北聯(lián)NK免疫細(xì)胞的腫瘤免疫治療

1、自然殺傷（NK）細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞,NK細(xì)胞與人體抗腫瘤、抗病毒感染與免疫調(diào) 節(jié)有關(guān)，具備識(shí)別靶細(xì)胞、殺傷介質(zhì)、分泌多種細(xì)胞因子的能力其殺傷活性無MHC限制，不 依賴抗體。隨著腫瘤免疫治療研究的快速發(fā)展NK細(xì)胞也越來越多的受到研究人員的關(guān)注.01、可單打獨(dú)斗、也可團(tuán)體作戰(zhàn)NK細(xì)胞是人體抵抗癌細(xì)胞和病毒感染的第一道防線，可非特異性直接殺傷腫瘤細(xì)胞， NK細(xì)胞可以在沒有抗體或MHC的情況下，識(shí)別這些細(xì)胞并進(jìn)行快速的免疫響應(yīng)。對(duì)于那些 失去自身標(biāo)記的MHC-I型的細(xì)胞，NK細(xì)胞不經(jīng)過激活就可以進(jìn)行殺傷，這種天然殺傷活性 既不需要抗原致敏，也不需要抗體1參與，且無MHC限制。其與人體其他多種白細(xì)

2、胞都不 同，不需要接受免疫系統(tǒng)的特殊指令，也不需要其他細(xì)胞的配合，自己單獨(dú)就能識(shí)別和攻擊 外來細(xì)胞、癌細(xì)胞和病毒。除了具有強(qiáng)大的殺傷功能外，還具有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能，與機(jī)體其他多種免疫細(xì)胞相 互作用，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫狀態(tài)和免疫功能。臨床研究發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞過繼免疫治療惡性腫瘤具 有良好的應(yīng)用前景，對(duì)多種實(shí)體瘤和血液系統(tǒng)惡性腫瘤均有一定效果。02、三大抗癌途徑NK細(xì)胞具有三方面抗癌作用，具體如下：1、對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷，通過釋放后穿孔素和顆粒酶或通過死亡受體殺死腫瘤細(xì)胞;2、通過分泌細(xì)胞因子和趨化因子扮演免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)細(xì)胞角色，激活T細(xì)胞等的殺傷 作用；3、形成ADCC作用（抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞

3、毒性作用），B細(xì)胞找到癌細(xì)胞時(shí)，就 會(huì)悄悄的把特異性IgG抗體留在癌細(xì)胞身上作為標(biāo)記提醒NK細(xì)胞，見到這個(gè)標(biāo)記的NK 細(xì)胞就會(huì)發(fā)揮殺傷作用。目前國際上用于腫瘤免疫治療的NK細(xì)胞策略有:體外活化的NK細(xì)胞（自體或異體）治療聯(lián)合NK細(xì)胞和單抗（如免疫檢查點(diǎn)抑制劑）來誘導(dǎo)抗體特異的細(xì)胞毒性構(gòu)建CAR-NK細(xì)胞免疫療法03、體外活化的NK細(xì)胞治療策略NK細(xì)胞可以通過自身表面的受體（激活型和抑制型受體）來調(diào)節(jié)自身的細(xì)胞毒性。通 過激活NK細(xì)胞自身受體來解鎖NK細(xì)胞免疫反應(yīng)將是一種有效的途徑。刺激“激活性受體”途徑NK細(xì)胞表面存在自然細(xì)胞毒性引發(fā)受體（NCRs）、C型凝集素（NKG2D）SLAM家族受 體

4、、C D16等一系列激活型受體，這些激活型受體結(jié)合配體后，能引發(fā)細(xì)胞因子比如IFN-Y、 TNF-a的分泌。IL-15臨床前及早期臨床的數(shù)據(jù)都表明，IL-15可以誘導(dǎo)NK細(xì)胞數(shù)量上升。IL-15 一方面能夠 協(xié)助越過免疫檢查點(diǎn)的抑制機(jī)制，另一方面能夠完善NK細(xì)胞上CD16介導(dǎo)的功能。目前， IL-15也成為了熱門的免疫治療新靶點(diǎn)。CD16NK細(xì)胞還表達(dá)低親和力受體FcYRIII （CD16）, CD16可與腫瘤抗原特異性抗體Fc段結(jié) 合，介導(dǎo)NK細(xì)胞識(shí)別并殺傷被抗體包被的腫瘤細(xì)胞，即ADCC作用。與NK細(xì)胞的其他激 活型受體不同，CD16與Fc的結(jié)合不需要協(xié)同激活，就可以產(chǎn)生強(qiáng)力的響應(yīng)。這也使

5、得NK 細(xì)胞能夠在病毒感染和腫瘤形成早期，通過抗體產(chǎn)生免疫反應(yīng)。ADCC是NK細(xì)胞殺傷靶細(xì) 胞的主要方式。此外，設(shè)計(jì)以NK細(xì)胞表面活化受體CD16和NKG2D為靶點(diǎn)的雙特異性分子，可以靶向 NK細(xì)胞識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞。（雙特異性分子被設(shè)計(jì)用來識(shí)別激活NK細(xì)胞受體結(jié)合另一端 的腫瘤抗原，以使NK細(xì)胞殺滅過度表達(dá)這些抗原的腫瘤細(xì)胞）04、與免疫檢查點(diǎn)抑制劑聯(lián)合盡管NK細(xì)胞對(duì)抗腫瘤的響應(yīng)調(diào)整并不依賴于腫瘤相關(guān)抗原的識(shí)別，但同樣存在免疫檢 查點(diǎn)的激活或抑制機(jī)制。腫瘤細(xì)胞可以表達(dá)的針對(duì)NK細(xì)胞免疫檢查點(diǎn)的配體，能夠抑制 NK細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞裂解，因此，以限制這種抑制作用，目前開發(fā)一系列針對(duì)腫瘤-NK

6、細(xì)胞的抑制型免疫檢查點(diǎn)的抗體。阻斷“抑制性受體”途徑NK細(xì)胞表面表達(dá)多種抑制性受體，如KIR類（免疫球蛋白樣受體）c型凝集素受體(NKG2A)常見的免疫檢查點(diǎn)受體(PD-1、TIM-3、LAG-3、TIGIT),這些抑制性受體可與MHCI類分子結(jié)合，抑制NK細(xì)胞活化。體外實(shí)驗(yàn)表明，應(yīng)用IPH2102單抗阻斷KIR2DL1-3,可以增加NK細(xì)胞的抗腫瘤活性。通 過抑制NK細(xì)胞的KIRs對(duì)不識(shí)別MHC類I分子表達(dá)的轉(zhuǎn)移的同種異體腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而殺傷 腫瘤細(xì)胞。此外，針對(duì)NK細(xì)胞其他下相應(yīng)的抑制性受體的抗體可明顯提高NK細(xì)胞的殺傷 作用。此外，研究者在多發(fā)性骨髓瘤患者體內(nèi)檢測到其NK細(xì)胞表達(dá)PD1，應(yīng)

7、用PD1單抗 (CT-011)后能修復(fù)NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)；此外，應(yīng)用PDL1的IgG1單抗還可能激發(fā) NK細(xì)胞的ADCC。其中AndreP等人開發(fā)了針對(duì)NK細(xì)胞抑制性受體NKG2A的人源化抗體monalizumab， 并在體外評(píng)估了 monalizumab對(duì)各種腫瘤細(xì)胞系的潛力，包括HNSCC細(xì)胞系和小鼠體內(nèi)。 其發(fā)現(xiàn)當(dāng)與其他單克隆抗體如durvalumab (抗PD1 mAb)或表皮生長因子受體(EGFR) mAb 以及西妥昔單抗一起使用時(shí)，它具有累加效應(yīng)。與免疫檢查點(diǎn)抑制劑與其他NK指導(dǎo)的免疫治療相結(jié)合，可以針對(duì)目前對(duì)現(xiàn)有療法無反 應(yīng)的多種類型的腫瘤。05、CAR-NK細(xì)胞療法嵌合抗

8、原受體改造的NK細(xì)胞，能顯著提高NK細(xì)胞療效特異性，其原理亦是通過在NK 細(xì)胞表面嵌合腫瘤特異性抗原受體，進(jìn)而使NK細(xì)胞靶向識(shí)別并摧毀腫瘤細(xì)胞。有研究顯示 CAR-NK展示出較ADCC更強(qiáng)的細(xì)胞毒作用。在CAR的應(yīng)用中，NK細(xì)胞較之T細(xì)胞優(yōu)勢(shì)：u異體NK細(xì)胞不會(huì)引起移植物抗宿主反應(yīng)(GVHD)，并已在許多臨床試驗(yàn)中得到證實(shí)。u NK細(xì)胞不分泌引起細(xì)胞因子釋放綜合征的炎癥因子，如IL-1、IL-6。u CAR-NK細(xì)胞除了 CAR介導(dǎo)的靶向殺傷之外，還可以通過NK細(xì)胞自身抗腫瘤的特性， 識(shí)別并殺傷CAR靶標(biāo)下調(diào)或缺失的腫瘤細(xì)胞，提高免疫治療效果。u異體NK細(xì)胞的來源廣泛：包括外周血、NK細(xì)胞系、

9、臍帶血、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、NK-92 等細(xì)胞系。目前已有多項(xiàng)關(guān)于CAR-NK的臨床試驗(yàn)，這些臨床試驗(yàn)多集中于血液腫瘤以及嘗試解決 CAR-T未能解決實(shí)體瘤的研究。在實(shí)體瘤的治療中，研究人員開發(fā)了多種靶向腫瘤相關(guān)抗原 的CAR-NK細(xì)胞，如靶向GD2、EGFR和PSCA等。經(jīng)過CAR修飾后的NK細(xì)胞對(duì)表達(dá)相 應(yīng)抗原的靶細(xì)胞展現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞毒作用。其中，最為特別的是以NKG2D作為胞外域的CAR 結(jié)構(gòu)，NKG2D可以與多種腫瘤表面的配體結(jié)合，有廣譜抗癌效果，NKG2D-DAP10-CD3Z構(gòu) 建的CAR-NK細(xì)胞對(duì)于骨肉瘤、前列腺癌、橫紋肌瘤等腫瘤有著良好的殺傷效果。綜上，可以匯總以下一圖來開發(fā)出一

10、系列用于癌癥治療的NK細(xì)胞免疫療法。CD16NCRsActivatingd CAR$ (e Acdvating receptorBisppcific linkerMHC class IPDL1Tumour antigenTurgor ami瞻nTurnoiir antigenNKceUorTcell Antibodya inhibitory , 一.，廣MRs ； ,一 0C NKG2DTumour cellD NKGZDLNCRLNon-self MHC利用NK細(xì)胞潛能的治療方法示意圖06、文末結(jié)語總的來說，利用NK來抗擊腫瘤的方式主要概括為三點(diǎn)：即激活NK細(xì)胞、解除NK細(xì)胞 的免疫抑制、控制NK細(xì)胞毒性。細(xì)胞治療是現(xiàn)如今治療和預(yù)防疾病最有效的方式，北聯(lián)生物聯(lián)合北京301醫(yī)院和湖南湘 雅醫(yī)院共同開展細(xì)胞科研合作