RPHPLC法測(cè)定馬兜鈴酸含量方法的優(yōu)化

1、RP-HPLC法測(cè)定馬兜鈴酸含量要領(lǐng)的優(yōu)化杜曉曦,周躍華,路金才,韓娜,周娟,畢開(kāi)順【摘要】目的優(yōu)化高效液相色譜法對(duì)馬兜鈴酸舉行含量闡發(fā)。要領(lǐng)通過(guò)比力差異提取溶劑、差異提取要領(lǐng),確定較為公正的供試品溶液制備要領(lǐng)。比力差異活動(dòng)相條件對(duì)馬兜鈴酸含量測(cè)定的影響,選擇含量闡發(fā)色譜條件。測(cè)定差異波長(zhǎng)下的最低檢出限度,確定痕量闡發(fā)條件。結(jié)果供試品溶液制備中以70%甲醇直接加熱回流提取,服從優(yōu)于其他提取要領(lǐng)。做一樣平常含量闡發(fā)時(shí)可以選擇活動(dòng)相為甲醇-1%醋酸水溶液(7030)或乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)(2575),250n或319n作為檢測(cè)波長(zhǎng)。做痕量闡發(fā)時(shí)宜選擇活動(dòng)相為乙腈-0.3%(

2、nh4)23(ph=7.5)(2575),并選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為224n,最小檢出量可達(dá)0.02ng。結(jié)論本實(shí)行所創(chuàng)立的要領(lǐng)可以正確可靠的舉行馬兜鈴酸含量闡發(fā)并舉行痕量查抄?！娟P(guān)鍵詞】馬兜鈴酸；高效液相色譜法；含量測(cè)定keyrds：aristlhiaid；rp-hplpredure；saplepreparatin；hratgraphinditin馬兜鈴酸是馬兜鈴科植物中的重要身分,比年來(lái)已證明其具有腎臟毒性。鑒于馬兜鈴科植物種類許多,名稱殽雜征象也很常見(jiàn),各地方用藥種類非常龐大,以是,有需要?jiǎng)?chuàng)立一個(gè)簡(jiǎn)樸有用、便于推廣的要領(lǐng)對(duì)馬兜鈴酸舉行定量闡發(fā),以便真實(shí)正確地反響出藥材或制劑中馬兜鈴酸的含量,包管用

3、藥寧?kù)o。如今,高效液相色譜法是在馬兜鈴酸含量測(cè)定中利用最多、生長(zhǎng)也較為成熟的一種要領(lǐng),但測(cè)定條件多種多樣。為此,本試驗(yàn)從供試品溶液的制備、色譜條件的選擇兩個(gè)方面舉行了研究,以期創(chuàng)立并保舉一個(gè)能正確反響馬兜鈴酸含量的高效液相色譜法。1儀器與試劑美國(guó)科普公司ssip3000高效液相色譜儀,del500紫外檢測(cè)器,hribab-212ph計(jì),anastar色譜事情站。色譜純?cè)噭┵?gòu)自天津康科德化學(xué)試劑廠,闡發(fā)純?cè)噭┵?gòu)自山東禹王化學(xué)試劑廠。關(guān)木通(兩年生)采自沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥用植物園,馬兜鈴酸a比較品購(gòu)自中國(guó)生物成品檢定所(批號(hào)110746-200204)。2供試品溶液的制備2.1提取溶劑的選擇現(xiàn)有的研究

4、中,馬兜鈴酸的提取溶劑多數(shù)選擇甲醇、乙醇、丙酮或參加必然量的酸來(lái)提取,有文獻(xiàn)報(bào)道,丙酮-10%甲酸提取服從較高。我們也重點(diǎn)觀察了該濃度酸及常用溶劑對(duì)提取服從的影響。取枯燥關(guān)木通藥材粉末(40目),細(xì)密稱定30份,各0.5g,別離參加表1所示溶劑各20l,每種溶劑各提取2份,共30份,別離浸泡2h,超聲15in,過(guò)濾,濾液蒸干,殘?jiān)约状既芙?定容至10l容量瓶中,微孔濾膜過(guò)濾后,供hpl測(cè)定用。結(jié)果見(jiàn)表1。表1差異提取溶劑的比力略從實(shí)行數(shù)據(jù)看,甲醇、乙醇不相宜對(duì)馬兜鈴酸舉行提取,參加酸或醇水溶液,可使馬兜鈴酸的提取服從明顯增長(zhǎng),綜合比力種種溶劑,70%甲醇對(duì)馬兜鈴酸的提取服從最高,可以作為馬兜

5、鈴酸的最優(yōu)提取溶劑。2.2提取要領(lǐng)的選擇索氏提取法：取0.5g關(guān)木通藥材粉末4份,以70%甲醇120l別離索氏提取1、2、3.5、5h,別離測(cè)定含量,結(jié)果表白3.5h后峰面積不再增長(zhǎng)。直接加熱回流法：取關(guān)木通粉末1份,提取溶劑為70%甲醇25l,提取1h,過(guò)濾,濾液舉行含量測(cè)定,濾渣再重復(fù)提取2次,別離得濾液并測(cè)定含量。結(jié)果表白,關(guān)木通提取1次即1h即提取完全。超聲提取法：取關(guān)木通粉末1份,提取溶劑為70%甲醇25l,提取15in,過(guò)濾,濾液舉行含量測(cè)定,濾渣再重復(fù)提取4次,別離得濾液并測(cè)定含量,結(jié)果表白,關(guān)木通重復(fù)提取4次即1h,即提取完全。見(jiàn)圖1。從圖1可以看出,在提取完全的環(huán)境下,超聲提

6、取法需提取4次,泯滅1h,斲喪溶劑共100l；索氏提取法需提取3.5h,斲喪溶劑120l；直接加熱回流法需提取1次,提取1h,斲喪溶劑25l,即可提取完全。故發(fā)起選擇直接加熱回流法提齲3色譜條件3.1活動(dòng)相對(duì)馬兜鈴酸含量測(cè)定的影響從大量的文獻(xiàn)報(bào)道來(lái)看,馬兜鈴酸含量測(cè)定的活動(dòng)相一樣平常利用甲醇-水體系1、乙腈-水體系2,尚有接納乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)3體系,本試驗(yàn)對(duì)差異活動(dòng)相體系甲醇-水-冰醋酸(70301)、乙腈-水-冰醋酸(50501)、乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5,2575)舉行了比力,見(jiàn)表2。由表2可以看出,3種活動(dòng)相條件均可與其他身分實(shí)現(xiàn)基天職離,理

7、論塔板數(shù)也切合定量闡發(fā)的要求,但在乙腈-水體系下,馬兜鈴酸盤(pán)算含量偏低。表2差異活動(dòng)相體系的比力略3.2低酸度對(duì)色譜分散的影響由于馬兜鈴酸屬于酸性物質(zhì),活動(dòng)相中參加適量的酸可以改進(jìn)峰形,但是酸的參加將會(huì)影響色譜住的利用壽命,本節(jié)探究差異酸度對(duì)馬兜鈴酸分散的影響,結(jié)果見(jiàn)表3。表3低酸度對(duì)色譜分散的影響略從表3可以看出,甲醇-1%醋酸水溶液活動(dòng)相條件分散度精良,理論塔板數(shù)切合定量闡發(fā)要求,低落酸度不影響色譜分散,甲醇-1%醋酸水溶液適互助為含量測(cè)定的活動(dòng)相條件。3.3痕量闡發(fā)時(shí)色譜條件的選擇儀器及要領(lǐng)的檢測(cè)限度是舉行馬兜鈴酸痕量闡發(fā)的緊張指標(biāo),為確保用藥的寧?kù)o性,要求色譜條件具有較低的檢測(cè)限。馬兜

8、鈴酸有4處最大汲取,即224、250、319、390n。取設(shè)置好的0.05g/l馬兜鈴酸比較品溶液,接納無(wú)窮稀釋法,活動(dòng)相選擇甲醇-1%醋酸水溶液及乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5),并配以差異檢測(cè)波上舉行最低檢出限度的觀察,結(jié)果見(jiàn)表4。表4差異色譜條件的最低檢測(cè)限度(略)從表4可以看出,乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)配以224n檢測(cè)波長(zhǎng)可以得到最低的檢出限度(見(jiàn)圖2),該條件可用于限度檢出。別的,按照樣品在差異波長(zhǎng)下的最低檢測(cè)限可以看出,樣品在390n處檢測(cè)限較高,不適互助為馬兜鈴酸含量測(cè)按時(shí)的檢測(cè)波長(zhǎng),而250n及319n檢測(cè)波長(zhǎng)下檢出限較低(1ng),信號(hào)相對(duì)較高

9、,適互助為含量闡發(fā)的檢測(cè)波長(zhǎng)。同時(shí),思量到224n檢測(cè)波長(zhǎng)在龐大樣品闡發(fā)時(shí)易出現(xiàn)雜質(zhì)峰滋擾,不發(fā)起作為含測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)。4小結(jié)與討論本試驗(yàn)對(duì)高效液相色譜要領(lǐng)測(cè)定馬兜鈴酸含量的供試品溶液的制備要領(lǐng)舉行了條件優(yōu)化選擇,確定供試品溶液的制備要領(lǐng)為70%甲醇直接加熱回流法舉行提齲在活動(dòng)相選擇上,研究創(chuàng)造,甲醇-1%醋酸水溶液(7030)及乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5)可以滿意馬兜鈴酸含量闡發(fā)必要,結(jié)果較為正確。當(dāng)藥材中馬兜鈴酸含量較低,需舉行痕量闡發(fā)時(shí)宜選擇活動(dòng)相為乙腈-0.3%(nh4)23(ph=7.5),檢測(cè)波長(zhǎng)為224n。本試驗(yàn)初次對(duì)甲醇-水分散馬兜鈴酸的酸度舉行了觀察,創(chuàng)造接納低酸度的甲醇-1%醋酸水溶液對(duì)馬兜鈴酸舉行含量測(cè)定,不但可以得到精良的分散結(jié)果,且可以減緩活動(dòng)相對(duì)色譜柱的斲喪,相宜用作馬兜鈴酸的含量測(cè)定要領(lǐng)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1由麗雙,王智民,姜旭,等.hpl法測(cè)定差異產(chǎn)地關(guān)木通中馬兜鈴酸a的含量j.中國(guó)中藥雜志,2022,28(5)：465467.2hangys,dengjs,kuyr.deterinatinfaristlhiaidintraditinalhinesepresriptins,ntainingradixaristlhiaefanghibyhplj.jliquidhratgraphyrelatedtehnlgies,20