藥學院藥分小學期實驗實驗設(shè)計-復(fù)方乙酰水楊酸的質(zhì)量檢查

1、 藥學院藥分小學期實驗實驗設(shè)計 復(fù)方乙酰水楊酸的質(zhì)量檢查 院 系： - 姓 名： - 學 號： - 指導(dǎo)老師： - 學 科： 藥物分析 2014年09月24日石河子大學藥學院復(fù)方乙酰水楊酸中阿司匹林的鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定 2011級藥學（4）班 摘要 目的：復(fù)方乙酰水楊酸片劑中阿司匹林的鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定。方法：（1）鑒別：薄層色譜法，展開劑 氯仿一乙醚一丙酮一冰醋酸(2 7 : 18 : 1 : 2)，在紫外燈(2 54n m ) 下檢視。 （2）雜質(zhì)檢查：高效液相色譜法，采用色譜柱（，）， 流動相: 甲醇-水-冰醋酸(70：29：1) ; 檢測波長為，柱溫為，流速為1.0mL/m

2、in，進樣量為。 （3）含量測定：高效液相色譜法，采用色譜柱（，），以乙腈為溶劑，流動相為甲醇水冰醋酸(70：29：1 )，檢測波長276nm，柱溫 ，流速為1.0mL/min，進樣量為。結(jié)果：（1）鑒別：樣品中一個斑點與阿司匹林對照品的斑點比移值相差不大（Rf供 =7.25/10.1=0.72 Rf對=R1/R=7.8/10.1=0.77） （2）雜質(zhì)檢查：水楊酸在424ug/ml 內(nèi), 線性關(guān)系良好, r=0.9952, （3）含量測定：阿司匹林在0.030.12ug/ml內(nèi)，線性關(guān)系良好，r=0.9863關(guān)鍵詞:阿司匹林 水楊酸 高效液相 薄層色譜 1 實驗部分1.1 藥品性狀本品為白色

3、結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭或微帶醋酸臭，味微酸；遇濕氣即緩緩水解。溶解度：本品在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或無水乙醚中微溶；在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時分解。酸性：阿司匹林分子結(jié)構(gòu)中具有鄰位取代苯甲酸結(jié)構(gòu)，故具有酸性。水解性：本類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯鍵，可發(fā)生水解。吸收光譜特性：阿司匹林分子結(jié)構(gòu)中有苯環(huán)的大共軛結(jié)構(gòu)，故可以產(chǎn)生紫外吸收。1.2儀器與試劑1.1.1儀器：微孔濾膜、高效液相色譜儀、燒杯、硅膠板、層析缸、玻璃棒、容量瓶、分析天平、移液管、紫外燈等1.1.2試劑：復(fù)方乙酰水楊酸片（25mg/片）、阿司匹林對照品（25mg/25ml=1000ug/1ml ）、水楊酸

4、對照品（12.5mg/25ml=500ug/1ml ）、氯仿、乙醚、丙酮、冰醋酸、無水乙醇、色譜甲醇、分析純冰醋酸、純凈水等展開劑（氯仿一乙醚一丙酮一冰醋酸(2 7 : 18 : 1 : 2) ）、流動相（甲醇-水-冰醋酸(70：29：1)。1.3 鑒別試驗薄層色譜法鑒別1.3.1 溶液的制備1.3.1.1 樣品溶液的制備 取復(fù)方乙酞水楊酸片1片, 研細, 加氯仿15 m,l, 振搖溶解, 濾過, 濾液作為樣品溶液。 1.3.1.2 單一對照品溶液的制備分別稱取乙酞水楊酸、加氯仿制成每l m l 中含乙酞水楊酸1 4.7mg的單一對照品溶液。1.3.2 薄層色譜鑒別： 1.3.2.1 層析液的

5、制備：用移液管量取氯仿27ml,乙醚18ml,丙酮1ml,冰醋酸2ml,倒入層析缸中，配成展開劑（氯仿一乙醚一丙酮一冰醋酸(2 7 : 18 : 1 : 2) ），蓋上蓋子，飽和10min。 1.3.2.2跑板：取對照品和供試品溶液，用點樣毛細管點樣于硅膠板，將點樣完畢的層析板放入已飽和的層析缸中，進行展開，蓋上蓋子，放平層析缸。待層析液最前端距離層析板頂端還有2厘米左右時，取出層析板，晾干，在254nm紫外燈下觀察斑點位置。記錄斑點位置。1.4 雜質(zhì)檢查與含量測定高效液相法試藥：對照品溶液、供試品溶液1.4.2實驗步驟：溶液的制備 供試品溶液的制備： 取本品20片，稱重，求得平均片中，研細，

6、精密稱取適量（相當于阿司匹林220），置于100ml容量瓶中，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取5ml于100ml容量瓶稀釋至刻度為樣品溶液。 標準品溶液的制備： 阿斯匹林標準品：取阿司匹林對照品25.，精密稱定，置于25容量瓶中，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為阿司匹林對照品儲備 游離水楊酸標準品：取水楊酸對照品12.5，精密稱定，置于25容量瓶中，加甲醇使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為水楊酸對照品儲備溶液。 用移液管量取適量阿斯匹林對照品溶液1ml、0.6ml、0.3ml、0.2ml、0.1ml稀釋到10ml容量瓶中，配成一系列濃度的對照品標準溶液。同理移液管量取適量水楊酸對照品

7、溶液1ml、0.5ml、0.3ml、0.2ml、0.1ml稀釋到10ml容量瓶中，配成一系列濃度的對照品標準溶液。1.4.2.2 流動相的制備 分別取甲醇140ml、純凈水60ml、冰醋酸1ml于試劑瓶中配成甲醇-水-冰醋酸為70：29：0.5的流動相（甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純），超聲15min后使用。 進樣測定 用高效液相色譜法，采用色譜柱（，）， 流動相: 甲醇-水-冰醋酸(70：29：0.5) ; 檢測波長為，柱溫為，流速為1.0mL/min，進樣量為，分別記錄出峰面積等數(shù)據(jù)。 2 結(jié)果與討論 2.1鑒別 2.1.1結(jié)果D1=7.80cmD0=10.1cmD2=7.25cm供試品對照

8、品 Do=10.1cm D1=7.80cm D2=7.25cm 比移值（Rf）=從基線至展開斑點中心的距離/從基線至展開劑前巖的距離 標準品：Rf=R1/R=7.8/10.1=0.77 樣品：Rf=R2/R=7.25/10.1=0.72 即測得供試品斑點中心到基線距離為7.25cm，樣品斑點到基線的距離為7.80cm 則計算結(jié)果為Rf供= Rf=R2/R=7.25/10.1=0.72 Rf對=R1/R=7.8/10.1=0.77結(jié)果如圖顯示樣品中的最遠斑點即阿斯匹林與對照品中斑點距離并不完全一致，但能定性的表明樣品中含有所阿斯匹林置紫外燈( 2 5 4n m ) 下檢視，樣品溶液 與相應(yīng)的對照

9、品溶液所顯的斑點一致,均顯暗紅色。且能夠清晰地觀察到復(fù)方乙酰水楊酸片中乙酰水楊酸、非那西丁、咖啡因3個完全分離的樣品斑點,易于辯認。 2.1.2討論： 雖然最終定性測出含有阿斯匹林，且使復(fù)方乙酰水楊酸片中乙酰水楊酸、非那西丁、咖啡因3個樣品成功的得到了很好的分離。但是如圖樣品和對照品含有的阿斯匹林斑點位置并不完全一致，并且在實驗過程中由于各種原因，在結(jié)果出來之前，進行了三次跑板點都沒分開，經(jīng)過第四次矯正，點才分離開，經(jīng)分析，出現(xiàn)上述現(xiàn)象原因可能有以下幾點： 斑點位置不一致原因：基線未畫水平，而使跑樣起點不同；薄層板沒放好或展開槽沒有放平；點樣時點樣位置沒有完全在同一水平線上，也使跑點開始時起點

10、不同。前幾次跑點失敗原因：（1）第一次跑樣時可能是點樣時，樣品和對照組的點樣量不均勻，斑點大小不同，且供試品點樣量相對過大，以至于跑點時沒能夠跑開。（2）第一次和第二次可能是前面長時間跑樣，以致使展開劑的有些成分揮發(fā)，而改變了原來有效的成分組成比，以使樣品組分不能展開。針對以上問題，我們又做出了一些相應(yīng)的調(diào)整，得出較滿意的結(jié)果。2.2含量檢查2.2.1結(jié)果測得阿司匹林對照品梯度濃度結(jié)果如下表1和圖1。表1：峰面積濃度（ug/ml）102030 60 100123平均峰面積124991123396134994127793.5174978157849166413.5281207 585529285

11、874 568622283540.5 577075.5117146411063651138915 圖1回歸方程為：10373x43315（0.9863） 樣品測定兩次進樣測定結(jié)果分別如下：峰# 保留時間 面積高度面積%拖尾因子相對保留時間1 1.513 13506 9041.2570 - -2 1.845 7534 6650.7012 - -3 2.321 8123 3330.7561 - -4 2.883 3190641746029.6962 2.295 -5 3.806 210080947619.5528 2.488 -6 4.725 5161181907848.0367 2.728 -峰

12、#保留時間面積高度面積%拖尾因子相對保留時間1 1.517 15982 10481.3293 - -2 1.849 8607 7660.7159 - -3 2.333 12694 4611.0559 - -4 2.891 360123 1953829.9536 2.281 -5 3.813 235267 1055619.5686 2.456 -6 4.731 569594 21244 47.3767 2.671 -由一系列阿司匹林對照品標準溶液的色譜圖可知：阿司匹林保留時間在4.5min左右，且樣品中最后一個峰與阿司匹林標準品出的峰相似。因此可推斷出樣品色譜圖中最后一個峰代表阿司匹林。 平均峰

13、面積=（516118+569594）/2=542856 帶入標準曲線方程得 54285610373x43315 解得x=56.51ug/ml 實驗稱取20片復(fù)方APC,總重為9.1739g，平均片重為0.4587g，實驗稱得0.1663g樣品，甲醇溶解，于25ml容量瓶中定容。樣品濃度為：0.1663g/100/20/100=83.15ug/ml此濃度樣品中阿司匹林含量為x： 4587mg/220mg=83.15ug/x X=3.9880ug因此樣品中阿司匹林的濃度為3.9880ug/ml.標示量%=實測值/理論值*100% =3.9880/56.51*100% =7.06%2.2.3 討論測

14、得結(jié)果偏小，可能是（1）由于過濾時用水潤洗，而導(dǎo)致溶液稀釋。（2）可能是由于樣品未充分震蕩溶解，而造成濃度偏小。（3）也可能是本藥品由于生產(chǎn)或儲存不當，而使有效成分降解，使阿斯匹林含量降低。并且在做高效液相時，出現(xiàn)了一些如下問題：2.2.3.1 實驗重現(xiàn)性不是很好，個別峰不是很理想，以至于有些峰面積值未能測出；標準品出峰時也出現(xiàn)有雜峰，可能是基線噪音，或者是在配置、稀釋或進樣時引入了一些雜質(zhì)，而對峰形產(chǎn)生了一定的影響；數(shù)據(jù)的線性回歸系數(shù)（0.9863）有點小，說明由于上述各種原因而使這次試驗的誤差比較大。 2.2.3.2 流動相的選擇:曾考察過1%醋酸溶液- 甲醇(4 ：6)、1%醋酸溶液(用

15、二乙胺調(diào)節(jié)pH 3.3 3.4) - 甲醇( 60:40) 為流動相,但效果不是很好，不能達到測定的效果，后又根據(jù)峰形加了甲醇的用量，最終確定配比為甲醇：水：冰醋酸為70：29：1，而得到了很好的測定效果，故選用本流動相, 保留時間適中, 分離效果好, 且峰對稱性好。 2.2.3.3 溶劑的選擇: 因乙酰水楊酸不穩(wěn)定,且為了增加實驗的成功率，故選用甲醇為溶劑，結(jié)果得到了很好得測定效果。 2.2.3.4 測定波長的選擇: 由相關(guān)權(quán)威文獻查得乙酰水楊酸的最大吸收波長為280nm, 故綜合考慮處方量及靈敏度, 選用276nm 為檢測波長。 結(jié)論 實驗最終測得的阿斯匹林含量標示量為7.06%，含量偏低

16、。2.3雜質(zhì)檢查2.3.1 實驗結(jié)果測得水楊酸對照品梯度濃度測定結(jié)果如下表2和圖2表2：濃度（ug/ml）峰面積5.1210.2415.36 25.6051.20 12平均峰面積167776306200236988302218298333300275.5426499421467423983 586065954622 圖2:回歸方程為：15678+163236（20.9952）。樣品雜質(zhì)檢查結(jié)果水楊酸雜質(zhì)峰為緊鄰第一個高峰左邊的小峰。平均峰面積=（164234+169396）/2=166399帶入標準曲線方程得 16639915678x+163236 解得x=0.2017ug/ml樣品濃度為：0

17、.1663g/100/20/100=83.15ug/ml所以雜質(zhì)百分含量為:0.201783.15*100%=0.24% 中國藥典采用顯色反應(yīng)對阿司匹林片中水楊酸進行檢查，規(guī)定其限量為0.3%，實驗檢測得雜質(zhì)水楊酸含量為0.24%0.3%，所以本品復(fù)方阿司匹林片中雜質(zhì)水楊酸的含量在雜質(zhì)限量范圍內(nèi)，合格。2.4討論 檢測波長的選擇: 查得文獻得水楊酸溶液用紫外分光光度法測定時, 流動相為空白, 在250一350nm 掃描,其最大吸收選擇檢測波長為295nm。 樣品溶劑的選擇:樣品復(fù)方乙酰氨基酚與水楊酸對照品均使用甲醇溶解，通過觀察，溶解性很好，再使用微孔濾膜過濾，之后使用高效液相色譜法測定。限度

18、: 美國藥典復(fù)方乙酰水楊酸中游離水楊酸限度為3.0 %。根據(jù)國內(nèi)生產(chǎn)廠家實際生產(chǎn)情況(上表)及國外同品種限度確定游離水楊酸限度為0.3 % (原標準游離水楊酸的限度為0.3 % )。在雜質(zhì)測定時采用HPLC標準曲線測定，相對即準確又簡單，故為大部分雜質(zhì)檢查的主要方法。2.5結(jié)論: 本方法能夠較好的分離復(fù)方乙酰水楊酸與游離水楊酸，實驗檢測得雜質(zhì)水楊酸含量為0.24%0.3%， 本品復(fù)方阿司匹林片中雜質(zhì)水楊酸的含量在雜質(zhì)限量范圍內(nèi)，合格。 參考文獻1 ISBN7 一5025 一2736 一2 / R60. 中國藥典二部2000(S2李銳，李香鳳測定復(fù)方乙酰水楊酸片中游離水楊酸雜質(zhì)檢查及限量中 國 現(xiàn) 代