觸或受熱易水解。176.黃嘌呤類(lèi) 咖啡因、茶堿咪唑嘧啶特性：咖啡因和茶堿是咪唑和嘧啶，分子結(jié)構(gòu)中雖含有四個(gè)氮原子，但兩個(gè)氮原

6、子受鄰位吸電子基團(tuán)羰基的影響，幾乎不呈堿性，而與其結(jié)構(gòu)相似的茶堿具有酸性，可溶于堿的水溶液中H茶堿18三、理化性質(zhì) physical and chemical properties（一） 性狀 組成多數(shù)含有C、H、O、N，少數(shù)含有S、Cl 形態(tài) 多為結(jié)晶性固體，有些為非晶性粉末，少數(shù)為液體(如煙堿、檳榔堿)味多具苦味(鹽酸小檗堿)，少數(shù)呈辛辣味 顏色 一般無(wú)色或白色；少數(shù)具有長(zhǎng)鏈共軛體系的具有一定顏色。如，小檗堿：黃色；小檗紅堿：紅色；一葉萩堿：淡黃色 揮發(fā)性與升華性 少數(shù)液體及個(gè)別小分子生物堿具揮發(fā)性(麻黃堿)，少數(shù)具升華性(咖啡因) 19產(chǎn)生條件 具有手性碳原子或手性分子 影響因素 A.

7、手性碳的構(gòu)型 B. 測(cè)定溶液 C. pH值 D. 濃度研究意義 生理活性與旋光性密切相關(guān)。通常左旋體的活性比右旋體活性強(qiáng)。如，L-莨菪堿的散瞳作用比D-莨菪堿大100倍。 （二） 生物堿的旋光性 20游離生物堿親脂性叔胺堿和仲胺堿，溶于有機(jī)溶劑，溶于酸水親水性主要指季胺堿和某些含N-氧化物生物堿；液體或分子較小的生物堿親脂又親水。如東莨菪堿、氧化苦參堿、煙堿、麻黃堿。具特殊官能團(tuán)兩性生物堿（嗎啡、小檗胺、檳榔次堿）：可溶于酸水及堿水，pH89產(chǎn)生沉淀。內(nèi)酯（或內(nèi)酰胺）結(jié)構(gòu)：類(lèi)似一般叔胺堿，但在堿水中可以開(kāi)環(huán)形成羧酸鹽溶于水，加酸又復(fù)原。（三） 生物堿的溶解性 21生物堿鹽一般易溶于水，可溶于醇

8、無(wú)機(jī)酸鹽有機(jī)酸鹽；無(wú)機(jī)酸鹽中含氧酸鹽鹵代酸鹽；小分子有機(jī)酸鹽大分子有機(jī)酸鹽（三） 生物堿的溶解性 22產(chǎn)生原因N原子具有孤對(duì)電子，能接受質(zhì)子或給出電子而顯堿性理論依據(jù)表示方法pKa堿性大小與pKa關(guān)系pKa2為極弱堿，pKa27為弱堿pKa711為中強(qiáng)堿，pKa11以上為強(qiáng)堿堿性基團(tuán)pKa值順序胍基季胺堿N-烷雜環(huán)脂肪胺芳香胺N-芳雜環(huán)酰胺吡咯（四）生物堿的堿性1. 共軛酸堿概念及強(qiáng)度表示 23雜化方式誘導(dǎo)效應(yīng)共軛效應(yīng)空間效應(yīng)氫鍵效應(yīng) 2. 堿性與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系（四）生物堿的堿性24堿性類(lèi)型雜化示例脂肪胺脂氮環(huán)sp3 11.3 11.2 9.5 芳雜環(huán)sp2 0.4 5.17 4.94 5.1

9、4氰基spCN1）雜化方式 25甲基苯環(huán)2）誘導(dǎo)效應(yīng) 氨基其他烷基酰基,雙鍵羥基,醚氧供電子基吸電子基堿性增強(qiáng)堿性減弱26 苯胺型 酰胺型 烯胺型 N原子上孤對(duì)電子形成p- 共軛時(shí)，堿性減弱3）共軛效應(yīng) 27稀胺型特例：N原子,-位有雙鍵可能轉(zhuǎn)化為季銨 蛇根堿 （serpentine）pka 10.828pka 8.2pka 5.6pka 3.8strychnine pseudostrychnine neostrychnineN: 處在橋頭，為剛性結(jié)構(gòu)，不發(fā)生未共用電子對(duì)的轉(zhuǎn)移，故不形成季銨堿。4）空間效應(yīng) 29生物堿的共軛酸鹽若能生成穩(wěn)定的分子內(nèi)氫鍵（與含氧基團(tuán)），則堿性增強(qiáng)。 和鉤藤堿 p

10、ka 6.32 異和鉤藤堿 pka 5.20 5）氫鍵效應(yīng) 30 17世紀(jì)初，中國(guó)人從烏頭烏頭堿 1806年，德國(guó)科學(xué)家首次從鴉片中得到嗎啡。 1810年，西班牙醫(yī)生從金雞納樹(shù)皮中分得奎寧和辛可寧的混合物。擴(kuò)展閱讀烏頭金雞納樹(shù)罌粟31 生物堿主要分布于植物界，在動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)得很少。在高等植物尤其在雙子葉植物中分布為廣： 在雙子葉植物的小檗科(Berberidaceae)，毛茛科(Rununcu-laceae)，木蘭科(Magnoliaceae)，防己科(Menisperma-ceae)，罌粟科(Papaveraceae)，蕓香科(Rutaceae)等植物中廣為分布； 裸子植物中，在紅豆杉科紅豆杉

11、屬(Taxus)，松柏科松屬(Pinus)，云杉屬(Picia)，三尖杉科三尖杉屬( Cepha-lotaxus)，麻黃科麻黃屬(Ephedra)等屬植物中有分布。分布32少數(shù)單子葉植物如石蒜科，百部科(Stemonaceae)，百合科(Liliaceae)等植物中有分布。生物堿在生物體中的存在部位和含量往往差別很大。例如，金雞納樹(shù)皮中生物堿的含量高達(dá)1.5%，長(zhǎng)春花中長(zhǎng)春堿含量?jī)H百萬(wàn)分之一，美登木中美登堿的含量更微，僅千萬(wàn)分之二。一般來(lái)說(shuō)，含量在千分之一以上即為高含量。在低等植物中，生物堿分布少，而且結(jié)構(gòu)一般為簡(jiǎn)單。如：蕨類(lèi)植物（少），地衣和苔蘚植物基本未見(jiàn)。33腎上腺素蟾酥堿動(dòng)物界也有存在

12、，但種類(lèi)少。34動(dòng)物界發(fā)現(xiàn)越來(lái)越多的生物堿。微生物中生物堿有待進(jìn)一步發(fā)掘（蟲(chóng)草、靈芝、青霉菌、鏈霉菌等，尤其是從土壤絲菌屬菌的發(fā)酵液得美登素類(lèi)生物堿）仿天然生物堿的研究（細(xì)胞培養(yǎng)法，英、美、德、日、印度、芬蘭等 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)連續(xù)發(fā)酵技術(shù)）化學(xué)合成及半合成研究（是臨床用藥的主要來(lái)源）海洋生物中發(fā)現(xiàn)環(huán)肽類(lèi)生物堿 研究新進(jìn)展35例：蟾蜍毒汁中的色胺海綿中含溴的生物堿，具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒作用36海洋中生物堿aplidine37第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)及檢查分析Identification and Check analysis38 1熔點(diǎn)和衍生物熔點(diǎn)， 2比旋度 一、鑒別試驗(yàn) (identification

13、test) （一）測(cè)定物理常數(shù)ChP(2010) The melting point and rotation of alkaloid drugs藥物名稱(chēng)熔點(diǎn)比旋度D鹽酸麻黃堿鹽酸偽麻黃堿秋水仙堿氫溴酸東莨菪堿氫溴酸山莨菪堿硝酸毛果蕓香堿磷酸可待因217220183186148153195199176181174178155159-33至-35.5, 50mg/ml, H2O+61.0至+62.5 , 50mg/ml, H2O-425至-450, 100mg/ml, H2O-24至-27, 50mg/ml, H2O-9.0至-11.5, 0.1g/ml, H2O+80至+83, 0.10g/m

14、l, H2O-98至-102，2%，H2O39一般鑒別反應(yīng)1、顯色反應(yīng)磷鉬酸試劑（Frohd試劑）、釩硫酸試劑（Mandelin試劑）、甲醛硫酸試劑（Marguis試劑）、亞硒酸硫酸試劑（Meclce試劑）、對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑（Wasicky試劑）硫酸鈰銨的磷酸試劑、硫酸、硝酸等（二）化學(xué)反應(yīng)鑒別法40ChP(2010) General color reaction of Some alkaloid drugs 藥物名稱(chēng) 顯色反應(yīng)結(jié)果馬來(lái)酸麥角新堿1mg,加水溶解后，加對(duì)二甲苯氨基苯甲醛試劑2ml，5min后顯淺藍(lán)色利血平1mg,加0.1%磷鉬酸鈉的硫酸溶液0.3ml，即顯黃色。5min后變

15、為藍(lán)色鹽酸嬰粟堿5mg, 加甲醛硫酸試液1ml，溶液無(wú)色或顯淡黃色，漸變深玫瑰紅色，最后變?yōu)樽仙＃▎岱然騿岱鹊孽セ锛闯首仙蜃陷郎┝蛩衢L(zhǎng)春新堿0.1mg，加1%硫酸鈰銨的磷酸溶液1滴，即顯紫紅色硫酸長(zhǎng)春堿0.1mg，加1%硫酸鈰銨的磷酸溶液23滴，即顯藍(lán)色，放置后漸變?yōu)樽陷郎姿峥纱?mg,于白瓷板上，加含亞硒酸2.5mg的硫酸0.5ml，即顯綠色，漸變藍(lán)色示例41生成不溶性鹽類(lèi): 硅鎢酸、苦味酸、磷鉬 酸試劑等生成疏松的配合物: 碘-碘化鉀試劑 生成不溶性加成物：碘化鉍鉀、碘化汞鉀等 重金屬鹽類(lèi) 沉淀試劑 2. 沉淀反應(yīng)在酸性水溶液中，與生物堿沉淀試劑（重金屬鹽類(lèi)和大分子酸類(lèi)等）發(fā)生

16、沉淀反應(yīng)。42 試劑名稱(chēng)組成 反應(yīng)特征 碘化物復(fù)鹽類(lèi)碘-碘化鉀試劑 KII2 紅棕色沉淀碘化汞鉀試劑 K2HgI4類(lèi)白色沉淀碘化鉍鉀試劑 KBiI4黃至橘紅色沉淀重金屬鹽類(lèi) 硅鎢酸試劑 SiO212WO3nH2O淡黃或灰白色沉淀 磷鉬酸試劑H3PO412MO32H2 O白色或黃褐色沉淀示例43 特征鑒別反應(yīng)1. 雙縮脲反應(yīng) 氨基醇結(jié)構(gòu)的反應(yīng) 水層藍(lán)色醚層紫紅OH-乙醚44銅配位化合物45例 鹽酸麻黃堿 ChP 【鑒別】（1）取本品約10mg，加水1mL溶解后，加硫酸銅試液2滴與20%氫氧化鈉溶液1mL，即顯藍(lán)紫色；加乙醚1mL，振搖后，放置，乙醚層即顯紫紅色，水層變成藍(lán)色。462. Vital

17、i反應(yīng) 托烷生物堿反應(yīng) 黃色深紫色473. 綠奎寧（Thakkeioquin）反應(yīng) 含氧喹啉的反應(yīng) H+翠綠色氨水48494.紫脲酸胺反應(yīng) 黃嘌啉類(lèi)生物堿 50515.異喹啉類(lèi)生物堿的特征反應(yīng) （1）Marquis反應(yīng) 含酚羥基異喹啉特征反應(yīng) 紫堇色鹽酸乙基嗎啡 黃色紫色黑色-硫酸甲醛鹽酸阿樸嗎啡 黑色 紫堇色紫色-硫酸甲醛磷酸可待因52（2）Frohde反應(yīng)鹽酸嗎啡+鉬硫酸 紫色藍(lán)色棕綠色（3）還原反應(yīng) 嗎啡的弱還原性 嗎啡與磷酸可待因的區(qū)分反應(yīng)536.吲哚類(lèi)生物堿的特征反應(yīng)-官能團(tuán)反應(yīng) （1）與香草醛反應(yīng)（2）對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng) 利血平 + 新制香草醛玫瑰紅色54（三）物理化學(xué)鑒別法 光

18、譜鑒別法 1UV吸收光譜 a. 比較最大（?。┪詹ㄩL(zhǎng)和相應(yīng)的吸收度 b. 與對(duì)照品比較吸收光譜的一致性 c. 比較吸光度或吸收系數(shù)的比值 2IR吸收光譜 IR光譜信息豐富，準(zhǔn)確度高，專(zhuān)屬性強(qiáng)55二 、純度及有關(guān)物質(zhì)分析（Purity and related substances analysis） 生物堿類(lèi)藥物在提取或合成中，由于結(jié)構(gòu)復(fù)雜，生產(chǎn)工藝長(zhǎng)，在生產(chǎn)或貯藏過(guò)程中常共存其他生物堿，會(huì)產(chǎn)生完全不同的生理活性或毒性。中藥中亦會(huì)含有內(nèi)源性有害生物堿類(lèi)成分，為保證安全、有效，應(yīng)對(duì)其嚴(yán)格檢查和控制。56 第三節(jié) 含量測(cè)定 assay57一、非水溶液酸堿滴定法(Nonaqueous acid-ba

19、se titration)本類(lèi)藥物在水中堿性較弱（滴定突躍不明顯，難以判斷滴定終點(diǎn)），很難直接滴定。在酸性非水介質(zhì)中（如冰醋酸中），堿性顯著增強(qiáng)，滴定突躍增大，可用高氯酸滴定液直接滴定，以指示劑或電位法確定終點(diǎn)。 58（一）基本原理生物堿少數(shù)以游離狀態(tài)存在，多數(shù)鹽形式存在。置換反應(yīng)，即用強(qiáng)酸（HClO4）置換出與生物堿結(jié)合的弱酸（HA）HA不同，對(duì)滴定反應(yīng)的影響也不同BH+A-代表生物堿鹽類(lèi) 59HA弱酸有機(jī)酸：馬來(lái)酸無(wú)機(jī)酸：HCl、H2SO4、HNO3、H3PO4、HBrHClO4、HBr、HCl、H2SO4、HNO3 在水中酸強(qiáng)度相等在冰醋酸中酸強(qiáng)度不相同HClO4HBr H2SO4 HC

20、lHNO3其它弱酸60(二）方法與應(yīng)用本法為半微量分析方法：滴定劑：0.1mol/L HClO4/無(wú)水gHAc 溶液，消 耗約8ml空白試驗(yàn)消耗：13D，20D1ml ， 1D0.05ml 使用10ml滴定管方可讀出，以減小誤差1.方法612測(cè)定條件的選擇Kb 10-8 ( 含氮有機(jī)堿鹽 及游離含氮有機(jī)堿）馬來(lái)酸氫鹵酸鹽硫酸鹽硝酸鹽磷酸鹽適用范圍62溶劑選擇藥物Kb合適的溶劑Kb=10-810-10 冰醋酸Kb=10-1010-12冰醋酸+醋酐Kb 10-12醋酐溶劑一般用量1030ml63 確定終點(diǎn)方法選擇指示劑法 最常用的指示劑是結(jié)晶紫（ Crystal Violet，CV）（堿性區(qū)） （

21、酸性區(qū)） 終點(diǎn)的顏色應(yīng)用電位法校準(zhǔn)。紫藍(lán)藍(lán)綠黃綠黃綠b電位法643.注意事項(xiàng)a.水份的影響及排除gHAc和HClO4中都含有一定量的水份 排除法： 配制時(shí)，根據(jù)gHAc和HClO4含水量，加入計(jì)算量的醋酐費(fèi)休氏（Fischer）水分測(cè)定法準(zhǔn)確測(cè)出gHAc和HClO4中含水量，準(zhǔn)確加入醋酐65b.標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性 水的膨脹系數(shù)是0.2110-3/CgHAc膨脹系數(shù)是1.110-3/C，較大，體積隨溫度變化較大，且還具有揮發(fā)性 測(cè)定樣品與標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)溫度不同，應(yīng)對(duì)濃度進(jìn)行校正。66其中： 0.0011：gHAc的膨脹系數(shù) t0和t1：標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和測(cè)定樣品時(shí)的溫度 F0和F1：t0和t1所對(duì)應(yīng)的

22、標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 說(shuō)明： t1-t0 2C 直接使用 2C t1-t010C，或超過(guò)30天，重新配制標(biāo)定校正公式：c .空白試驗(yàn) 消除試劑對(duì)終點(diǎn)的影響67應(yīng)用示例1.游離生物堿測(cè)定咖啡因0.15g醋酐-冰醋酸 5：1CV 1DHClO4(0.1mol/L）黃色682.氫鹵酸鹽的測(cè)定氫鹵酸在gHAc中酸性較強(qiáng)，對(duì)滴定有影響。排除方法：加入過(guò)量的HgAc2/gHAc溶液（理論量13倍） 由于醋酸汞毒性較大，Ch.P(2010)大多數(shù)生物堿氫鹵酸鹽的測(cè)定取消醋酸汞，改為電位法指示終點(diǎn)。 69鹽酸麻黃堿冰醋酸10mlHg(AC)24 ml結(jié)晶紫 1 DHClO4 (0.1mol/L）滴定翠綠色百分含量=

23、 70 生物堿的硫酸鹽，在冰醋酸介質(zhì)中只能被滴定至生物堿的硫酸氫鹽。 3. 硫酸鹽的測(cè)定71（1） 硫酸阿托品的測(cè)定 HClO4直接滴定時(shí)，反應(yīng)摩爾比為1172（2）硫酸奎寧的測(cè)定分子中有四個(gè)N原子二個(gè)喹啉N，屬于芳環(huán)族N，堿性較弱二個(gè)喹核N，屬于脂環(huán)族N，堿性較強(qiáng)73在水中硫酸是二元酸，能夠解離出兩個(gè)氫離子，即在冰醋酸中硫酸是一元酸，解離出 一個(gè)氫離子，即74奎寧與硫酸結(jié)合時(shí)，一分子的硫酸能與兩分子的奎寧結(jié)合，即：75滴定反應(yīng)如下：+3HClO4+用HClO4直接滴定硫酸喹寧時(shí)，摩爾比是1376（3）硫酸奎寧片的含量測(cè)定經(jīng)過(guò)處理排除輔料對(duì)測(cè)定的影響方法：10片去糖衣精稱(chēng)總重 研細(xì)精密稱(chēng)取W（

24、相當(dāng)于硫酸奎寧0.3g）加0.1mol/LNaOH 10mlCHCl3液 HClO4（0.1mol/L）滴定CHCl3提取醋酐除水77原理：中和游離堿HClO4二甲基黃玫瑰紅醋酐摩爾比標(biāo)示百分含量% = 100%（V-V0）TF W標(biāo)示量78 因HNO3具有氧化性，可使指示劑變色，一般電位法指示終點(diǎn)。如硝酸士的寧、硝酸毛果蕓香堿 4. 硝酸鹽的測(cè)定 弱酸，對(duì)滴定無(wú)干擾，能準(zhǔn)確滴定，按常法測(cè)定，如磷酸氯喹、磷酸可待因 5. 磷酸鹽和有機(jī)酸鹽的測(cè)定79簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、取樣量小，測(cè)定的是生理活性部分，尤其適合原料；專(zhuān)一性差，實(shí)際上是置換滴定，滴定陰離子。小結(jié)80（一）基本原理 利用生物堿鹽類(lèi)可溶于

25、水，游離生物堿不溶于水而溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)進(jìn)行提取，然后進(jìn)行滴定的方法。 二、提取酸堿滴定法 (Extraction acid-base titration) 生物堿鹽類(lèi)可溶解于水，不溶于有機(jī)溶劑游離生物堿不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑依據(jù)性質(zhì)81（二）操作步驟與方法82測(cè)定方法 1.直接滴定法 用于堿性較強(qiáng)的生物堿 2.剩余滴定法 用于堿性較弱的生物堿 833.酸滴定液返提后剩余滴定法 用于對(duì)熱不穩(wěn)定的生物堿 841.堿化試劑 選用堿化試劑時(shí)應(yīng)考慮的因素堿化試劑堿性大于生物堿的堿性；不易進(jìn)入有機(jī)相，或易除去；不與生物堿和有機(jī)溶劑反應(yīng)；（三）條件選擇生物堿的化學(xué)性質(zhì) 易水解或具兩性，不能用強(qiáng)堿試劑。

26、如阿托品具有酯結(jié)構(gòu)，與強(qiáng)堿接觸時(shí)分解；嗎啡有酚羥基，和NaOH形成酚鹽溶于水，難以用有機(jī)溶劑提取。有脂肪性物質(zhì)共存時(shí)，不能用強(qiáng)堿性的堿化試劑，以免形成乳化而難以用有機(jī)溶劑提取。85氨水是最常用的堿化試劑 特點(diǎn)： 氨Kb=1.7510-5（pKb為4.67） 一般生物堿Kb：10-610-9 （pKb為6 9） 氨堿性適當(dāng)，能使大部分生物堿游離，又不能使具酯結(jié)構(gòu)或兩性生物堿水解或成鹽，具揮發(fā)性、易除去，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。862. 提取溶劑 （1）提取溶劑選擇的原則（2）常用的提取溶劑： 最常用氯仿氯仿特點(diǎn)：比重大，易于分離對(duì)大部分生物堿都有較大的溶解度不燃燒，使用安全氯仿在堿性下受熱很容易分解，尤其

27、是堿性較強(qiáng)時(shí)更容易分解。87（3）提取溶劑的用量及提取次數(shù) 通常應(yīng)提取4次，第一次用量至少應(yīng)為水液體積的一半，以后幾次應(yīng)各為第一次的一半 3. 提取終點(diǎn)的確定 用合適的沉淀反應(yīng)確定4. 指示劑的選擇 滴定時(shí)選擇變色范圍在酸性區(qū)域的指示劑885.乳化的預(yù)防和消除預(yù)防乳化方法：a采用堿性弱的堿化劑b采用不易產(chǎn)生乳化的合適提取劑c在保證提取完全的條件下，避免過(guò)于猛烈的振搖消除乳的方法：a再加一些有機(jī)相或水相b加數(shù)滴乙醇并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)分液漏斗c輕度乳化可旋轉(zhuǎn)分液漏斗，將已分出的液層分出，以加速分層速度。d用熱毛巾在分液漏斗外熱敷e以鹽析破壞乳化F用脫脂棉過(guò)濾89例 磷酸可待因糖漿的含量測(cè)定ChP采用本法測(cè)

28、定磷酸可待因糖漿的含量。 本法先在氨堿性條件下用三氯甲烷提取可待因，揮去三氯甲烷，精密加入定量過(guò)量的硫酸滴定液(0.01molL)使溶解，然后用氫氧化鈉滴定液(0.02molL)回滴。每1m1硫酸滴定液(0.0lmolL)相當(dāng)于8.488mg的C18H21NO3H3PO41.5H2O。90（四）方法小結(jié)1. 專(zhuān)一性：經(jīng)分離后測(cè)定生物堿，有一定專(zhuān)一性。2. 缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)，繁瑣；對(duì)揮發(fā)性或熱不穩(wěn)定性生物堿類(lèi)藥物不適用。 91三、紫外可見(jiàn)分光光度法 (Ultraviolet visible spectrophotometry)（一）直接測(cè)定法通常選擇max為測(cè)定波長(zhǎng)，多用對(duì)照品比較法和吸收系數(shù)法。 例

29、 ChP氨茶堿注射液的含量測(cè)定吸收系數(shù)法 本品相當(dāng)標(biāo)示量的百分含量=式中，A為測(cè)得的吸光度值；n為稀釋倍數(shù)；V為供試品取用量，ml。92（二）酸性染料比色法1.基本原理 在適當(dāng)?shù)膒H介質(zhì)中 （適用于小劑量藥品及制劑）932.方法定量分取呈色有機(jī)相 測(cè)定A( ) 定量分取呈色有機(jī)相 測(cè)定A( )定量分取呈色有機(jī)相 測(cè)定A( )脫水脫水脫水堿化酸化943.實(shí)驗(yàn)條件選擇關(guān)鍵：定量生成離子對(duì)，全部提取到有機(jī) 相，提取常數(shù)大，提取完全。E提取常數(shù)D分配比，與所用酸性染料陰離子種類(lèi)、溶劑有關(guān)。95（1）酸性染料選擇要求：a. 能與有機(jī)堿定量結(jié)合； b. 形成離子對(duì)在有機(jī)相中有最大 溶解度，在max處，A最

30、大； c .酸性染料不得進(jìn)入有機(jī)相。常用酸性染料：溴麝香草酚藍(lán)(BTB)、溴甲酚綠(BCG)、溴酚藍(lán)(BPB)96溴麝香草酚藍(lán)(BTB)brom thymol bluepH 6.07.6（黃藍(lán)）常用酸性染料-磺酞類(lèi)指示劑溴甲酚綠(BCG)brom cresol greenpH 3.65.2（黃藍(lán)）溴酚藍(lán)(BPB)bromophenol bluepH 3.84.6（黃紫）97 （2） 有機(jī)溶劑的選擇要求： a. 不與水相互溶（在水中溶解度?。?b. 生成的離子對(duì)在有機(jī)相中有最大 溶解度，提取完全； c .離子對(duì)在溶劑中有最大吸收度。 常用：CHCl3、 CH2Cl2 、CCl498 (3) 水

31、相pH值的選擇 水相的pH是最主要條件 要求： a.測(cè)得有機(jī)堿（生物堿）全部以BH+形式存在，指示劑以In-存在； b.在一定pH下關(guān)鍵定量生成離子對(duì)進(jìn)入有機(jī)相99pH（酸性）BH+，InBH+In- ，有機(jī)溶劑提取的是HInpH（堿性） In-，BH+BH+In-，有機(jī)溶劑提取的是B100水相最佳pH選擇方法：a理論計(jì)算查手冊(cè)被測(cè)藥物查手冊(cè)被測(cè)藥物濃度101b 實(shí)驗(yàn)求得用待測(cè)的有機(jī)堿加入一定的酸性染料，配制成一系列不同pH值的溶液，分別用有機(jī)溶劑提取后測(cè)定有機(jī)溶劑提取液的吸收度，吸收度值最大的溶液所對(duì)應(yīng)的pH值就是水相的最佳pH值。ApH102(4) 水分的影響 a提取時(shí)防止水進(jìn)入有機(jī)層，有

32、機(jī)染料影響測(cè)定結(jié)果;b 水分使有機(jī)層混濁;c 加入脫水劑（無(wú)水Na2SO4)或經(jīng)干燥濾紙濾過(guò) 。（5）有色雜質(zhì)的排除 可先用有機(jī)溶劑提取酸性染料中有色雜質(zhì)。 103例.硫酸阿托品片的含量測(cè)定 本品相當(dāng)標(biāo)示量的百分含量式中Ax、AS分別為供試品和對(duì)照品溶液的吸光度； CS為對(duì)照品溶液的濃度mg/ml； m為樣品質(zhì)量；為平均片重。1.027為（C17H23NO3）2H2SO4H2O與（C17H23NO3）2H2SO4的質(zhì)量換算系數(shù)。 1043. 準(zhǔn)確度差，不能用于原料藥的測(cè)定，只能用于制劑分析（三）方法小結(jié)1. 選擇性高（選用適當(dāng)pH緩沖液可消除干擾）2. 靈敏度高、供試品用量少105第四節(jié) 體內(nèi)

33、藥物分析(Pharmaceutical analysis in vivo)106 生物堿類(lèi)藥物在藥效學(xué)、藥動(dòng)學(xué)、毒理學(xué)、臨床藥學(xué)、臨床藥理學(xué)等研究與應(yīng)用中，常常需要建立生物樣本中微量藥物及其代謝物的分離、分析方法，以便進(jìn)行臨床藥物監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)合理用藥，評(píng)價(jià)新藥及生物利用度、生物等效性研究，闡明藥物作用機(jī)制及毒副反應(yīng)等。 107示例 磷酸可待因體內(nèi)樣品分析 磷酸可待因?yàn)榕R床上常用的中樞鎮(zhèn)痛藥，常用于緩解輕度至中度疼痛，是WHO對(duì)腫瘤患者止痛三階梯治療方案中的二級(jí)階梯的最主要藥品。其藥物動(dòng)力學(xué)及生物利用度的研究受到廣泛關(guān)注。 1081、血藥濃度測(cè)定方法 色譜條件：色譜柱為Hypersil BDS C

34、18 （4.6mm200mm，10g）；柱溫：40；流動(dòng)相：乙腈-0.25%醋酸胺溶液（pH7.0）（65：35），流速：1.5ml/min；UVD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：212nm。2、血漿樣品處理：取血漿2ml，置10ml具塞離心管中，加內(nèi)標(biāo)溶液（依維菌素3.86g/ml）50l，旋渦混合30秒后，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9.50.2，加入醋酸乙酯4ml，旋渦混均，離心20min（2000r/min），分取醋酸乙酯層，以氮?dú)獯蹈?。殘?jiān)?00l流動(dòng)相溶解，離心，取上清液50l進(jìn)樣。1092、藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn) 志愿腫瘤患者（年齡52.77.3歲）10名，隨機(jī)分為A、B兩組。A組先口服磷酸

35、可待因緩釋片，每日7:00和19:00時(shí)各服90mg，連服至第6日晨，于第46日晨7:00時(shí)服藥前及第6日服藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0和12.0h由肘靜脈采血5ml。B組先口服磷酸可待因片，每日7：00、13：00和19：00及次日凌晨1:00時(shí)各用45mg，連服至第6日晨，于第46日晨7：00時(shí)服藥前及第6日服藥后0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6. 0小時(shí)由肘靜脈采血5ml。間隔1周后交叉服藥，同樣時(shí)間點(diǎn)靜脈采血。血樣置肝素化離心管中，離心，分離血漿，-40冷凍保存?zhèn)溆谩?103、實(shí)

36、驗(yàn)結(jié)果 方法學(xué)考察： 可待因血藥濃度的線性范圍為5140ng/ml；高中低3種濃度的可待因平均回收率為97.5%5.4%（n=15）；日內(nèi)RSD6.4%，10天內(nèi)5次測(cè)定的日間RSD7.5%。 111藥動(dòng)學(xué)與生物利用度 對(duì)口服多劑量磷酸可待因緩釋片與磷酸可待因片達(dá)到穩(wěn)態(tài)后血藥峰濃度（Cmax）、血藥谷濃度（Cmin）、血藥濃度達(dá)峰時(shí)間（Tmax）、血藥濃度波動(dòng)度（DF%）、有效血藥維持時(shí)間（Teff）和平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度（Cav）進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)和雙單側(cè)t檢驗(yàn)，除Cmax外，各項(xiàng)藥動(dòng)參數(shù)的差異均有顯著意義（P0.01），磷酸可待因緩釋片在多劑量給藥時(shí)具有顯著的緩釋特性。 同時(shí)磷酸可待因緩釋片的相對(duì)

37、生物利用度為123.6%8.1%，表明兩者生物不等效。 112Summary: Alkaloids is a kind of organic compound include nitrogen in its organism，most of them are basic and have many kinds of biological activities. Its basic property is affected by the hybridization way of nitrogen atom，electric effect，conjugative effect，steric effect，molecular bond-hydrogen，etc. We could choose the suitable analytical methods for identification, impurities determination and assay of alkaloids, according to structure, phys